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芫荽软腐病病原菌生物学特性与药剂筛选



全 文 :黑龙江农业科学2015(7):62~64
Heilongjiang Agricultural Sciences
芫荽软腐病病原菌生物学特性与药剂筛选
张立微,张景涛,张丽茁,李小梅,戴忠仁
(哈尔滨市农业科学院,黑龙江 哈尔滨150029)
摘要:为有效防治芫荽软腐病,对其病原菌进行生物学特性及其药敏筛选试验研究。结果表明:芫荽软腐病
病原菌在37℃条件下,土壤pH为7时导致芫荽植株发病加速。在药剂筛选试验中,通过抑菌圈法可知,7种
试验药剂中72%农用硫酸链霉素可溶性粉剂、3%噻霉酮可湿性粉剂、53.8%氢氧化铜水分散粒剂、20%噻菌
铜悬浮剂均有明显抑菌作用。其中,72%硫酸链霉素可溶性粉剂的抑菌作用最强,最小抑菌浓度为0.031%;
其次为3%噻霉酮可湿性粉剂,最小抑菌浓度为0.06%。
关键词:芫荽;软腐病;生物学特性;药剂筛选
中图分类号:S436.36 文献标识码:A 文章编号:1002-2767(2015)07-0062-03 DOI:10.11942/j.issn1002-2767.2015.07.0062
收稿日期:2014-11-12
第一作者简介:张立微(1982-),女,黑龙江省绥化市人,硕
士,农艺师,从事蔬菜遗传育种研究。E-mail:307832795@
qq.com。
通讯作者:张景涛(1963-),男,硕士,高级农艺师,从事蔬菜
遗传育种研究。E-mail:702444364@qq.com。
  软腐病为芫荽生产尤其是育种中常见病害,
各地都有发生,轻则影响产品质量,重则可使植株
成片腐烂,造成绝产。此病传播速度快,给芫荽育
种上造成极大损失,严重影响芫荽繁种。芫荽生
产中绝大部分为叶用品种的生产,在营养生长阶
段,软腐病的发生很少;而在生殖生长阶段病害发
生严重,导致生产和研究上对此种病害的忽视。
软腐病是一种世界范围内的植物性病害,由于软
腐病菌主要在土壤中传播[1-2],特别是植株有伤口
时,条件适宜时,通过雨水、浇水使得植株发病,若
不及时清理就会侵染健康植株,造成病原蔓延。
通过对该病原菌进行生物学特性及其药敏筛选试
验研究,确定最有效药剂及使用剂量,为病害防治
提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料
病原菌为哈尔滨市农业科学院实验室分离鉴
定的芫荽软腐病病原菌菌株。NA培养基为牛肉
膏3g,蛋白胨10g,氯化钠5g,琼脂15~20g,蒸
馏水1000mL,pH 7.2±0.2。0.100MPa灭菌
20min。NA培养液为牛肉膏3g,蛋白胨10g,
氯化钠5g,蒸馏水1 000mL,pH7.2±0.2。
0.100MPa灭菌20min。LB培养基为胰蛋白胨
10g,酵母粉5g,NaCl 10g,琼脂16~18g,蒸馏
水1 000mL,pH7.2~7.4。0.100 MPa灭菌
20min。LB培养液:胰蛋白胨10g,酵母粉5g,
NaCl 10g,蒸馏水1 000mL,PH7.2~7.4。
0.100MPa灭菌20min[3]。药剂筛选所用农药有
72%农用硫酸链霉素可溶性粉剂(石家庄通泰生
化有限公司)、3%噻霉酮(细刹)可湿性粉剂(陕西
西大华特科技实业有限公司)、53.8%氢氧化
铜(可杀得贰千)水分散粒剂(上海杜邦农化有限
公司)、20%噻菌铜悬浮剂(浙江龙湾化工有限公
司)、33.5%喹啉铜(海正必绿)悬浮剂(浙江海正
化工股份有限公司)、2%春雷毒素+45%王铜(春
雷王铜)(华北制药股份有限公司)
1.2 方法
1.2.1 不同pH 对病原菌生长的影响 将 NA
培养液分装在灭菌带塞试管中,每瓶20mL,分别
