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火棘果汁干预砷中毒小鼠肝功能损害指标的变化



全 文 :火棘果汁干预砷中毒小鼠肝功能损害指标的变化
·基础研究·
韦忠恒 !,胡 柳 ,黄剑娴
!右江民族医学院附属医院肝胆外科,广西壮族自治区百色市 #$$%%%&
右江民族医学院临床医学系,广西壮族自治区百色市 #$$%%%
韦忠恒,男,!’() 年生,广西壮族自治区隆安县人,壮族,!’’ 年广西右
江民族医学院毕业,主治医师,讲师,主要从事肝胆外科基础和临床研究。
中图分类号 *+#’’,- 文献标识码 *. 文章编号 *!(/!0#’(1%%(2$0%%’’0%$
收稿日期*%%(0%!0!) 修回日期*%%(0%-0% (%(0#%0!0-)/ 3 4·52
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韦忠恒+胡柳+黄剑娴4火棘果汁干预砷中毒小鼠肝功能损害指标的变化 J1K4中国临
床康复,/@@A,*@C/DEFGGH*@* JLLL4M(>7N647&OK
摘要
目的:观察蔷薇科火棘属植物火棘浓缩果汁对小鼠砷中毒肝损害的干
预效果。
方法:实验于 %%#0!% 3 ! 在广西右江民族医学院附属医院外科实验
中心完成。!选用健康昆明小鼠 (% 只,雌雄不拘。按随机摸球法将小
鼠分为 ( 组,每组 !% 只:对照组,模型组,低、中、高剂量火棘果汁治疗
组和硒治疗组。应用 -%% 照组外其余小鼠皮下注射制备砷中毒模型,隔日 ! 次,共 !# 次。染毒结
束后第 / 天,低、中、高剂量火棘果汁治疗组:灌胃 ,-,!% 棘浓缩果汁(火棘鲜果实,采自广西隆林县,采用浸提法将火棘鲜果实
进行分级、粉碎、榨汁、过滤、真空浓缩自制浓缩果汁;储存于 -c#_的
冰箱内);硒治疗组:灌胃硒溶液 !%% 胃等量生理盐水。各组均连续灌胃 $% J。#实验结束后取实验小鼠眼
球血,按试剂盒说明书,用硫代巴比妥酸显色法测定丙二醛水平,用改
良赖氏法测定丙氨酸氨基转移酶活性,用二硫代二硝基甲酸法测定谷
胱甘肽过氧化物酶活性。$计量资料差异比较采用方差分析。
结果:小鼠 (% 只均进入结果分析。!高、中剂量火棘果汁治疗组和硒治
疗组及对照组血清丙二醛水平和丙氨酸氨基转移酶活性均明显低于模
型组(! a %,%#),谷胱甘肽过氧化物酶活性明显高于模型组(! a %,%#);
低剂量火棘果汁治疗组血清丙氨酸氨基转移酶活性明显低于模型组(!
