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凹叶景天不同部位醇提物总黄酮含量测定及其体外抗氧化活性比较



全 文 :现代医药卫生 2013年7月30日 第29卷第14期 J Mod Med Health,July 30,2013,Vol.29,No.14
凹叶景天(sedum emarginatum migo)为景天科景天属植物,野
生资源丰富,全草在湘、鄂西土家族及民间广泛作为药用 [1]。具有
清热解毒、收敛止血、活血祛瘀、消肿止痛的功能,治疗痢疾、疮
毒、跌打损伤等症;浙江民间用来治疗肝炎。其主要含有异鼠李素
和槲皮素等黄酮类化合物 [2-3]。本研究通过体外抗氧化实验,考察
凹叶景天根、茎、叶、花部位 1,1-二苯基-2-苦基苯肼(DPPH)自由
基清除能力、总抗氧化能力和总还原力,并对各部位总黄酮进行
了含量测定,旨在为凹叶景天的生物活性及开发利用提供科学依据。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂 凹叶景天采自杭州九溪,经浙江中医药大学姚
振生教授鉴定;芦丁对照品购自中国药品生物制品检定所(批号:
100080-200707);DPPH 购自 Sigma 公司;无水乙醇、铁氰化钾、三
氯乙酸、三氯化铁、浓硫酸、磷酸钠、钼酸铵等试剂均为分析纯。
1.2 仪器 TU-1900 双光束紫外可见分光光度计(北京普析通
用仪器有限公司)、电子天平(北京赛多利天平有限公司)等。
1.3 方法
1.3.1 不同部位样品液的制备 凹叶景天按根、茎、叶、花分离后
置于 60℃烘箱干燥 6 h,粉碎。精密称取样品不同部位粉末 10 g,
分别加入 70%乙醇 60 mL,加热回流 3 次(2.0、1.5、1.5 h),合并提
取液,回收乙醇至无醇味,定容至 50 mL,待用。
1.3.2 总黄酮含量测定 [4] 精密称取 105 ℃干燥至恒质量的芦丁
对照品 0.019 8 g,加 70%乙醇溶解定容于 100 mL 容量瓶,得浓度
为 0.198 mg/mL 对照品溶液。精密吸取对照品溶液 0、1、2、3、4、5 mL
分别置于 25 mL 容量瓶中,各加水至 5 mL;加入 5%亚硝酸钠
(NaNO2)溶液 1 mL,摇匀,放置 6 min 后,加 10%硝酸铝[Al(NO3)3]
溶液 10 mL,混匀,静置 6 min 后,加 10%氢氧化钠(NaOH)溶液
10 mL,加 70%乙醇定容至 25 mL,15 min 后在 510 nm 处测定吸光
度值。以芦丁浓度为横坐标,以吸光度值为纵坐标,绘制标准曲
线。利用芦丁标准曲线计算样品溶液中总黄酮量 [5]。
1.3.3 抗氧化性测定
1.3.3.1 清除 DPPH 自由基活性测定 按照文献[6-7]的方法(稍
加修改),分别取不同浓度(0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mg/mL)的各样品
液1.0 mL,加入 3.0 mL 的 DPPH 溶液,室温避光反应 30 min,于
517 nm 波长处测定吸光度值(AS)。同时,在 517 nm 处测定不同
浓度样品 1.0 mL加 70%乙醇 3.0 mL 的吸光度值(AC),70%乙醇
1.0 mL加 DPPH 3.0 mL 吸光度值(A0)。并计算 DPPH 自由基清除
(SA)率:SA 率(%)=[1-(AS-AC)]/A0×100%。
1.3.3.2 总抗氧化能力测定 分别取不同浓度样品液(0.1、0.2、
凹叶景天不同部位醇提物总黄酮含量测定及其体外抗氧化
活性比较
程琳茗,李炳伦,严爱娟,徐义云,陈 京(浙江中医药大学生物工程学院,浙江 杭州 310053)
【摘 要】 目的 分析凹叶景天根、茎、叶、花各部位醇提物总黄酮含量及其抗氧化活性。 方法 以凹叶景天根、
茎、叶、花为研究对象,在测定其总黄酮含量的基础上,通过测定 1,1-二苯基-2-苦基苯肼(DPPH)自由基清除能力、总抗
氧化力和还原力来综合考察凹叶景天不同药用部位的抗氧化活性。 结果 凹叶景天根、茎、叶和花中总黄酮含量(以芦
丁计算)分别为 0.82、0.95、2.04、16.17 mg/g;但不同部位醇提物在对 DPPH 自由基清除能力、总抗氧化力和还原力上表现
不同,其中凹叶景天花对 DPPH 自由基的清除能力、抗氧化能力和还原力最强,其次为叶,茎与根较弱。 结论 总黄酮含
量与 DPPH 自由基清除率、总抗氧化能力和还原力呈正相关,黄酮类化合物可能是凹叶景天抗氧化作用的主要物质基础。
【关键词】 景天属; 醇类; 分离和提纯; 黄酮类; 自由基清除剂; 抗氧化活性
doi:10.3969/j.issn.1009-5519.2013.14.008 文献标识码: A 文章编号: 1009-5519(2013)14-2096-02
Content determination of total flavonoids in alcohol extract from different parts of sedum emarginatum migo and com-
parison of their in vitro antioxidant activities Cheng Linming,Li Binglun,Yan Aijuan,Xu Yiyun,Chen Jing(Institute of Bio-
engineering,Zhejiang Chinese Medical University,Hangzhou,Zhejiang 310053,China)
【Abstract】 Objective To determine the contents of total flavonoids in the alcohol extract of root,stem,leaves and flowers
of sedum emarginatum migo and to compare their antioxidative activities. Methods With the root,stem,leaves and flowers of se-
dum emarginatum migo as the research subjects and on the basis of determining their total flavonoids contents,the antioxidant ac-
