全 文 ：第 0 1卷
18 9
第 2 期
年 4 月
中 国 医 学
人 C一 1入 A C AD E M I A〔
科 学 院 学 报
M「D I CN I A E SN ! I C A E
V ol
.
10
.
AP r 一 1
N o
.
2
18 98
-唯 漏芦对抗血叶琳衍生物光氧化作用的研究
傅乃武 黄 磊 燕利学 全兰萍
(肿瘤研究所 , 北京 )
提要 光叶琳 ( Y H p D ) 合并照光使红细胞溶血度和红细胞膜脂质过氧化产物丙二醛含量大
大增加 , 红细胞膜乙酞胆碱醋酶活力显著减低 . 体内 给药 , Y H p D 对小鼠皮肤产生明显光敏反
应 。 漏芦水提取物在体外和体内试验中都明显对抗 Y H p D 的光氧化作用 , 这种对 抗 作 用与其对
Y H p D产生的单线态氧的清除有关 。
关键词 血外琳衍生物 光敏反应 漏芦 单线态氧
恶性肿瘤病人在应用 H p D 光动力治 疗 后需避光 l 一 2 个月 , 以防止对皮肤的光敏反应 ;
先天性红细胞生成叶琳症 ( E r y t h r o p o i e t i e p o r p h y r i a , E p p ) 患者 , 在光线照射下易出
现严重的皮肤光敏反应 。 上述光敏反应尚无有效的防治药物 。 体 内外实验 表明 , 中药漏芦
可对抗 H p D 的光氧化作用 。
材 料 与 方 法
动物 昆明种小鼠 , 雌性 , 体重 18 一 2 2 9 本院动物所供应 。
二 、 药物和试荆 光叶琳 Y H p D (扬州生化制药厂 , 批号 85 0 1 08 ) ,氯化乙酞胆碱 ( 5 19 -
m a )
,
5
,
5
’ 一D i t h i 。一 b s s ( 2 一 n i t r o b e n z 。 i c a e i d ) (D T N B )
( R h
a p o n t se u m U n i f l o r u m ( L
.
D C )
,
2 9生药 / m l , 其它试剂购自北京化工厂 。
三 、 光溶血试验 参照文献 1 。 漏芦组 :
加入漏芦 6 0协 l 使 成 6 0 m g 生 药 / m l , 3 7 。
(北 京市药材公司 )
( C
a r l R o e h 公 司 ) , 漏芦
按照常规制备水提 取 物 ,
取小鼠红 细 胞 制备 悬 液 ( l , 40 稀释 ) 2 m l ,
C 下 2 0 m i n 。
2 0卜只/ m l , 3 7 O C下 Z o m i n 。 照光 3 o m i n 后测定溶血度 。
加入 l m g / m l 的 Y H p D 4 0协 l 使成
光源是黑光灯管 (北万 灯 泡 厂 ) ,
石
两支20 W灯管并列 ,光照距离 1 c m , 光照 强度 o . Z m w at l / c m 么 . 发射光谱主峰为 3 6 5 0 A 。 对
照组 Y H p D不加漏芦 ,其余同上 。 溶血度的计算是以红细胞内加入蒸馏水的溶血为 10 呱 , 各
试验组的溶血与之比较求出溶血度 。
四 、 其它红纽胞膜制备 按文献 2方法 ; 丙二醛 ( M D A )测定按文献 3 方法 ; 乙酞胆碱
醋酶 ( A c h E s ) 测定按文献 4 方法 ; 蛋白质测定按文献 5 方法 ;单线态氧测定 按 文献 6 方 法 。
五 、 小眼皮肤光敏反应 对照组小 鼠腹腔注入 Y H p D 20 m g / k ` 体重 ,置于 圆形玻璃缸
内 , l h 后 照 光 。 光源为一支 10 W白炽灯 , 光照距离 50 。 m 。 照光 4 h , 取出小鼠 , 用 直
径为 6 m m 打孔器于耳中部固定部位打孔 , 分别称两耳重量 , 以其平均值被体重除 , 求得
本文于 1夕即年 5月 20 日收到
9 6中 国 医 学 科 学 院 学 报 0 1卷
耳指数 .耳指数大小反映光敏反应的强弱 。 漏芦组小鼠腹腔注射或口 服 药 物一次 , 10 m in
后腹腔注入 Y H p D 20 m g / k g 体重 , 然 后 按 对照组小 鼠步骤进行实验 。 亚硒酸钠 0 . s m g / k g
体重腹腔注射 , 每 日 1次 , 共 4 次 。
介结 果 与 讨 论
一 、 漏芦对杭 Y H p O 引起的光溶血作用 Y H p D 2 0林 g / m l 合 并照光 30 m in ,
对照组显著增加 。 漏芦 60 m g 生药 / m l , 明显对抗 Y H p D 对红细胞 的光溶血作用
溶血度比
(表 1 ) 。
二 、 漏芦对红细胞膜脂质过叙化作用的影响 红细 胞 膜悬液内加 入 Y H p D 2 0卜 g / m l ,
照光 20 m in , 细胞膜脂质过氧化作用的产物丙二醛 ( M D A ) 比 对 照 组 增加 5 5 . 3帕 , 事先
