全 文 ：［收稿日期］ 20111224(007)
［基金项目］ 新疆医科大学研究生创新基金项目(MC2010-3)
［第一作者］ 布海里且木，主管药师，从事医院药学管理研究，
E-mail:bhlqmal@ 126. com
［通讯作者］ * 张浩科，硕士，从事中药新药研究开发，Tel:
0991-4366841，E-mail:zhanghaokee@ 163. com
HPLC测定香青兰中齐墩果酸和熊果酸的含量
布海力且木·阿里，李桂荣，闫波，张浩科*
(新疆医科大学第一附属医院药学部，乌鲁木齐 830054)
［摘要］ 目的:采用反相高效液相色谱法测定香青兰中齐墩果酸和熊果酸的含量。方法:采用 Kromasil C18柱(4. 6 mm ×
250 mm，5 μm) ，流动相甲醇-0. 2%磷酸二氢钠(88∶ 12) ，流速 1. 0 mL·min －1，检测波长 210 nm，柱温 25 ℃。结果:齐墩果酸
与熊果酸线性范围分别为 0. 42 ～ 2. 10 μg (r = 0. 999 4) ，0. 436 ～ 2. 18 μg (r = 0. 999 7) ;平均回收率分别为齐墩果酸
98. 9%，RSD 1. 14%(n = 6) ;熊果酸 98. 1%，RSD 1. 80% (n = 6)。结论:该方法快速、准确、可靠，可用于同时测定香青兰中
齐墩果酸和熊果酸的含量。
［关键词］ 香青兰;齐墩果酸;熊果酸;高效液相色谱法
［中图分类号］ R284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2012)15-0080-03
Determination of Oleanolic Acid and Ursolic Acid Content in
Dracocephalum moldovia by RP-HPLC
Ali·Haibuliqiemu，LI Gui-rong，YAN Bo，ZHANG Hao-ke*
(Dept． of Pharmacy，The First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University，
Urumqi 830054，China)
［Abstract］ Objective:Use the method of HPLC to determine the conten of oleanolic acid and ursolic acid
in Dracocephalum moldovia． Method:The content of oleanolic acid and ursolic acid was detected by HPLC． The
separation was carried out on a Kromasil C18 column (4. 6 mm ×250 mm，5 μm)． The mobile phase was methanol-
0. 2% sodium dihydrogen phosphate (88∶ 12) ;the flow rate was 1. 0 mL·min －1;the detective wavelength was set
at 210 nm． The column temperature was at 25 ℃ ． Result:The linear ranges of oleanolic acid and ursolic acid were
0. 42-2. 10 μg (r = 0. 999 4)and 0. 436-2. 18 μg (r = 0. 999 7) ，respectively． The average recoveries were
98. 9% with RSD of 1. 14% (n = 6)and 98. 1% with RSD of 1. 80% (n = 6) ，respectively． Conclusion:This
method was rapid，accurate and reliable;it could be used to determine the content of oleanolic acid and ursolic
acid in D． moldovia simultaneously．
［Key words］ Dracocephalum moldovia;oleanolic acid;ursolic acid;HPLC
