全 文 ：世界科学技术一中医药现代化 ★专题讨论 ： Ｄ ＮＡ条形码技术茌中药材及其种源鉴定中的应用
ｉ斤疆 ４ 种 绢 蒿屬植物及玟缘种银蒿 的 丨ＴＳ／ ＩＴＳ２
条形碭鉴走研 堯 ＊
刘 戈 宇 ， 宁慧霞 ， 阿吉艾克拜 尔 ？ 艾萨 〃
（ 中 国科学院新疆理化技术研究所 省部共建国家重点实验室培育基地 中国科学院干旱区
植物资源化学重点实验室 ／ 新疆维吾尔 自治区植物资源化学重点实验室 ／
新疆特有药用资源利用重点实验室 乌鲁木齐 ８３００ １ １）
摘 要 ： 目 的 ： 评价 ＩＴＳ／ ＩＴＳ２ 热点条形码序 列对新疆 ４ 种绢 蒿属植物及其近缘种银蒿 的鉴别 能力 ， 为絹
蒿属植物分类鉴定提供分子参考依据 。 方 法 ： 对 １ ５ 份絹 蒿 属及银蒿 植物样本进行 ＤＮＡ 提取 、 ＰＣＲ 扩增 、
双向 测序 ， 采用 Ｃ ｏｄｏｎＣ ｏｄｅＡ ｌｉ ｇｎ ｅｒ 软件对序列峰图进行校对拼接 ， ＭＥＧＡ ６ ． ０ 分析序列碱基组成及 变异 ，计
算 Ｋ２Ｐ 遗传距 离 并构建聚类邻接树 ， 预测 ＩＴＳ２ 序 列 二级结构 ，评估鉴别 能 力 。 结 果 ： 西北绢 蒿 、 针裂叶绢
蒿种 内 变异位点及信息位点数均 小 于银蒿 。 ＩＴＳ 序列 种 间 、 种 内遗传变 异均 大于 ＩＴＳ２ 序 列 。 ＩＴＳ ／ＩＴＳ２ 序
列 邻接 （ ＮＪ ）树均聚为 ３ 支 ， 销 蒿 属 、 银蒿 １ 、银 蒿 ２ 。 绢 蒿属 ＩＴＳ２ 序 列二级结构与银蒿 有差异 。 结论 ： 通过
ＩＴＳ／ ＩＴＳ２ 序 列 的种 间 Ｋ２Ｐ 遗传距 离 、邻接树 、 ＩＴＳ２ 序列 二级结构分析 ， ＩＴＳ ＪＴＳ ２ 序列 具很好的属鉴定效果 ，
不 同 产 地的针裂叶絹 蒿被区 分开 。
关键词 ： 绢 蒿ＤＮＡ 条形码 ＩＴＳＩＴＳ２ＰＣＲ 扩增 遗传距 离
ｄｏ ｉ ： １０ ． １ １ ８４２／ｗｓｔ ． ２０ １ ６ ． ０２． ０ １ ３中 图分类号 ： Ｒ２８２ ． ５文献标识码 ： Ａ
绢 蒿 属 Ｓｅｈｐ ／ｉ述 （Ｂｅ ｓ ｓ） 隶 属 于 菊 科有重要意义 。 部分种 因含有 ａ－ 苎酮 、樟脑 、 ａ－ 山
Ａｓｔｅｒａｃ ｅａｅ 向 日 奏 超族 ７Ｖｉ６ ．Ｚ／ｅＺ ｉａ ／Ｕ／ｉｅａｅＣａ ｓｓ ． 春道年和 山 道年为主要成分的挥发油 ，是驱蝴虫药
黄菊族 ７Ｖ ｉ ６ ．Ａ ｆＵ ／ｉｅｍ ｉｄｅａｅＣ ａｓ ｓ ，全世界约有 １ ３ ０ 余的原料 ，具有重要的药用开发潜力 。 银蒿 Ａ ｒ ｔｅｍ ｉｓ ｉａ
种 ， 主要分布于北温带 的亚欧大陆 、北美和 北非等 ， 俗称银叶蒿 ， 隶属于菊科向 日 葵超族春
地区 ， 中 国有 ３ １ 种及 ３ 变种 ［ １ ］ 。 中 国绢蒿属植物分黄菊族蒿属 ／Ｉ ｒ ｉｅｍ ｉｓ ｉａ 矮丛蒿系 Ｃａｅｓｐ ｉ ｆｏ ｓａ ｅ 。 银篙
为 ３ 类 ， 即三裂叶绡蒿组 Ｓｅ ｃｔ 如 絹蒿组 Ｓｅ ｃｔ ．合剂具有解热镇痛 、抗菌消 炎等功效 ， 用 于治疗感
民勤绢蒿组 Ｓｅ ｃＬ，其中新冒身热 、鼻塞 、头痛 、咳嗽 、 咽喉炎和上呼吸道感染 。
疆有 ２６ 种及 ２ 变种 ｍ 。 绢 蒿根 系发达 ，具有抗旱 、 银蒿 含 ７ 种微 量元素 ， 其 中 Ｃ ａ 的 含量最 高 ， Ｚｎ 、
抗寒 、抗盐碱适应性强等特性 ， 多生长在草原 、半荒Ｎａ 、 Ｆｅ 的含量次之 。 银蒿含挥发 油 ， 可作香料用 ；
漠或荒漠草原地区 。 部分种类是西北干旱草原的建含牲蓄食用的粗蛋 白 、纤维素 ， 可作牲蓄的饲料 ， 胳
群种 和优势种 ，具耐牧 、寿命长 、产量高及冬春秋季驼 、羊喜食 ， 马 、驴稍食 。 银叶蒿是极好的镶边及地
适 口 性好等特点 ， 是用于防风 固沙 、水 土流失和控被植物 ，可用在花坛或花镜 中 。
制荒漠化的优 良牧草 ，对畜牧业发展和生态建设具绢蒿属和蒿属是菊科两大属 ， 种类繁多 、种类性
状连续性和交叉性极强 、地理分布广 泛 、 演化关系
＾ Ｂ＃ ： ２０ １ ５－ ｌ ｌ－２９复杂 ，诸多专业学者对其系统分类学 １ ３ ，４ １ 、解剖学 ｜Ｍ １ 、
修回 Ｈ期 ： ２０ １ ５－ １２－ ０７
＊中科院 “西部之光” 人才培养计划 西部博士资助项 目 （ ＸＢＢＳ２ ０１ ２ １ ３） ：新疆蒿 属 药用 植物 ＤＮＡ 条形码研究 ， 负 责人 ： 刘 戈宇 。
＊ ＊通讯作者 ： 阿吉艾克拜 尔 ． 艾 萨 ，研究 员 ，博士生导师 ， 副 所长 ， 主要研究方向 ： 天然药物化学 、 民族药 学 。
［ Ｗｏｒｌｄ． Ｓｃ ｉｅｎｃｅ ａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ／Ｍｏｄｅｒｎｉｚａ ｔ ｉｏｎ ｏｆ Ｔｒａｄｉ ｔｉｏｎａ ｌＣｈ ｉｎ ｅｓｅ Ｍｅｄｉｃ ｉｎｅａｎｄＭａｔ ｅｒｉ ａＭｅｄｉｃａ ］２２ １
２０ １６ 第十八卷 第二期 ＊Ｖ〇 １ ． １８ Ｎ〇 ．２
孢粉学 染色体 ＿ 、果实形态特征 ａ＇种子萌形码研究 ， 用 叶绿体 条形码信息位点可
