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关苍术、白术及苍术血中移行成分的比较



全 文 :关苍术、白术及苍术血中移行成分的比较
李纯璞1, 张善玉1, 金英今2*
(1. 延边大学药学院,吉林 延吉 133000;2. 延边大学分析测试中心,吉林 延吉 133000)
收稿日期:2015-06-13
作者简介:李纯璞 (1990—) ,女,硕士,从事中药质量标准研究。E-mail:chunpuliangyuan@ 163. com
* 通信作者:金英今 (1965—) ,女 (朝鲜族) ,高级工程师,从事化学制药研究。Tel: (0433)2732207,E-mail:jinyingjin650118@
126. com
摘要:目的 比较关苍术、白术及苍术的血中移行成分。方法 HPLC法比较空白血清、含药血清和甲醇提取液的色
谱峰,确定灌服关苍术、白术、苍术提取物后大鼠血中移行成分。结果 以 240 nm 为紫外检测波长时,关苍术和白
术药材中有 3 个相似成分进入血液;以 340 nm为紫外检测波长时,有 1 个相似成分。结论 关苍术的血中移行成分
和白术比较接近,而与苍术有较大差异。
关键词:关苍术;白术;苍术;血中移行成分;HPLC
中图分类号:R284. 1 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2016)02-0383-03
doi:10. 3969 / j. issn. 1001-1528. 2016. 02. 032
Comparison of the constituents absorbed into blood in Atractylodes japonica,At-
ractylodis macrocephalae and Atractylodes Lancea
LI Chun-pu1, ZHANG Shan-yu1, JIN Ying-jin2*
(1. College of Pharmacy,Yanbian University,Yanji 133000,China;2. Center of Forecasting and Analysis,Yanbian University,Yanji 133000,China)
ABSTRACT:AIM To compare the constituents absorbed into the blood in Atractylodes japonica,Atractylodis
macrocephalae and Atractylodes Lancea. METHODS HPLC was applied to comparing the difference in chromato-
gram peaks of blank serum,medicated serum and methanol extract. Then the constituents absorbed into blood in
rats were identified after intragastric administration with Atractylodes japonica,Atractylodis macrocephalae and Atrac-
tylodes Lancea extracts. RESULTS There were three similar constituents absorbed into the blood in Atractylodes
japonica and Atractylodis macrocephalae at 240 nm,while there was one at 340 nm. CONCLUSION The constit-
uents absorbed into the blood in Atractylodes japonica are relatively similar to those in Atractylodis macrocephalae,
but obviously different from those in Atractylodes Lancea.
KEY WORDS:Atractylodes japonica;Atractylodis macrocephalae;Atractylodes Lancea;constituents absorbed into
blood;HPLC
中药化学成分由于理化性质各异,造成其吸收
部位或速率不同,各成分以原型或代谢物进入体内
的方式也不一致,而且给药后血清成分并非固定不
变,随时间可能发生变化,因此有必要建立血清药
物化学动态图谱,用于反映中药化学成分群在体内
的动态变化规律及其与药物原型成分之间的相关
性。从某种意义上来说,中药血清动态图谱的研究
是未来从中药中寻找活性物质的主要途径之一[1]。
关苍术、白术和苍术均为菊科苍术属植物,其
中苍术和白术为临床常用中药,收载于 《中国药
典》[2],而关苍术因其挥发性成分含有量低而在我
国被视作苍术和白术的伪品,但日本和韩国却将其
作为白术用于临床,另外朝鲜族民间也经常把关苍
术分为块根和节状根,分别作为白术和苍术使
用[3-4]。无论中药中含有多少种成分,只有进入血
液者才有可能成为有效成分 (外用药及直接作用
于胃肠道的药物除外)。通过分析口服给药后血中
移行成分,确定中药及复方的体内直接作用物质,
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将成为快速、准确地确定中药药效物质基础的有效
途径[5-7],其常用研究方法为在建立中药色谱指纹
图谱的基础上,采用血清药物化学方法,通过对比
药材各提取部位、给药 (含药血清)及未给药供
试动物血清 (空白血清)的色谱指纹图谱,筛选
中药的活性成分及其作用机理[8-10]。本实验拟采用
中药血清药物化学的方法,对关苍术、白术和苍术
等提取物进行初步研究,比较其含药血清中的移行
成分峰,探索这 3 味中药是否具有相同的药效物质
基础,为朝鲜族民族药材—关苍术的药效物质基础
研究及其临床应用奠定基础。
1 仪器与试药
1. 1 药材 关苍术药材于 2010 年采自吉林省汪清
县,经延边大学药学院生药学教研室吕惠子副教授
鉴定为菊科植物关苍术 Atractylodes japonica Koidz.
