全 文 ：高效液相色谱法同时检测
蛇莓饮片齐墩果酸与熊果酸的含量*
吴英俊1，韩冬梅2，武 艳1，包海花1，初彦辉1，袁晓环1
(牡丹江医学院 1．重点实验室;2．红旗医院，157011)
［摘 要］ 目的 探讨高效液相色谱法测定蛇莓饮片中齐墩果酸与熊果酸含量的方法。方法 采用 Thermo ODS-
2HYPERTIL C18(250 mm ×4． 6 mm，5 μm)色谱柱;柱温为室温(26 ℃) ;流动相:7． 8 g·L
-1磷酸二氢钠 -甲醇(14∶ 86) ;
检测波长:210 nm;流速:0． 8 mL·min-1。结果 齐墩果酸在 0． 19 ～ 2． 16 μg范围内呈良好线性关系(r = 0． 998 2) ;平均
回收率为 98． 6%，RSD为 1． 00%(n = 9) ;熊果酸在 1． 78 ～ 5． 34 μg范围内呈良好线性关系(r = 0． 996 5) ;平均回收率为
98． 3%，RSD = 1． 15%(n = 9) ;齐墩果酸与熊果酸的分离度为 1． 96。结论 该测定方法简单、准确、可靠，可用于蛇莓中
齐墩果酸与熊果酸两种成分的同时检测。
［关键词］ 蛇莓饮片;齐墩果酸;熊果酸;色谱法，高效液相
［中图分类号］ R284 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1004 － 0781(2010)08 － 1069 － 03
Determination of Oleanolic Acid and Ursolic Acid in the Herba Duchesnea Indicae
Decocting Pieces by HPLC Methods
WU Ying-jun1，HAN Dong-mei2，WU Yan1，BAO Hai-hua1，CHU Yan-hui1， YUAN Xiao-huan1 (1．
Heilongjiang Key Laboratory of Anti-fibrosis Biotherapy，Mudanjiang，2． Hongqi Hospital，Medical College，
Mudanjiang 157011，China)
ABSTRACT Objective To investigate simultaneously determination of oleanolic acid and ursolic acid in Herba
Duchesnea indicae decocting pieces by HPLC． Methods The chromatographic separation was performed on a Thermo ODS-
2HYPER-TIL C18 column(250 mm × 4． 6 mm，5 μm)at 25 ℃;the mobile phase consisting of NaH2 PO4 7． 8 g·L
-1-Methyl
alcohol (14∶ 86) ;and examination wave length being 210 nm;speed of flow:0． 8 mL·min-1 ． Results The liner relationship
of oleanolic acid was good within the range of 0． 19 ～ 2． 16 μg(r = 0． 998 2)． The average recovery was 98． 6% (n = 9)and RSD
was 1． 00% ． The liner relationship of ursolic acid was good within the range of 1． 78 ～ 5． 34 μg (r = 0． 996 5)． The average
recovery was 98． 3% (n = 9)and RSD was 1． 15% ． Conclusion The method is simple，accurate and reliable，which can be
used to determine the two main chemical contents simultaneously．
KEY WORDS Herba Duchesnea indicae decoction pieces;Oleanolic acid;Ursolic acid;HPLC
蛇莓 Duchesnea indica (Andr．)Focke 为蔷薇科植