发特性 ［ １ ３Ｍ ５ ］ 、 生理生态适应性 ［ １ ６ ， １ ７ ］ 等方面研究 ，试区分形 态上非 常相似的黄花蒿 、茵陈蒿 、青蒿 ［４ ２］ 。
图将绢蒿属 、蒿属 物种准确分类 、鉴定 ， 但其属下等采用药用植物的 ４ 条候选 ＤＮＡ 条形码序列 （ ＩＴＳ２ 、
级的鉴定划分有较多争议 。 林有润等 ［ ３ １ 把系统分ｒｂ ｃＵ ｉｎ ａｔＫ＾ ／ｗＭ －加丑 ） 对黄花蒿 、艾蒿 、茵陈蒿 、
类与地史 、 地质变迁及花粉形态等研究材料结合起细裂叶莲蒿 、歧茎蒿 、 白花蒿 、野艾蒿 、 白莲蒿 、大籽
来论述蒿属与邻近属 的谱系 分支 ， 阐 明絹蒿属 和蒿蒿 ９ 种常见的蒿属药用植物进行鉴定 ， ＩＴＳ２ 序列对
属在系统演化上属于姐妹属 ，二者具有很近的亲缘９ 种蒿属药用植物 的物种水平鉴定成功率最高 ， 成
关系 ， 目前 中 国 植物志 、新疆植物志和 中 国高等植功率为 １ ００％ １４３ ］ 。
物等主要工具书均采用林有润对蒿属 、绢蒿属建立银蒿和絹蒿属虽属 同一科两个不同 的属 ，但外
的分类体系 。部形态极为相似 ， 不易识别 ， 易被混淆 ， 因此找到快
ＤＮ Ａ 条形码 （ ＤＮＡＢ ａｒｃｏ ｄｉ ｎｇ ） 利用基 因组 中速准确 的方法鉴别是非 常必要的 。 为评价 ＤＮＡ 条
一段公认 的标准短序列来进行物种鉴定 的分子鉴形码热点序列对新疆常见絹蒿 和银蒿分子鉴定效
定新技术 ， 由加拿大分类学家 Ｐａｕ ｌＨ ｅｂ ｅ ｒ ｔ 于 ２ ００３果 ， 与形态学物种分类鉴定方法对应 ， 寻找一种简
首次提 出 ［ １ ８ ］ 。 该方法通过筛选通用条形码 ， 建立易 的分类鉴定方法 ， 本研究选用 在植物鉴定 中应用
条形码数据库和鉴定平台 ，运用生物信息学方法分广泛的 ＩＴＳ ／ ＩＴＳ ２ 序列 ， 对新疆常见的 ４ 种绢蒿属 植
析 比 对 ＤＮＡ 数据 ， 进而对物种进行 鉴定 ， 是传统物和外部形态极为相似蒿属植物银蒿 为研究材料
生物鉴定方法 的有效补 充和重大突破 ， 目 前 已 成进行 ＤＮＡ 条形码分析 ， 考查通用 ＤＮＡ 条形码 ＩＴＳ ／
为物种鉴定和分类研究的热点 ［ １ ９ ， ２° ］ 。 该技术被称 ＩＴＳ ２ 序列对絹蒿属和蒿属 的适用性和鉴定能力 ， 以
为 “ 草药鉴定从形态 到 ＤＮ Ａ 条形码 的文艺 复兴” 期 为新疆常见绢蒿属植物提供快速有效的鉴定方
（ Ｂ ｉ ｏ ｔｅ ｃｈ ｎｏ ｌ ｏｇｙＡｄ ｖａｎｃ ｅ ｓ ） ，标志着 “中 药鉴定学迈法 ， 为 ＤＮＡ 条形码技术在绳 蒿属 和蒿属 植物 的鉴
人通用和标准化基因鉴定时代” ［ ２ １ ］ 。 ＤＮＡ 条形码技定研究 、开发利用提供参考依据 。
术已经在中药材基原鉴定 、药材流通体系等方面得
到广泛推广驢用＿８ １ 。
核 基 因ＩＴＳ（ Ｉｎｔｅｒｎａ ｌＴｒａｎｓｃ ｒ ｉｂｅ ｄＳｐａｃｅ ｒｓ ， ＩＴＳ）１＿ １材料
序列具有较快的突变速率 ， 能够提供丰 富的遗传信本研究在新疆境内共收集常见绢蒿属试验样品
息 ， 被认为 是陆地被子植物的核 心条形码 ［ ２＼ 而４ 种 １ ０ 份 、银蒿 ５ 份 ， 经新疆农业大学周 桂玲教授
Ｃｈｅｎ 等 １ ３°＿ ３ ５ １ 提出在药用植物及 中药材鉴定 中 以核鉴定为西北絹 蒿 、博乐绢蒿 、伊塞克绢 蒿 、针裂叶绢
糖体 ＤＮＡＩＴＳ２ （ ｉ ｎｔｅｒｎａ ｌｔ ｒａｎ ｓ ｃ ｒ ｉｂｅｄｓ ｐａｃ ｅｒ２ ） 序蓄 、银嵩 。 数字影像信息及凭证样本保存于 中 国科
列 为主 、叶绿体 基因间 隔 区序列 （ ｐ ｌ ａｓ ｔ ｉｄ学院新疆理化技术研究所 ，样品信息见表 Ｕ
ｐ ｓ ６Ａ－ｔ ｒｎ ／／ ｉ ｎ ｔｅｒｇ ｅｎ ｉｃｒｅ ｇｉ ｏｎ ） 为辅的 鉴定系统 。 植１ ． ２方法
物核糖体 ＤＮＡ 中的 内转录间隔 区 ＩＴＳ２ 和 叶绿体基１ ． ２ ． １ 样品 ＤＮＡ 的提取
因 片段在种间及种下居群间具有进化速称取经硅胶 干燥 的 叶 片样 品 １ ００－ １ ５ ０ｍｇ ， 在
率快 ， 变异程度高 、 区分物种能力强 的特点 ，适用于干净的研钵中用液氮迅速研磨成粉 ， 取 ３０ｍｇ 于灭
药用植 物与其近缘种类等较低分类 阶元 的分子鉴菌 ２ ．０ｍＬ 离心管 中使用天根生化科技 （北京 ） 有限
定 ［ ３ ６ ］ 。 特别是 ＩＴＳ２ 序列在有毒中药土荆皮 ［ ３７ ］ 、 中公司 的植物基因组 ＤＮＡ 提取试剂盒 ＤＰ ３ ０５ 提取总
药材地黄 ［ ３ ８ ］ 、川 贝母 ｜ ３９ ｉ 、 山 豆根 ｗ 等混伪品基原鉴ＤＮＡ ，其余样品放于 １ ． ５ｍＬ 离心管保存于 －８０＾备
定中表现了很好的鉴定优势 。用 。
中药材 ＤＮＡ 条形码分子鉴定 法指导原则 已列１ ． ２ ． ２ 引 物合成和 ＰＣＲ 扩增
人 《 中 华 人 民共和 国药典 》 （ ２ ０ １ ０ 年版第 三增补引物序列 、 ＰＣＲ 反应条件和扩增程序见参考文
