全 文 ：痛作用可达到 60.49%。结果见表 3。
表 3 　延龄草提取物对小鼠扭体法致痛实验的影响( x±s)
组别 剂量C/g· kg-1
第一次
扭体时间t/s
扭体
次数 /次
抑制率
(%)
模型 - 243.6±1.8 20.5±4.4 -
阿斯匹林 4.00 329.7±12.4＊＊ 15.4±2.2＊＊ 24.88
乙醇提取物高剂量 1.024 341.5±2.1＊＊ 10.7±2.8＊＊ 47.80
乙醇提取物低剂量 0.256 288.6±1.6＊＊ 12.3±1＊＊ 40.00
正丁醇萃取物 0.164 314.0±8.5＊＊ 8.1±2.0＊＊ 60.49
醋酸乙酯萃取物 0.111 248.4±2.4 14.6±2.8＊＊ 28.78
　　与模型组比较 , ＊P<0.05, ＊＊P<0.01;n=8
3.3　延龄草提取物的凝血作用 延龄草乙醇提物 、正丁醇萃取物
和醋酸乙酯萃取物均有明显的促凝血作用 ,其中醋酸乙酯萃取物
的效果最为明显。结果见表 4。
表 4　延龄草提取物对小鼠凝血时间的影响( x±s)
组别 剂量 C 玻片法 t/min 毛细管法 t/min
模型 - 126.0±8.7 174.5±8.0
三七片 1.5片· kg-1 107.7±16.1＊ 132.8±7.6＊＊
乙醇提取物高剂量 1.024/g· kg-1 81.5±4.9＊＊ 139.6±10.2＊＊
乙醇提取物低剂量 0.256/g· kg-1 85.9±7.5＊＊ 154.6±4.9＊＊
正丁醇萃取物 0.164/g· kg-1 79.6±4.8＊＊ 165.6±10.0
醋酸乙酯萃取物 0.111/g· kg-1 73.3±7.6＊＊ 152.3±7.0＊
　　与模型组比较 , ＊P<0.05, ＊＊P<0.01;n=8
4　讨论
延龄草作为神农架林区的珍贵药材 , 在民间享有极高的声
誉。尽管延龄草民间应用疗效确切 ,国内外学者对其药理活性和
化学成分也进行了初步研究 ,但是目前我们仍然很难依据现有研
究资料对其进行合理开发和利用。
以上研究表明 ,延龄草乙醇提取物体 、醋酸乙酯萃取物和正
丁醇萃取物具有良好的抗炎 、镇痛和促凝血作用 , 其中正丁醇萃
取物的作用更显著 ,可能为其药理活性的有效部位 , 但是其有效
成分及其构效关系还有待进一步深入研究。
参考文献:
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收稿日期:2007-04-29;　修订日期:2007-08-11
作者简介:田树革(1968-),男(汉族),山东梁山人 ,现任新疆医科大学中
医学院副教授 ,学士学位 ,主要从事中药化学和中药制剂分析教学及科研
工作.
大孔吸附树脂 -比色法测定维药香青兰中总三萜酸成分
田树革1 , 王良玉 2 , 刘宏炳 1 , 燕雪花1
(1.新疆医科大学中医学院 ,新疆 乌鲁木齐　830054;2.重庆市璧山县人民医院 ,重庆　402760)
摘要:目的 测定香青兰全草中总三萜酸成分含量。方法 以齐墩果酸为指标 , 采用香草醛 -冰醋酸 及高氯酸显色后用
分光光度法测其含量。结果 齐墩果酸的线性范围是 8.48 ～ 42.4 μg· ml-1 , 测得香青兰中总三萜酸含量约为 14.9 mg/
g, RSD为 1.23%。结论 用大孔吸附树脂对香青兰除杂后富集利用显色法测定总三萜酸是可行的 , 该方法具有简便 、快
速 、准确 、重复性好等优点。
关键词:香青兰;　三萜酸;　大孔吸附树脂;　比色法;　齐墩果酸
中图分类号:R284.1　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)05-1180-02
DeterminationoftheContentoftheTritepenoidicAcidinDracocephalummoldavicaL.by
MacroreticularResin-ColorimetricMethod
TIANShu-ge1 , WANGLiang-yu2 ,LIUHong-bing1 ,YANXue-hua1
(1.ColegeofTraditionalChineseMedicine, XinjiangMedicalUniversity, Urumuqi830054 China;2.Peoples
HospitalofChongqingBishanCountyPeoplesHospital, Chongqing402760, China)
Abstract:ObjectiveTodeterminethecontentoftheTritepenoidicAcidinDracocephalummoldavicaL.MethodsWitholean-olicacidasthestandard, 5% Vanillin-Aceticacidandperchloricasthedeveloper, colorimetricmethodwasapplied.ResultsA
goodlinearitywasfoundintheconcentrationrangeof8.48 ～ 42.4μg· ml-1 foroleanolicacid, theaveragerecoverywas99.1%
withRSD1.23%.TheaveragecontentofDracocephalummoldavicaL.was14.9 mg· g-1.ConclusionMacroreticularresin-
Colorimetricmethodissuitableforthedeterminationoftota1 tritepenoidicacidfromDracocephalummoldavicaL.Thismethodis
simple, theresultisstable, andhasgoodrepeatability.