加入漏芦 60 m g 生药 / m l , 可有效地对抗脂质过氧化作用 (表 2 ) 。
表 1 漏芦对抗 Y H p D 引起的光溶血作用
T a b l e 1 E f f e e t o f R h a p o n t飞e u m u n i f ! o r u m O n p h o t o h e m o l y , i 、 i l i d u e e d b y Y l江p D *
G r o u P
C o n t r o l
Y H P D + l i g h t
R h
. u . + Y H p D + l i g h t
H e跟梦s ` s I n h i b i t i o n o f h e m o l y s i s(% )二
3
.
3士 1 . 2 3* * .
3 2
。
3士 2 . 54
1 3
.
2士2 。 2夕 5夕。 2
. Y H P D 2 0 “ g / m l , i r r a d i a t i o n t i m e 2 0 m i n , R h . u . ( R h a p o t i e u m u n i f l o r u m ) 6 o m g / m l ,
二 h e m o l y s i s o f g r o u p o f Y H p D p l u s l i g h t w a s t a k e n a s 1 00% ;
… t h e f i g u r e r e p r e s e n t , m e a n o f 3 t e s t s (又士 S E )
表 2 漏芦对抗 Y H p D对红细胞膜的脂质过氧化作用
T a bl e 2 P r e v e n t i v e e f f e e t o f R h a p o n t i e u m u n i f l o r u m o n l i p i d p e r o x i d a t i o n
o f e r y t h r o e y t e m e m b r a n e i n d u e e d b y Y H p D p l u s l i g h t
.
, . . . . . . . . . . . . . 曰曰 目 . . . . . . . . . .口
G r o u P y
a l o乎户i al d e h y d , 、
气 l lD 0 l l m g P r o t e l n 少
L` p` d ”
e(3r 于`d a “ o n”
C o n t r o l
Y H P D + l i g h t
R h
.
u
.
+ Y H p D + l i g h t
1 1 2
.
0土 0 . 0 2* 二
1 7 4
.
0土 0。 0 3
1 1 2
.
0土 0。 02
1 00
1 5 5
。
3
10 0
。
0
Y H p D 2 0 “ g / m l , i r r a d i a t i o n t i m e 2 0
M D A e o n t e
n t o f e o n t r o l g r o u p w a ,
m i n a n d R h
.
u
.
6 0m g / m l w e r e 妹 s e d ;
巾* t a k e n a s 100% ;
… t h e f i g u r e r e P r e s e n t s m e a n o f 3 t e , t , (又士 S E ) 今
表 3 漏芦对抗 Y H p D 引起的红细胞膜 A o h E s 的光失活
T a b l e 3 P r e v e n t i v e e f f e e t o f R h
.
u
O n
a e e t y l e h o l i n e s t e r a s e i n a e t i v a t i o n
舒
o f e r y t h r o e y t e m e m b r a n e b y Y H p D p l u s l i g h t
*
G r o u P
C o n t r o l
Y H p D + l i g h t
R h
.
u
.
+ Y H p D + l i g h t
人e e t y l c h g l乒n 兮气拌 m o l l m g P r 0 l e l n l m l n 少
3 6
.
5士 14 . 4 ( 6 ) , * .
16
.
3士 4 . 6 ( 6 )
2 3
.
2士 6 . 4 (4 )
P e r e e n t o f * *
e n z y m e a e t i v i t y
1 0 0
4
.
6
6 3
。
6
.山...
Y H p D 1 0 “ g / ` n l , i r r a d i a t i o n t i m e 1 0 m i n a n d R h
.
u
.