物蛇莓的全草，为民间常用草药，始载于《别录》［1］，被
列为下品。自梁代以来诸家本草，尤其是《本草纲目》
所述蛇莓蔓生，节上生根，三出复叶，有齿，开黄花，果
托鲜红色，膨大如覆盆等主要特征与生长环境以及本
草附图，均与今之蛇莓 Duchesnea Indica 相符。别名三
匹风、鸡冠果、地莓、一点红、蛇含草、宝珠草等［2］。性
味甘、苦，性寒，有小毒，入肺、肝、大肠经，具有清热解
毒、凉血止血、散瘀消肿之功效，用于治疗热病、惊痫、
［收稿日期］ 2010 － 01 － 22 ［修回日期］ 2010 － 03 － 04
［基金项目］ * 黑龙江省卫生厅项目(基金编号:2007-006)
［作者简介］ 吴英俊(1972 －) ，男，黑龙江牡丹江人，实验
师，学士，从事药学研究。电话:0453 － 6582156 － 3334，E-mail:
wuyingjun2000@ yahoo． com． cn。
［通讯作者］ 袁晓环(1969 －) ，女，黑龙江牡丹江人，硕士，
教授，从事药物分析及天然药物开发研究工作，电话:0453 －
6582156 － 3647，E-mail:yuanxiaohuan1969@ 163． com。
感冒、痢疾、咽喉肿痛、咳嗽吐血、疔疮痈肿、蛇虫咬伤、
湿疹等。齐墩果酸与熊果酸均为蛇莓的有效成分，具
有抗炎、抗肿瘤、提高免疫力之功效，因此建立快速、稳
定、重现性好的测定方法对蛇莓及其制剂的开发具有
临床应用价值。
1 仪器与试药
1． 1 仪器 LC-10AT 高效液相色谱(HPLC)仪(日本
岛津公司) ;GZX-9070 MBE 数显鼓风干燥箱(上海博
讯实业有限公司医疗设备厂) ;Synergy 超纯滤水器
(MILLIPOER) ;FD-1C冷冻干燥机(北京德天佑)。
1． 2 试药 中药蛇莓饮片(哈尔滨市盛泰中药饮片加
工厂;批号:090403 /05，090305 /06)。熊果酸对照品(中
国药品生物制品检定所，批号:110709-200505) ;甲醇
(HPLC用色谱纯，天津市科密欧化学试剂开发中心)。
2 方法与结果
2． 1 色谱条件 色谱柱:Thermo ODS-2HYPERTIL C18
·9601·医药导报 2010 年 8 月第 29 卷第 8 期
(250 mm × 4． 6 mm，5 μm) ;流动相:磷酸二氢钠
(NaH2 PO4)7． 8 g · L
-1-甲醇 (14 ∶ 86) ;流速:
0． 8 mL·min-1;柱温:26 ℃;检测波长:210 nm。
2． 2 标准曲线的制备 分别精密称取齐墩果酸对照品
1． 96 mg、熊果酸对照品 4． 45 mg置于 10 mL的量瓶中，
加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得每 1 mL含齐墩果酸
0． 196 mg、熊果酸0． 445 mg的对照品储备液。吸取上述
配制好的对照品储备液 1，4，8，10，12 μL注入高效液相
色谱仪。在上述色谱条件下测定峰面积(A) ，以峰面积
为纵坐标(Y) ，以对照品的量为横坐标(X) ，绘制标准曲
线，得出回归方程为:Y熊果酸 = 1． 725 9X + 3． 380 3(r =
0． 996 5，n = 5) ;Y齐墩果酸 = 1． 528 7X － 0． 204 4(r = 0． 998
2，n =5)。熊果酸在1． 78 ～ 5． 34 μg 范围内峰面积与浓
度呈良好线性关系;齐墩果酸在0． 19 ～ 2． 16 μg 范围内
呈良好线性关系。
2． 3 方法学考察
2． 3． 1 系统适用性试验 取“2． 2”项下齐墩果酸及
熊果酸对照品溶液(1∶1)10 μL，注入 HPLC 仪测试，
理论塔板数以齐墩果酸计为 11 304;以熊果酸峰计为
12 467，分离度 1． 96。
2． 3． 2 精密度试验 精密吸取同一蛇莓样品溶液
10 μL，重复进样 6 次，按上述色谱条件测定其含量，
RSD为 1． 99%。表明本方法精密度良好。
2． 3． 3 稳定性试验 精密吸取同一蛇莓样品溶液
10 μL，分别于 0，3，6，9，24 h 注入 HPLC 仪，测定峰面
积，计算齐墩果酸及熊果酸含量，其相对标准偏差 RSD
分别为 1． 29%，1． 35%，表明本方法稳定。
2． 3． 4 重复性试验 精密称取同一蛇莓样品 5 份，每
份 200 g，按“2． 4”项测定方法操作，测得平均齐墩果
酸含量为 0． 85 μg· g-1，RSD 为 1． 79%;熊果酸为