Keywords:Dracocephalum moldavicaL;　 TritepenoidicAcid;　 Macroreticularresin;　 Colorimetricmethod;　
Oleanolicacid
　　香青兰 DracocephalummoldavicaL.为唇形科青兰属植物 ,分 布于华北 、东北 、西北等省区 ,新疆以南疆和东疆栽培较多。其药
用全草为干燥地上部分 , 有泻火 、清热 、止痛 、止血等功效。在维
吾尔医和民间常用于治疗冠心病及高血压病 、寒性神经性头痛 、
寒性感冒 、气管炎等疾病 [ 1 , 2] 。近年来经药物成分分析 , 香青兰
主要含有挥发油 [ 3] 、氨基酸 [ 4] 、微量元素 [ 5] 、萜类 、黄酮类 、多糖
等 [ 6] , 其中含有三萜类化合物齐墩果酸 [ 7] 、熊果酸等 [ 8] 。 A.
·1180·
时珍国医国药 2008年第 19卷第 5期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.5　
Kakasy等 [ 9]利用 HPLC与 GC-MS分析了香青兰中非挥发性成
分 , V.Povilaitytoee等 [ 10]研究了香青兰的抗氧化活性 , 洪秀芳
等 [ 11]做了香青兰治疗冠心病 、心绞痛的疗效分析研究 , 鉴于香青
兰临床疗效显著 , 有进一步研究的价值 , 对其总三萜酸成分进行
了含量测定研究。现报道如下 。
1　材料
1.1　仪器 S54 UV-VisSpectraphotometer54 , S54PC紫外可见
分光光度计数据处理软件包(上海棱光技术有限公司), RE-52
旋转式蒸发器(上海安亭电子仪器厂), YOKO-SY紫外线分析
摄影仪(武汉药科新技术开发公司), BS110S电子天平(sartorius
德国产), KQ-400DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有
限公司), YOKO-BD薄层电动点样仪(武汉药科新技术开发公
司),大孔吸附树脂(HPD-100型沧州宝恩化工有限公司)。
1.2　药材 香青兰(购于新疆乌鲁木齐 , 自治区维吾尔医院)药
材经新疆医科大学中医学院主任药师李永和鉴定。
1.3　试剂 齐墩果酸标准品(中国药品生物制品检定所 0709 -
9803), 所用其他试剂均为分析纯。
2　方法与结果
2.1　标准品溶液的制备 精密称取齐墩果酸标准品 10.6 mg,用
无水乙醇定容于 25ml容量瓶中 , 即得 0.424 mg/ml的齐墩果酸
标准品溶液。
2.2 　供试品溶液的制备
2.2.1　回流提取 称取香青兰全草 5.0 g, 用甲醇回流提取 6 h
至无色 , 蒸干后再用甲醇溶解并定容于 50 ml容量瓶中。
2.2.2　富集总三萜酸 取 3 ml定容后的甲醇溶液至大孔吸附树
脂上 , 分别用 40 ml的水 , 30%乙醇 , 50%乙醇 , 75%乙醇 、无水乙
醇重复洗脱两次 , 定量收集 , 每份 40 ml, 按齐墩果酸的硅胶薄层
层析鉴别方法进行定性检查 , 待无水乙醇收集液呈阴性后 , 方终
止收集 , 共有 8份。
2.3 　显色反应 分别取 4 ml75%, 无水乙醇收集液在水浴中蒸
干 , 加入 0.5 ml5%香草醛冰醋酸和 0.8 ml高氯酸 , 在 60℃的水
浴中加热 10min,取出置冰水中冷却 2 ～ 3 min, 加冰醋酸定容至
10 ml,摇匀后在 560 nm处测定吸收值。
2.4 　波长的选择 齐墩果酸与香草醛 -冰醋酸及高氯酸显色
后 , 可在 560 nm处有最大吸收且空白对照无干扰。