60m g /m l W e r e
u s e d ;
…
、 L
f 19
z
一 了 o f e o n t r o l g r o u p w a s t a k e n a s 100肠 ,
u r e s i n P a r e n t h e s e s r e P r e s e n t N o
.
o f t e , t s
2 期 漏芦对抗血叶琳衍生物光氧化作用的研究 97
三 、 · 漏芦对红细胞膜 A oh E s活性的影响 YHp D 10 卜 g / m l合并照光 0 1 m i n,对细胞膜
A ch E
s 活性的抑制率为 5 . 4肠 。 漏芦在 60 m g 生药 / m l 的剂量下可 部分对抗此种抑制 ,对
抗效率为 36 . 4肠 (丧 3 ) 。
四 、 漏芦对 Y H p。 引起的皮肤光敏 反应的影响 对 照 组 小鼠腹腔注射 Y H p D 20 m g八 g
合并照光 , 两耳皮肤表面血管充血 、 水肿 、 皮肤厚度增加 。 实验组 口服或腹腔注射漏芦水提
物 , 可有效地对抗上述皮肤光敏反应 。 耳指数比对照组显著减低 。 腹腔注射的最小有效量是
2
.
5 9 生药 / k g 体重 , 口服的最小有效量是 5 9 生药 / k g 体重 . 亚 硒 酸 钠对皮肤光敏反应没
有对抗作用 (表 4 ) 。 每次实验对照组和实验组各为 5 只小 鼠 。
表 4 漏芦对抗 Y H p D对小鼠的皮肤光敏反应
T a b l e 4 P r o t e e t i v e e f f e e t o f R h
.
u
o n n 1 O U S e
s k i n p h o t o s e n s i t i z a t i o n
*
D o
R h
S e O f
G r o u P
R o
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U t e a
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n d N o
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一
E a r
i n d e x
( g / k g ) s t r a t i o n (又士 S E )
Y H P D + l i g h t
R h
.
u
.
+ Y H p D + l i g h t
Y H p D + l i g h t
R h
.
u
.
+ Y H P D 十 l i g h t
Y H P D + l i g h t
R h
.
u
.
+ Y H p D + l i g h t
Y H PD + l i g il t
R h
.
u
.
+ Y H p D + l i g h t
Y H P D + l i g h t
R h
.
u
.
+ Y H p D + l i g il t
Y H p D + l i g h t
Rh
.
u
.
+ Y H p D + l i g h t
Y H P D + l i g h t
S e + Y H P D + l i g h t
i P x l
i P x l
i P x l
i P X l
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P O X l
P o X l
P o X I
i P X l
i P x 4
1
.
2 6 4土 0 . 15 5 ( 3 ) * *
0
.
98 士 0 . 1 2 3 ( 3 )
1
.
4 3 0土 0 . 2 8 4 ( 2 )
0
.
8 4 7士 0 . 1 5 7 ( 2 )
0
.
6 4 7士 0 . 0 5 3 ( 2 )
0
.
4 3 6 士 0 . 0 6 1 ( 2 )
0
.
66夕士 0 . 1 3 1 ( 3 )
0
.
4 2 4 + 0
.
0 4 2 ( 3 )
1
.
1 5 9士 0 . 24 1 ( 2 )
0
.
9 3 8土 0 . 17 2 ( 2 )
0
.
808士 0 . 1 62 ( 2 )
0
.
5 63 1 0
.
0 97 ( 2 )
0
.
8 D7 土 D. 0 59 ( 3 )
0
.
7 7 2士 0 . 1 1 2 ( 3 )
> 0
.
0弓
< 0
.
00 1
< 0
.
0 0 1
< 0
.
0 0 1
< 0
.
05
< 0
.
00 1
> 0
.
2
. Y H p D Zom g / k g
, s o d i u m s e l e n i t e ( S e ) o
.
s m g / k g a n d i r r a d i a t i o
n t im e 4h w e r e u s e d ;
. * f i g u r e s i n P a r e n t h e s e s r e P r e s e n t N o
.
o f t e s t s
附图 漏芦对单线态氧的清除作用
F 19 C o m p a r i s o n o f d i m e t h y l f u r a n
( D M F ) e o n t e n t a s f u n e t i o n o f
Y H P D P l u
s l i g h t e x p o s u r e w i t h
o r w i t h o u t R h
.
u
.