版 ） ， 陈士林等 ［ ４ １ １ 出版 了 《 中 国药典 中药材 ＤＮＡ 条献 ［ ３３ ’ ４ ４］ 。 引 物 由生工生物工程 （上海 ） 股份有 限公
形码标准序列 》 ， 但其 中缺乏关于绢蒿属 、蒿属等的司合成 ， ＩＴＳ 通用引物 ＩＴＳＳＦ ｄ ＇－ＣＣＴＴＡＴＣＡＴＴＴＡ－
ＤＮＡ条形码信息 。 有文献报道蒿属材料的ＤＮＡ条ＧＡＧＧＡＡＧＧＡＧ－ ３ ＇ 和 ＩＴＳ４Ｒ ： ５ＬＴＣＣ ＴＣ ＣＧＣ ＴＴＡＴ－
２２２［ Ｗｏ ｒｌｄ Ｓｃ ｉ ｅｎ ｃｅ ａｎｄ Ｔｅ ｃｈｎｏｌｏｇｙ／Ｍｏｄｅｍ ｉｚａｔ ｉｏｎｏｆＴｒａｄｉｔ ｉｏ ｎａ ｌＣｈ ｉｎｅｓｅ Ｍ ｅｄ ｉｃ ｉｎ ｅａｎｄＭａｔ ｅｒｉａＭｅｄ ｉｃａ ３
世界科学技术一中医药现代化 ★ 专题过论 ： Ｄ ＮＡ条形码技术在中药材及其沖源鉴定中的应用
表 １ 样品信息
编号种名采集地拉丁 名标本号
１ 银蒿 察布查 尔县白 石峰 Ａ ．ａｎ边 ＰＳ０００５ＭＴ０ １
２银蒿察布查 尔县 白 石峰Ａ （Ｈｕ＆ｉｏｃａＰＳ０００５ＭＴ０２
３ 银蒿 霍城县三道湾 Ａｒａｕｆｒｉｏｃａ ＰＳ０００５ＭＴ０３
４银蒿霍城县三道湾Ａ ｃＨｕｔｒｉａｃａＰＳ０００５ＭＴ０４
５ 银蒿 霍城县三道湾 ，４ ．ａｉｔｆｉｒｉａｃａ ＰＳ０００５ＭＴ０５
６西北销 蒿伊宁县 Ｓ． ｒａｉｉｒｔＢｉｉｍＰＳ００ １４ＭＴＯ １
７ 西北销 蒿 伊宁县Ｓ． ｎｋｒｏｓｕｍ ＰＳ００ １４ＭＴ０２
８西北销 蒿伊宁县 Ｓ．ｒａ＇ｔｒｏｍｍＰＳ００ １４ＭＴ０３
９ 西北销 蒿 伊宁县 Ｓ． ｎｉｔｒｏｗｎ ＰＳ００ １４ＭＴ０４
１ ０博乐绢 蒿霍城县Ｓ． ６ｏｒｏｔａ／ｅｒａｅＰＳ００ １ ５ ＭＴ０ １
１ １ 伊塞克绢 蒿 伊宁县 Ｓ．ＰＳ００ １ ６ＭＴＯ １
１ ２针裂叶箱 蒿新源县前进牧场＆ＯＴｉｆａｓ ｉｎｇｉａｒａｕｍＰＳ００ １ ８ＭＴ０ １
１ ３ 针裂叶销 蒿 新源县前进牧场 Ｓ． ，ｓｉ＾ＺｅｓＭ＞ｉｇｉａｒａｉｔｍ ＰＳ００ １８ＭＴＯ２
１ ４针裂叶绢 蒿察布查尔县 白石峰 ＰＳ００ １８＿３
ｉｆ１ ５

针裂叶销 蒿

察布查 尔县 白 石峰

．Ｓ． ｓｕｂ ｌｅｓｓｉｎｇｉａｎｕｍ

ＰＳ００ １８ＭＴ０４
ＴＧＡＴＡＴＧ Ｃ－ ３ ＇ ； １ＴＳ２ 通用 引 物 ＩＴＳ ２Ｆ ： ５ ＇－ ＡＴＧＣＧ－获得标 准 ＩＴＳ ２ 间 隔 区序列 ｔ４５ １ 。 使用软 件 ＭＥ ＧＡ
ＡＴＡ ＣＴＴＧＧＴＧＴＧＡＡＴ＾ 和 ＩＴＳ３ Ｒ ： ５ ＬＧＡＣＧ ＣＴＴ－６ ． ０ 计算所得序列 的碱基组成 、序 列 间 的碱基变异
ＣＴＣ ＣＡＧ ＡＣ ＴＡＣ ＡＡＴ－ ３、 Ｐ ＣＲ 反 应 在 Ｅ ｐ ｐｅｎ ｄ ｏ ｒｆ频率和序列间 的转换颠换频率及其比率 １ ４６ ］ ， 计算物
Ｍａ ｓ ｔｅ ｒｃ ｙｃ ｌ ｅｒＰＣＲ仪 （ Ｅ ｐ ｐｅ ｎｄ ｏ ｒｆ ， 德 国 ） 上 进 行 ，种的 种 内 种 间Ｋ ｉ ｍ ｕ ｒａ２ －ｐ ａ ｒａｍ ｅｔ ｅ ｒ（Ｋ ２ Ｐ） 遗传距
反 应体 积 ５ ０ ． ０ｐ Ｌ ， 体系 包 含 Ｐ ＣＲ 缓 冲 液 ５ ．０｜ｉＬ离 。 构建邻接 （ Ｎｅ ｉｇｈｂ ｏｒ－ ｊ ｏ ｉ ｎ ｉｎｇ ，ＮＪ） 系统发育树
（ １ ０ ｘ ， 含 ＭｇＣｌ ２ ） ， ｄＮＴＰ１ ． ０ 叫 （ １ ０ｍｍ ｏ ｌ ．Ｌ— １） ， 弓 ｜评估各物种之间的亲缘性 ，利用 Ｂｏｏ ｔ ｓ ｔ ｒａｐ（ １０００ 次
物 各 １ ． ０Ｈ Ｌ（１ ０ｐｍ ｏ ｌ ’Ｌ － １ ） ， Ｔａ ｑ 酶 １ ．０） ＿ｉ Ｌ（ ２ ． ５Ｕ ，重 复 ） 检验各分支 的支持率 。 根据 Ｋｏｅ ｔｓｃｈ ａｎ 等 ［４７ ］
北 京 天 根生化科技有 限公 司 ， ＥＴ １ ０ １ －０２－０ １） ， 总建立 的 ＩＴＳ ２ 序列 数据库及其网站 （ ｈ ｔ ｔＰ ： ／／ ｉ ｔ ｓ ２－ 〇 ｌｄ ．
Ｄ ＮＡ２ ． ０ｐＬ（ 约５０ｎ ｇ） 。 ＰＣＲ程序 ： 首 先９４预ｂ ｉ ｏ ａｐｐ ｓ ． ｂ ｉ ｏ ｚ ｅｎ ｔ ｒｕｍ ． ｕ ｎ ｉ －ｗ ｕ ｅ ｒ ｚ ｂ ｕ ｒｇ ． ｄ ｅ ／ ｃ ｇ ｉ － ｂ ｉ ｎ／
变性５ｍ ｉ ｎ ；其次 ９４Ｔ ：变性１ｍ ｉｎ ， ５ ３Ｔ：退火１ｍ ｉｎ ，ｉｎｄｅｘ ． ｐｌ ？ ａｎｎｏ ｔ ａｔ ｏｒ） 预测ＩＴＳ２ 序列二级结构 〇
７２ Ｔ延 伸 １ ． ５ｍ ｉ ｎ ， ３０ 个循环 ； 最后 ７ ２ Ｔ延伸 ７ｍ ｉ ｎ 。２ 结果与分 丰斤
ＰＣＲ 扩增产物在冰箱 中 －２ ０ Ｔ保存 。
１ ．２ ． ３电 泳检测 和测序２ ． １Ｄ ＮＡ 提取与 丨ＴＳ ／ １ ＴＳ ２ 序列 扩增 成功 率分析
扩增产 物经 １ ．５％ 的琼脂糖凝胶电泳 后 ， 选择实验样 品 提取基因组 Ｄ ＮＡ ， 做为母液 ， 取 ３ａＬ
有 明显特异条带 的样 品测 序 ， 测序 由生工生物工程经 ０ ． ８％ 琼脂糖凝胶 电泳后条带 清晰单一 ， 无 ＲＮ Ａ
（上海 ） 股份有 限公司 完成 。 为保证测序的准确性 ，和蛋 白 污染 。 取母液 ＤＮＡ 适量稀释 Ｉ 倍 ， ＰＣＲ 扩增