ex Kitam.的块根;白术和苍术药材购自延吉药店,
经吕惠子副教授分别鉴定为菊科植物白术 Atrac-
tylodes macrocephala Koidz. 和苍术 Atractylodes Lan-
cea (Thunb.)DC.的干燥根茎。将三者用高速万能
粉碎机粉碎,置于阴凉干燥处备用。
1. 2 仪器与试剂 LC-10ATVP 高效液相色谱仪
(日本岛津公司) ;KQ5200DE 数控超声清洗器
(昆山市超声仪器有限公司) ;XYJ80-2 电动离心机
(金坛市恒丰仪器厂) ;高速万能粉碎机 (天津市
泰斯特仪器有限公司)。乙腈为色谱纯;水为去离
子水;其他试剂为分析纯。
1. 3 实验动物 成年 SD 大鼠均为雄性,体质量
(200 ± 10)g,由延边大学实验动物中心提供,许
可证号 SCXK (吉)2011-0007。先适应性饲养几
天,每日更换水和饲料,并保证良好的卫生环境。
2 实验方法
2. 1 灌胃液的制备 精密称取粉碎后的关苍术、
白术和苍术粉末适量,分别加甲醇回流提取,提取
液减压浓缩,残渣加适量蒸馏水溶解,制成混悬液
(1. 0 g /mL) ,即得。
2. 2 血清供试液的制备 取 SD 大鼠 8 只,随机
分为空白对照组、关苍术、白术和苍术给药组,药
物组给予相应的灌胃液,2 mL /只,2 次 /d;空白
组给予同体积去离子水,连续给药 3 d。于最后一
次给药 1 h 后,摘除眼球取血,3 000 r /min 离心
10 min,取适量置于离心管中,按血清-甲醇
(1 ∶ 4)加入甲醇,摇匀,离心,取上清液,蒸干
后少量甲醇溶解,0. 45 μm微孔滤膜滤过,即得。
2. 3 色谱条件 BondapakTM C18分析柱 (5 μm,
4. 6 mm × 250 mm) ;柱温 25 ℃;体积流量
1. 0 mL /min;进样量 20 μL;检测波长 240、340
nm (3 种药材的提取液及含药血清通过紫外分光
光度仪,在 200 ~ 500 nm 范围内扫描,结果分别
在 240 nm和 340 nm 处出现最大吸收)。流动相为
水 (A)-乙腈 (B) ,梯度洗脱 (240 nm 时,0 ~
8 min,40% ~ 50% B;8 ~ 28 min,50% ~ 75% B;
28 ~ 40 min,75% ~ 90% B;40 ~ 60 min,90% ~
100%B;60 ~ 80 min,100% ~ 40% B。340 nm 时,
0 ~ 10 min,40% ~ 50% B;10 ~ 15 min,50% B;
15 ~ 40 min,50% ~ 65% B;40 ~ 50 min,65% ~
95%B;50 ~ 60 min,95% ~ 100% B) ,将 240 和
340 nm检测波长分别简称为色谱条件Ⅰ和Ⅱ。
3 实验结果
3. 1 按照色谱条件Ⅰ,分别将药材、空白血清、
含药血清供试液进行 HPLC分析,得到相应的色谱
图,见图 1。
a. 关苍术含药血清 b. 关苍术药材 c. 白术含药血清 d. 白
术药材 e. 苍术含药血清 f. 苍术药材 n. 空白血清
a. A. japonica medicated serum b. A. japonica sample c. A. mac-
rocephalae medicated serum d. A. macrocephalae sample e. A. lan-
cea medicated serum f. A. lancea sample n. blank serum
图 1 色谱条件Ⅰ下的 HPLC色谱图
Fig. 1 HPLC chromatograms (Ⅰ)