配制pH为3、4、5、6、7、8、9、10、11等9种NA培
养液,每瓶接种一环软腐病菌,每处理3次重复,
24~48h后用紫外分光光度计测其菌液的OD620
值,由于吸光度与菌液浓度呈正比,即可得菌液
浓度。
1.2.2 不同温度对病原菌生长的影响 挑取幼
龄菌于NA固体培养基平板上接种单菌落,于4、
16、25、28、37、40、45、50℃下培养,每处理3次重
复,24~48h后观察菌株生长,用游标卡尺十字
交叉法测量菌落直径,最后确定细菌生长最适
温度[4]。
1.2.3 药剂筛选 根据测定抑菌圈直径大小筛
选有效抑菌药剂。LB培养基倒平板,取用无菌
生理盐水稀释在LB培养液中培养36h浓度为
106~108 cfu·mL-1菌液0.2mL于平板上,用三角
26
7期   张立微等:芫荽软腐病病原菌生物学特性与药剂筛选
涂布棒涂抹均匀。在平板中央打直径1.0cm的
小孔,取药液0.2mL滴于小孔中,置于28℃恒温
箱中培养36h,每种待测药剂均稀释5、10、50、
100、500、1 000倍6个梯度,每种试剂每个梯度均
做3个平行样。用游标卡尺按十字交叉法测量抑
菌圈直径,取平均值[5]。以在培养皿中央孔中加
入无菌水作为对照。根据抑菌圈大小可划分为:
直径16~20mm为高度抑菌;11~15mm为中度
抑菌;10mm为轻度抑菌;在6~10mm,说明该
药剂具有抑菌性[5]。
1.2.4 最小抑菌浓度(MIC)测定 采用二倍稀
释方法测定药剂的最小抑菌浓度[6]。将供试菌种
接种LB培养液中,28℃培养36h后,用无菌生理
盐水稀释浓度106~108 cfu·mL-1。取2mL LB
培养液装至试管中,7支为1组。先用生理盐水
将药剂浓度稀释为2%,取适量加入每组的第1
支试管中,摇匀后从第1支试管中取2mL至第2
支试管中,如此稀释每操作1次,试剂就被稀释1
倍,形成7个浓度梯度。不加菌液作为对照。将稀
释后的供试菌接种0.2mL于各试管中。接种菌悬
液,于28℃培养箱内培养36h。取出试管,充分震
荡,并对各试管进行逐个检查,用肉眼并结镜检观
察其混浊度,从而判断有无菌生长。每处理3次重
复,以完全无菌生长的最高稀释度为最低抑菌浓
度。确定是否为无菌生长,可取适量菌悬液倒入
LB平板涂匀培养,观察看是否有菌生长。
2 结果与分析
2.1 不同pH对芫荽软腐病菌生长的影响
由图1可看出,供试菌株在不同pH 下生长
24h后,在pH 为7.0时菌液OD620值为0.183,
48h后OD620值为0.290,均高于其它pH生长条
件的OD620值,为菌体生长最旺盛,由此可知,在
pH中性条件下最适合软腐病菌生长。
2.2 不同温度对芫荽软腐病菌生长的影响
由图2可看出,随着培养温度的升高,芫荽软
腐病菌生长趋势是先增长后降低,其中在37℃下
菌落直径最大,分别是24h后为7.39mm,48h
后为9.92mm,说明此温度为软腐病菌生长最快
温度,在4、45、50℃条件下此菌停止生长。
2.3 药剂筛选结果
由表1可看出,供试的6种药剂中,72%硫酸
链霉素可溶性粉剂在稀释不同倍液时均表现高度
抑菌,抑菌作用强烈;3%噻霉酮可湿性粉剂稀释
5倍~100倍液时表现高度抑菌,抑菌作用强烈,
500~1 000倍时为中度抑菌;53.8%氢氧化铜水分
散粒剂在稀释不同倍液表现不同抑菌作用,当稀释
至500~1 000倍时无明显抑菌作用;20%噻菌铜悬
浮剂稀释倍数大于50倍时无抑菌作用;33.5%喹
啉铜是浮剂和2%春雷毒素+45%王铜可湿性粉
剂均表现无抑菌效果或表现极弱。由此可知,在不
同稀释浓度下72%硫酸链霉素可溶性粉剂抑菌圈
直径都是最大的,表现强烈的抑菌效果,且与稀释
倍数呈反比,可作为此病害的有效杀菌剂。
图1 分离菌在不同pH下的生长情况
Fig.1 Growth of Erwinia caratovora subsp.