tivities of different medicinal parts were comprehensively evaluated by determining the scavenging capability to DPPH free radi -
cals,total antioxidant capacity and reducing power. Results The total flavonoids contents from the root,stem,leaves and flowers
of sedum emarginatum migo were 0.82,0.95,2.04,16.17 mg/g respectively. But different parts of the alcohol extract had the dif-
ferent manifestations in the DPPH free radical clearing ability,total antioxidant force and reducing power. Among them,the flower
of sedum emarginatum migo had the strongest DPPH free radical clearing ability,total antioxidant force and reducing power,fol-
lowed by leaves,which of the stem and root were weaker. Conclusion The content of total flavonoids is positively correlated with
the DPPH free radical clearing ability,total antioxidant force and reducing power,flavonoids compounds may be the main material
basis for the antioxidative action of sedum emarginatum migo.
【Key words】 Sedum; Alcohols; Isolation & purification; Flavones; Free radical scavengers; Antioxidative activity
·论 著·
通讯作者:陈京(E-mail:cj00123@zjtcm.net)。
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现代医药卫生 2013年7月30日 第29卷第14期 J Mod Med Health,July 30,2013,Vol.29,No.14
0.3、0.4、0.5 mg/mL)1.0 mL,加入 3.0 mL 磷钼试剂溶液,95 ℃水浴
加热 90 min,放冷至室温,以蒸馏水为空白,695 nm 处测吸光度
值,吸光度值越大,表明抗氧化能力越强 [8-10]。
1.3.3.3 还原力的测定 分别取不用浓度的样品液(1.0、2.0、3.0、
4.0、5.0 mg/mL)1.0 mL,加入磷酸盐缓冲液(0.2 mol/L,pH=6.6)2.5 mL
和 1%的铁氰化钾溶液 2.5 mL,50 ℃水浴 20 min 后,加入 10%三氯
乙酸 2.5 mL,3 000 r/min 离心 10 min,吸取上清液 2.5 mL,加入蒸馏
水 2.5 mL 和 0.1%三氯化铁溶液 0.5 mL,在 700 nm处测吸光度值,
吸光度值越大,表明还原力越强[11-12]。
2 结 果
2.1 各样品中总黄酮含量测定结果 回归方程 :Y=28.056X+
0.033 4,r=0.999 4,表明样品浓度为 0.007 92~0.039 60 mg/mL 时线
性良好 。根 、茎 、叶和花中总黄酮含量分别为 0.82、0.95、2.04、
16.17 mg/g。
2.2 抗氧化性
2.2.1 对 DPPH 自由基清除作用 见表 1。
2.2.2 总抗氧化能力测定结果 见图 1。
2.2.3 还原力测定结果 见图 2。
3 讨 论
本实验表明,凹叶景天根、茎、叶、花的醇提物对 DPPH 自由
基均有较强的清除作用,且均随着浓度的增大对自由基的清除作
用逐渐增强,说明醇提物的浓度与自由基的清除作用有一定的量
效关系。当样品浓度为 0.1~0.5 mg/mL 时,在清除 DPPH 自由基方
面,凹叶景天花清除作用最强,叶次之,根和茎较弱。凹叶景天根、
茎、叶、花的醇提物均具有一定的抗氧化能力,并随各自浓度的增
加而逐渐增强,以凹叶景天花的抗氧化能力增长率最快。当样品
浓度为 0.1~0.5 mg/mL 时,凹叶景天各部位的抗氧化能力由强至
弱依次为花、根、叶、茎。 凹叶景天根、茎、叶、花醇提物均具有一
定还原力,总还原能力随着浓度的增加而呈线性增加,说明凹叶
景天提取液是良好的电子供应者,供应的电子可以使 3 价铁离子
还原成 2 价铁离子。凹叶景天花、叶的醇提取物具有良好的抗氧
化活性;黄酮类化合物可能是其抗氧化作用的主要物质基础。从
凹叶景天各部位的抗氧化能力分析, 总黄酮含量与抗氧化能力并
非完全呈正相关,这可能与总黄酮中具体的黄酮种类有关,有待于
进一步的深入研究。
参考文献
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(收稿日期:2013-04-08)
表 1 凹叶景天各部位 SA 率比较(%)
部位




23.32
20.61
58.79
56.25
样品浓度(mg/mL)
0.1 0.2 0.3 0.4 0.5
31.49
29.98
61.60
61.96
39.65
39.36
64.42
67.68
47.82
48.74
67.24
73.40
55.99
58.11
70.05
79.11
图 2 还原力测定
0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
1.2
1.4



mg/mL
1.6
0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
1.2
1.4



mg/mL
图 1 总抗氧化能力测定
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