全 文 ：2006 年 3 月第 8 卷第 1 期
March. 2006 , Vol. 8 , No. 1 湖北中医学院学报Journal of H ubei Colleg e of TCM
　　作者简介:邹国安(1980-),男 ,湖北中医学院药学院 2003级硕士研究生。
高效液相色谱法测定火绒草中咖啡酸和原儿茶醛的含量
邹国安 ,李水清 ,王光忠 ,刘焱文
(湖北中医学院中药资源与中药化学省级重点实验室 ,湖北 武汉 430061)
　　摘要:目的　建立 RP-HPLC 法测定火绒草中咖啡酸和原儿茶醛的含量。方法　采用 Alltech alltima C18(4. 6mm×250mm ,
5μm)色谱柱;流动相为甲醇-0. 05%磷酸水溶液(25∶75);柱温为25℃,流速为1. 0ml min- 1;检测波长:13min以前为280nm , 13min
后为 323nm。结果　咖啡酸在 0. 0822μg ～ 0. 822μg 范围内线性关系良好, r=0. 9999 , 平均加样回收率为 99. 40%, RSD 为
1.23%(n=6),原儿茶醛在0.01498μg～ 0. 1498μg 范围内线性关系良好 , r=0. 9999 ,平均加样回收率为 97. 96%, RSD 为 1. 42%
(n=6)。结论　本法操作简单 ,灵敏度高,定量准确可靠,重现性好 ,可用于火绒草的质量控制。
　　关键词:火绒草;咖啡酸;原儿茶醛;H PLC 法;含量测定
中图分类号:R284. 2　　　　　　文献标识码:A　　　　　　文章编号:1008 - 987X(2006)01 - 0045 - 02
Quantitat ive Analysis of Caffeic Acid and Protocaechuic Aldehyde from
Leontopodium Leontopodioides(wild.)Beauv. by HPLC
ZOU Guo-an , LI Shui-qing ,WANG Guang-zhong , et al
(Hubei Key Labo rato ry o f Rescource Science and Chemistry in Chinese Medicine ,
H ubei Colleg e of T raditional Chinese Medicine , Wuhan 430061)
　　 Abstract:Objective:To establish an optimal RP-H PLC method to determine the contents of caffeic acid and
proto caechuic aldehyde fr om Leontopodium leontopodioides(Wild .)Beauv. Method:Column:Alltech alltima C18(4. 6mm×
250mm , 5μm), mobile phase:methanol—0. 05%phospho ric acid(25 ∶75), column temperature:25℃, flow rate:1. 0 ml
min- 1 , w aveleng th:280nm before 13 minute s and 323 nm af te rwa rds. Results:The calibr ation curv e of caffeic acid and
proto caechuic aldehyde w ere linea r respectively ove r the range of 0. 0822 ～ 0. 822μg , and 0. 01498 ～ 0. 1498μg . The
co rr esponding mean recove ry rate we re 99. 40%with RSD 1. 23%(n=6)and 97. 96%with RSD 1. 42%(n=6)according ly .
Conclusion:The H PLC me thod established w as simple , fea sible , accurate , highly sensitiv e and reliable , w hich can be used to
control the quality of Leontopodium 1eontopodioides(Wild .)Beauv.
