全 文 ：李玉中，杨 芳，刘 春，等． 衡阳地区莴笋叶斑病病原菌的鉴定及其室内药剂筛选［J］． 江苏农业科学，2014，42(2):102 － 104．
衡阳地区莴笋叶斑病病原菌的鉴定及其室内药剂筛选
李玉中，杨 芳，刘 春，滕 涛，何丽芳
(衡阳师范学院生命科学系，湖南衡阳 421008)
摘要:对衡阳地区的莴笋叶斑病病原菌进行了分离和形态学鉴定，并采用平皿菌丝生长抑制法测定供试药剂对病
菌菌丝生长的抑制活性，比较了 4 种杀菌剂对致病菌的抑制效果，结果表明:衡阳地区莴笋叶斑病致病菌为微疣匍柄
霉［Stemphylium chisha (Nish)Yannamoto］，在供试药剂中甲霜·锰锌、代森锰锌的抑菌效果较好，EC50分别为 6． 58、
6. 34 mg /L;其次是多菌灵，其 EC50为 458 mg /L;最后是百菌清，其 EC50为 2 107 mg /L。
关键词:莴笋叶斑病;药剂筛选;生长抑制;菌落直径
中图分类号:S436． 36 文献标志码:A 文章编号:1002 － 1302(2014)02 － 0102 － 03
收稿日期:2013 － 06 － 07
基金项目:湖南省衡阳市科技发展计划(编号:2011KN12)。
作者简介:李玉中(1978—)，男，山东聊城人，博士，副教授，主要从事
微生物及植物病害防治等方面的研究。E － mail:yzl _2002 @
163． com。
莴笋(Lactuca sativa)为菊科(Compositaeaceae)1 年生或 2
年生草本植物，在我国各地普遍栽培。莴笋肉质细嫩，常吃莴
笋可增强胃液和消化液分泌，增进胆汁分泌。莴笋含丰富的
钾、氟元素及胡萝卜素，可为人提供丰富的营养。此外，莴笋
叶还具有一定的平咳作用［1］。莴笋在我国的种植面积越来
越大，同时其病害的发生及其造成的经济损失也在增大，尤其
是莴笋叶斑病［2］。本研究对湖南省衡阳地区莴笋叶斑病的
病原菌进行了分离、纯化、鉴定和药剂筛选，以期找出防治莴
笋病害的最佳药剂，为衡阳地区莴笋叶斑病的防治提供科学
参考。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 试验菌株 分离自衡阳地区尖叶青笋发病的典型叶
片上的病原菌。
1． 1． 2 培养基和试剂 PDA:马铃薯 200 g，葡萄糖 20 g，琼
脂 15 g，蒸馏水 1 L;0． 1%的 HgCl2 消毒液;参照方中达方
法［3］配制。
试验药剂:(1)纯品多菌灵可湿性粉剂(山东富先达农药
有限公司);(2)70%甲基硫菌灵可湿性粉剂(珠海凯特生物
技术有限公司);(3)75%百菌清可湿性粉剂(吉林力生农化
农药有限公司);(4)进口 80%代森锰锌可湿性粉剂(奥瑞特
农药有限责任公司);(5)72%甲霜·锰锌可湿性粉剂(重庆
易丰科技发展有限公司)。
1． 2 试验方法
1． 2． 1 样品采集 于衡阳市各地采集尖叶青笋上明显发病
病叶，将叶片装入封口塑料袋中带回实验室待用。
1． 2． 2 菌株的分离、纯化与保存 从采集的样品中，选出具
有典型病斑的叶片，以常规组织分离法［3］进行分离。在每个
叶片上分离 3 ～ 5 块组织，每一病斑于病健交界处切取约
5 mm2 的病组织，然后用 70%乙醇浸 20 ～ 30 s，再在 0． 1%的
酸性氯化汞水溶液中浸 1 ～ 2 min，再用灭菌水换洗 4 次，置于
PDA平板上，每皿接种 4 ～ 5 个叶斑。接种完毕后将其置于
(25 ± 1)℃条件下培养。待病组织长出菌丝后，观察菌丝生
长情况，选取菌丝一致的菌落，用接种针挑取菌株的周边菌丝
于新的 PDA平板上于(25 ± 1)℃下培养 4 d，将分离到的纯
种菌株接种试管斜面，于(25 ± 1)℃下培养至菌丝长满斜面，
置 4 ℃ 冰箱保存待用。