a %,%#),其他 项指标与模型组相近(! b %,%#)。高剂量火棘果汁治
疗组血清丙二醛水平和丙氨酸氨基转移酶活性均明显低于低剂量火棘
果汁治疗组(! a %,%#),谷胱甘肽过氧化物酶活性明显高于低剂量火棘
果汁治疗组(! a %,%#);中剂量火棘果汁治疗组血清谷胱甘肽过氧化物
酶活性明显高于低剂量火棘果汁治疗组,其他 项指标与低剂量火棘
果汁治疗组相近(! b %,%#)。
结论:火棘果汁可能通过消除氧自由基,减轻砷中毒小鼠肝损害;高、中
剂量火棘果汁作用效果明显优于低剂量。
主题词:植物I 药用;砷 3中毒;小鼠;肝疾病 3药物作用
E 引言
火棘(SE:9A9=;U9 +>7<)为蔷薇科火棘属植物,其
果实红色,亦称赤阳子,味酸甜,是国内重要的野生可
食果植物资源。其果实中可溶性果糖、葡萄糖含量为
!%dc!$d,含有多种维生素和 !) 种氨基酸,其中包
含 ) 种人体必需氨基酸;还含有 # 种脂肪酸和 !) 种
无机盐及微量元素,其中 ^7,OG,e=,N= 等微量元素
含量较高,其营养成分种类齐全、含量丰富、比例协
调。火棘果实中超氧化物歧化酶活力强 f!,g。火棘具有
健脾消食,活血止血等功能,火棘总提物具有清除氧
自由基,降血脂,增强免疫力,增强体力和促进消化功
能等作用,具有较高的营养保健价值 f$g。本实验以亚砷
酸钠染毒复制小鼠砷中毒模型,本实验旨在观察火棘
浓缩果汁对砷中毒模型小鼠血清中丙氨酸氨基转移
酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性及丙二醛水平的影响。
F 材料和方法
设计:完全随机分组设计。
中国临床康复 第 *@卷 第 /D期 %%(0%(0%出版
.#)%/0/ 1$’2%+3 $- .3)%)*+3 4/#+5)3)6+6)$%7 1’%/ 89 899: ;$3< =9 >$< 8? GG
!# $%&$’()*% +# *$’$,&- . /
!!!#$%&’(&)* ’(+,,-./-,01234&)* 韦忠恒0等1火棘果汁干预砷中毒小鼠肝功能损害指标的变化
单位:右江民族医学院附属医院肝胆外科,右江
民族医学院临床医学系。
材料:实验于 *--(’$- . $*在广西右江民族医学院
附属医院外科实验中心完成。选用健康昆明种 +(&23
小鼠 %-只,雌雄不拘,鼠龄 4- 5,体质量 $67** 8,由广
西右江民族医学院动物室提供(许可证号:9:;(桂)
*--,---%)。雌雄分笼喂养。按随机摸球法将小鼠分为
% 组,每组 $- 只:对照组,模型组,低、中、高剂量火棘
果汁治疗组和硒治疗组。
药品和试剂:火棘鲜果实,采自广西隆林县,经右
江民族医学院民族医药协会鉴定为全缘火棘(<=>?@
A?BCD? ?C?E?BCFGF5HI J?BAH C?KL),由本课题组自制浓
缩果汁(采用浸提法的技术要点将火棘鲜果实进行分
级、粉碎、榨汁、过滤、真空抽气浓缩;储存于 ,7( M的
冰箱内)。亚砷酸钠(购自湖南水口山化学试剂厂,国
产分析纯),丙二醛、谷胱甘肽过氧化物酶测定试剂盒
为北京建成生物工程研究所出品;丙氨酸氨基转移酶
测定试剂盒为四川省迈克科技有限公司产品。
方法:染毒与观察:将亚砷酸钠用生理盐水配制
成 ,-- N8 . 3 溶液,对模型组、各剂量火棘果汁治疗
组和硒治疗组小鼠进行染毒。染毒剂量按 , N8 . O8
给药(半数致死量:)167$*1( N8 . O8P,Q的 4*R7,-16R)
即 $- N3 . O8 溶液给药,皮下注射,隔日 $ 次,共染毒
$(次S4- 5T。染毒结束后第 &天,低、中、高剂量火棘果
汁治疗组:灌胃 *,,,$- N3 .(O8·5)火棘浓缩果汁;硒
治疗组:灌胃硒溶液 $-- !8 .(O8·5)P(Q;对照组和模型
组:灌胃等量生理盐水。各组均连续灌胃 4- 5。实验小
鼠每日用自制饲料喂养 P%Q。每天观察记录实验小鼠的