香青兰为唇形科植物香青兰的干燥地上部分，
维吾尔名为巴德兰吉布牙，维吾尔医认为其性质为
二级干热，具有益心护脑、保肝健胃、增强感觉力、补
充保护力、填益智慧力、开通脑中闭塞的作用，常用
于心悸心痛、头晕脑胀、反应迟钝、感觉低下、思维不
敏、胃虚肝弱、机体自然力下降等症［1］。香青兰主
要分布于华北、东北、西北地区，新疆地区中以南疆
和东疆栽培较多，欧洲等地亦有分布［2］。香青兰含
有挥发油、黄酮类、萜类、氨基酸等多种化学成分，现
代药理研究表明，香青兰有改善与调节血液流变性
作用、抗氧化作用，并且对心肌缺血具有保护作
用［3］。本研究采用反相高效液相色谱法测定香青
兰中齐墩果酸与熊果酸含量，为香青兰的临床用药
及进一步开发提供参考。
1 材料
1. 1 仪器 岛津高效液相色谱仪(LC-6AD 高压
·08·
第 18 卷第 15 期
2012 年 8 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 18，No． 15
Aug．，2012
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2012.15.035
泵，SPD-20A型紫外检测器，CBM-20A 色谱工作站，
SIL-20A 自动进样器，CTO-10AS 柱温箱) ，KQ-
200KDE型高功率数控超声清洗器(昆山市超声仪
器有限公司) ，XS105 型电子天平(梅特勒-托利多)。
1. 2 试药 甲醇(色谱纯) ，磷酸二氢钠(分析纯) ，
水为娃哈哈饮用纯净水，齐墩果酸对照品(中国药
品生物制品检定所，批号 110709-200505) ，熊果酸
对照品(中国药品生物制品检定所，批号 110742-
200517) ;香青兰药材经自治区中医院李永和主任
药师鉴定为唇形科植物香青兰 Dracocephalum
moldavical L． 的干燥地上部分。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 Kromasil C18色谱柱(4. 6 mm × 250
mm，5 μm) ，流动相甲醇-0. 2% 磷酸二氢钠 (88 ∶
12) ，检测波长 210 nm，柱温，25 ℃，流速 1. 0 mL·
min －1。上述色谱条件下，齐墩果酸与熊果酸分离
度 ＞ 1. 5，理论塔板数按齐墩果酸计 ＞ 10 000，色谱
图见图 1。
A．对照品;B．供试品;1. 齐墩果酸;2. 熊果酸
图 1 香青兰高效液相色谱
2. 2 对照品溶液的制备 精密称取齐墩果酸对照
品 1. 05 mg、熊果酸对照品 1. 09 mg，用甲醇定容于
10 mL 量瓶中，制成齐墩果酸质量浓度为 0. 105 g·
L －1、熊果酸质量浓度为 0. 109 g·L －1的混合对照品
溶液。
2. 3 供试品溶液的制备 取干燥药材粉末约 2. 00
g，精密称定，置于 100 mL 具塞锥形瓶中，加入 50
mL甲醇，称定质量，浸泡 30 min，超声提取(功率
250 W，频率 50 kHz)50 min，取出放冷，再称定质
量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，0. 45 μm 微孔滤
膜滤过，即得供试品溶液。
2. 4 线性关系考察 精密吸取齐墩果酸和熊果酸
对照品混合溶液 4，8，12，16，20 μL 进样分析，按上
述色谱条件测定峰面积，以对照品的进样量(X，μg)
为横坐标，峰面积积分值(Y)为纵坐标，绘制标准曲
线，得齐墩果酸线性回归方程为 Y = 524 850 X +
37 346(r = 0. 999 4) ;熊果酸线性回归方程为 Y =
503 346 X － 1 329(r = 0. 999 7)。结果表明，齐墩果
酸进样量在 0. 42 ～ 2. 1 μg，熊果酸进样量在0. 436 ～
2. 18 μg，峰面积与进样量呈现良好的线性关系。
2. 5 精密度试验 分别精密吸取齐墩果酸与熊果
酸混合对照品溶液 10 μL，重复进样 6 次，结果齐墩
果酸峰面积的 RSD 1. 33%，熊果酸峰面积的 RSD
为 1. 57%，精密度较好。
2. 6 稳定性试验 取同一香青兰供试品溶液，分别
于 0，2，4，6，8，12，24 h 进样 10 μL 测定，结果齐墩
果酸和熊果酸峰面积的 RSD 分别为 1. 49%，
1. 84%，表明供试品溶液在 24 h内基本稳定。
