免费文献传递   相关文献

RP-HPLC法测定不同产地香青兰药材中迷迭香酸的含量



全 文 :中药与临床 Pharmacy and Clinics of Chinese Materia Medica 2016;7(2) ·23·
香青兰为唇形科植物香青兰Dracocephalum
moldavica L.的干燥地上部分,为我国维吾尔医学及
蒙医常用药材,主要分布于我国华北、东北、西北
部各省,新疆有人工栽培[1]。现代药理研究表明,香
青兰具有降血脂、抗动脉粥样硬化,抗心肌缺血、
免疫抑制等多种药理作用[2]。现已从香青兰中分得黄
酮、三萜、甾体、苯丙素、环烯醚萜及多糖等化学
成分,其中以黄酮类(含量可达1.9%[3])和苯丙素类
成分含量较高[4]。迷迭香酸是一种具有多酚结构的苯
丙素类活性天然产物,现代研究证实其具有抗炎、
抗氧化、抗菌及调节免疫等多种药理活性[5],是香青
兰药材的重要活性成分。因此,本文以迷迭香酸为
指标性成分,采用RP-HPLC建立了香青兰药材中迷
迭香酸的含量测定方法,并对不同产地香青兰药材
中迷迭香酸含量进行了测定,实验结果为香青兰药
材的质量评价奠定一定的基础。
1 仪器与材料
1.1 仪器
安捷伦1100高效液相色谱仪,安捷伦色谱工作
站;KQ3200 超声波清洗器( 昆山超声仪器有限公
司,工作频率40 kHz,超声功率120 W);Kromasil
李凤琼,穆敏婕,张梅
[摘要] 目的:建立香青兰药材中迷迭香酸含量测定方法,比较不同产地香青兰药材中迷迭香酸含量差异。方法:采
用RP-HPLC法进行含量测定,色谱条件:Kromasil C18色谱柱(250 mm × 4.6 mm,5 μm);流动相为甲醇- 0.1%磷酸水溶液
(40∶60); 流速1.0 mL.min-1;柱温35℃;进样量20 μL;检测波长330 nm。结果:迷迭香酸含量在0.0414~0.3726 mg.mL-1
浓度范围内与峰面积线性关系良好(r=0.9999),平均回收率为98.25%,RSD=0.53%(n=6);不同产地香青兰药材中迷
迭香酸含量在0.425%~1.01%之间,差异较大。结论:本文建立了一种快速、准确、经济的测量香青兰药材中迷迭香酸含
量的方法,为香青兰药材的质量控制奠定了基础。
[关键词] 香青兰;迷迭香酸;RP-HPLC;含量测定
[中图分类号] R 284.1 [文献标识码] A [文章编号] 1674-926X(2016)02-008-02
Determination of the contents of rosmarinic acid in Qinglanxiang from different origins by RP-HPLC/LI Feng-
qiong, MU Min-jie, ZHANG Mei//( School of Pharmacy, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine; Key Laboratory
of Standardization for Chinese Herbal Medicine, Ministry of Education; National Key Laboratory Breeding Base of Systematic
Research, Development and Utilization of Chinese Medicine Resources, Chengdu 611137, Sichuan)
[Abstract] Objective: To establish a method for determination of rosmarinic acid content, and to compare the differences of
rosmarinic acid content in Qinglanxiang from different producing areas. Method: The quantitative determination of rosmarinic
acid was performed by RP-HPLC with a Kromasil C18 chromatographic column (250 mm × 4.6 mm,5 μm) . Mobile phase was
composed of methanol - 0.1% phosphoric acid solution (40: 60) at the fl ow rate of 1.0 mL.min-1. The column temperature was 35
℃ and the UV detection wavelength was set at 330 nm. The injection volume was 20 μL. Result: The linear relationship was good
in the range of 0.0414~0.3726 mg.mL-1(r=0.9999). And the average recovery rate was 98.25% (n=6) with the RSD of 0.53%. The
contents of rosmarinic acid in Qinglanxiang from different producing areas were in the range of 0.425% to1.01% with signifi cant
difference. Conclusion: A rapid, accurate and economical method was established to determine rosmarinic acid in Qinglanxiang. It
lays a foundation for evaluating the quality of Qinglanxiang.
[Keyword] Qinglanxiang; rosmarinic acid; RP- HPLC; content determination.
