全 文 :途径产生的苯丙素类化合物,其在植物中的含量差
异与植物发育时期和组织器官的代谢能力有直接相
关性。本试验结果显示日本蛇根草不同组织器官中
绿原酸的含量依次为花 >叶 >根 >茎。此结果与繁
殖器官花的代谢最旺盛,营养器官叶的代谢活跃,运
输器官根和茎的代谢程度低的特点相吻合。二月盛
花期日本蛇根草全草中绿原酸含量比果期的高,与
其盛花期花在全草中的比例较大有关。因此利用日
本蛇根草中绿原酸的药理作用在临床用于抗菌、消
炎、解毒、清除氧自由基和抗癌的治疗时,于冬季到
早春盛花期采收比较合理。
深入的挖掘古方及民间有确切疗效的验方,结
合现代制药技术开发新药造福人类是中药研究的热
点,《本草纲目拾遗》记载“雪里花”经后人的本草考
证为日本蛇根草原植物,其记载“土人采得,干之入
药。…敷痔疮,湿者干掺,干者麻油调搽一二度,其
痔即消缩”[11],古人记载如此神效,与其记载的活血
散瘀,清肺发散的功效是相适应的,但是目前未见日
本蛇根草临床应用和药理药效的研究报道,本研究
发现其富含绿原酸是否与其药效有关联,还需相应
的临床观察及药效试验来佐证,本研究为野生日本
蛇根草资源的充分利用,明确其药用价值提供理论
依据。
参 考 文 献
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(2015-04-23 收稿 2015-06-04 修回)
基金项目:湖北省高等学校创新能力提升计划(编号:鄂教科函[2012]56 号)
通讯作者:张晓燕 Tel:(0719)8637262 E-mail:coarff66@ 126. com
多指标评价不同加工方法对湖北野生川党参质量的影响
余世荣1 徐梦菲2 张晓燕1 石金敏1 (1. 湖北医药学院附属人民医院药学部 湖北十堰 442000;2.武汉大学第二
临床学院)
摘 要 目的:采用多指标评价不同产地加工方法对竹山当地野生党参质量的影响。方法:采用正交设计试验,以干膏得
率、党参炔苷含量、党参多糖含量为指标筛选最佳工艺,采用高效液相色谱法测定党参炔苷和党参多糖的含量。结果:采用循
环干燥控制温度 70℃充分烘干,揉搓 1 次的加工方法最佳。结论:本试验优选的加工方法简单实用,比较有推广价值。
关键词 竹山野生党参;干膏得率;党参炔苷;党参多糖;正交试验
中图分类号:R283. 1 文献标识码:A 文章编号:1008-049X(2015)09-1477-04
Effects of Various Processing Methods on the Quality of Wild Codonopsis Tangshen Oliv. in Hubei Evalua-
ted by Mutiple-index
Yu Shirong1,Xu Mengfei2,Zhang Xiaoyan1,Shi Jinmin1(1. Renmin Hospital,Hubei University of Medicine,Hubei Shiyan 442000,
China;2. The Second Clincial School of Wuhan University)
ABSTRACT Objective:To study the quality differences of Codonopsis tangshenThe caused by various processing methods. Meth-
ods:The orthogonal design was used to screen the optimum technology. The yield of extract and the contents of lobetyolin and polysac-
charides in Radix codonopsis determined by HPLC were used as the indices. Results:The optimal processing technology was as follows:
intensively dried at 70℃ using cyclic drying,and kneaded once. Conclusion:The optimal technology is simple and worthy of wide ap-
plication.