　　Key words:Leontopodium ;Caffeic acid;Protocaechuic aldehyde;HPLC;Quanti tat ive analy sis
　　火绒草 Leontopodium leontopodioides(wild.)Beauv. 别
名:老头草 、薄雪草 、老艾头。系菊科火绒草属植物火绒草的干
燥全草。夏 、秋季采割 , 以地上全草入药。性寒 , 味微苦 , 具有清
热凉血 、消炎利尿等功效。多生于草原 、山坡 、地埂等处 , 广泛分
布于我国东北 、西北 、华北和西南等地 , 野生资源极其丰富 , 是我
国北方民间常用中草药之一[ 1] 。 文献[ 2～ 4]报道火绒草对革兰氏
阳性球菌具有很好的抑制作用 ,其有效成分为原儿茶醛 、咖啡酸
和香草酸等 ,其主要作用为抗变态 、炎症反应 , 如抑制多核细胞
游走 ,抑制溶酶体 、组织胺 、5 -羟基色胺等引起的炎症反应。火
绒草常用于肾脏疾病的治疗 , 据文献[ 5 ～ 6] 报道:治疗肾病的中药
大多具有清热凉血作用或者含有原儿茶醛。虽然火绒草的部分
活性成分已明确 ,但其含量测定方法尚未见报道 ,本实验建立了
HPLC 法同时测定火绒草中咖啡酸和原儿茶醛含量的方法 , 为
其品质评价提供了一定的科学依据。
1　材料与方法
1. 1　仪器与试药
高效液相色谱仪:Ag lient 1100 系统;超声波清洗机(中国华
南超声波设备厂 ,频率为 25KH z)。咖啡酸对照品:由湖北中医
学院中药资源与中药化学省级重点实验室自制 , 含量 99. 41%,
原儿茶醛对照品:由中国药品生物制品检定所提供 , 批号为
0810-200004 , 甲醇为分析纯 , 磷酸为优级纯 ,水为双蒸水。
火绒草药材购自药店 , 经湖北中医学院中药鉴定教研室鉴
定为菊科火绒草属火绒草。
1. 2　方法
1. 2. 1　色谱条件　色谱柱:采用 Alltech a lltima C18(4. 6mm×
250mm , 5μm) 色谱柱 , 流动相:甲 醇-0. 05%磷酸水 溶液
(25∶75), 流 速:1. 0 ml min - 1 ,检 测 波 长:13min 以前 为
280nm , 13min后为 323 nm;柱温 25℃。
1. 2. 2　对照品溶液的制备　精密称取减压干燥至恒重的原儿
茶醛对照品 7. 49mg ,置 50 ml容量瓶中 , 加甲醇稀释至刻度 , 摇
匀 ,精密吸取 5 ml置 100 ml容量瓶 , 另取咖啡酸对照品 4. 11mg
置同一容量瓶中 ,加甲醇稀释至刻度 , 摇匀 , 作为对照品储备液。
精密吸取对照品贮备液 2 m l置 10 ml容量瓶中 , 加甲醇稀释至
刻度 ,作为对照品溶液 。
1. 2. 3　供试品溶液的制备　取本品约 1g ,精密称定 , 置 50ml量
瓶中 ,精密加入 5%甲酸的甲醇溶液 25m l , 密塞 , 摇匀 , 称定重
量 ,超声处理 30min ,取出 , 放置至室温 , 再称定重量 ,用 5%甲酸
的甲醇溶液补足减失的重量 , 摇匀 , 用微孔滤膜(0. 45μm)滤过 ,
45
湖北中医学院学报 2006 年 3 月第 8 卷第 1 期
取续滤液作为供试品溶液。
2　结果
2. 1　系统适用性考察
取供试品溶液依法测定 , 记录色谱图 , 结果咖啡酸的
tR=21. 98 min ,原儿茶醛的 tR =11. 14 min , 两者理论板数均大
于 2000 ,与相邻峰的分离度大于 1. 5 ,见图 1。
　　　1. 原儿茶醛　　　　　　　　　　2. 咖啡酸
图 1　高效液湘色谱图
2. 2　线性关系的考察
精密吸取对照品储备液 1 , 2 , 4 , 8 , 10 ml于 10ml容量瓶中 ,
加甲醇稀释至刻度 ,摇匀 , 作为标准溶液。分别取样 20μl , 注入
高效液相色谱仪中 , 按上述色谱条件测定峰面积。以对照品进
样量为横坐标 ,色谱峰面积为纵坐标 , 绘制标准曲线。经线性回
归 ,咖啡酸的回归方程为:Y=5948. 71X-17. 607 , r=0. 9999 , 原
儿茶醛的回归方程为:Y=4891. 75X-1. 856 , r=0. 9999。结果表
明咖啡酸在 0. 0822μg ～ 0. 822μg , 原儿茶醛在 0. 01498μg ～
0. 1498μg范围内各峰面积与进样量呈良好的线性关系。
2. 3　精密度试验
取同一浓度对照品溶液 , 按上述色谱条件进行测定。 重复