1． 2． 3 病原菌的鉴定 将纯化的菌株在 PDA 上培养 7 ～
10 d，挑取菌落组织，显微镜下观察菌丝、分生孢子的形态并
拍照。根据形态参考《中国真菌志》第三十一卷暗色砖格分
生孢子真菌的描述［4］对病菌进行鉴定。
1． 2． 4 药剂筛选 采用含药平板法［5 － 7］。根据预试验的结
果，供试药剂的浓度如下:80%代森锰锌和 72%甲霜·锰锌
可湿 性 粉 剂 6 个 浓 度 为:10、5、2． 5、1． 25、0． 625、
0. 312 5 mg /L;纯品多菌灵为:5 000、1 667、556、185、62、
21 mg /L;75%百菌清可湿性粉剂为 10 000、3 333、1 111、370、
123、41 mg /L。
将供试菌株接种到 PDA 平板培养基上，置于培养箱内
25 ℃ 培养 5 ～ 7 d，用打孔器打取直径 6 mm的菌饼接种于相
应浓度的含药 PDA平板培养基中央，每皿 1 枚，置于 25 ℃恒
温培养，每种药剂每个浓度设 3 次重复，以加等量无菌水的平
板培养基为对照;4 d 或 7 d 后用十字交叉法测量菌落直径，
根据公式(1)计算各药剂对病菌的抑制率，并通过 DPS2000
软件对药剂浓度和抑制率进行毒力回归方程分析和计
算 EC50。
生长抑制率 =对照直径 －处理直径
对照直径 －菌饼直径
× 100% (1)
2 结果与分析
2． 1 病原菌的鉴定
莴笋发病病叶上出现红棕色至暗褐色坏死斑，中间有灰
白色点，以其为中心有轮纹，整个病斑有圆形、近圆形或不规
则形，直径为 2 ～ 8 mm，每张叶片上出现的病斑数目不等，少
的几个，多的十几个甚至几十个(图 1 － A)。分离纯化的菌
丝在 PDA培养基上生长，菌落圆形或近圆形，厚实，初期呈灰
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白色，3 ～ 4 d逐渐变为灰褐绿色。整个菌落外围灰白色至暗
青褐色，由外往内菌丝颜色逐渐加深，直至菌落中央的黑褐
色，但接种点因长有较多气生菌丝为灰白色(图 1 － B)。显微
镜下观察显示，该菌菌丝细长，有分枝，菌丝直径为 2． 0 ～
3． 0 μm;分生孢子梗单生，顶端色稍淡，基部细胞稍大，顶端
较宽，呈截形，分生孢子椭圆形或卵形，单生，淡褐色至褐色，
无嘴喙，有纵横分隔，成熟孢子表面有细疣(图 1 － C、D)。根
据以上形态特征，可知衡阳地区莴笋叶斑病的病原菌为微疣
匍柄霉［Stemphylium chisha (Nish)Yannamoto］。
2． 2 4 种药剂对病菌的抑制效果
药剂处理叶斑病菌丝培养 7 d后，结果显示:在试验浓度
范围内，甲霜·锰锌和代森锰锌最高抑制率分别为 59． 68%
和 58． 87%;而药剂处理 4 d 的多菌灵、百菌清的最高抑制率
分别为 88． 89%、80． 56%(表 1)。由此可知，所试各种浓度的
药剂对病原菌菌丝的生长都有不同程度的抑制作用。通过
DPS2000 软件对药剂浓度和抑制率进行相关性数据分析，得
出甲霜·锰锌、代森锰锌、多菌灵和百菌清回归方程并计算出
各个药剂的抑制中浓度分别为 6． 58、6． 34、458、2 107 mg /L
(表 2)。由此可知，在对莴笋叶斑病测试的 4 种药剂中，代森
锰锌的抑菌效果最好，其次是甲霜·锰锌，再次是多菌灵，最
差的为百菌清。所以，4 种杀菌剂对病原菌的毒力大小次序
为:代森锰锌 ＞甲霜·锰锌 ＞多菌灵 ＞百菌清(图 2)。
表 1 杀菌剂对莴笋叶斑病菌丝生长的影响
药剂名称
药剂浓度
(mg /L)
菌落直径
(cm)
抑制率
(%) 药剂名称
药剂浓度
(mg /L)
菌落直径
(cm)
抑制率
(%)
72%甲霜·锰锌可湿性剂粉 10 3． 10 59． 68aA 纯品多菌灵可湿性粉剂 5 000 1． 00 88． 89aA