均采用正反双 向测 序 。［ＴＳ／ ＩＴＳ ２ 序列后 ， 经 １ ．５％ 琼脂糖凝胶 电泳检测 ， 试
１ ． ２ ．４ 数据处理 验材料 明显获得均一条带 ， Ｐ Ｃ Ｒ 产物用于测序分析 。
测序所得的峰 图采 用 Ｃ ｏ ｄｏ ｎＣ ｏ ｄｅＡ ｌ ｉ ｇｎ ｅ ｒＶ３ ． ０２ ．２４ 种 常见 绢 蒿 属植物及银 蒿 Ｉ ＇ Ｉ ＇Ｓ ／ ＩＴＳ ２ 序 列 长
软 件 （ 美国 Ｃ ｏｄ ｏｎＣ ｏｄｅ 公司 ） 对序列 峰 图进行校对度 、 ＧＣ 含量及种 内 变异位点分析
拼接 ， 去除 引 物区和低质量 的序列 ， 根据 ＮＣ Ｂ Ｉ 数变 异位点及信息位点 数可反 映所分析材料的
据库的 ＢＬ ＡＳＴ 比对中相似度最高物种 的序 列边界 ，碱基变 异程度 。 经 ＭＥＧＡ６ ．０ 比对后 ， 本实验获得
截取各 序列 边界 。 Ｉ ＴＳ２ 序列 基于隐 马尔 可夫 模型的 １ ０ 条绢 蒿 属 植物 和 ５ 条银 蒿 ＩＴ Ｓ 序 列 长度 为
的 ＨＭ Ｍ ｅ ｒ 注释方法 ， 去除两端 ５ ． ８Ｓ 和 ２ ８Ｓ 区段 ， ７ １ ９ －７ ２ ０ｂＰ ，Ｇ Ｃ 含 量 为 ５ 丨 ％－５ ６％ ， 平均 ＧＣ 含量
［ ＷｏｒｌｄＳｃ ｉｅｎｃ ｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ／Ｍｏｄｅ ｒｎｉｚａ ｔｉ ｏｎｏｆＴｒａｄｉ ｔｉｏｎａ ｌＣｈ ｉｎｅｓ ｅＭｅｄ ｉｃ ｉｎｅａｎｄ Ｍａ ｔｅｒｉａ Ｍｅｄｉ ｃａ］２２３
２０ １ ６ 第十八卷 第二期 ★ Ｖ〇１ ． １ ８ Ｎ〇 ．２
为 ５４％ ， 其中西北绢蒿和针裂 叶绢蒿种 内变 异位点于种 内 变异 。 经 Ｍ ＥＧＡ ６ ． ０ 比对分析后 ， ４ 种絹蒿和
及信息位点 数均为 ９／４ ， 而 ５ 份银蒿种 内 变异位 点银蒿种 间变异位点 ／ 信息位点 ＩＴＳ 序列 为 ８ ５ ／５ ５ 、
及信息位点数较大为 ６４ ／ ３７ 。ＩＴＳ２ 序列为 ２ ３ ／ １ ７ 。
ＩＴＳ２ 序列长度为 ２ ２５ ＿２２６ｂｐ ， ＧＣ 含量为 ５３％－种 间 、 种内 遗传距离 ６ 个值的统计分析见表 ２ ，
５７％ ， 平均 ＧＣ 含 量 为 ５６％ ， ４ 份 西 北绡 蒿 种 内 存银蒿 ＩＴＳ 序列 ３ 个种 内遗传距离值大于 ＩＴＳ ２ 序列 ，
在 ２ 个 变 异 位 点 ， 为 １ ６ ３ｂｐ 处 （ ＰＳ００ １ ４ＭＴ０２ ） 、银蒿的 ＩＴＳ 和 ＩＴ Ｓ２ 序列种 内 ３ 个遗传距离值均大
１ ９９ｂ ｐ 处 （ ＰＳ００ １ ４ＭＴ０３ ） Ｃ－Ｔ 变 异 ， 图 １Ａ ； ４ 份 针于 絹 蒿属 ； 絹 蒿属 除种 内最 大距离 ＩＴＳ 序列等于
裂叶 絹 蒿样 品 种 内 存在 ３ 个变异位 点 ， 为 １ ６５ｂ ｐＩＴＳ ２ 序列外 ， 其他 ５ 个值 ＩＴＳ序列均大于 ＩＴＳ ２ 序列 ；
处 Ｔ －Ａ（Ｐ Ｓ ０ ０ １ ８Ｍ Ｔ０２） 、 １ ６６ｂ ｐ 处 Ｔ －Ｃ 变 异絹 蒿属 ＩＴ Ｓ 和 ＩＴＳ ２ 序列 种 间 ３ 个值均小于 种 内 ３
（ ＰＳ ０ ０ １ ８ＭＴ０ ２） 、 １ ９ ９ｂｐ处Ｔ－Ｃ（Ｐ Ｓ ００ １ ８ ＭＴ０ １ 、个值 。
ＰＳ００ １ ８ＭＴ０２ ） ， 图 １ Ｂ ； ５ 份银蒿种 内存在 １ ６ 个变异２ ．４４ 种常 见絹 蒿 属植物 及银 蒿 ＩＴＳ ／ ＩＴＳ ２ 序 列 邻
位点 ， 信息位点数为 １ １ ， 图 １Ｇ接 （ Ｎ Ｊ） 树鉴定分析
以上结果表明 ： 绢蒿属 、银蒿物种本身存在一定Ｎ Ｊ 聚类树状 图是 ＤＮＡ 条形码序列物 种 鉴别
的 变异 ， ＩＴ Ｓ 变异位点 及信息位 点 数大于 ＩＴＳ ２ ， 银的方法之一 ， 而物 种鉴定是否成功 ， 看 同一个物 种
蒿的 Ｉ ＴＳ ／ ＩＴ Ｓ ２ 变异位点 及信息位点数均 大 于 ４ 种的不 同个体在 构建 的 ＮＪ 系 统树上是 否形成单系
絹蒿 。分支 ， 即 同一物种 的不 同 个体能否 聚类到一起 ， 如
２ ． ３４ 种 常 见绢 蒿 属植物 及银 蒿 丨 ＴＳ ／ ＩＴＳ２ 序 列 种形成单系分支则鉴别成功 ， 反之鉴别不成功 。 利用
间 、 种 内 遗传距 离 分析Ｍ ＥＧＡ６ ． ０ 构建 Ｉ ＴＳ 和 ＩＴＳ ２ 序列邻接树 （ Ｎｅ ｉ ｇｈ ｂ ｏ ｒ－
判 断 Ｄ ＮＡ 条形码质量标准之一是该序列 是否Ｊ ｏ ｉ ｎ ｉ ｎ ｇ ，Ｎ Ｊ） ， 见 图 ２ 。 由 图 ２ （Ａ 、 Ｂ） 可知 ， 整个树
具有可以 区分物种 的足够遗传变异 ， 物 种 的序列种从根部分化为 ３ 支 ，西北绢蒿 、博乐絹蒿 、伊塞克绢
间 变异较大 ， 种 内 变异足够小 ， 即物 种 种 间 变异 大蒿 、针裂 叶絹蒿 ４ 个物种 １ ０ 份材料 以 ９９％ 的支持
１ １ ＂ Ｉ
６ ９ ６６９
３ ９ ５６９
Ｓｅｒｉｐｈ ｉｄｉｕｍｎｉｔｒｏｓｕｍＰＳ ００ １ ４ＭＴ ０ １Ｃ ＣＳｅｒｉｐｈｉｄｉｕｍｓｕｂｌｅｓｓ ｉｎｇｉａｎｕｍＰＳ ００ １８ＭＴ０３Ｔ Ｔ Ｔ
