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菘蓝提取物对小鼠免疫性肝损伤的保护作用



全 文 :2012年 第30卷 第6期
2012 Vol.30 No.6
新疆中医药
Xinjiang Journal of Traditional Chinese Medicine
近年来,随着新药的研发和临床应用,药物诱
导的肝损伤越来越受到人们的关注,但由于许多具
有肝脏毒性的药物治疗原发病的疗效确切,且暂时
不可替代,故如何在不影响药物疗效的前提下减轻
药物引起的肝损伤,已成为临床治疗过程中所要面
对的关键问题之一。菘蓝又名大青,别名:茶蓝、板
蓝根、大青叶,具有清热解毒、凉血利咽之功效,中
医常用于抗炎、抗病毒以及急慢性肝炎、骨髓炎等
疾病的治疗。已有报道证实,其提取物有效成分为:
有机酸类、木脂素类、生物碱类、甾醇类、芥子苷
类、含硫类化合物、多种氨基酸、核苷和多糖类[1-3]。
菘蓝提取物具有一定的肝脏保护作用,而其肝脏
保护作用则可能因其使用剂量的不同而产生明显
差异,故为进一步探讨菘蓝提取物对肝损伤的影
响,本研究通过建立 BCG+LPS诱导的免疫肝损伤
模型,研究菘蓝提取物对其小鼠肝损伤的影响作
用,为菘蓝用于临床上肝损伤的治疗药品提供实
验依据。
作者简介:王轶睿(1978-),男,主管药师,新疆医科大学第一附属医院药学部临床药学科。电话:13579884315;E-mail:wangyirui415@sina.com
表 5 测定实验结果
产地及
标号
吸收度
(A)
平均吸收度
(A)
黄酮浓度
mg/L
每克浸膏中总
黄酮含量(mg/g)
和田 1
1 0.392 2 0.393 2 33.80 0.845
2 0.333 6
3 0.333 8
和田 2
1 0.293 0 0.293 1 25.32 0.633
2 0.292 1
3 0.374 3
和田 3
1 0.359 6 0.358 6 30.87 0.772
2 0.308 7
3 0.308 2
阿克苏 1
1 0.221 1 0.220 0 19.13 0.478
2 0.220 7
3 0.219 6
阿克苏 2
1 0.203 6 0.203 8 17.75 0.444
2 0.202 4
3 0.204 4
5 讨论
在本实验条件下芦丁标准品在 512nm 处有最
大吸收,所以选择 512nm为测定波长。在 4.384~
43.840 0mg/L范围内,吸光度与浓度线性关系良好
(r=0.999 7),平均回收率为 99.71%(RSD=3.82%),
不同样品芹菜根总黄酮含量为 0.444~0.845(mg/g)。
和田地区芹菜根总黄酮含量高于阿克苏地区芹菜
根总黄酮含量。
参考文献:
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2010:212-213.
(收稿日期:2012-10-22)
菘蓝提取物对小鼠免疫性肝损伤的保护作用
王轶睿, 王 捷
(新疆医科大学第一附属医院药学部, 新疆 乌鲁木齐 830011)
摘 要:目的:探讨菘蓝提取物对小鼠免疫性肝损伤的保护作用。方法:建立卡介苗(BCG)和脂多糖(LPS)诱导的小鼠免疫
性肝损伤模型,用全自动生化仪检测血清中ALT、AST水平,分光光度计测定肝匀浆中MDA、SOD含量,并观察肝脏病理
组织学变化。结果:菘蓝提取物可明显降低免疫性肝损伤小鼠血清中ALT和AST活性,同时能减少肝匀浆中MDA含量,
升高肝匀浆SOD活性。结论:菘蓝提取物对免疫性肝损伤具有保护作用。
关键词:菘蓝;免疫性肝损伤;保肝作用
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新疆中医药
Xinjiang Journal of Traditional Chinese Medicine
