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非洲臀果木提取物对由bFGF所致NIH_3T_3细胞增生的抑制作用



全 文 :老年医学与保健 2007 年第 13 卷第 6 期 Geriatr Health Care, 2007,Vol.13.No.6
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目 前 有 证 据 表 明 碱 性 成 纤 维 细 胞 生 长 因 子
(bFGF)在良性前列腺增生(BPH)的发生过程中起了
重要作用,非洲臀果木提取物对由 bFGF 所致的 BPH
具有明显的抑制作用。本实验进一步证实在体外非洲
臀果木提取物对由 bFGF 所致的 NIH3T3 成纤维细胞增
生有抑制作用。
材料和方法
非洲臀果木提取物由利博福尼制药公司提供。
NIH3T3 细胞、DMEM 培养液、1640 培养液、10% 胎牛
血清和 bFGF 由上海细胞生物学研究所提供。溴化甲
基噻唑基四唑(MTT)液由 Merck 公司提供。DMSO 由
Sigma 公司提供。DG3022 酶联免疫检测仪由华东电子
管厂制造。
用含 NIH3T3 细胞 DMEM 培养液铺板,并在 37℃
恒温下培养过夜。把样本分为 6 组。把 NIH3T3 细胞单
独培养和加入bFGF 50 ng的两组作为对照组。另四组
作为实验组,分别在 NIH3T3 细胞中加入 10 μg/mL 臀
果木提取物,20 μg/ml 臀果木提取物,50 ng bFGF+10
μg/ml 臀果木提取物,50 ng bFGF+20 μg/ml 臀果木提
取物。继续培养 48 h,然后每个样本取细胞悬浮液在
光学显微镜下进行细胞观察,并用 MTT 法测定细胞
吸光度(OD)值。
统计学处理:用 SPPS 15.0 软件对数据进行处理 ,
用 -x±s 表示计量资料结果。两个对照组的比较采用
成组资料的 t 检验,实验组与对照组的比较采用方差
分析中邓尼特 t 检验法。
结  果
在添加臀果木提取物 48 h 后,所有实验中细胞
成活率都超过 95%,未发现有直接毒性证据。
细胞记数情况:见表 1~6。
未加 bFGF 组
非洲臀果木提取物对由 bFGF 所致 NIH3T3 细胞
增生的抑制作用
徐 骏 钱伟庆 宋建达
【摘要】 目的 通过体外观察非洲臀果木提取物对由碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)所致 NIH3T3 细胞增生的
作用来了解其治疗良性前列腺增生的机理。方法 在体外培养 NIH3T3 细胞后,分别在其中加入 bFGF 和非洲臀果木
提取物。继续培养 48 h,然后每个样本取细胞悬浮液在光学显微镜下进行细胞观察,并用溴化甲基噻唑基四唑(MTT)
法测定细胞 OD 值。最后比较各组细胞生长情况,并进行统计学分析。 结果 在 NIH3T3 细胞中加入 bFGF 后,细胞记
数明显增多,再加入非洲臀果木提取物后,细胞记数明显减少。用 MTT 法测定细胞 OD 值,加入 bFGF 后,OD 值明显
增加,再加入非洲臀果木提取物后,吸光度(OD 值)明显减少。以上结果有统计学意义。 结论 bFGF 对 NIH3T3 细胞
有明显刺激生长的作用。非洲臀果木提取物不论有无 bFGF 存在对 NIH3T3 细胞的生长均有抑制作用。
【关键词】 成纤维细胞生长因子 2; 非洲臀果木; 前列腺增生; NIH3T3 细胞
[ 中图分类号 ] R329.28 [ 文献标识码 ] A [ 文章编号 ] 1008-8296(2007)-06-0360-03
Inhibitory effects of Pygeum africanum extract on proliferation of NIH3T3 cells induced by BFGF XU Jun,
QIAN Wei-qing, SONG Jian-da Department of Urology, Huadong Hospital, Fudan University, Shanghai 200040, China
【Abstract】 Objective To observe the inhibitory effects of Pygeum africanum extract on proliferation of cultured 3T3
fibroblasts stimulated by basic fibroblast growth factor (BFGF) in order to gain an insight into its mechanism of action in the
treatment of benign prostatic hyperplasia (BPH). Methods BFGF and Pygeum africanum extract were added to NH3T3 cells
separately, and cultured for 48 h. The cell suspension was observed under an optic microscope, and the value of optic density
(OD) was detected by MTT method. Results Addition of BFGF in NIH3T3 cells increased the number of cells and the OD value,
and addition of Pygeum africanum decreased the number of cells and the OD value. The difference was statistically significant.
Conclusions BFGF stimulated the growth of NIH3T3 cells, while Pygeum africanum extract inhibited the growth of NIH3T3
cells either in the presence or in the absence of BFGF.