1． 22 μg·g-1 ，RSD为 1． 60%。
2． 3． 5 加样回收率试验 称量 9 份已知含量的蛇莓
饮片(批号:090403 /05，含齐墩果酸 0． 85 μg·g-1，熊
果酸 1． 224 μg· g-1)200． 00 g，分别加入齐墩果酸
0． 196 mg·mL-1与熊果酸 0． 445 mg·mL-1对照品溶液
0． 5，0． 5，0． 5，1，1，1，2，2，2 mL，按照“2． 4”项下方法
制备供试品溶液，并测定含量，计算加样回收率，结果
见表 1。齐墩果酸平均回收率为 98． 6%，RSD 为
1． 00%(n = 9) ，熊果酸平均回收率为 98． 3%，RSD 为
1． 15%(n = 9)。
2． 4 测定方法
2． 4． 1 供试溶液的制备 蛇莓饮片 200 g，粉碎，按一
定料液比，加入 95%的乙醇溶液 300 mL，浸泡过夜，过
滤，活性炭脱色后抽滤，滤液减压浓缩至 50 mL;然后
用等体积石油醚萃取 3 次，保留萃取后的原料液，再减
压浓缩至干，加少量醇溶解即为预样品液。将上述方
法所得的预样品液分别和对照品做薄层色谱(TLC)预
分离。在薄层板上，把与对照品显色部位所对齐的样
品点抠下;用少量甲醇溶解，再浓缩该甲醇液至
10 mL，即为供试品溶液。
2． 4． 2 样品测定 精密吸取“2． 4． 1”项下制备好的
蛇莓样品溶液 10 μL 注入高效液相色谱仪，记录色谱
图，见图 1。采用外标法以峰面积计算各样品中齐墩
果酸及熊果酸含量，结果:批号为 090403 /05 的蛇莓药
材测得齐墩果酸和熊果酸含量分别为 0． 85，
1． 224 μg·g-1，RSD为 1． 79%;批号为 090403 /06 的蛇
莓药材测得齐墩果酸和熊果酸含量分别为 0． 81，
1． 208 μg·g-1，RSD为 1． 65%。
3 讨论
实验蛇莓样品为哈尔滨市盛泰中药饮片加工厂生
产，企业为 GMP 认证单位，饮片加工方法按《中华人
民共和国药典》2010 年版以及《全国中药材炮制规范》
进行加工，经抢水洗，晾干，趁鲜切片，片厚度为 1 ～
2 mm。不会改变其成分。本品包装包装为塑料袋，没
表 1 齐墩果酸和熊果酸加样回收率试验结果
Tab． 1 Recovery of oleanolic acid and ursolic acid
齐墩果酸含量 /
mg
加入量 /
mg
测得量 /
mg
回收率 /
%
熊果酸含量 /
mg
加入量 /
mg
测得量 /
mg
回收率 /
%
0． 17 0． 098 0． 267 99． 0 0． 245 0． 222 0． 461 97． 3
0． 17 0． 098 0． 265 96． 9 0． 245 0． 222 0． 463 98． 2
0． 17 0． 098 0． 266 98． 0 0． 245 0． 222 0． 463 98． 2
0． 17 0． 196 0． 367 100． 5 0． 245 0． 445 0． 688 99． 6
0． 17 0． 196 0． 362 98． 0 0． 245 0． 445 0． 686 99． 1
0． 17 0． 196 0． 364 99． 0 0． 245 0． 445 0． 691 100． 2
0． 17 0． 392 0． 556 98． 5 0． 245 0． 89 1． 110 97． 2
0． 17 0． 392 0． 558 99． 0 0． 245 0． 89 1． 107 96． 9
0． 17 0． 392 0． 557 98． 7 0． 245 0． 89 1． 116 97． 9
·0701· Herald of Medicine Vol. 29 No. 8 August 2010
有发现储存、运输方面的质量问题。
图 1 蛇莓样品 HPLC图
1．齐墩果酸，2．熊果酸
Fig． 3 The chromotograms of duchesnea indica
1． Oleanolic acid，2． Ursolic acid
由实验结果可知，本法线性范围较宽，精密度、稳
定性、重复性和加样回收率良好，可用于蛇莓中齐墩果
酸与熊果酸的同时检测。结果表明，蛇莓中的三萜类
成分含量很低，尤其齐墩果酸与熊果酸成分含量微少。
笔者已尝试简单提取直接检测时杂质对其影响很大，
效果不理想，所以用 TLC 分离后将样品斑点括下洗
脱，这样步骤有些繁琐，但目前报道没有更理想的方
法，也是今后值得进一步研究的工作。本实验建立的
蛇莓药材中熊果酸的 HPLC含量测定方法，操作简便、