进样 6 次 ,测定各峰面积的平均值 ,结果咖啡酸 RSD为 1. 11%,
原儿茶醛 RSD 为 1. 08%,表明仪器精密度良好。
2. 4　稳定性试验
取供试品溶液 , 按上述色谱条件分别于 0 , 2 , 4 , 6 , 8h 测定 ,
结果 RSD 为 0. 96%,表明样品溶液至少在 8h 内稳定。
2. 5　重复性试验
精密称取同一样品 6 份 ,依上述测定方法测定 , 结果样品中
咖啡酸的平均含量为 0. 2038mg g - 1 , RSD 为 1. 24%,原儿茶醛
的平均含量为 0. 03718mg g - 1 , RSD为 1. 12%。
2. 6　加样回收率试验
精密吸取已知含量的咖啡酸和原儿茶醛含量的样品 6 份 ,
按 1∶1 加入对照品溶液 , 按上述样品溶液制备方法制备供试品
溶液 ,测定。 结果咖啡酸平均加样回收率为 99. 40%, RSD 为
1. 23%,原儿茶醛平均加样回收率为 97. 96%, RSD 为 1. 42%,
结果见表 1。
表 1　回收率试验结果
样品中含有量(mg)
咖啡酸　原儿茶醛
对照品加入量(mg)
咖啡酸　原儿茶醛
测得总量(mg)
咖啡酸　原儿茶醛
回收率(%)
咖啡酸　原儿茶醛
平均回收率(%)
咖啡酸　原儿茶醛
RSD (%)
咖啡酸　原儿茶醛
0. 0987 0. 01763 0. 1028 0. 01873 0. 1985 0. 03576 97. 08 96. 80
0. 1004 0. 01816 0. 1028 0. 01873 0. 2026 0. 03608 99. 42 95. 68
0. 1018 0. 01852 0. 1028 0. 01873 0. 2052 0. 03702 100. 58 98. 77
0. 1036 0. 01892 0. 1028 0. 01873 0. 2063 0. 03748 99. 90 99. 09
99. 40 97. 96 1. 23 1. 42
0. 1043 0. 01882 0. 1028 0. 01873 0. 2072 0. 03725 100. 10 98. 40
0. 1050 0. 01902 0. 1028 0. 01873 0. 2071 0. 03756 99. 32 98. 99
2. 7　样品测定
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 20μl ,按上述色
谱条件注入高效液相色谱仪 ,记录色谱图 , 测定 4 个不同产地火
绒草中咖啡酸和原儿茶醛的含量 ,结果见表 2。
表 2　不同产地样品含量测定结果
样品来源 样品中平均含量(m g /g)咖啡酸 原儿茶醛
甘肃 0. 2038 0. 03718
东北 0. 2103 0. 03688
华北 0. 2018 0. 02973
西南 0. 2213 0. 03772
3　讨论
咖啡酸和原儿茶醛为火绒草中的活性成分 , 两者的最大吸
收波长相差较大 ,不宜在同一波长同时测定 , 笔者通过摸索得到
良好的液相条件使两者的保留时间相差 10min 左右 , 可灵活选
择适当的时间切换波长 ,使两成分均在最大波长处测定 , 有利于
提高检测的灵敏度。
本实验考察了不同提取溶剂和超声时间对含量的影响 , 最
后选择以 5%甲酸的甲醇溶液为提取溶剂 ,超声提取 30min 的提
取方法。
注:本试验在湖北中医学院中药资源与中药化学省级重点
实验室完成。
参考文献:
[ 1] 　《全国中草药汇编》编写组.全国中草药汇编(上册 ,第 2版)[ M] .北
京:人民卫生出版社 , 1996. 14.
[ 2] 　伍义行,王建国 ,郭福存 ,等.火绒草抑菌作用试验研究[ J] . 时珍国
医国药 , 2000 , 11(4):289.
[ 3] 　李龙云, 叶金梅 ,尹航 ,等. 火绒草对动物变态反应性炎症的影响
[ J] .中国中药杂志 ,1994 , 19(3):174.
[ 4] 　常桂荣.中药老头草乙醇剂治疗慢性肾炎 45 例[ J] .中西医结合杂
志, 1987 , 7(11):669.
[ 5] 　程桂芳.清热利湿通淋法治疗急性肾盂肾炎 86例[ J] .湖北中医杂
志, 2001 , 23(12):30.
[ 6] 　张雄.丹参液加肾灵片治疗慢性肾功能不全 21例的疗效观察[ J] .
湖北中医学院学报 , 1999 , 1(4):76.
(收稿日期:2005 - 06- 12　　编辑:郑晓屏)
46