【Key words】 Fibroblast growth factor 2; Pygeum africanum; Prostatic hyperplasia; NIH3T3 cells
作者单位: 200040 上海市,复旦大学附属华东医院泌尿外科
老年医学与保健 2007 年第 13 卷第 6 期 Geriatr Health Care, 2007,Vol.13.No.6
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对照组 1:NIH3T3 细胞单独培养
实验组 1:NIH3T3 细胞 +10 μg/ml 臀果木提取物
实验组 2:NIH3T3 细胞 +20 μg/ml 臀果木提取物
经 t 检验发现实验组 1 与对照组 1 差异有统计学
意义(P<0.01),实验组 2 与对照组 1 差异有统计学意
义(P<0.001)。
加 bFGF 组
对照组 2:NIH3T3 细胞 +50 ng bFGF
实验组 3:NIH3T3 细胞 +50 ng bFGF+10 μg/ml 臀
果木提取物
实验组 4:NIH3T3 细胞 +50 ng bFGF+20 μg/ml 臀
果木提取物
经 t 检验发现实验组 3 与对照组 2 差异有统计学
意义(P<0.001),实验组 4 与对照组 2 差异有统计学意
义(P<0.001)。
经 t 检验发现对照组 1 与对照组 2 差异有统计学
意义(P<0.001)。
测定细胞 OD 值情况:
经 t 检验发现实验组 1 与对照组 1 差异无统计
学意义(P=1),实验组 2 与对照组差异有统计学意义
(P<0.01)。
经 t 检验发现实验组 3 与对照组 2 差异有统计学
意义(P<0.01), 实验组 4 与对照组 2 差异有统计学意
义(P<0.001)。
经 t 检验发现对照组 1 与对照组 2 差异有统计学
意义(P<0.001)。
讨  论
根据本实验中无论细胞记数还是用 MTT 测定的
细胞 OD 值,对照组 1 与对照组 2 差异都有统计学意
义的结果,我们可以得出 bFGF 对 NIH3T3 细胞有明显
刺激生长的作用的结论。另外实验中还发现非洲臀果
木提取物对 NIH3T3 细胞无直接毒性作用,它可能是通
过抑制细胞有丝分裂而促进细胞凋亡。在细胞记数和
MTT 测定的细胞 OD 值方面,实验组 2 和对照组 1 以及
实验组 4 和对照组 2 差异均有统计学意义。这可提示
非洲臀果木提取物不论有无 bFGF 存在对 NIH3T3 细胞
的生长均有抑制作用。实验组 1 和对照组 1 在 MTT 测
定的细胞 OD 值上数据差异无统计学意义,暗示非洲
臀果木提取在抑制 NIH3T3 细胞有丝分裂上需有一定
浓度。
我们发现 bFGF 在体外确实对 NIH3T3 这种成纤维
细胞的生长有明显的促进作用 , 那么在 BPH 患者病程
中它是否起同样作用呢?
bFGF 是由 146 个氨基酸组成的多肽生长因子,
体内分别存在分子量为 18 000、22 000 和 24 000 等数
种同种异构体。bFGF 是细胞重要的有丝分裂促进因
子,也是纤溶酶原激活剂和Ⅳ型胶原酶的诱导剂,它
参与机体发育、血管形成、组织修复、伤口愈合以及
某些病理过程 [1]。一些理论认为,随着年龄增长,反
复微损伤(排尿、射精和感染)会导致一种成纤维生
长因子的释放,从而导致纤维肌瘤的形成,最终形成
表 1 各组细胞记数情况 ( 个 /HP)
对照组 1 实验组 1 实验组 2
1
2
3
均值
92
96
97
95±2.65
85
82
88
85±3.00
51
47
46
48±2.65
表 2 各组细胞记数情况 ( 个 /HP)
次数 对照组 2 实验组 3 实验组 4
1
2
3
均值
146
155
163
155±8.50
92
106
90
96±8.72
88
80
81
83±4.36
表3 NIH3T3 细胞单独培养与+50 ng/ml bFGF后细胞记数情况(个/HP)
次数 对照组 1 对照组 2
1
2
3
均值
92
96
97
95±2.65
146
155
163
155±8.50
表 4 未加 bFGF 组 MTT 测定的细胞 OD 值
次数 对照组 1 实验组 1 实验组 2
1
2
3
均值
0.24
0.28
0.28
0.27±0.02
0.27
0.24
0.29
0.27±0.03
0.19
0.18
0.18
0.18±0.01
表 5 加 bFGF 组 MTT 测定的细胞 OD 值
次数 对照组 2 实验组 3 实验组 4
1
2
3
均值
0.45
0.42
0.43
0.43±0.02
0.34
0.39
0.32
0.35±0.04
0.25
0.26
0.27
0.26±0.01
表6 NIH3T3 细胞单独培养与+50ng/ml bFGF后MTT测定的细胞OD值
