全 文 ：2006年 第7卷 第4期
山西中医学院学报
菘蓝(IsatisindigoticaFort.)为十字花科植物,其根为板
蓝根,其叶即大青叶,具清热解毒、凉血利咽之效。笔者对
菘蓝同一时期不同器官过氧化物 (POD)同工酶进行了测
定,分析比较其 POD同工酶谱特征,为探讨其抗氧化能力
和进一步开发利用菘蓝提供参考依据。
1 实验材料
仪器:DYY-Ⅱ-2C稳压稳流电泳仪、DYY-Ⅱ-28A型
垂直电泳槽、LD5-10型离心机,KQ-118超声波清洗器。
药物:4月至5月间,在本校药材种植圃随机采集生殖
生长期(具花蕾和花)的菘蓝若干株,用蒸馏水洗净,吸水纸
吸干水分,分别按根、叶、花蕾和花等不同器官依次取样。
2 实验方法
2.1 样品制备
称取样品(鲜品冷冻)1.0g,冰浴研磨,加入 1mL电极
缓冲液(pH8.3),冰浴超声提取 30min,0℃离心 20min,
8000r/min,上清液加等体积40%的蔗糖溶液混匀,置冰箱
内冷藏,供点样用。
2.2 试剂配制及凝胶制备
采用不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳。分离胶:浓度为7.5%;
浓缩胶:浓度为3.5%;电极缓冲溶液:pH8.3的Tris-Gly系
统。分离胶灌制完成后,置4℃冰箱中过夜,浓缩胶在电泳
前灌制。
2.3 电 泳
用微量进样器分别吸取 20μL样品液缓缓注入样品
槽底部,在负极槽电极缓冲液中加入1滴溴酚蓝指示剂示
踪,将电泳槽正负极与电泳仪正负极相连,电泳开始时控
制电流为15mA,待示踪指示剂行至距琼脂层约1cm时,
关闭电源,停止电泳。整个过程约需3h,为防止温度过高,
电泳过程在冰箱内进行。
2.4 染 色
取出胶板,标记前沿,将胶板浸于醋酸联苯胺溶液内,加
2~3滴30%双氧水,10min~15min后出现清晰的蓝色谱带。
3 结 果
3.1 基本谱型
胶片照相后,绘制电泳
图谱(见图1)。将根、叶、花
蕾、花各部位显现的酶带叠
加,形成菘蓝 POD同工酶
的基本谱带(见图2)。
由图2可知,菘蓝POD
同工酶共出现 3条谱带,从
负极到正极依次为A、B、C,
其中谱带B较轻,可见,菘
蓝在取样期内,POD同工酶
带数不多。
3.2 不同器官POD同工酶
特征
由图 1可知,根中 POD
同工酶为3条,其中A带活
性较强,而叶中只呈现C这条谱带,且活性不是很强,花蕾
和花中均显现A、C这2条谱带,且活性一致。
中药菘蓝过氧化物同工酶的测定
李桂兰
(山西中医学院,山西 太原 030024)
摘要 目的:对菘蓝不同器官的POD同工酶进行分析测定。方法:采用聚丙烯酰胺垂直板凝胶电泳。结果:菘蓝的POD
同工酶酶谱具有一定的器官特异性和稳定性。结论:同工酶变化与生物的生长发育之间具有特异性关系,可为生物生长
发育的调控研究提供参考。
关键词 菘蓝;POD;同工酶电泳鉴别
中图分类号:R284.1 文献标识码:A 文章编号:1671-0258(2006)04-0047-02
李桂兰,女,硕士,讲师,从事生物化学教学与科研工作
图2 菘蓝POD同工酶基本谱带
+
A B C
-
StudiesonPeroxidaseIsozymeofIsatisIndigoticaFort
LiGuilan
(ShanxiColegeofTCM,TaiyuanShanxi030024)
Abstract Objective:TodeterminetheperoxidaseisozymeofIsatisindigoticaFortdiffentpart.Methods:Polypropylene
amidegelelectrophoresiswasused.Results:Thesampleszymogramsofperoxidaseisozymehascharactersandstabili-
ties.Conclusions:ThenumberofisozymepaternbandsandenzymeactivitywereproportionaltothegrowingrateofIsatis
indigoticaFortanditsmetabolicactivity.Itwasvaluabletobeusedforcontrolingthegrowthofplants.