RP-HPLC法测定不同产地香青兰药材中迷迭香酸的含量
·品种品质·
[基金项目] 四川省卫生厅基金项目(120077)
[作者单位] 成都中医药大学药学院 中药材标准化教育部重
点实验室中药资源系统研究与开发利用省部共建
国家重点实验室培育基地,四川 成都 611137
[作者简介] 李凤琼(1990-),女,硕士研究生,药物分析
Tel:028-87393316 Email: lifengqiong2014@163.com
[通讯作者] 张梅(1963-),博士,教授,博士生导师,从事中
药及其复方物质基础及质量标准化研究工作
Tel:028-61800231 Email: zhangmei63@126.com
[收稿日期] 2015-09-18
中药与临床 Pharmacy and Clinics of Chinese Materia Medica 2016;7(2)·24·
C18色谱柱(250 mm × 4.6 mm,5μm) ;Mettler
AE240(1/10)万分之一电子分析天平(瑞士梅特勒-托
利多公司)。
1.2试剂
甲醇(美国Fisher 公司)为色谱纯,磷酸为优级
纯,水为超纯水,其余试剂均为分析纯。
1.3药材
香青兰药材购自不同产地, 经四川大学生物治
疗国家重点实验室何俊博士鉴定为唇形科植物香青
兰(Dracocephalum moldavica L.) 的干燥地上部分;迷
迭香酸对照品 (批号:111871-201404,中国食品药品
检定研究院)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,
5 μm);流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液(40∶60);流
速1.0 mL.min-1;柱温35 ℃;进样量20 μL;检测波
长330 nm。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取迷迭香酸对照品10.35 mg,甲醇溶解,
定容于25 mL容量瓶中,备用。
2.3 供试品溶液的制备
精密称取干燥至恒重的香青兰药材粉末0.5 g,
置于50 mL具塞锥形瓶中,加入甲醇30mL,浸泡30
min后,超声提取30 min(150W/60KHz),过滤,
重复两次,合并滤液,减压蒸馏挥干溶剂,残渣用
甲醇溶解并定容至25 mL,经0.45 μm 微孔滤膜滤
过,即得供试品溶液。
在上述色谱条件下,取对照品溶液及供试品溶液
各20 μL进样测定,香青兰药材中迷迭香酸与其他成分
能达到很好的分离,分离度大于1.5,色谱图见图1。
2.4 方法学考察
2.4.1 标准曲线的制备 精密量取对照品溶液1、
2、4、6、8、9 mL,置于10 mL量瓶中,甲醇稀
释至刻度。分别精密量取各溶液20 μL,按“2.1”
项下色谱条件进样测定。以标准溶液浓度为横坐
标,峰面积为纵坐标进行线性回归,得回归方程为
A=1.36×107C-4.99×104(r=0.9999),结果表明,迷
迭香酸在0.0414-0.3726 mg.mL-1浓度范围内与峰面积
具有良好的线性关系。
2.4.2精密度与稳定性考察 精密量取迷迭香酸对照
品溶液20 μL,连续进样测定6次,计算峰面积的相
对标准偏差RSD,结果显示RSD=1.67%,精密度
良好。取供试品溶液分别在0、1、2、4、8、12、
16、24小时进样测试并计算峰面积的相对标准偏
差RSD,结果表明供试品溶液在24小时内稳定性良
好,其RSD=2.35%。

图1 迷迭香酸对照品(a)和样品(b)的HPLC图谱
2.4.3 重复性试验 取同一批次的药材粉末,按照
“2.3” 项下的方法制备样品溶液6份,按照“2.1”项下
的色谱条件测定,计算峰面积的RSD ,结果表明该
法重复性良好,RSD=2.14%。
2.4.4 加样回收试验 精密称取香青兰药材粉末约
0.25 g,共6份,精密称取迷迭香酸对照品100.26
mg,甲醇溶解定容至50 mL,分别精密量取5 mL加
入上述粉末中,按照“2.3”项下的方法制备样品溶
液,并按照“2.1”项下色谱条件进样测定,计算加
样回收率。结果显示加样回收率在97.50~98.83%之
间,表明本法具有较好的准确度。结果见表1。
表1 加样回收试验
序号 样品重(g)
迷迭香
酸含量
(mg)
加入量
(mg)
实测
含量
(mg)
加样回
收率
(%)
平均值
(%)
RSD
(%)
1 0.2871 1.221 1.20 2.395 97.83
2 0.2890 1.231 1.20 2.416 98.75
3 0.2732 1.161 1.20 2.339 98.17
98.25 0.53
4 0.2792 1.189 1.20 2.359 97.50
5 0.2861 1.216 1.20 2.397 98.42
6 0.2810 1.196 1.20 2.382 98.83
2.5 样品测定
取不同产地的香青兰药材粉末按照“2.3”项下方
法制备样品溶液,每批6个平行样品,精密吸取20
μL按上述色谱条件进样测定,结果见表2。
(下转第27页)
中药与临床 Pharmacy and Clinics of Chinese Materia Medica 2016;7(2) ·27·
于0.020%。测定结果见表1。
3 结果与讨论
文献报道不同产地狗脊中原儿茶酸含量在
0.0328%~0.004%之间,相差约8倍[3],而炮制如砂
炒狗脊、酒蒸狗脊、蒸狗脊的原儿茶酸含量均大于
炮制前,其中以砂炒狗脊增加得最多,为炮制前的4
倍[4];也有报道炮制前后,狗脊片、烫狗脊片、蒸狗
脊片中原儿茶酸含量均值分别为0.028%、0.040%、
0.051%,蒸、烫炮制可提高原儿茶酸的含量[5]。可
见,狗脊经加热炮制,原儿茶酸含量增加,这可能
是加热过程由其苷转化为苷元所至[4],也可能是大
分子鞣质降解所至[6]。这可能也是《中国药典》2010
年版仅对烫狗脊制订了含量测定的原儿茶酸限度,
但对狗脊药材和饮片狗脊(厚片)并未制订含量测
定项的原因。在《中国药典》中没有收录盐狗脊的
质量标准,且在《广西壮族自治区中药饮片炮制规
范》2007年版中盐狗脊仅收录于熟狗脊项下,因此
我们对盐狗脊进行了系统的研究,对盐狗脊的临床
应用及质量控制具有重要意义。
感谢四川省食品药品检验所、四川省中药饮片
炮制规范制定委员会为本次研究提供经费支持。
[参考文献]
[1] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典:2010 年版一部[S].