X 一 x Y H P D ( 0 . s m g / m l ) , l m l ; D M F
( 100% )
,
1拼 1
一 R h . u . ( 1 00m g l m l ) , 0 . 0弓m l ; Y H P D
( 0
.
s m g / m l )
,
l m l : D M F ( 1 0 0% )
,
i “ l ;
o一。 R h . u . ( 2 00m g / m l ) , o . l m l ; Y H P D
( 0
.
s m g / m l )
,工m l ; D M F ( 1 00% ) , 1 “ l
。一xǎ1\。已à
价护
甚`
笼口
5 10
I r r a d ia t i o n
l 5
( m i n )
9 8中 国 医 学 科 学 院 学 报 1 0卷
五 、 肠芦对单线态级的清除作用 对照组试管内每毫升二 甲基甲酞胺含 。 .sm g Y H p D,
漏 芦组 试管内加入等量二甲基吠喃 ( l 卜g / m l) 。 在不同光照时间下二甲基吠喃的消耗速度
基 本符合线性关系 , 其斜率是单位时间内二 甲基吠喃的消耗量 。 对 照 管的斜率 一 4 . g x l价
m o l / m i
n , 相 关系数 一 0 . 9 9 2 ; 漏芦组 ( l o o m g 生药 / m l ) 的斜率 是 一 2 . 6 8 6 x l` 4 m o l /
m s n
, 相关系数 一 0 . 9 9 0 ; 漏 芦组 ( Z o o m g生药 / m l ) 的 斜 率 一 1 . 0 6 6 x l o一m o l / , n i n ,相
关系数 一 0 . 9 7 0 。 两个剂量漏芦组的斜率和对照组斜率之差分别为 一 2 . 2 14 x l o 一 4 m ol / m in
和 一 3 . 8 34 x l0 一 ` m ol / m in , 表示 漏芦 组 的单线态 氧产 生效率 比对照 组 分别减低 了
2
.
2 x l o 一 4 和 3 . s x l o 一 4 倍 (附图 ) 。
实验表明 , H p D 在光激发下对红细胞膜的脂质过氧化作用明显加强 ,膜乙酞胆碱醋酶活
力大大减低 , 溶血度增加 ; H p D 对小 鼠皮肤有明显的光敏反应 , 耳 部皮肤血管扩张 , 充血
及水肿 。 漏芦水提取物在体内 、 外条 件下 都可 明显 对抗 H p D 的 光氧化作用。 在体外条件
下 , 漏芦明显清除 H p D 照光时单线态氧的产生 , 漏芦对抗 H p D 的 光氧化作用与此有关 .
参 考 文 献
1
. 傅乃武 , 等 。 血叶琳衍生物对红细胞膜的光辐射损伤 。 生物化学与生物物理进展 1 9 8 6 ; 2 : 3 3
2
.
F a i r b a n k G
, e t a l
.
E l e e t r o p h o r e t i e a n a l y s i s o f t h e m a j
o r p o l y p e p t i d e s o f t h e
h u m a n e r y t h r o e v t e m e m b r a n e
.
B i o e h e m i s t r y 一。 7 一; 10 : 2 6 0 6
3
.
G i r o t t i A W
.
P r o t o p o r p h y r i n 一s e n , i t i z e d p h o t o d a m a g e i n i s o l a t e d m e m b r a n e o f h u m a n
e r y t h r o e y t e s
.
B i o e h e m i s t r y r o 7 9 , 1 5 : 4 4 0 3
4
.
E l l m a n G L
, e t a l
.
A n e w a n d r a p i d e o l o r i m e t r i e d e t e r m i n a t i o n o f a e e t y l e h o l i n -
e s t e r a s e a e t i v i t y
.
B i o e h e m P h a r m a e o l 1 0 6一; 7 : 5 5
5
.
L o w r y O H
, e t a l
.
P r o t e i n m e a s u r e m e n t w i t h t h e F o l i n P h e n o l r e a g e n t
.
J B i o l
C h e m 19 5 1
, 19 3 : 2 6 5
6
. 傅乃武 , 等 。 几种血外琳衍生物制剂对癌细胞的杀伤效应以及单线态氧的产生和在癌细胞内的积聚 .
中华肿瘤杂志 1 0 5 6 ; s : 1 0 3
A n t io x id a t i o n E f f e c t o f R ha Po n t ic u m U n i f l o r u m Ag a i n s t
H e m a t o po r phy r in D e r i v a t iv e P h o t o o x id a t io n
F u N a i w u
, e t a l
( I n s t i t u t e o f O n e o l o g y
,
B e i j i
n g )
E r y t h r o c jr t e m e m b r a n e w a s f o u n d t o b e s e v e r e l y d a m a g e d b y H p D p h o -
t o s e n s i t i z a t i o n w i t h i n e r e a s e o f p h o t o h e m o ly s i s a n d e n h a n e e m e n t o f l i p i d
p e r o x i d a t i o n o f u n s a t u r a t e d f a t t y a e id s o f e r y t h r o e y t e m e m b r a n e a n d i n a e t i -
v a t i o n o f a e e t y l e h o l i n e e s t e r e s e
.