2. 7 重复性试验 精密称香青兰药材粉末 6 份，按
2. 3 项下方法制成供试液，并在上述色谱条件下进
样 10 μL，测定齐墩果酸与熊果酸的峰面积，计算含
量。结果样品中齐墩果酸与熊果酸含量的 RSD 分
别为 1. 93%，1. 87%，表明方法的重复性较好。
2. 8 加样回收率试验 分别精密称取 6 份已知含
量香青兰药材粉末 1. 00 g，分别置于 100 mL具塞锥
形瓶中，每个具塞锥形瓶中分别准确加入齐墩果酸
和熊果酸混合对照品适量，按 2. 3 供试品溶液的制
备项下方法制成供试液，在上述色谱条件下进样 10
μL测定，结果见表 1。
2. 9 样品含量测定 精密吸取供试品溶液 10 μL
分别注入液相色谱仪，在上述色谱条件下测定，每样
平行测定 3 份，计算样品中齐墩果酸和熊果酸的含
量，结果见表 2。
3 讨论
齐墩果酸与熊果酸极性相近，分离难度较大，常
在中药材中共存。本研究试验了各种流动相及其比
·18·
布海力且木·阿里，等:HPLC测定香青兰中齐墩果酸和熊果酸的含量
表 1 香青兰中 2 种成分加样回收率试验(n = 6)
组分
样品称量
/ g
样品含量
/mg
加入对照品量
/mg
实测总量
/mg
回收率
/%
平均值
/%
RSD
/%
齐墩果酸 1． 00 1． 59 1． 55 3． 13 99． 4 98． 9 1． 14
1． 00 1． 59 1． 55 3． 11 98． 1
1． 00 1． 59 1． 55 3． 10 97． 4
1． 00 1． 59 1． 55 3． 12 98． 7
1． 00 1． 59 1． 55 3． 15 100． 6
1． 00 1． 59 1． 55 3． 13 99． 4
熊果酸 1． 00 1． 16 1． 15 2． 28 97． 4 98． 1 1． 80
1． 00 1． 16 1． 15 2． 29 98． 3
1． 00 1． 16 1． 15 2． 26 95． 7
1． 00 1． 16 1． 15 2． 32 100． 9
1． 00 1． 16 1． 15 2． 30 99． 1
1． 00 1． 16 1． 15 2． 28 97． 4
表 2 香青兰中 2 种成分含量测定(n = 3)
样品来源
齐墩果酸
/mg·g － 1
RSD
/%
熊果酸
/mg·g － 1
RSD
/%
和田 1. 59 1. 87 1. 16 1. 72
阿克苏 1. 55 1. 74 1. 12 1. 59
喀什 1. 82 1. 56 1. 27 1. 55
奇台 1. 92 1. 69 1. 44 1. 83
例，分离效果均不理想，经过多次试验并结合文
献［4-5］最终确定色谱条件为甲醇-0. 2%磷酸二氢钠
(88∶ 12)等度洗脱，流速 1. 0 mL·min －1，检测波长
210 nm，柱温 25 ℃。此条件下二者能基本分离。
本研究比较了实验室常用的超声波提取法、回
流提取法及浸渍提取法提取效果，结果浸渍提取法
不及超声波提取法与回流提取法，但超声波提取法
与回流提取法相差不大，前者提取效率高、定量精
确，故选择超声波提取法提取药材。
本研究使用液相色谱法同时测定香青兰中齐墩
果酸与熊果酸的含量，样品处理快速、简单，重复性
好，回收率高，可用于香青兰药材中齐墩果酸与熊果
酸定量分析与质量控制，为香青兰的进一步研究提
供数据。
［参考文献］
［1］ 国家药典委员会． 中华人民共和国卫生部药品标准
维吾尔药分册［S］． 乌鲁木齐:新疆科技卫生出版
社，1999:73．
［2］ 刘勇民． 维吾尔药志(上) ［M］． 乌鲁木齐:新疆科
技卫生出版社，1999:405．
［3］ 宋睿，金传山，周亚伟． 维药香青兰的研究进展
［J］． 安徽医药，2010，14(3) :344．
［4］ 査孝柱，谢晓梅，吕美红，等． 含齐墩果酸和熊果酸
的 10 种果实类中药 HPLC 分析［J］． 中国实验方剂
学杂志，2010，16(18) :60．
［5］ 彭旖，王秀峰，王志刚，等． 熊果酸与齐墩果酸高效
液相色谱分离条件优化［J］． 广州化学，2006，31
(4) :26.
［责任编辑 顾雪竹］
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第 18 卷第 15 期
2012 年 8 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 18，No． 15
Aug．，2012