进食、活动、反应、粪便、皮毛、死亡等情况。
指标测定:实验结束后取实验小鼠眼球血,按试
剂盒说明书,用硫代巴比妥酸显色法 P&Q测定丙二醛水
平,用改良赖氏法测定丙氨酸氨基转移酶活性,用二
硫代二硝基甲酸法测定谷胱甘肽过氧化物酶活性。
主要观察指标:各组小鼠血清丙氨酸氨基转移
酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性及丙二醛水平比较。
统计学分析:数据由第一作者采用 < $-1- 软
件完成统计处理。结果采用 561 表示;计量资料差异比
较采用方差分析。
! 结果
*1$ 一般情况 纳入小鼠 %- 只,均进入结果分析,无
脱失值。小鼠染毒 $( 5 后,小鼠开始脱毛。给药结束
后,模型组脱毛较重,以背部为主,有明显的中毒症
状,体质量增长较其他组慢,脱毛明显,而各治疗组和
对照组中毒症状较轻。
*1* 火棘果汁对砷中毒小鼠血清丙氨酸氨基转移
酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性及丙二醛水平的影响
见表$。
由表 $ 可见 0高、中剂量火棘果汁治疗组和硒治
疗组及对照组血清丙二醛水平和丙氨酸氨基转移酶
活性均明显低于模型组(7 U -1-(),谷胱甘肽过氧化
物酶活性明显高于模型组(7 U -1-();低剂量火棘果
汁治疗组血清丙氨酸氨基转移酶活性明显低于模型组
(7 U -1-(),其他 *项指标与模型组相近(7 V -1-()。高
剂量火棘果汁治疗组血清丙二醛水平和丙氨酸氨基转
移酶活性均明显低于低剂量火棘果汁治疗组(7
U -1-(),谷胱甘肽过氧化物酶活性明显高于低剂量火
棘果汁治疗组(7 U -1-();中剂量火棘果汁治疗组血
清谷胱甘肽过氧化物酶活性明显高于低剂量火棘果汁
治疗组,其他 *项指标与低剂量火棘果汁治疗组相近
(7 V -1-()。
讨论
砷是环境中常见的污染物之一,是严重影响人类
健康的环境毒物和已知的致癌物。砷是一种胞质毒物,
在体内在体内脏器组织中蓄积,易与巯基结合,形成稳
定的络合物,从而阻碍细胞呼吸、分裂和增殖,使细胞
代谢发生障碍;并对多种酶有抑制作用,引起神经系
统、肝脏、肾脏等多个重要器官发生病变。蒙山等[6]动
物实验表明,砷中毒大鼠肝组织中蓄积,肝组织显微镜
下观察显示有肝细胞变性、炎症及点状坏死。:FH 等P)Q
发现大鼠暴露于亚砷酸钠 $-周后,与对照组相比,各
处理组肝组织砷浓度均高于对照组。砷对肝细胞的影
响可以通过甲基化过程、脂质过氧化影响脂代谢,直接
损伤肝细胞等多种途径引起肝脏损伤。哺乳动物可通
过各种途径对无机砷解毒,其中无机砷的甲基化是机
体内砷降解的主要途径,肝脏为无机砷甲基化代谢的
主要场所。砷参与甲基化过程也砷暴露导致肝脏抗氧
化系统发生变化,是砷致肝脏损伤的另一重要机制,脂
质过氧化进程中可以产生多种自由基和非自由基产
物,可引起细胞功能紊乱,或直接攻击细胞造成损伤。
砷在肝脏甲基化降解后,主要经胆汁排泄,这一过程需
要消耗肝内谷胱甘肽。大量研究发现,砷暴露鼠肝组织
中谷胱甘肽、%’磷酸葡萄糖脱氢酶、谷胱甘肽过氧化
物酶和超氧化物歧化酶活力明显降低,肝组织中脂质
过氧化物及代谢产物丙二醛水平,同时伴随不同程度
的肝细胞损伤,甚至肝纤维化,提示脂质过氧化可能参
表 $ 各组小鼠血清丙氨酸氨基转移酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性及丙
二醛水平比较 (56103W$-)
剂量 谷胱甘肽过氧化物酶S!O?C . 3T
丙二醛
S!NGE . 8T
丙氨酸氨基
转移酶SBO?C . 3T
对照组
模型组
低剂量火棘果汁治疗组
中剂量火棘果汁治疗组
高剂量火棘果汁治疗组
硒治疗组
,1*4%X-16%,?
(1,*4X$1$-*
(1-&(X-1,,-
,14%(X-1)-6?
41)4%X$14$*?Y
,1446X-16&,?
&-$16$X4$,1-%?