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物 昆明种小鼠,体重(18~22)g,由
新疆疾病控制中心动物房提供。
1.1.2 药品及试剂 菘蓝水提物,临床拟用量为
10g(生药)/天,1g 生药相当于 0.154 5g 浸膏;菘蓝
醇提物,临床拟用量为 10g(生药)/天,1g生药相当
于 0.3g浸膏,均由新疆医科大学第一附属医院药剂
研究室提供;联苯双酯(1.5mg/粒)北京协和药厂生
产,批号:国药准字 H11020980;丙氨酸转氨酶
(ALT)试剂盒,中生北控生物科技股份有限公司,批
号:120430;天冬氨酸转氨酶(AST)试剂盒,中生北
控生物科技股份有限公司,批号:120430; 丙二醛
(MDA)测试盒,南京建成生物工程研究所,批号:
20120315;超氧化物歧化酶(SOD)测试盒,南京建成
生物工程研究所,批号:20120421。
1.1.3 仪器设备 Saba-18 全自动生化分析仪;
3K30高速低温离心机(德国 Sigma公司)。
1.2 方法
1.2.1 动物模型的建立 采用卡介苗十脂多糖诱
导小鼠免疫性肝损伤 [4]。小鼠尾静脉注射 BCG0.2mL/
只,10天后,尾静脉注射 LPS 0.2mL/只(7.5ug)诱导
肝损伤,正常组小鼠尾静脉注射同等剂量的生理
盐水。
1.2.2 动物分组与处理 动物分空白组、模型组、
阳性对照组和给药组。灌胃给药,阳性对照组给予
联苯双酯,各给药组给予不同的菘蓝提取物,空白
组给予同等剂量生理盐水。造模结束后小鼠禁食
16h左右,称重,摘眼球采血。
1.2.3 检测指标及方法 小鼠摘眼球取血,放入
Eppendorf管中,3 500r/min离心 10min,分离血清。
按试剂盒说明,全自动生化仪测定 ALT、AST活性,
分光光度计测定肝匀浆组织中 MDA、SOD含量。小
鼠脱椎处死,立即取肝脏称重,肝脏系数=肝重/
体重。
1.2.4 数据处理 数据均以 x±sD表示,采用方差
分析和组间 t检验,P<0.05表示统计学差异,P<0.01
表示具有统计学差异。
2 结果
2.1 菘蓝提取物对免疫性肝损伤小鼠血清转氨酶
的影响 与正常组相比较,模型组血清 ALT、AST
水平升高,给予菘蓝提取物后血清中升高的 ALT、
AST水平显著降低(结果表 1)。
表 1 菘蓝提取物对免疫肝损伤小鼠血清 ALT、AST
和肝脏系数的影响(x±sD)
组别
剂量
(g/kg)
动物数
(只)
AST
(μL)
ALT
(μL)
肝脏系数
(%)
空白对照组 10 180.8±21.5 67.5±10.6 4.7±0.4
模型组 10 258.6±45.3++ 79.7±12.9 5.1±0.3++
阳性对照组组 0.4 10 215.3±27.3 60.4±4.3** 4.6±0.6*
菘蓝水提取物 0.4 10 220.3±37.2 70.9±10.2 4.6±0.5*
菘蓝醇提取物 0.4 10 206.6±20.8* 70.9±8.8 4.4±0.3**
注:#与空白组比 P<0.01;**与模型组比 P<0.01;* 与模型比
P<0.05
2.2 菘蓝提取物对免疫性肝损伤小鼠肝匀浆中
MDA、SOD水平的影响 模型组肝匀浆 MDA水平
升高,同时 SOD水平降低。给予不同溶剂提取的的
菘蓝提取物,可降低肝匀浆中升高的 MDA含量,同
时能提高肝匀浆中 SOD含量(结果见表 2)。
表 2 菘蓝提取物对免疫肝损伤小鼠血清 MDA、SOD和
肝脏系数的影响(x±SD)
组别
剂量
(g/kg)
动物数
(只)
MDA
(nmol/mL)
SOD
(U/mgprot)
空白对照组 10 10.01±5.22 23.57±8.00
模型组 10 26.20±9.45# 12.42±6.82#
阳性对照组 0.4 10 17.38±8.77* 22.98±5.00**
菘蓝水提取物 0.4 10 13.73±8.42** 22.25±3.05**
菘蓝醇提取物 0.4 10 12.80±5.09** 21.30±2.79**