Ｓｅｒｉｐｈ ｉｄｉｕｍｎｉｔｒｏｓｕｍＰＳ ００ １４ＭＴ ０３ ．ＴＳｅｒｉｐｈｉｄｉｕｍ ｓｕｂｌｅｓｓ ｉｎｇｉａｎｕｍＰＳ ００ １８ＭＴ０４ ． ． ．
Ｓｅｒｉｐｈ ｉｄｉｕｍｎ ｉｔｒｏｓｕｍＰ Ｓ ００ １４ＭＴ ０４． ．Ｓｅｒｉｐｈｉｄｉｕｍ ｓｕｂｌｅｓｓ ｉｎｇｉａｎｕｍＰＳ ００ １８ＭＴ ０ １？ ．Ｃ
Ｓｅｒｉｐｈ ｉｄｉｕｍｎｉｔｒｏｓｕｍＰ Ｓ ００ １ ４ＭＴ ０ ２Ｔ ．Ｓｅｒｉｐｈｉｄｉｕｍｓｕｂｌ ｅｓｓ ｉｎｇｉａｎｕｍＰＳ ００ １８ＭＴ ０２Ａ Ｃ Ｃ
Ａ Ｂ
１１１ １１ １２２ ２２２
２ ３ ３ ４ ６ ２ ５ ５ ７ ８ ９ ０ ０ １ １ １
２ ０ ９ ２ １ ０ ５ ８ ３ ７ ８ １ ９ ４ ６ ７
Ａ ｒｔｅｍｉｓ ｉａ ａｕ ｓｔｒｉ ａｃａＰＳ００ ０５ＭＴ ０ ４Ｇ Ｔ Ｇ Ｔ Ｔ Ｇ Ｔ Ｃ Ａ Ａ Ａ Ｔ Ｃ Ｃ Ａ Ｃ
Ａ ｒｔｅｍｉｓｉａ ａｕｓｔｒｉ ａｃａＰＳ００ ０５ＭＴ０ ５ Ｃ
Ａ ｒｔｅｍｉｓｉａ ａｕｓｔｒｉ ａｃａ ＰＳ００ ０５ＭＴ０ ３ ．Ｃ Ａ Ｃ Ｃ．Ｃ．．Ｔ Ｇ Ｃ Ｔ Ｔ Ｇ．
Ａｒｔｅｍｉｓｉａ ａｕｓｔｒｉ ａｃａＰＳ００ ０５ＭＴ０ １Ａ ．Ａ ．． Ａ ． Ｔ ．． Ｔ ． Ｔ ．． Ｔ
Ａ ｒｔｅｍｉｓｉａ ａｕｓｔｒｉａｃａ ＰＳ００ ０５ＭＴ０ ２ ． Ｃ Ａ Ｃ Ｃ ． Ｃ ．． Ｔ Ｇ Ｃ Ｔ Ｔ Ｇ ．
Ｃ
图 １ 西北绢蒿 、 针裂叶绢蒿 、 银蒿 ＩＴＳ２ 种 内变异位点
注 ： Ａ ．４ 份西 北 绢 蒿 ， Ｂ ．４ 份针裂 叶绢 蒿 ， Ｃ ．５ 份银蒿 。

表 ２ＩＴＳ／ＩＴＳ２ 序列种间及种 内遗传距离分析

属名序列种 内距 离种内 最大距 离种 内 平均距 离种 间距 离种间平均距 离种 间最小距 离
ＩＴＳ０ ．０５ ３２ ０． ０７２５０． ０５３２±０ ．０２３９银蒿
ＩＴＳ２０ ．０４ １ ０±０ ． ０２２６０．０６ １０． ０４ １ ０±０ ．０２２ ６
ＩＴＳ０ ．００７ ２ ± ３ ．２５７ ４Ｅ－０６０ ．０ １ １２ ± ６．２９３ ３Ｅ－０６０． ００７ ２±０ ．００３００ ．００６ ７± ０ ．００ ３４０ ．００６ ５± ０ ．０００９０． ００２ ８± ０．００２ ８
绢 蒿属＾ ＩＴＳ２０ ．００６ ０± ０． ００２ １０ ．０ １ １２ ±０． ００３２０．００６ ０±０ ．００４ ４０ ．００ ５ ３± ０ ．００ ３ ８０ ．００４ ８± ０ ．０００ ７０． ００ １ ５ ±０． ００２ ６
２ ２４［Ｗｏｒｌｄ Ｓｃ ｉ ｅｎｃｅａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌ ｏｇｙ／Ｍｏｄｅｒ ｎｉｚａｔ ｉｏ ｎｏｆ Ｔｒａｄｉ ｔ ｉｏｎａｌ Ｃｈｉ ｎｅｓｅ Ｍ ｅｄ ｉｃ ｉｎｅａｎｄＭａｔ ｅｒ ｉａＭｅｄ ｉｃａ ］
世界科学技术一中医药现代化★专题讨论 ： ＤＮＡ 条形码技术在中药材及其种源鉴定中的应用
率聚为一大支绢蒿属 ； ５ 份银蒿形成 ２ 个并系性 ； 西图 ３Ｂ 、 ３ Ｃ 、 ３Ｄ 。
北绢蒿 、博乐绢 蒿 、伊塞克绢蒿 、针裂叶绢蒿存在聚Ａ 模型在螺旋 Ｉ 上有茎环 ，而 Ｂ模型没有 ， 仅存
类融合现象 。 以上结果说明 ： 对于本研究的 ４ 种绢在螺旋 Ｉ 这一点区别 ， 中心环和 １ 、 羾 、 ＩＶ螺旋区均
蒿属植物和银蒿 ， ＩＴＳ 和 ＩＴＳ ２ 序列具有很好地鉴定相同 ；模型 Ｃ 与 Ｄ 中 心环大小不 同 ， 螺旋 Ｉ 末端茎
属的效果 。环小于 Ｄ 模型 ； 在螺旋 Ｉ 和 ｎ 之间 中心环上模型 Ｃ
２ ． ５４ 种 常见绢 蒿属植物及银蒿 ＩＴＳ２ 序列 二级结无凸 出环 ， 而 Ｄ 有凸 出环 ， 除此外 ， Ｃ 和 Ｄ模型 ＩＩ 、
构预测 皿 、 ＩＶ螺旋区均相 同 。
据 ＩＴ Ｓ２ 序列数据库及其网站得知 ， 物种 ＩＴＳ ２
序列二级结构均为一个 中心环 （ 主环 ） 和 ４ 个螺旋Ｖ
区 （ Ｈ ｅ ｌ ｉｘ ） 构 成 ， ４ 个螺旋 区命 名 为 ： Ｉ 、 ｎ 、 ｍ 和新疆地域辽 阔 ， 山脉与盆地相间排列 ，盆地与高
ＩＶ ， 而不 同 的物种其螺旋 区的茎环数 目 、大小 、位置山环抱 ，喻称 “三 山夹二盆” ， 形成明显 的温带大陆
以及螺旋发出 的角度有差异 。 在 ＩＴＳ２ 序列数据库性气候 ， 四季温较差 、昼夜温差大 ， 季节变化 明显 ，
网站预测 ４ 种絹 蒿属 植物 、银蒿 的 ＩＴＳ ２ 序列二级春季气温多变 ，秋天气温骤降 ，气温随纬度增加 、海
结构发现有与其相 同 的 、高度相似 的 ［Ｈ ｉ ｇｈＱｕａ ｌ ｉ ｔｙ拔上升而 降低 ， 天 山 南北差异甚大 ， 地貌和土壤复
Ｍｏ ｄｅ ｌ ，ａ ｌｌｈｅ ｌ ｉ ｃ ｅ ｓ（ ｐ ｅｒ ｃｅｎ ｔａｇｅ ｓ１ ００／ １ ００／ １ ００ ／ １ ００ ） ］杂多样 ， 为适应复杂多变的环境 ， 由 此形成物种遗