KEY WORDS Codonopsis tangshen Oliv.;Yield of extract;Lobetyolin;Polysaccharides of Radix Codonopsis;Orthogonal design
党参的来源为桔梗科植物党参(Codonopsis pilo- sula(Franch.)Nannf.)、素花党参[Codonopsis pilosu-
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la Nannf. var. modesta (Nannf.)L. T. Shen]或川党
参(Codonopsis tangshen Oliv. )的干燥根[1]。竹山当
地野生党参经鉴定为川党参(Codonopsis tangshen
Oliv. )当地药农每年秋季选晴天刨出全根洗净,直
接在晒席上摊晒 2 ~ 3 d,当晒至参体发软时,捆成小
把,一手握住根头,一手向下顺揉搓数次。次日再
晒,晚上收成牛角把子,再置木板上反复压搓,继续
晒干成外观整齐的商品党参,揉搓后的党参除去了
根毛、泥土等杂质,并使得党参皮肉紧贴而坚实,干
燥均匀,质柔润,首尾药性均匀,干后不空心宜保存。
这种原始的产地加工方法对党参品质的影响未见相
关文献报道。本文以干膏得率、党参炔苷含量、党参
多糖含量为指标[2,3],采用 L9(3
4)正交表设计试验,
考察干燥方法、循环烤箱干燥温度和揉搓次数产地
加工方法中的 3 个因素对野生党参质量的影响,用
于优选产地加工方法。
1 仪器与试药
1. 1 仪器
恒温水浴锅(上海亚荣生化仪器厂) ;日本岛津
高效液相色谱仪(LC-20AT 泵;SIL-20A 自动进样
器;CTO-20A 柱温箱;SPD-M20A 紫外检测器;Lab-
Solutions色谱工作站) ;四号筛五号筛六号筛(250
μm,180 μm,150 μm,NO. 60浙江上于哨金哨洋纱
筛厂) ,PS - 1010HT 超声清洗器(合肥攀升超声波
科技有限公司,40 ± 2 kHz,900 W)。万分之一电子
分析天平[CP214,奥豪斯仪器(上海)有限公司制
造],电热恒温鼓风循环干燥箱(GZX-GF-101-2-BS-
Ⅱ,上海贺德实验设备有限公司)。微量台式高速
离心机(HI650 湖南湘仪实验室仪器开发有限公
司) ,双光束紫外分光光度计(TV-I901,北京普析通
用仪器有限责任公司)。
1. 2 试药
党参炔苷标准品(购自四川省维克奇生物科技
有限公司,批号:130416,纯度≥98%,供含量测定
用)。无水葡萄糖、乙腈、99. 5%甲醇为色谱纯;水
为双重蒸馏水;其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 试验设计的因素水平
试验以干燥方法(因素 A)、揉搓次数(因素
B)、循环干燥温度(因素 C)为考察因素进行正交试
验,每个因素设 3 个水平,因素水平表见表 1。党参
样品于 2014 年 9 月 20 号,采自湖北省竹山县官渡
镇,经湖北医药学院张晓燕副教授鉴定为川党参
(Codonopsis tangshen Oliv.) ,按上述因素水平进行
干燥加工制成党参样品备用。
表 1 因素水平表
水平 因素 A 因素 B(次) 因素 C(℃)
1 自然阴干 0 50
2 自然晒干 1 60
3 人工烘干 2 70
2. 2 干膏得率
取党参样品粉末约2. 0 g,精密称定,置 250 ml
的锥形瓶中,精密加 45%乙醇 50 ml,密塞,称定重
量,浸泡 1 h,回流提取 1 h。放冷后,取下锥形瓶,密
塞,再称定重量,用 45%乙醇补足减失的重量,摇
匀,用干燥滤器滤过,精密量取续滤液 25 ml,置已干
燥至恒重的蒸发皿中,在水浴上蒸干后,于 105℃干
燥 3 h,置干燥器中冷却 30 min,迅速精密称定重
量[4]。
2. 3 党参炔苷的含量测定
2. 3. 1 色谱条件 色谱柱:Dionex Acclaim C18柱
(250 mm ×4. 6 mm,5 μm) ;流动相(乙腈 ∶ 水,25 ∶
75) ;流速:1. 00 ml·min -1;检测波长:267 nm;柱温
为 35℃,进样量:10μl。
2. 3. 2 党参炔苷含量测定方法[5] 精密称取党参
炔苷标准品3. 2 mg,置于 5 ml 棕色量瓶中,加甲醇
溶解,定容至刻度,摇匀。配成浓度为0. 64 mg·
ml -1的党参炔苷对照品储备溶液。另取0. 5 ml党参
炔苷对照品储备溶液置于 5 ml 棕色量瓶中,加甲醇
溶解,定容至刻度,摇匀。配成浓度为0. 064 mg·
ml -1的党参炔苷对照品溶液。
取样品粉末 2 g,精密称定,于具塞锥形瓶中,
准确加入甲醇溶液 50 ml,称重,超声处理 30 min,放
冷至室温,称重,用甲醇补足减失的重量。摇匀,用
漏斗过滤,取续滤液 25 ml 于蒸发皿中,水浴蒸干,
用甲醇转移至 5 ml 量瓶中,定容至刻度,用微孔滤
膜过滤即得供试品溶液。
按“2. 3. 1”项下色谱条件,取党参炔苷对照品溶
液和供试品溶液各 10 μl,分别进样,记录党参炔苷的
峰面积,按外标一点法求样品中党参炔苷的含量。
2. 4 党参多糖的含量测定