注:# 与空白组比 P<0.01;* 与模型组比 P<0.05;** 与模型比
P<0.01。
3 讨论
3.1 免疫性肝损伤动物模型类似于人类肝炎发生
的病理生理过程,是筛选保肝药物较为理想的模型
之一[5-6]。本试验研究使用菘蓝提取物对免疫性肝损
伤动物模型进行干预,并通过相关数据统计分析后
发现,使用菘蓝提取物可使免疫性肝损伤小鼠的脏
器系数和血清转氨酶降低,而升高肝匀浆 SOD活
性,降低 MDA含量。故本实验研究证明菘蓝提取物
对 BCG和 LPS诱导的小鼠免疫性肝损伤具有良好
的保护作用。
3.2 目前研究证明,肝脏是清除内毒素的主要场
所,同时又是内毒素攻击的首要器官,而枯否细胞
在肝脏清除内毒素和内毒素肝损伤过程中发挥关
键作用,其在肝损伤时被激活,释放多种炎症介质
和细胞因子,参与炎症过程 [7 -9]。细菌脂多糖
(lipopolysaccha-ride,LPS)是革兰氏阴性细菌细胞
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中药的配伍不是随意相加和堆砌,而是有中医
理论指导的。中医方剂的组成,一般分为君药、臣
药、佐药、使药四个部分。君药是针对主病或主证起
主要治疗作用的药物;臣药是辅助君药增强治疗主
病或主证的药物,同时对兼病或兼证起主要治疗作
用;佐药是既配合君药、臣药加强治疗作用,又能清
除或减弱君、臣药的毒性、烈性;使药为引君药又能
调和诸药。例如主治外感风寒的麻黄汤:麻黄为君
药,辛温,发汗解表以散风寒,宣发肺气以平喘逆;
桂枝为臣药,辛甘温,温经和营,解肌散寒、助麻黄
发汗解表;杏仁为佐药,苦温,降肺气以助麻黄平
喘,散风寒以助麻黄、桂枝解表;甘草为使药,甘
温,调和诸药。当然,不是每个方剂都必须有“君、
臣、佐、使”四部分,有的方剂只有君臣两个部分,如
治肝火犯胃、嗳气、吞酸的左金丸,黄连为君药,性
苦寒,配以辛温的吴茱萸来制约黄连的苦寒,两药
相加,清肝泻火、降逆止呕,起相反相成的协同
作用。
药物的配伍与使用剂量很重要,同一种药物因
配伍不同、使用的剂量不同而作用不同。麻黄配桂
枝可发汗解表,而白芍配桂枝则和营止汗。桂枝汤
中桂枝与白芍等量,有调和营卫、解肌发表的作用;
桂枝量加重就成了温通心阳而降逆的桂枝加桂汤,
治阳虚心悸或气从少腹上冲心胸;白芍量加倍就成
了既解表又和里的桂枝加芍汤,治表寒虚证兼见腹
满胀痛。枳术汤和枳术丸都是由枳实、白术两味药
组成,枳术汤中枳实量倍于白术,以消导积滞为主,
现在有用于胃下垂的治疗;而枳术丸中白术量倍于
枳实,以健脾和中为主,用其治疗脾虚气滞消化不
良。另外,渗湿利水的五苓散只有按张仲景原方的
剂量给予,利尿效果方好,各药等量给予则疗效明
显减弱。可见,药物配伍时,各药之间剂量的比例是
壁结构中的类脂多糖体,广泛存在于人和动物的消
化道中。BCG首先激活致敏 T淋巴细胞,尤其是致
敏肝内枯否细胞和巨噬细胞,并大量聚集于肝脏,
当注射 LPS后进一步激活处于致敏状态的巨噬细
胞,释放大量的细胞毒性介质 IL-1β、TNF-α等[10-11],最
终引起肝细胞的损伤和凋亡,故述对上述两种细胞
毒性介质在免疫性肝损伤中的作用进一步研究有
非常重要的意义。
3.3 在本实验中给予肝损伤小鼠菘蓝提取物,测定
小鼠血清中 ALT、AST水平从而体现菘蓝提取物对
免疫肝损伤模型的保护作用。实验结果表明,菘蓝
提取物均可降低肝损伤模型小鼠血清中 ALT、AST
水平,提示菘蓝对肝损伤具有一定的保护作用,且
在同等临床剂量下醇提物效果强于水提物,而其对
肝损伤的确切机制则需进一步深入研究。
参考文献:
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浅谈中药配伍与辨证用药
马存娥, 包延军
(吉木萨尔县人民医院, 新疆 吉木萨尔 831700)
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