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HPLC测定蒙古扁桃种仁中α-维生素E的含量



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的峰面积,结果表明流动相提取率较高、杂质较少。
另对提取方法筛选,直接溶解或超声处理 10,20,30
min,结果表明超声处理 20 min 溶出充分。故供试
品溶液的制备采用加流动相超声处理 20 min 进行
提取。
由于样品中含量的较大差别,梓醇采用流动相
(Ⅰ)乙腈-水(2∶ 98) ,地黄苷 D 和益母草苷采用流
动相(Ⅱ)乙腈-水(4∶ 98) ,均达到良好分离效果。
对 12 批不同产地怀地黄提取物进行含量分析
发现,各指标成分含量存在较大差异,品种、等级和
环境因素均影响药材成分含量,制备鲜地黄提取物
药材的选择应当考虑品种、等级和产地。
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[责任编辑 顾雪竹]
[收稿日期] 20120817(018)
[基金项目] 国家自然科学基金项目(81102760) ;内蒙古自治区高等学校科学研究项目(NJ10185)
[第一作者] 苏琨,讲师,硕士,从事蒙药资源开发利用研究,Tel:15044937220,E-mail:nmsk528@ 126. com
[通讯作者] * 石松利,副教授,博士,从事中蒙药成分及资源开发利用研究,Tel:0472-7167855,E-mail:shisongli122@ 126. com
HPLC测定蒙古扁桃种仁中 α-维生素 E的含量
苏琨,石松利* ,郑东华,李巨欣
( 内蒙古科技大学包头医学院 药学院,内蒙古 包头 014060)
[摘要] 目的:利用高效液相法,测定出蒙古扁桃中维生素 E 的含量。方法:采用色谱为 Wondasil C18(4. 6 mm ×
250 mm,5 μm) ,流动相为甲醇-水(98∶ 2) ,流速 1. 0 mL·min -1,柱温 25 ℃,检测波长 300 nm,检测器温度为室温(25 ℃)。结
果:α-维生素 E在 1 ~ 100 μg呈良好的线性关系,方程为 Y = 5 176. 7X - 7 645. 8(r = 0. 999 6) ,平均回收率为 99. 4%(n = 3,
RSD 1. 740%) ,蒙古扁桃桃仁中维生素 E的含量在 7. 12 ~ 15. 36 μg·g -1,以雅布格戈壁最高,固阳爬榆树最低。结论:该法可
用于测定蒙古扁桃桃仁中的维生素 E的含量,结果准确可靠,快速灵敏。
[关键词] 蒙古扁桃,α-维生素 E,高效液相
[中图分类号] R284. 1 [文献标识码] A [文章编号] 1005-9903(2013)12-0070-03
[doi] 10. 11653 /syfj2013120070
Determination of Alpha Tocopherol Content in Amygdalus mongolica by HPLC
SU Kun,SHI Song-li* ,ZHENG Dong-hua,LI Ju-xin
·07·
第 19 卷第 12 期
2013 年 6 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 19,No. 12
Jun.,2013
(School of Pharmacy,Baotou Medical College,Inner Mongolia University
of Science & Technology,Baotou 014060,China)
[Abstract] Objective:To determine and compare vitamin E content in five different regions of Amygdalus
mongolica. Method:HPLC method was established for determining the content of vitamin E. Methanol-water
(98∶ 2)was used as the mobile phase at the flow rate of 1. 00 mL·min -1 . The chromatographic column was
WondaSil-C18 (4. 6 mm ×250 mm,5 μm) ;the detection wavelength was set at 300 nm;the column temperature
was kept at 25 ℃,and the ethanol was used as solvents. Result:The calibration curves of vitamin E was in good
linearity over the range of 1-100 μg (r = 0. 999 6). The average recovery of vitamin E was 100. 1% (n = 3,RSD
1. 740). Among five samples from different areas,the highest content of vitamin E is determined in the sample of
Yabuge Gebi and the lowest is the one from Guyang Payushu. Conclusion:The method was proved to be rapid,
accurate and credible.