与空白血清色谱图比较,关苍术含药血清色谱
图中发现 8 个新的移行成分峰. 其中,1、3、6、7
号 4 个峰在关苍术药材的色谱图中有相对保留时间
接近的对应峰,即被吸收入血的关苍术原型成分,
而 2、4、5 及 8 号 4 个峰为新产生的代谢产物;白
术含药血清色谱图中出现 3 个移行成分峰,其中 4
号峰为白术原型成分,1、5 号峰为代谢产物;苍
术含药血清色谱图中出现 5 个移行成分峰,其中
5、6 号峰为苍术原型成分,2、3 及 4 号峰为代谢
产物。
比较关苍术、白术和苍术含药血清的色谱图发
现,白术和关苍术有 3 对相对保留时间接近的峰,
即关苍术的 3 号峰和白术的 4 号峰、关苍术的 7 号
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峰和白术的 5 号峰、关苍术的 9 号峰和白术的 6 号
峰,均是药材色谱图中有对应峰的峰。
3. 2 按照色谱条件Ⅱ,分别将药材、空白血清、
含药血清供试液进行 HPLC分析,得到相应的色谱
图,见图 2。
a. 关苍术含药血清 b. 关苍术药材 c. 白术含药血清 d. 白
术药材 e. 苍术含药血清 f. 苍术药材 n. 空白血清
a. A. japonica medicated serum b. A. japonica sample c. A. mac-
rocephalae medicated serum d. A. macrocephalae sample e. A. lan-
cea medicated serum f. A. lancea sample n. blank serum
图 2 色谱条件Ⅱ下的 HPLC色谱图
Fig. 1 HPLC chromatograms (Ⅱ)
与空白血清色谱图比较,关苍术含药血清色谱
图中发现两个新的移行成分峰,均在关苍术药材的
色谱图中有相对保留时间接近的对应峰,即被吸收
入血的关苍术原型成分;白术含药血清色谱图中出
现 3 个移行成分峰,其中 3 号峰为白术原型成分,
1、2 号峰为代谢产物;苍术含药血清色谱图中出
现 5 个移行成分峰,其中 4、5 号峰为苍术原型成
分,1、2 及 3 号峰为代谢产物。比较关苍术、白
术和苍术含药血清色谱图发现,三者各有相对保留
时间接近的峰 (关苍术 1 号、白术 2 号和苍术 3 号
峰) ,关苍术和白术含药血清色谱图中有 1 对相对
保留时间相近的峰 (关苍术的 2 号峰和白术的 3
号峰)。
4 讨论
众所周知,中药的成分复杂,但只有能够进入
血液者才是真正的有效成分,在关苍术、白术和苍
术中究竟有哪些成分进入了血液?是不是有相同的
成分?这是血清药物化学所要解决的问题。从 3 种
药材的提取、血清样品的收集处理以及液相色谱分
析条件的设定等相关研究均是在同一条件下进行,
所得色谱图中相对保留时间接近的峰有可能是相同
或相似的化学成分。实验结果表明,当 240 nm 为
检测波长时,关苍术和白术药材中有 3 个相似成分
进入血液;340 nm 为检测波长时,两者有 1 个相
似的成分。但是,苍术在 240 nm和 340 nm波长下
均没有相似的成分进入血液,提示关苍术和白术的
血中移行成分比较接近,与苍术有较大差异。
中药血清药物化学研究的最终目的,是通过弄
清血清中药物成分的响应以及代谢转化成分的分
析,试图找到中药的药效物质基础。本实验初步对
关苍术、白术和苍术 3 种药材进行了血清药物化学
研究,将为深入开展三者的有效物质基础及其深层
次的应用药物研发奠定了一定的基础。
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