5 3． 50 53． 23bB 1 667 1． 50 75． 00bB
2． 5 4． 00 45． 16cC 556 2． 10 58． 33cC
1． 25 5． 25 25． 00dD 185 2． 60 44． 44dD
0． 625 5． 30 24． 19dD 62 3． 00 33． 33eE
0． 312 5 5． 33 23． 71dD 21 3． 70 13． 89fF
CK 6． 80 CK 4． 20
80%代森锰锌可湿性粉剂 10 3． 15 58． 87aA 75%百菌清可湿性粉剂 10 000 1． 3 80． 56aA
5 3． 60 51． 61bB 3 333 2． 1 58． 33bB
2． 5 4． 00 45． 16bB 1 111 2． 3 52． 78cC
1． 25 4． 35 39． 52cC 370 2． 8 38． 89cC
0． 625 5． 45 21． 77dD 123 3． 2 27． 78eE
0． 312 5 5． 50 20． 97 dD 41 3． 6 16． 67fF
CK 6． 80 CK 4． 20
注:菌落直径及抑制率均为 3 次重复平均值;同列数据后不同小写字母表示相同药剂不同浓度之间差异显著(P ＜ 0． 05)，不同大写字母表
示相同药剂不同浓度之间差异极显著(P ＜ 0． 01)。
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表 2 不同杀菌剂对莴笋叶斑病病菌抑制的回归方程及 EC50
供试药剂 毒力回归方程 相关系数 抑制中浓度 EC50(mg /L)
72%甲霜·锰锌可湿性粉剂 y = 0． 041 0x + 0． 231 0 0． 949 1 6． 58
80%代森锰锌可湿性粉剂 y = 0． 038 9x + 0． 253 1 0． 893 4 6． 34
纯品多菌灵可湿性粉剂 y = 0． 000 097 0x + 0． 455 6 0． 886 9 458
75%百菌清可湿性粉剂 y = 0． 000 103x + 0． 283 0 0． 823 5 2 107
注:x表示药剂的浓度，y表示对菌丝的抑制率。
3 结论与讨论
经过形态学鉴定发现，衡阳地区引起莴笋叶斑病的病原
菌主要是微疣匍柄霉。药剂筛选表明，代森锰锌和甲霜·锰
锌对该病菌的抑制中浓度要远小于百菌清和多菌灵。本研究
结果为莴笋叶斑病的防治奠定理论基础。
在对衡阳地区果蔬主要病害的调查中发现，衡阳地区的
莴笋叶部病害发生严重，成为影响莴笋产量和质量的主要病
害之一［2］。目前防治莴笋叶斑病推荐使用的农药为 75%百
菌清、50%异菌脲、40%克菌丹、50%甲基硫菌灵可湿粉剂［8］
等，而本研究显示代森锰锌和甲霜·锰锌同推荐药剂百菌清
相比效果更好。造成结果不一致的原因可能有两个:一是不
同地区的莴笋叶斑病病菌的对不同药剂的敏感度存在差异;
二是百菌清药剂的长期使用使得莴笋叶斑病对其产生了部分
抗性。由此看来，今后在防治莴笋叶斑病过程中，有必要对本
试验药剂进行进一步的田间验证试验，找出更经济有效的药
剂，用于莴笋叶斑病害的防治，以降低药剂用量，减少环境污
染和防止病原菌抗药性的产生。
在本试验中，代森锰锌和甲霜·锰锌处理组是测定处理
7 d 的菌落直径，而百菌清和多菌灵处理组是测定处理 4 d的
菌落直径，是因为在预试验中发现，百菌清和多菌灵药剂处理
菌丝 4 d以后对菌丝的抑制率基本保持不变，因此对于 EC50
的计算没有影响。另外，在药剂预试验中还测试 70%甲基硫
菌灵，发现该药对莴笋叶斑病无抑制效果。
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