结果可靠、重复性好，可为控制蛇莓药材及其制剂的质
量提供依据。
实验所用的 HPLC条件是在参考有关文献的基础
上［4］，根据实际情况，经过多次优化、筛选而确定的。
实验表明选择 210 nm 做为检测波长时，基线稳定，分
离度也较好。流动相也是经过多次筛选最终确定
NaH2PO47． 8 g·L
-1-甲醇(14∶86) ;且该方法简单易
行，重现性好，并且干扰小，非常便于操作。
［DOI］ 10． 3870 /yydb． 2010． 08． 034
［参考文献］
［1］ 国家中医药管理局《中华本草》编委会．中华本草［M］．上
海:上海科学出版社，1999:2628．
［2］ 江苏新医学院．中华大辞典(下册)［M］．上海:上海科技
出版社，1985:2115．
［3］ CHEN Li，ZHANG Yi-hua，KONG Xiang-wen，et al． Synth-
esis and biological evaluation of nitric oxide-releasing
derivatives of oleanolic acid as inhibitors of HepG2 cell
apoptosis［J］． Bioorg Med Chem Lett，2007，17(11) :2979 －
2982．
［4］ 杨 林，裴 瑾，万德光． 威灵仙药材中三萜苷元齐墩果
酸含量的 HPLC 测定［J］． 天然产物研究与开发，2006，
18(2) :313 － 315．
更安颗粒的质量标准研究
陈 琳，邢 茂，夏 午，张恩娟
(第三军医大学新桥医院药剂科，重庆 400037)
［摘 要］ 目的 建立更安颗粒的质量控制方法。方法 采用薄层色谱法(TLC)对更安颗粒中的淫羊藿、丹参、首
乌藤、黄芩进行定性鉴别;采用高效液相色谱法测定淫羊藿苷的含量。结果 TLC可鉴别出上述各组分与对照品相应的
斑点，且阴性对照无干扰。淫羊藿苷在 0． 011 6 ～ 1． 030 0 mg·mL-1线性关系良好(r2 = 0． 999 7) ，平均加样回收率为:
98． 35%，RSD = 1． 23%(n = 6)。结论 该方法操作简便，方法稳定，可作为该制剂的质量控制方法。
［关键词］ 更安颗粒;淫羊藿苷;色谱法，薄层;色谱法，高效液相
［中图分类号］ R284． 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1004 － 0781(2010)08 － 1071 － 04
Quality Standard of Gengan Granule
CHEN Lin，XING Mao，XIA Wu，ZHANG En-juan(Department of Pharmacy，Xinqiao Hospital of the 3rd
Military Medical University，Chongqing 400037，China)
ABSTRACT Objective To establish a method for quality control of gengan granule． Methods Herba epimedii，
Salvia miltiorrhiza，Caulis polygoni multiflori，Radix scutellariae were identified by TLC． The content of icariin was determined by
HPLC． Results The spots of components mentioned above and the control were detected by TLC，and no interference by the
negative sample occured． The linear ranges of icariin were 0． 0116 ～ 1． 03 mg·mL-1(r2 = 0． 999 7) ，and the average recovery
was 98． 35%，RSD = 1． 23% ． Conclusion The established method is simple，feasible and repeatable，and can be used for the
quality control of gengan granule．
KEY WORDS Gengan granule;Icariin;TLC;HPLC
·1701·医药导报 2010 年 8 月第 29 卷第 8 期