2.5　标准曲线的绘制 精密吸取齐墩果酸对照品溶液 0.2, 0.4,
0.6, 0.8, 1.0 ml按显色反应的步骤在 560 nm处测定吸收值 ,以
吸收度为横坐标 , 齐墩果酸为纵坐标作标准曲线 ,回归方程为:Y
=68.236X+3.761, r=0.996 8。
2.6　样品含量测定 从定容后的 50ml香青兰甲醇溶液中吸取 3
ml的甲醇液上样于大孔吸附树脂 , 后按供试品溶液的制备和显
色反应的步骤进行测定 ,水平重复 3次。结果见表 1。
表 1　香青兰中总三萜酸含量测定
实验
号
收集
洗脱液号
吸光度
A
浓度
C/mg· ml-1
3 ml样液浓度
C/mg· ml-1
每克生药
含量(%)
平均值
(%)
1 4号 0.05 0.0071
5 ～ 7号 0.13 0.012 6 1.493 14.93
2 4号 0.05 0.006 9
5号 0.24 0.019 9
6号 0.13 0.012 4 1.480 14.80
7号 0.02 0.004 9 14.96
3 4号 0.06 0.007 5
5号 0.33 0.026 2
6号 0.08 0.009 1 1.516 15.16
7号 0.02 0.005 1
2.7　精密度考察 取供试品溶液 ,按含量测定项下测定 , RSD为
1.23%。
2.8 　稳定性考察 取供试品溶液 , 按含量测定项下以时间扫描
方式测定 , 显示在 60 min内稳定 。
2.9　加样回收率实验 精密吸取已知含量的无水乙醇洗脱液 4
ml, 分别加入 0.2, 0.4, 0.6 ml的 0.1 mg/ml齐墩果酸对照品 , 每
组平行 3次。结果见表 2。
3　讨论
依据文献和薄层色谱法的验证 ,证明香青兰中确有齐墩果酸
成分。由于齐墩果酸是五环三萜化合物 , 在紫外区无吸收 , 故用
显色法 ,使其在可见光区有最大吸收。
由于皂苷类成分的显色反应专属性较差 ,常用的显色试剂又
很多 , 本次实验选用香草醛 -冰醋酸及高氯酸法 , 因其显色灵敏 ,
试剂空白溶液色浅 ,常用于三萜类皂苷的显色 , 但由于其与皂苷
元反应所产生的颜色受试剂的浓度 、反应温度 、反应时间等影响
较大。因此必须注意反应条件的控制。
表 2　加样回收实验
测定试液 吸光度 A 浓度C/mg· ml-1
回收率
(%)
平均
回收率(%)
RSD
(%)
样品 +0.2 ml标品 0.15 0.014 2 1.02
0.15 0.014 1 0.96
0.15 0.014 0 0.92
样品 +0.4 ml标品 0.18 0.016 1 0.99
0.18 0.016 0 0.96 99.1 1.5
0.18 0.016 3 1.04
样品 +0.6 ml标品 0.21 0.0178 0.94
0.21 0.018 3 1.02
0.21 0.018 4 1.03
大孔吸附树脂是一种具有多种立体结构人工合成的聚合物
吸附剂 , 是在离子交换剂和其他吸附剂应用基础上发展起来的一
类新型树脂 , 是依靠它和被吸附的分子之间的范德华引力 , 通过
它巨大的比表面进行物理吸附而工作的 。本文选用 HPD-100
大孔吸附树脂 , 属非极性 ,广泛应用于天然植物中提取 、分离 、纯
化各类皂苷等活性物质。装柱高度 20 cm, 柱子的直径 1.5 cm,
洗脱液流速 1 ml/min, 每份洗脱液都要经过重吸附后才定容收
集 , 这是为了保证大孔吸附树脂与被吸附分子之间能充分结合。
利用大孔吸附树脂比色法测定总三萜酸成分 ,该方法具有简
便 、快速 、准确 、重复性好等优点。
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