次数 对照组 1 对照组 2
1
2
3
均值
0.24
0.28
0.28
0.27±0.02
0.45
0.42
0.43
0.43±0.02
老年医学与保健 2007 年第 13 卷第 6 期 Geriatr Health Care, 2007,Vol.13.No.6
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良性前列腺增生 [2]。
有证据表明,bFGF 在前列腺腺体尿道区的浓度
比在前列腺腺体周边区的高,而良性前列腺增生的
病理组织学过程正是从前列腺腺体尿道区开始的 [3]。
Sinowatz 等 [4] 研究中用放免分析法发现每克 BPH 组织
中含有 450-950ng bFGF,其浓度远高于正常前列腺组
织。bFGF 分布于成纤维细胞、内皮细胞及平滑肌细
胞,而在上皮细胞中没有发现。由此推测 bFGF 有特
异的基质促有丝分裂作用,从而在 BPH 发生中扮演了
重要角色。另外, Giri 等 [5] 研究也发现 bFGF 在 BPH 组
织中浓度是正常前列腺组织的 2 倍,它的浓度与前列
腺基质增殖在统计学上有相关性。免疫组化研究发现
在接近前列腺腺上皮的基质中,无论是正常还是增生
的前列腺组织都有较高的 bFGF 的表达。结果在前列
腺上皮细胞中发现存在 IL-8,它能诱导基质细胞产生
bFGF,并有 bFGF 刺激上皮及基质细胞的增长,从而
发生前列腺增生。
另外,有证据证明在只有双氢睾酮(DHT)存在
的情况下,前列腺细胞不发生增殖,只有在生长因子
存在的条件下前列腺细胞才发生增殖,其中的 bFGF
具有促有丝分裂作用 [6]。Cussenot 等 [7] 认为睾丸酮在
前列腺上皮细胞内被代谢成 DHT,DHT 进而刺激前列
腺间质成纤维细胞的生成,后者产生多肽的生长因子
反过来刺激上皮的生长。其中 bFGF 及 KGF 被认为是
最重要的。BPH 主要表现为间质及腺体增生,间质增
生是 BPH 形成的第一步。因此,BPH 组织中 bFGF 过
度表达可能是间质增生的主要原因。
非洲臀果木提取物来源于非洲洋李干树的树皮,
含有脂肪酸、石炭酸、萜酸、脂肪醇、固醇类、三萜类、
维生素 E 和链烷类。它对所培养的成纤维细胞自发生
理性增生有抑制作用,但它对 bFGF 所诱导的细胞增
生的抑制作用更大。本实验在体外试验中证实了这一
点,国外实验也有类似发现 [8]。为此我们推断非洲臀
果木提取物在临床上能控制和缩小 BPH 患者的前列
腺体积。
参考文献
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5 Giri D, Ittmann M. Interleukin-8 is a paracrine inducer of
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8 Paubert-Braquet M, Monboisse JC, Servent-Saez N, et al.
Inhibition of bFGF and EGF-induced proliferation of 3T3
fibroblasts by extract of Pygeum africamum (Tadenan). Biomed
Pharmacother,1994,48: 43~47.
(收稿:2007-08-29)
  作者简介 徐 骏 男 1968年生。现任复旦大学附属华东
医院泌尿外科副主任医师。主要从事前列腺疾病的诊治和研究工
作。
上海市康复医学会 20 周年庆祝大会征文通知(第一轮)
上海市康复医学会定于 2008 年 4 月中旬召开学会成立 20 周年庆祝大会。
一.征文范围 (一)已发表或待发表的与康复相关医疗、教育、管理类文章:1.康复医学相关基础理论;2.功能评定;3.常见疾病
及功能障碍的康复治疗;4.社区康复、康复护理、康复营养、中医传统康复、康复工程、康复教育、康复管理等;(二)20 年来上海市康复医
学实用新技术、学术新成果展示(三)20 年来上海市康复医学科规范化建设介绍
二.参会对象 1.各级医院康复医学科、老年医学科、护理部及营养科等;2.康复教育、管理、社区康复等;3.残联系统;4.康复专
业毕业生(免注册费);5.康复医疗设备厂商
三.会议注册费 会议及资料费 400 元(含学分)。会议报到时间及地点(详见第二论通知)。
四.征文要求 论文及摘要格式按科技期刊要求,文责自负。欢迎 E-mail 投递,邮寄者请注明“年会征文”字样。会议授予国家级继续教
育Ⅰ类学分 10 分。
论文截至日期:2008 年 2 月 28 日,邮箱:LNKF2008@yahoo.com.cn
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