二级结构模型 ， ４ 种绢蒿属植物的 ＩＴＳ２ 二级结构模传多样性高或遗传变异丰富 多彩的蒿属 、 绢蒿属植
型均为 图 ３Ａ ， 而 ５ 份银蒿存在 ３ 种类型的模型 ， 见物资源 ， 新疆是絹蒿属植物分布 中心 。 蒿 自 然群种

７９ ｉ Ｓｅｒｉｐｈｋｔｉｕｍ ｉｓｓｙｋｋｕｉｅｎｓｅ ＰＳ００ １６ＭＴ０１
Ｉ Ｓｅｒｉｐｈ ｉｄｉｕｍ ｓｕｂ ｌｅｓｓｉｎｇｉａｎｕｍ ＰＳ００１８ＭＴ０２
Ｓｅｒｉｐｈ ｉｄｉｕｍ ｎｉｔｒｏｓｕｍ ＰＳ００１４ＭＴ０１
效Ｉ
 Ｓｅｒｉｐｈ ｉｄｉｕｍｂｏｒｏｔａｌｅｎｓｅＰＳ００１５ＭＴ０ １
５６ ＊ Ｓｅｒｉｐｈ ｉｄｉｕｍ ｓｕｂ ｌｅｓｓｉｎｇｉａｎｕｍ ＰＳ００１８ＭＴ０１
Ｓｅｒｉｐｈ ｉｄｉｕｍ ｎｉｔｒｏｓｕｍ ＰＳ００１４ＭＴ０２
Ｉ
 Ｓｅｒｉｐｈｉｄｉｕｍｎｉｔｒｏｓｕｍ ＰＳ００１４ＭＴ０４
 Ｉ Ｉ Ｓｅｒｉｐｈ ｉｄｉｕｍ ｎｉｔｒｏｓｕｍ ＰＳ００１４ＭＴ０３７６
１ Ｓｅｒｉｐｈｉｄｉｕｍ ｓｕｂｌｅｓｓｉｎｇｉａｎｕｍ ＰＳ ００１８ＭＴ０３
８６
１ Ｓｅｒｉｐｈｉｄｉｕｍ ｓｕｂｌｅｓｓｉｎｇｉａｎｕｍ ＰＳ００１８ＭＴ０４
Ｉ
 Ａｒｔｅｍｉｓ ｉａａｕｓｔｒｉａｃａＰＳ０００５ＭＴ０１

Ｉ
 ＡｒｔｅｍｉｓｉａａｕｓｔｒｉａｃａＰＳ０００５ＭＴ０４
Ｉ〇〇 ｌ Ａｒｔｅｍｉｓ ｉａａｕｓｔｒｉａｃａＰＳ０００５ＭＴ０５
．
 Ａｒｔｅｍｉｓ ｉａａｕｓｔｒｉａｃａＰＳ０００５ＭＴ０２
！〇〇 ？ ＡｒｔｅｍｉｓｉａａｕｓｔｒｉａｃａＰＳ０００５ＭＴ０３
Ａ
Ｉ
 Ｓｅｒｉｐｈｉｄｉｕｍｓｕｂ ｌｅｓｓｉｎｇｉａｎｕｍＰＳ００１８ＭＴ０３
— Ｓｅｒｉｐｈ诚ｕｍｓｕｂ ｌｅｓｓｉｎｇｉａｎｕｍＰＳ００１８ＭＴ０４
Ｉ ＳｅｒｉｐｈｋＲｕｍｎｉｔｒｏｓ ｕｍＰＳ００１４ＭＴ＾ ３

Ｉ
ＳｅｒｆｐＡｆｄ？ｕｍｉｓｓｙｋｋｕｉｅｎｓｅ ＰＳ００１６ＭＴ０１
６？ Ｓｅｒｉｐｈｋ＾ｕｍｓｕｂ ｌｅｓｓｉｎｇｉａｎｕｍＰＳ００１ＢＭＴ０２
— ＳｅｒｉｐｈｉｄｉｕｍｎｉｔｒｏｓｕｍＰＳ００１４ＩＩＩＴ０２
Ｓｅｒ＾ｈＫ＾ｕｍｂｏｒｏｔａ ｆｅｎｓｅ ＰＳＯ０ｆ５ＭＴＯ１
 ＳｅｒｉｐｈＵＭｕｍｎｉｔｒｏｓｕｍ ＰＳ００１４ＭＴ０１
 ＳｅｒｉｐｈｉｄｉｕｍｎｉｔｒｏｓｕｍＰＳ００１４ＭＴ０４
Ｉ ＳｅｒｉｐｈｋＢｕｍｓｕｂ ｌｅｓｓｉｎｇｉａｎｕｍＰＳ００１８ＭＴ０１
Ｉ
 Ａｒｔｅｍｉｓｉａ ａｕｓｔｒｉａｃａＰＳ０００５ＭＴ０１
秘Ｉ
 ａｕｓｔｒｉａｃａ ＰＳ０００ＳＭＴ０４
９６ ＊ Ａｒｔｅｍｉｓｉａ ａｕｓｔｒｉａｃａ ＰＳ０００５ＨＴ０５

Ｉ
Ａｒｔｅｍｉｓｉａａｕｓｔｒｉａｃａ ＰＳ００＆５ＭＴ０２
＇
Ａｒｔｅｍｉｓｉａ ａｕｓｔｒｉａｃａ ＰＳ０００５ＭＴ０３
Ｂ
图 ２ 基于 ＩＴＳ／ＩＴＳ２序列构建的 ４ 种绢蒿属植物和银蒿邻接 （ Ｗ） 树
注 ： ｂｏｏｔ ｓｔｒ ａｐ１０００ 次重复 ，枝上数值仅显示 自展 支持率 彡 ５ ０％ ； Ａ ． ＩＴＳ ，Ｂ ． ＩＴＳ２ 。
［ Ｗｏｒ ｌｄ ＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ／Ｍｏｄｅｒｎｉｚａ ｔｉｏｎｏｆＴｒａｄｉｔ ｉｏｎａｌ Ｃｈ ｉｎｅｓ ｅＭｅｄｉｃ ｉｎｅ ａｎｄＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ ］２２５
２０ １ ６ 第十八卷 第二期 ＊ Ｖ〇１ ． １ ８Ｎｏ ．２
／ ＼／Ａ
ｆ＼Ａ
Ｃ Ｄ
图 ３ 绢蒿和银蒿 Ｉ ＴＳ２ 序列二级结构模型
注 ： Ａ ． 销 蒿 属 ， Ｂ ． 银 蒿 １ ，Ｃ ． 银蒿 ２ ， Ｄ ． 银 蒿 ３ 。
类 多 、 分布广 、分化复杂 ， 植物外部 形 态极其相 近 ， 距离及 Ｎ 〗 树将常见的 ９ 种蒿属黄花蒿 、艾蒿 、茵陈
难于分辨 ， 研究者试图 利用 ＤＮ Ａ 条形码对其进行蒿 、细 裂 叶莲蒿 、歧 茎蒿 、 白 花蒿 、野艾蒿 、 白莲蒿 、
基原鉴定 、分类 。 王铁绢等 １ ４８ １ 对蒿属 ２ 个亚属 ５ 个大籽蒿全部区分 ， 以上研究均不包括本研究 的 ４ 种
组 （ 艾组 、艾蒿组 、 龙蒿组 、牡蒿组 、 莳萝 蒿组 ） ３ ８ 个绢蒿 。
种进行 序列 分析 ， ｔｍｉ－ｆ＇ 序列 在 蒿属 植物在本研究探讨热点序列 ＩＴＳ ／ＩＴＳ２ 对西北绢蒿 、
间有 着高度 的一致性 ， 一些种 的 序列 完全相 同 ， 来博乐絹蒿 、伊塞克绢蒿 、 针裂叶绢蒿 ４ 种绢蒿属植物
自 于不同组 的一些植物也具有完全 相同 的序 列 ， 除与 近缘种银蒿蒿 属 的 区分效果 ， 发现西北绢 蒿 、 针
艾组外 ， 其它组并未得到很好的 分化 、均没有 形成裂 叶绢蒿 间有着高度的一致性 ， 共有 的 ＩＴＳ 序列 变
独立 的 分支 。 Ｇ ａｏ 等 ［４ ９］ 基于实 验样本和 ＧｅｎＢ ａｎ ｋ异位点 及信息位点数 ９ ／４ ， ＩＴＳ ２ 序列 变异位点及信