$ $-41&*X46)1(6
6$,1$%X$641(6?
6$,1$%X$641(,?
(4(1&&X$)%1&$?Y
%6)14-X*%-1&*?
41(&X-1*%?
*1&6X-1,$
41-6X-1$)
4144X-1**?Y
414&X-1$&?Y
414&X-1*,?
与模型组比较,?7 U -1-(;与低剂量火棘果汁治疗组比较,Y7 U -1-(
组别
-
-
* N3 . O8
, N3 . O8
$- N3 . O8
$-- !8 . O8
!
与了肝脏细胞功能损害过程!#,$。
针对砷中毒致肝损害的动物和临床研究尚处于
初步探索阶段。治疗研究较多的有硒对砷的拮抗作
用,有机硒是目前治疗砷中毒的标准药物。抗氧化物
如超氧化物歧化酶,银杏叶片等对砷中毒肝损害的保
护作用[%]。蒙山等[&]应用海尔福口服液治疗砷中毒小
鼠,观察丙氨酸氨基转移酶、谷胱甘肽过氧化物酶活
性及肝脏的病理学变化,结果表明,海尔福口服液具
有对抗砷及其化合物对小鼠肝脏的损害。
本实验结果显示:模型组小鼠的血清丙氨酸氨基
转移酶活性明显高于对照组、各剂量火棘果汁治疗组
与硒治疗组(! ’ #(#)),说明砷中毒对小鼠肝脏功能
有明显受损害;但各剂量火棘果汁治疗组与硒治疗组
接近(! * #(#)),说明服火棘果汁对肝脏具有良好的保
护和修复作用。模型组小鼠血清丙二醛水平明显高于对
照组和各剂量火棘果汁治疗组及硒治疗组(! ’ #(#));
而谷胱甘肽过氧化物酶活性却明显低于对照组和各
剂量火棘果汁治疗组(! ’ #(#))。同时显示,中、高剂
量火棘果汁治疗组的治疗效果均优于低剂量火棘果
汁治疗组。
火棘浓缩果汁中含有多种维生素和多种人体必
需氨基酸,营养成分种类齐全、含量丰富、比例协调,
超氧化物歧化酶活力强,是机体抗氧化系统中重要的
金属酶类,它能够有效地清除生物氧化产生的多种自
由基和非自由基产物。丙二醛是生物膜不饱和脂肪酸
(花生四烯酸)脂质过氧化的降解产物,它的增加,说
明体内抗氧化能力降低,不饱和脂肪酸脂质过氧化加
强。谷胱甘肽过氧化物酶是含硒的酶类,主要在肝脏
合成,是机体重要的含巯基,催化体内过氧化氢或过
氧化物与还原型谷胱甘肽反应,生成生成氧化型谷胱
甘肽和水,使过氧化物被清除,并再由一氧化氮合酶
供氢使氧化型谷胱甘肽重新被还原成谷胱甘肽,从而
保护肝细胞膜、蛋白酶和核酸等免遭损害。
本实验发现模型组小鼠血清谷胱甘肽过氧化物
酶活性显著降低,对体内过氧化物的清除能力下降,
生物膜上的不饱和脂肪酸易被氧化,生成过氧化脂
质,损伤生物膜,丙二醛水平显著增高,血清丙氨酸氨
基转移酶活性明显高。但经过火棘浓缩果汁治疗及标
准药物硒的治疗后砷中毒小鼠的谷胱甘肽过氧化物
酶活性显著提高,丙二醛水平显著降低。血清丙氨酸
氨基转移酶活性与对照组无明显差异,说明火棘果汁
对砷中毒小鼠肝损害具有较显著保护和修复作用。其
机制可能与火棘浓缩果汁中不仅超氧化物歧化酶活
性强,而且能够刺激机体产生谷胱甘肽过氧化物酶,
有效地清除生物氧化产生的多种自由基的能力,提高
机体的抗氧化活性,减少氧自由基对肝细胞的损害作
用有关。
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本刊被国内外数据库及文摘杂志列为源期刊
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《中国组织工程研究与临床康复》(原《中国临床康复》)杂志社
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