[Key words] Amygdalus mongolica;α-vitamin E;HPLC
蒙古扁桃蒙古名为乌兰-衣不勒斯,又名山樱
桃、土豆子,隶属蔷薇科扁桃属旱生落叶灌木,生于
海拔 1 000 ~ 2 400 m的荒漠草原、荒漠地区,被列为
国家三级保护植物。其果仁中含有大量不饱和脂肪
酸、氨基酸、微量元素等营养物质以及相当量的维生
素,具有较高的药用、生态和经济价值[1-2]。蒙古扁
桃果为传统中药材,在内蒙古可作郁李仁使用[3],
以种仁入药,主治止咳化痰、润肠通便、水肿、脚
气等[4]。
维生素 E中共有 4 种生育酚,其生物效应以 α-
维生素 E 较为重要[5]。目前未见有关蒙古扁桃桃
仁维生素 E 含量测定的报道。本文旨在确立可靠
的高效液相方法并测定蒙古扁桃中 α-VE 的含量,
为其药理作用和深入开发利用提供实验依据。
1 材料
DGU-20A3 型高效液相色谱仪(日本岛津公司)
包括:CTO-10AS VP 系统控制器,SPD-M20A 紫外-
可见检测器,LC-20AT 泵和 CBM-20A 色谱工作站,
JP-310S 型超声波清洗仪(功率 180 W,频率 40
kHz) ,离心机。
甲醇(色谱纯) ,无水乙醇,纯净水(娃哈哈) ;α-
VE对照品(上海源叶生物科技有限公司,YY1187-
20 mg) ;蒙古扁桃为 2012 年 3 月购(采)于不同产
地,包括雅布格戈壁(1 号) ,贺兰山沟(2 号) ,固阳
爬榆树(3 号) ,忽鸡沟(4 号) ,九峰山(5 号) ,所有
样品经内蒙古大学生命科学院王迎春教授鉴定。
2 方法
2. 1 色谱条件 WondaSil C18色谱柱(4. 6 mm ×
250 mm,5 μm) ,流动相甲醇-水(98∶ 2)[6],流速 1. 0
mL·min -1,柱温 25 ℃,检测波长,300 nm,检测器温
度室温(25 ℃)。
2. 2 对照品溶液制备 精密称取 10 mg α-VE标准
品于 10 mL棕色量瓶中,加 50 mg VC(抗氧化剂) ,
用甲醇超声溶解并定容,得 α-VE 标准储备液 1. 0
g·L -1,置冰箱中避光保存,临用时用无水乙醇稀释
至不同的浓度作为对照品溶液。
2. 3 供试品溶液制备 取一定量干燥蒙古扁桃仁,
粉碎(由于桃仁油性太大,不易过筛) ,精确称取扁
桃粉末 5. 00 g于 50 mL具塞棕色瓶中,精确加入 10
mL无水乙醇作为提取剂,密塞,称定质量。超声提
取 30 min,冷却静置 15 min,加入无水乙醇补足减失
质量,摇匀,取上层清液经 0. 45 μm 有机滤膜过滤
后用作高效液相色谱分析。
3 结果
3. 1 对照试验 将所配置的样品溶液和对照品溶
液按照前述色谱条件平行进样,二者在 12. 8 min 左
右都出现 α-VE峰,该峰与其他峰分离度良好,其他
峰对测定并没有干扰。色谱图见图 1。
A. 对照品;B. 样品;1. α-VE
图 1 蒙古扁桃科仁的 HPLC
3. 2 线性关系考察 分别精密吸取 1,0. 75,0. 50,
·17·
苏琨,等:HPLC测定蒙古扁桃种仁中 α-维生素 E的含量
0. 25,0. 01 mL的标准溶液(1 g·L -1)置于 10 mL 棕
色量瓶中,用乙醇稀释至刻度,摇匀,配置成 100,
75,50,25,1 mg·L -1的对照品溶液。分别精密吸取
上述溶液各 20 μL 进样,以 α-VE 对照品质量浓度
为横坐标(X)、峰面积值为纵坐标(Y)绘制标准曲
线,得 回 归 方 程 Y = 5 176. 7X - 7 645. 8
(r = 0. 999 6)。
3. 3 精密度试验 在 2. 1 确定的色谱条件下,精密
吸取 5 号样品溶液 20 μL,连续进样 6 次,