数据分析 ， 提出 ＩＴ Ｓ２ 序列 可作为菊科鉴定 的 ＤＮＡ息 位点 数 ２／０ 、 ３ ／ １ ； 银蒿 ＩＴ Ｓ／ ＩＴ Ｓ２ 序列 变 异位点 及
条形码序列 ， Ｉ ＴＳ２ 序列对蒿属 ７ ４ 个物种 的 ９ １ 份样信息位点 数分别 为 ６ ４／ ３ ７ 、 １ ６ ／ １ １ ， 多于绢蒿属 材料 ；
品 的鉴定效率为 ５ ９ ． ３％（ Ｂ ＬＡＳＴ １） ， 这 ７ ４ 个物种中银蒿种 内遗传距离值 ＩＴＳ 序列大于 Ｉ ＴＳ ２ 序列 ， 并且
主要是艾蒿 、黄花蒿 、 白 花蒿 、 细裂 叶莲蒿等蒿属材其 ＩＴ Ｓ／ ＩＴ Ｓ２ 序列 值均大于絹 蒿属 ；绢 蒿属 种 内 、 种
料 。 而 刘美子 １ ４ ３ １ 利用 ＩＴＳ２ 序列 的 种 间 Ｋ ２Ｐ 遗传间 遗传距离 ， ＩＴＳ 序列 均大 于 ＩＴＳ２ 序列 ， 但种 间 ３
２２６［ ＷｏｒｌｄＳｃｉｅｎｃｅａ ｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ／Ｍ ｏｄｅ ｒｎ ｉｚａｔ ｉｏｎ ｏｆＴｒａｄｉ ｔ ｉｏｎａ ｌＣｈ ｉｎｅｓ ｅＭｅｄｉ ｃ ｉｎ ｅａｎｄＭａ ｔｅｒｉ ａＭｅｄｉｃａ］
世界科学技术一中医药现代化★专题讨论 ： Ｄ ＮＡ 条形码技术在中药材及其沖源鉴定中的应用
个值均小于种 内 ３ 个值 。 这说 明银蒿材料的 ＤＮＡ导致种间在短时 间 内 没有积累足够的遗传变异 ，物
序列变 异程度大于 ４ 种 絹蒿属材料 ， ＩＴＳ／ ＩＴ Ｓ２ 序列种 之间难 以 分辨 ， ＩＴＳ ／ＩＴＳ ２ 物 种 鉴别能区分到属 。
对银蒿的鉴定区分效果都优于绢蒿属 。第 三 ， 地貌 、 土壤 、 气候 等微环境导 致 同一种物不
ＮＪ 树鉴定 时存在交叉 现象 ， 因 此根据植物 习同 产地遗传差异 ， ４ 份针裂叶 絹蒿 ＰＳ００ １ ８ＭＴ０ １ 和
性 、花序 、营养叶 、根 系 等形态学划分的 西北绡蒿 、 ＰＳＯＯ 丨 ８ＭＴ０ ２ 采集于新源县前进牧场 ， ＰＳＯ Ｏ １ ８Ｍ Ｔ０３
针裂叶 绢蒿没有得到很好 的分辨 。 主 要是缺乏变和 ＰＳ００ １ ８Ｍ Ｔ０ ４ 采 集 于 察 布 查 尔县 白 石 峰 ， ＩＴ Ｓ／
异位点 ， 因此 由 于 变异位点 的缺乏 ， 在所分析的 种Ｉ ＴＳ２ＮＪ 树均显示 ＰＳ００ １ ８ ＭＴ０ ３ 和 ＰＳ００ １ ８ＭＴ０４ 聚
中 ，一些种没有和本组植物聚到一起 。 银嵩 ５ 份材在一起 。
料 Ｎ ｊ 树聚为 ２ 个并系 ， ＩＴＳ２ 序列 二级结构模型有由 于样 品量有 限 ，对絹蒿属植物的 ＤＮＡ 条形码
３ 个类 型 ， 印证了银蒿 种 内 本身碱基 变异大 。 西北鉴定 尚需进一步研究 。 中药材 ＤＮＡ 条形码分子鉴
絹蒿 、博乐 絹蒿 、伊塞 克绢蒿 、针 裂叶絹蒿 ４ 种 绢蒿定法在 中 药材基原物种鉴定 、 中成药流通监管 、 道地
属 Ｉ Ｔ Ｓ２ 序列二级结构模型相 同 ， 进一步印证了 ＩＴ Ｓ／药材鉴别 、保健食品 和食 品质量安全控制等领域发
ＩＴＳ ２ 条形码序列 能很好的鉴定到属 ， 而对絹蒿属 内挥重要作用 ［Ｍ］ ， 叶绿体超级条形码的提出及应用 Ｉ ５ １ １ ，
种 的鉴定分类有一定局 限性 。均给絹蒿属 Ｄ ＮＡ 条形码研究提供思路和途径。
由于植物在进化过 中容易 发生杂交 、 网状进化 ，
且 同一基因在 不 同类群 的进化速率不 同 ， ４ 种绢蒿致谢 ：感谢中科院 “西部之光” 人才培养计划 “ 西部
与银蒿物种之间可能存在杂交渐渗 ， 这可 能是 ＩＴ Ｓ／博士资助项 目 ” （ Ｘ ＢＢ Ｓ ２０ １ ２ １ ３） 资助 。 感谢中 国 医
Ｉ ＴＳ ２ 序列 对 ４ 种 絹蒿和银蒿物种鉴 别率低 的可能学科学院北京协和 医学 院药用植物研究 所韩建萍
原 因 之一 。 其 次 ， ４ 种 绢 蒿 可能经历 了 快速成种 ， 老师及硕士生王丽丽对数据分析的指导 、 建议。
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西北农林科技大学博士学位论文 ， ２００７ ： １ － １２ １ ． 丨 ６ 侯钰荣 ． 伊犁绢蒿生理生态适应性的研究 ． 乌鲁 木齐 ： 新疆农业大
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林科技大学硕士学位论文 ， ２００７ ： １ － ４７ ．１ ８Ｈｅｈｅ ｒｔＰ Ｄ，Ｃ ｙｗｉｎ ｓｋ ａ Ａ ，Ｂ ａｉ ｌＳ Ｌ ． Ｂｉ ｏ ｌｏｇ 丨’ ｃ ａｌ ｉｄｅｍ 丨Ｙｉｃａ ｔ ｉ ｏｎｓ（ ｈｒｏｕｇｈ
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硕士学位论文 ， ２０ １ ０ ：１ －３ ２ ． １ ９Ｓｃ ｈ ｉ ｎｄｅ ｌ ＤＥ， Ｍ ｉ ｌ ｌｅ ｒ ＳＥ ．Ｄ ＮＡｂａ ｒｏ ｏｄ ｉ ｎｇａ ｕ ｓｅｆｕ ｌｔｏｏ ｌｆｏ ｒ ｔａｘｏ ｎｏｍ ｉ ｓ ｔ ｓ ．