I n一 v i v o t e s t s h o w e d t h a t H p D e o u l d
i n d u e e m a r k e d s k i n p h
o t o s e n s i t i Z a t i o n a s d e m o n s t r a t e d b y i n e r e a s e o f e a r
漏芦对抗血叶琳衍生物光氧化作用的研究
in d x e
.
Ex t a c rt f r。 m h Ra p。 n t i c u mn u i f lo u r。 ( h R. u. ) s h。 w ed o a rk ed po rt -
e et in o a g a in st l
一
I pD phot o s en s it i zat i on bot hin v it o a rn d in 一 v v i o
.
T he an t i o -
x id at i on e f fe et o f Rh
.
u
.
w a s fn o ud re lat ed t o s e av en 凡 in g o fs in g let x o y g en .
K e y w o rd s he m at o po r phy rin d e riv at iv e phot o s en s it i a zt i on h Ra pon t i e u m
un i f lo ru m s in g let ox y gn e
抗流行性出血热病毒人一人杂交瘤
细胞株的建立 (简报 )
基础医学研究所 顾方舟 王树葱 孙 月英 苏小玲
陈 伯权 . 刘琴芝 . 陶三菊 . 严 玉辰 ’ . 贾克丽 二 刘 国教二
杂交瘤技术问世以来 , 单克隆抗体已被广泛应用于医学的各个领域 , 并获得了明显的社会 和 经 济 效
益 。 由于鼠一鼠单克隆抗体在治疗和诊断上存在一定缺点 , 故制备人一人单克隆抗体的问题已引起世界科学
家的重视 。 迄今未取得重大突破 。 我们进行了抗流行性出血热病毒人一人杂交瘤细胞株的建 株研 究 , 并初
步获得了三株抗出血热病毒的人一人杂交瘤细胞株 。
方法是 ( l) 杂交瘤技术 . 即 从正常人的脾或扁桃体 , 以及出血热患者的血或脾脏分离淋巴细 胞 , 用
P W M (美州商陆 ) 和出血热病毒抗原同时刺激 , 四天后与人骨髓瘤细胞融合 , 融合后用 含 H A T 的培基
培养。 ` 2 )用 E B V 转化一杂交瘤技术 , 即从出血热患者的外周血和脾脏分离淋巴细胞 , 而后用 E B 病毒感
染 。 感染后 14 天左右可见细胞成团生长 , 并侧得培养液中产生抗出血热病毒的特异性抗体 。 用此转化后的
淋巴母细胞与人骨髓瘤细胞融合 , 融合后用含 H A T 和乌本普的培基进行培养 。 上述二种方法培养 4 ~ 6周
后用荧光抗体 , 血凝抑制及反向被动血凝抑制试验进行抗体检测 。 融合率在 10 ~ 15 肠 , 杂交瘤阳性孔在 10
~ 20 呱 。 取阳性孔连续克隆二次 , 用前述二种杂交方法分别获得一株和二株抗出血热病毒的人一人杂 交 瘤
细胞株 。 其被动血凝抗体滴度为 1 : 8~ l : 1 6 . 实验结果表明 , 用 P W M和特异性抗原直接刺激患者的 淋 巴
细胞以及用 E B V转化一杂交瘤技术所获得的杂交瘤抗体滴度 ( > 1 ; s) 均高于用 P W M 和抗原刺激正常人
淋巴细胞所获得的抗体滴度 ( l : 4 ) .
出血热是病死率较高的急性传染病 , 临床无特效疗法 . 抗出血热人一人杂交瘤细胞株的建立及其产生的
单克隆抗体可能将为诊断和治疗该病提供有力手段 。 目前国内外多应用 E B V 转化一杂交瘤技术制 备 人一人
单克隆抗体 . 除此之外 , 我们认为采用非 E B 病毒转化的体外 B淋巴细胞转化技术的研究是一条值得探 索
的途径 .
本文于1夕87 年8月 6日收到 * 中国预防医学科学院病毒学研究所 * * 中国预防医学科学院流行病学研究所