RSD 1. 16%。
3. 4 重复性试验 取同一批 2 号样品适量,配制 6
份样品溶液,进行 6 次平行测定。结果 6 批样品平
均含量的 RSD 1. 93%,该方法的重复性良好。
3. 5 稳定性试验 取 5 号样品适量,依样品处理方
法制成样品溶液,放置 0,0. 5,1,1. 5,2,2. 5,3,3. 5,
4,8 h 后分别进行测定 α-VE 的峰面积,平均
RSD 2. 70%。
3. 6 加样回收试验 精密称取 5 号样品粉末
0. 500 0 g共 9 份,分别加入质量浓度为 25 mg·L -1
的 α-VE 对照品溶液适量,按 2. 3 方法制备成供试
液。在 2. 1 确定的色谱条件下分别进行测定含量,
计算回收率,结果如表 1。
表 1 α-VE在 5 号样品中添加的回收率测定
取样量
/ g
样品中
VE量
/μg
添加量
/μg
测得值
/μg
回收率
/%
平均
RSD
/%
平均
回收率
/%
0. 501 5 6. 238 7 5. 00 11. 14 98. 03
0. 502 2 6. 247 4 5. 00 11. 01 95. 25
0. 503 9 6. 268 5 5. 00 11. 28 100. 23
0. 504 9 6. 281 0 6. 25 12. 54 100. 14 1. 76 98. 84
0. 500 8 6. 230 0 6. 25 12. 39 98. 56
0. 501 2 6. 234 9 6. 25 12. 42 98. 96
0. 504 9 6. 268 5 7. 50 13. 71 99. 22
0. 501 9 6. 282 4 7. 50 13. 88 101. 30
0. 500 6 6. 227 5 7. 50 13. 57 97. 9
3. 7 蒙古扁桃桃仁中的维生素 E 的含量测定 根
据 2. 3 方法和 2. 1 确定的色谱条件下,分别测定 5
种不同产地的蒙古扁桃桃仁中的 α-VE 的含量,结
果如表 2。
4 讨论
利用高效液相法测得 α-VE 在 1 ~ 100 μg 呈良
好的线性关系,精密度良好,平均加标回收率为
99. 1%。所测得的扁桃桃仁中维生素 E 的含量在
7. 0 ~ 15. 3 μg·g -1。测定结果表明,5 种不同产地的
表 2 不同地区的蒙古扁桃维生素 E的测定
No. 产地 α-VE /μg·g - 1
1 雅布格戈壁 15. 31
2 贺兰山沟 14. 82
3 固阳爬榆树 7. 027
4 忽鸡沟 8. 396
5 九峰山 12. 44
蒙古扁桃种仁中的 α-维生素 E 含量均低于扁桃种
仁(208. 5 μg·g -1)[8],而高于长柄扁桃种仁(2. 82
μg·g -1)[9]、核桃油(6. 6 μg·g -1)。
维生素 E的提取溶剂常用正己烷、无水甲醇[10]
或者无水乙醇[11],近年来更多采用的提取溶剂是后
两种。本文采用无水乙醇作为溶剂,利用超声提取
法对样品进行处理,能够很好的分离 α-VE,通过高
效液相法可获得良好的峰形及合适的保留时间。此
法样品处理不需要皂化、萃取等烦琐步骤,减少了
热源和空气对 α-VE 产生的影响,提取率高,且
HLPC简单快速,适于大批样品的分析。
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[责任编辑 顾雪竹]
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第 19 卷第 12 期
2013 年 6 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol. 19,No. 12
Jun.,2013