８孙 会 忠 ， 贺 学 礼 ， 陈 铁 山 ， 等 ． 中 国 絹 蒿 属Ｓ ｅｒ ｉｐｈ ｉ ｃ ｌ ｉ ｕｍ （Ｂｅ Ｓｓ ．） ＴＶａｍｒｅ， ２００５ ， ４３ ５ （７ ０３ ８ ） ： １７ ．
Ｐｏ ｌ ｊａ ｋ ． １ ６ 种植物 花粉形态研究 ． 自然科学进展 ， ２００７ ， １ ７ （ １ ） ：３ ５－４ １ ．２０ 陈士林 ， 姚辉 ， 宋经元 ， 等 ． 基于 ＤＮ Ａｂａ ｒｃｏｄ ｉ ｎｇ（ 条形码 ） 技术 的
９ 孙会忠 ， 贺学礼 ，牛忠磊 ． 菊科絹蒿属 １ ０ 种植物 的花粉形态研究 ． 西中药材鉴定 ． 世界科学技术 － 中医药现代化 ， ２００７ ， ９ （ ３） ：７ － １ ２ ．
北农林科技大学学报 （ 自 然科学版 ） ， ２０ ０８ ， ３６（６ ） ：２２８－２ ３４ ．２ １ 杨朝辉 ． 一 扫条形码便知 中草药真假优劣 ． 科技 日 报 ， ２０ １ ４－ ８－３０
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物学报 ， ２００９ ，  ２９ （６ ） ：１ １ ５５－ １ １ ６ １ ．２２ 王丽丽 ， 林余霖 ， 陈晓辰 ， 等 ． 基于 Ｓ ＮＰ 位点鉴定藏菖蒲及其近缘
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１ ２ 孙会忠 ， 宋月 拜１ ， 贺学礼 ． 絹 蒿属 ８ 种植物果实微形态特征及其分（Ｌｉｎ ｇｚ ｈｉ ）ｓｐｅｃ ｉｅ ｓ ｂｙＩＴＳ２ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｓ ．ＣＴｕＶｉＵ， ２０ １ ５ ， １ ０ ：２２ ．
［ Ｗｏｒ ｌｄＳｃ ｉｅｎ ｃｅ ａｎｄＴｅｃｈｎｏ ｌｏｇｙ／Ｍｏｄｅ ｒｎｉｚａ ｔｉ ｏｎｏｆＴｒａｄｉ ｔ ｉｏｎ ａｌＣｈ ｉｎｅｓｅＭ ｅｄ ｉｃ ｉｎ ｅａｎｄＭａｔ ｅｒｉ ａＭｅｄ ｉｃａ］２２ ７
２０ １ ６ 第十八卷 第二期 ★Ｖｏｌ ． ｌ８ Ｎｏ ．２
２４ 王丽丽 ， 焦文静 ， 陈晓辰 ， 等 ． 基于核糖体 Ｄ ＮＡ 第二内部转录间隔界科学技术 － 中医药现代化 ， ２０ １ ３ ， １ ５ （ ３） ：４４ １ － ４４５ ．
区
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ＩＴＳ２ ） 序列鉴定 四季青及其近缘种 和混伪品 ． 农业生物 技术学３９ 罗焜 ， 马培 ， 姚辉 ， 等 ． 基于 ＩＴＳ２ 序列 鉴定川贝 母及其混伪品 基原
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２９Ｃｈ ｉｎａＰ ｌ ａｎ ｔＢＯＬＧ ｒｏｕｐ ，Ｌｉ ＤＺ ，Ｇａ ｏＬＭ ，ｅｔａｌ ．Ｃ ｏｍｐａ ｒａｔ ｉ ｖｅ ａ ｎ ａｌ ｙｓ ｉ ｓ的鉴定中草药２０ １ ２４３ （ ７） ＇ １ ３９ ３１ ３９７
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Ｓｃ ｉＵＳＡ ，２０ １ １ ， １ ０８ （４９ ） ： １ ９６４ １ － １ ９６４６ ．， ，Ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃ ｏ ｌ，２００９ ， １ ２４ ：４３４ －４ ３ ９ ．
３０Ｃ ｈｅｎＳＬ
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贝ｌｊ中国 中药杂志２０ １ ３３８ （２ ） ． １４ １ － １ ４８ｃ ａｎｄ ｉ ｄａ ｔ ｅＤ Ｎ Ａｂａｒ ｃ ｏ ｄｅ ｓ ｉｎｄ ｉ ｓ ｃ ｒ ｉｍ ｉ ｎａ ｔ ｉ ｎ ｇｓｐ ｅ ｃ ｉ ｅ ｓｏ ｆ ｔ ｈｅｌ ａ ｒ ｇｅ
３６ＨａｎＪＰ， Ｓｏｎ ｇＪＹ ，Ｌｉ ｕＣ ， ｅｔ ａｔ ． Ｉ ｄｅ ｎ ｔ ｉ ｆ ｉｃ ａｔ ｉｏ ｎｏ ｆＣ ｉｓｔ ａ ｎｃ ｈｅｓ ｐｅ ｃｉ ｅｓＡｓ ｔ ｅｒａ ｃｅ ａ ｅｆａｍ ｉ ｌ ｙ ．ＢＭＣ Ｅｖｏｌ Ｂ ｉｏ ｌ， ２０ １ ０ ， １ ０ ．３ ２４ ．
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世界科学技术一中医药现代化 ★专题讨论 ： ＤＮＡ 条形码技术在中药材及其沖源鉴定中的应用
ｏｆｐ ｌ ａｎ ｔｓｉｎＳｅｒｉｐｈ ｉｄ ｉｕｍ ．ＩＴＳ ／ ＩＴＳ ２ｒｅｇｉｏ ｎｓｆｒｏｍｆｉ ｆｔ ｅｅｎＳｅ ｒｉｐｈ ｉｄ ｉｕｍｓ ｐｅｃ ｉｅ ｓａ ｎｄＡ ．ａ ｕｓ ｔｒ ｉａｃａｓａｍｐ ｌ ｅ ｓｗ ｅｒｅ
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（责任编辑 ： 马雅静 张志华 ， 责任译审 ： 朱黎婷 王 晶 ）
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