caratovora at different pH
图2 分离菌在不同温度下的生长情况
Fig.2 Growth of Erwinia caratovora subsp.
caratovora at different temperatures
2.4 最小抑菌浓度测定结果
由表2可知,72%硫酸链霉素可溶性粉剂的
最小抑菌浓度为0.031%,3%噻霉酮可湿性粉剂
最小抑菌浓度为0.063%,53.8%氢氧化铜水分
散粒剂的最小抑菌浓度为0.25%。20%噻菌铜
悬浮剂最小抑菌浓度是2%。由此可知,72%硫
酸链霉素可溶性粉剂抑菌效果最好,对细菌性软
腐病菌有强烈杀菌作用,其浓度越高抑菌作用越
强,从而防治病害的能力越强。其次为3%噻霉
酮可湿性粉剂。
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     黑 龙 江 农 业 科 学 7期
表1 不同药剂不同稀释倍数抑菌效果
Table 1 Effect of different bactericides and dilution ratios on pathogens
药剂名称
Bactericide
菌落直径/mm Diameter of coenobium
5× 10× 50× 100× 500× 1000×
72%农用硫酸链霉素可溶性粉剂
72%Streptomycin SP
42.55±2.8386a 43.93±1.6562a 38.59±0.9858a 35.11±1.0222a 21.64±0.5981b 18.39±0.6872b
3%噻霉酮可湿性粉剂
3%Benziothiazolinone WP
30.85±2.0112a 25.93±1.8874ab 24.54±2.0006ab 20.83±1.2144b 12.11±0.6323c 10.97±0.8047c
53.8%氢氧化铜水分散粒剂
53.8%Copper hydroxide WDG
19.56±1.0587a 14.67±1.5866b 10.13±1.3201c 7.81±0.6007c 0d 0d
20%噻菌铜悬浮剂
20% Thiodiazole-copper SC
12.79±1.2001a 9.58±0.7996b 0c 0c 0c 0c
33.5%喹啉铜悬浮剂
33.5% Oxine-copper SC
0 0 0 0 0 0
2%春雷毒素+45%王铜可湿性粉剂
2%Spring toxoid+45%Kauriti WP
0 0 0 0 0 0
表2 有效药剂最低抑菌浓度
Table 2 Minimum inhibitory concentration of bactericides to pathogens
药剂名称
Bactericide
抑菌效果 Antimicrobial effect
2.00% 1.00% 0.50% 0.25% 0.13% 0.06% 0.03%
72%农用硫酸链霉素可溶性粉剂72%Streptomycin SP - - - - - - +
3%噻霉酮可湿性粉剂3%Benziothiazolinone WP - - - - - + +
53.8%氢氧化铜水分散粒剂53.8%Copper hydroxide WDG - - - + + + +
20%噻菌铜悬浮剂20% Thiodiazole-copper SC - + + + + + +
  “-”:完全抑菌;“+”:不完全抑菌。
“-”:complete restrain;“+”:incomplete restrain.