Keywords IsatisindigoticaFort;POD;electrophoresisidentificationofisozyme
-
+
A
B
C
图1 菘蓝不同部位POD同工酶图谱
根 叶 花蕾 花
中药制剂工程与技术
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2006Vol.7No.4
山西中医学院学报
《中国药典》2005年版收载的金银花为忍冬科植物忍
冬 LonicerajaponicaThunb.的干燥花蕾,山银花为红腺忍
冬 LonicerahypoglaucaMiq.华南忍冬 Loniceraconfusa
DC.和灰毡毛忍冬 LoniceramacrathoidesHand.-Mazz的干
燥花蕾。在此之前,忍冬、红腺忍冬和华南忍冬的干燥花
蕾均作为金银花被药典收载,具有相似的性状与功效,新
药典因二者化学成分的差异将其分别收载,因此,临床应
用时不再互相代用。但笔者在实际工作中发现,药典所记
载的二者的性状,用于鉴别有一定困难,本文试从性状与
显微两方面对两种药材进行鉴别。
1 性状鉴别
1.1 金银花
花蕾呈细长鼓槌状,稍弯曲,长 2cm~3cm,上粗下
细,上部直径约 3cm,下部直径约 1.5cm,外表黄白或绿
浅色,储久色深,密生短柔毛及腺毛。偶见卵形或椭圆形
大型叶状苞片(长达2cm~3cm),花萼细小,黄绿色,先端
五裂,萼筒类球形,长近2cm,无毛,萼齿卵状三角形或长
三角形,顶端尖而有长毛,外面和边缘都有密毛,长 1cm,
比萼筒稍短,花冠筒状,上部稍开裂。偶有开放的花,花冠
二唇型,冠筒稍长于唇部,少近等长,雄蕊 5,花丝着生于
筒壁,雌蕊1,子房无毛,气清香,味微苦。
1.2 山银花
1.2.1 红腺忍冬 花蕾长2.5cm~4.5cm,膨大处直径 0.8
cm~2cm,表面黄白或黄棕色,毛茸较少,小苞片条状披针
形而顶渐尖,萼筒无毛,先端五裂,裂片长三角形,长约为
萼筒的1/3~2/3,萼齿边缘有毛。开放者花冠下唇反转,花
柱无毛。
1.2.2 华南忍冬 花蕾长1.6cm~3.5cm,直径 0.5cm~2
cm,表面密被毛茸,苞片披针形,长约 1cm~2cm,萼筒椭
圆形,亦被毛,萼齿披针形或卵状三角形,外密被短柔毛,
子房有毛。
1.2.3 灰毡毛忍冬 花蕾长3cm~4.5cm,上部直径约 2
cm,下部直径约 1cm,表面棕绿或黄白色,萼筒无毛,萼
筒常有蓝白色粉,无毛或上半部或全部有毛,长近 2cm,
萼齿三角形,长1cm,比萼筒稍短,总花梗集结成簇,开放
者花冠裂片不及全长之半。质稍硬,捏之稍有弹性。
2 显微鉴别
2.1 金银花
腺毛多见两种,一种头部呈倒圆锥形,顶部平坦,侧
面观约 10个~33个细胞,排成 2层~4层,直径 48μm~
108μm,腺柄 2个~5个细胞,长 70μm~700μm;另一种
头部呈类圆形或扁圆形,侧面观约 6个~20个细胞,直径
24μm~80μm,腺柄2个~4个细胞,长 24μm~80μm。单
细胞非腺毛也有两种,一种厚壁,长约 45μm~990μm,直
径 14μm~37μm,壁厚 5μm~10μm,微具疣状突起,有
的具角质螺纹;另一种为薄壁非腺毛,极多,甚长,弯曲而
皱缩。花粉粒类球形,直径60μm~92μm,黄色,表面有细
密短刺及圆颗粒状雕纹,具3个萌发孔沟。
2.2 山银花
2.2.1 红腺忍冬 腺毛头部盾形而大,顶面观约 8个~40
个细胞,直径 60μm~176μm,侧面观约 7个~10个细胞,
排成 1层~2层。厚壁非腺毛长约 38μm~1408μm,有的
成钩状。
2.2.2 华南忍冬 腺毛头部倒圆锥形或盘形,顶端多凹
陷,侧面观约 10个~100个细胞,直径 32μm~152μm,排
成3层~5层。厚壁非腺毛长约848μm,具双或单螺纹。
3 讨 论
通过比较性状特征中毛茸在花冠、萼筒、萼齿、子房表
面的分布情况,及苞片的大小、形状,再结合显微特征中腺
毛及非腺毛的特征,基本可以准确地对两种药材进行鉴别。
4 结 论
文中所述方法在对金银花和山银花进行药材鉴别的
时候,具有方便、简单、有效的优点,但是仍有一定的局限
性。这方面已有多位学者进行了积极的探讨,如,张尊建等
利用 HPLC/UV/MS指纹图谱比较了忍冬和华南忍冬花蕾
中的化学成分,发现实验条件下,二者均有绿原酸、异绿原
酸、香茶酚、丁香酚四个峰,而忍冬另有熊果酸、十三烷酸、
corymbosin、3-甲基-4-羟基肉桂酸四个峰,华南忍冬则有
一咖啡酸峰。周日宣等利用 HPLC法比较了灰毡毛忍冬
与忍冬花蕾中绿原酸的含量,结果发现二者之间有很大
差异。濮祖茂等利用电镜扫描,发现不同产地的忍冬花蕾
中花粉粒在大小、刺状突起的密度、覆盖层与内层厚度之
比上存在较大差异。
(杨翠玲 山西职工医学院)
易混品金银花与山银花的鉴别
4 讨 论
由实验可知,菘蓝POD同工酶在其生长发育过程中的
不同组织、不同器官中有一定的特异性。由于POD同工酶
在植物体内普遍存在,通过对植物POD同工酶的研究,可
以探究同工酶谱变化与生长发育的关系,为生长发育的调
控提供参考。
同工酶的多种分子形式的时间特异性和组织特异性
在植物中普遍存在,植物体内各种酶的同工酶谱随着细胞
分化、组织器官及植株的生长、成熟而发生规律性的变化。
这种变化在一定程度上反映了植物在发育过程中基因表
达的时空顺序性,因而同工酶的酶谱特征可以作为植物组
织培养的一种生化指标。
同工酶分析技术从产生到现在已经将近 50年了,随
着科技的发展,这一技术越来越成熟。同工酶分析技术在
动物、植物、微生物、农业和医学等许多方面都有广泛的应
用,也取得了极为显著的成果。尤其是对分析生物繁殖、体
细胞杂交、染色体倍性、基因分化和表达、生物多样性保护
等。就目前来说,该技术仍不失为一种比较先进的技术,相
信随着科学技术的不断发展,同工酶分析技术应用范围将
会愈来愈广阔。
参考文献
[1]周顺伍.生物化学实验技术[M].北京:北京农业大学出版社,
1991:82.
(收稿日期:2006-06-09 修回日期:2006-07-06)
中药制剂工程与技术
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