北京: 中国医药科技出版社,2010: 160.
[2] 广西壮族自治区食品药品监督管理局. 广西壮族自治区中
药饮片炮制规范. 广西科学技术出版社,2007版.
[3] 罗瑞,何智建.不同产地狗脊中原儿茶酸和原儿茶醛的含量
测定[J].临床医学工程, 2011,18(7): 1100-1101.
[4] 谢艳,罗瑞,何智建.狗脊炮制工艺的研究[J].临床医学工程,
2011,18(7):1096-1097.
[5] 陈征,李文莉, 童珂.狗脊饮片不同炮制品中原儿茶酸的含量
测定[J].湖南中医药大学学报, 2011, 31(9): 38-40.
[6] 贾天柱,刁秀兰,李军,等.狗脊不同炮制品种鞣质的含量测定
[J].中成药, 2002, 24(1): 32-34.
(责任编辑:傅舒)
表2 不同产地香青兰药材中迷迭香酸含量(n=6)
序号 产地 迷迭酸含量(%) RSD(%)
1 吉林长岭县 0.425 1.76
2 吉林乾安县 0.512 2.25
3 吉林农安县 0.604 2.11
3 内蒙古赤峰市郊 0.732 1.88
4 内蒙古宁城县 0.588 2.29
5 内蒙古建平县 0.679 1.99
6 新疆墨玉县 0.987 2.01
7 新疆洛浦县 1.010 1.81
8 新疆于田县 0.905 2.18
9 甘肃金塔县 0.736 1.69
10 甘肃永靖县 0.799 2.42
3 讨论
本文采用RP-HPLC法建立了香青兰药材中迷迭
香酸含量测定方法,实验结果显示本法精密度、稳
定性、重复性及加样回收率等方法学参数均较为理
想,提供了一种快速、准确、经济的测定香青兰药
材中迷迭香酸含量的方法。
迷迭香酸由于结构中含有多酚羟基结构,虽然
在甲醇溶液中较为稳定,但操作中应尽量避光,样
品溶液应保存于棕色瓶中,避免变质。本文利用该
法测定了来源于吉林、内蒙古、新疆和甘肃四个省
区的10批药材,结果显示所有批次的药材中均能检
测出迷迭香酸,但含量差异较为明显,其中吉林长
岭县的含量最低,仅为0.425%;新疆洛浦县最高,
含量达1.01%,差异较大,究其原因可能与药材生长
地的纬度、海拔、日照等因素相关,提示若以迷迭
香酸作为指标成分制定香青兰药材质量标准含量限
度范围时,应充分考虑到样本的广泛性。
[参考文献]
[1] 中国植物志.第六十五卷. 第二分册[M]. 北京:科学出版
社,1983: 361.
[2] 杨丽娜,邢建国,何承辉,等. 维药香青兰的化学成分与药理
作用评价[J]. 世界临床药物,2013,34(4): 226.
[3] 尤努斯江·吐拉洪,吐尔洪·买买提. 超声提取香青兰中黄酮
及其抗氧化活性[J]. 食品科学,2012,13(24):72.
[4] Dastmalchi K,Damien D, Laakso I , et al . Chemical
composition and antioxidative activity of moldavian
balm(Dracocephalum moldavica L) extracts[J]. LWT-Food Sci
Technol, 2007, 40(9): 1655.
[5] 陈立亚.迷迭香酸的研究概况[J].中国药事,2007,21(11):923.
(责任编辑:李芸霞)
(上接第24页)