3 结论与讨论
芫荽软腐病可使芫荽生长受阻,失去商品价
值,不能完成整个生育期,因而很难采收到种子,
造成绝产和绝种,因而针对此病害进行有效药剂
防治的研究与利用。软腐病菌适宜的生长环境条
件与其致病性的上升相关,从田间芫荽植株发病
情况看,高温条件,土壤pH中性导致芫荽植株发
病加速,这与病菌室内测定生长温度与pH 结果
相吻合。在24℃以上是芫荽软腐病在田间的发
生高峰期。因而针对此病菌,在药剂筛选试验中,
采用抑菌圈法,测得结果为72%农用硫酸链霉素
可溶性粉剂抑菌效果最好,其次为3%噻霉酮可
湿性粉剂。药剂的抑菌效果有时因为生产厂家或
施用地理位置气候因素不同而不同,本试验药剂
筛选为实际应用提供理论参考。目前就软腐病的
防治来说,应用化学杀菌剂还是软腐病防治的主
要方法。但是农药会造成自然环境的污染及土壤
残留[7]。所以,除了使用农药抑制病害发生外,如
何采取更加环保的方法控制病害是重中之重。目
前国际上对生物农药和和基因工程的研究越来越
多,对软腐病进行生物防治的研究既环保又有前
景,如Sang-Tae等人从软腐菌中筛选的Ecc32能
产生一种专门抵抗软腐致病菌的化合物[8]。但若
要将生物防治技术大范围推广尚需一定时间。
本研究对所鉴定菌株通过抑菌圈法进行有效
药剂筛选可知,72%农用硫酸链霉素可溶性粉剂、
3%噻霉酮可湿性粉剂、53.8%氢氧化铜水分散粒
剂、20%噻菌铜悬浮剂均有明显抑菌作用。72%
硫酸链霉素可溶性粉剂的抑菌作用最强,最小抑
菌浓度为0.031%。
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黑龙江农业科学2015(7):65~68
Heilongjiang Agricultural Sciences
新疆北疆地区冬枣贮藏期病原菌分离及初步鉴定
李青云1,刘文玉2,魏长庆1,童军茂1,杨 焱1
(1.石河子大学 食品学院,新疆 石河子832000;2.新疆石河子职业技术学院,新疆 石河子832000)
摘要:为了明确新疆北疆地区采后冬枣贮藏期腐烂的主要病原菌及探寻延长其贮藏保鲜期的方法,以新疆北
疆地区冬枣为供试材料,采用传统纯培养方法分离筛选病原菌,并进行初步鉴定。结果表明:分离得到新疆
北疆地区采后冬枣贮藏期腐烂的主要病原菌3株,观察真菌形态并查询相关分类鉴定手册最终确定主要致病
菌为青霉属、链格孢属和毛霉属。
关键词:冬枣;贮藏期;病原菌;分离;初步鉴定
中图分类号:S436.62 文献标识码:A 文章编号:1002-2767(2015)07-0065-04 DOI:10.11942/j.issn1002-2767.2015.07.0065
  果蔬采后贮藏和运输过程中因为病害给世界
果蔬业带来了巨大的损失。据报道,发达国家由
此导致的损失在10%~25%,而在冷藏设施尚不
完备的发展中国家则高达40%~50%[1]。果蔬
采后发生品质变差的主要原因是病原微生物的入
收稿日期:2014-12-12
基金项目:第八师师市科技型中小企业专项资助项目(2013
QY15)
第一作者简介:李青云(1989-),男,新疆维吾尔自治区石河
子市人,在读硕士,从事果蔬贮藏及保鲜研究。E-mail:
cloud126@126.com。
通讯作者:魏长庆(1981-),男,在读博士,副教授,从事食品
科学与工程相关的教学和科研工作。
侵。新疆素有“瓜果之乡”的美誉,2011年,新疆
地区红枣产量为105.8万t,全国排名第二,仅次
于河北,表现出了巨大的发展潜力。冬枣营养丰
富,富含维生素C及多种氨基酸,冬枣采收和贮
运中的腐烂变质主要由于其果皮很薄易受到损伤
和微生物侵染导致,这对生产者的利益造成了直
接影响,也阻碍了冬枣商品化的进一步发展,通过
确定新疆北疆地区的冬枣采后贮藏期主要致腐病
原菌,可以对后续的采用生物防治技术或其它保
鲜方法来控制冬枣贮藏期的腐坏,延长冬枣的贮
藏保鲜期提供理论参考依据。
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Biology Characters and Bactericide Screening
of Pathogen of Coriander Soft Rot
ZHANG Li-wei,ZHANG Jing-tao,ZHANG Li-zhuo,LI Xiao-mei,DAI Zhong-ren
(Harbin Academy of Agricultural Sciences,Harbin,Heilongjiang 150029)
Abstract:For effective prevention and control of coriander soft rot,biology characters and bactericide screening
of pathogen of coriander soft rot were studied.The result showed that coriander soft rot could be accelerated
plant disease under 37℃and pH 7.0of soil.According to bactericide screening,72%Streptomycin SP,3%Ben-
ziothiazolinone WP,53.8%Copper hydroxide WDG,20%Thiodiazole-copper SC were effected to coriander soft
rot.Minimum inhibitory concentration of 72%Streptomycin SP was 0.031%;secondly,minimum inhibitory
concentration of 3%Benziothiazolinone WP was 0.06%.
Keywords:Coriandrum sativum L.;Erwinia caratovora subsp.caratovora;biological characteristics;bacteri-
cide screening
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