2. 4. 1 党参多糖的提取与精制[6] 称取党参样品
100 g置圆底烧瓶中,加石油醚 250 ml,75℃回流 1 h
脱脂,过滤,残渣挥干溶媒,然后用 80%的乙醇 250
ml浸渍过夜,超声提取 2 次,每次 1 h,过滤,药渣加
蒸馏水 500ml 浸渍 1 h 后,超声提取 30 min,过滤,
再用 250ml 蒸馏水超声提取 30 min,过滤,合并滤
液,浓缩至 75 ml,用氯仿萃取 3 次,除去蛋白质。加
1%活性炭脱色 2 次,抽滤,滤液调含醇量 80%,静
置醇沉,置冰箱过夜,过滤,残渣先后用 95%乙醇、
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无水乙醇、乙醚、丙酮依次洗涤,60℃ 烘干至恒重,
即得精制党参多糖。
2. 4. 2 葡萄糖对照品溶液的制备 精密称取
105℃干燥至恒重的葡萄糖10. 7 mg,置 100 ml 量瓶
中加蒸馏水溶解并稀释至刻度,即得0. 107 mg·
ml -1葡萄糖标准溶液。
2. 4. 3 5%苯酚溶液的制备[7] 取苯酚 100 g,加铝
粉 100 mg,碳酸氢钠 50 mg,蒸馏收集 182 ℃馏分,称
取此馏分 5 g,加水到 100 ml,摇匀,置棕色瓶中备用。
2. 4. 4 标准曲线的绘制 精密吸取葡萄糖标准品液
0. 2,0. 4,0. 6,0. 8,1. 0 ml分置 50 ml 具塞试管中,依
次加蒸馏水补足到 2 ml,各管再加入 5%的苯酚溶液
1 ml,摇匀,并迅速加入浓硫酸5 ml,常温放置25 min,
于 490 nm处,以空白溶液为参比测定吸光度,绘制标
准曲线,以吸光度(A)对样品浓度(C,μg·ml -1)进行
回归,得出回归方程:A = 0. 064 9C - 0 . 022 2,r =
0. 998 8,线性范围为 10. 7 ~53. 5μg·mg -1。
2. 4. 5 换算因素的测定 精密称取 60℃干燥至恒重
的精制党参多糖 20 mg,置 100 ml 量瓶中,加蒸馏水
溶解,并稀释至刻度,摇匀作贮备液。精密吸取贮备
液 2 ml,按“2. 4. 4”的测定方法操作,从回归方程中求
得贮备液中葡萄糖浓度,按 f = w /(C × D) ,式中 w为
多糖的质量(μg) ,C为多糖稀释液中葡萄糖浓度(μg
·ml -1) ,D为多糖的稀释因素。计算得出 f =5. 931。
样品测定:精密吸取供试品液 1 ml,按“2. 4. 4”
的测定方法操作,测定吸收度。从回归方程求出供
试液葡萄糖含量,按下式计算样品中的多糖含量:多
糖含量(%)=(C × D × f)/W × 100% 。式中 W 为
供试品的质量(μg) ,C 为供试品液中葡萄糖浓度
(μg·ml -1) ,D为供试品的稀释因素。
2. 4. 6 供试品溶液制备方法优选 对同一党参样
品,平行备样,一种方法用 80%乙醇回流 1 h,过滤,
残渣用 80%热醇洗涤 3 次,残渣连同滤纸加蒸馏水
回流 1 h,过滤,残渣用热水洗涤 4 次,洗液并入滤
液;另一种方法用 80%乙醇超声 30 min,过滤,残渣
连同滤纸加蒸馏水超声 30 min,过滤,再加蒸馏水重
复提取一次,过滤,残渣加滤纸水洗 4 次,洗液并入
2 次提取液[6]。两种方法的提取液定容后按照
“2. 4. 4”测定方法测定吸光度,按上述公式计算多
糖含量。结果回流提取法党参多糖的含量为
34. 886%;超声提取法党参多糖的含量为39. 455%。
超声提取方法的提取时间缩短,提取效率较高,明显
优于传统的回流提取方法。
2. 4. 7 供试品溶液的制备 取党参样品2. 0 g,精
密称定,置锥形瓶中。按“2. 4. 6”优选的超声提取
方法提取,合并 2 次提取液,定容 250 ml 于量瓶中,
摇匀,即得。
2. 5 正交试验设计与结果
按 L9(3
4)正交设计表安排试验,以干膏得率、
党参炔苷含量、党参多糖含量为指标,优选最佳的产
地加工方法,正交试验结果见表 2。
表 2 正交试验结果
试验号 因素(A) 因素(B) 因素(C) 干膏得率 (%) 炔苷含量 (mg·g - 1) 多糖含量 (%) 综合值
1 1 1 1 23. 55 1. 686 32. 72 76. 47
2 1 2 2 27. 71 1. 823 34. 83 83. 61
3 1 3 3 24. 49 1. 333 36. 23 74. 61
4 2 1 2 26. 45 1. 347 40. 26 80. 14
5 2 2 3 26. 05 2. 367 40. 08 96. 93
6 2 3 1 24. 9 1. 602 33. 86 77. 07
7 3 1 3 30. 45 1. 429 39. 56 83. 45
8 3 2 1 27. 25 1. 305 34. 98 74. 70
9 3 3 2 28. 95 2. 287 37. 63 95. 05
干膏得率 K1 25. 250 26. 817 25. 233
K2 25. 800 27. 003 27. 703
K3 28. 883 26. 113 26. 997
R 3. 633 0. 890 2. 470
炔苷含量 K1 1. 614 1. 687 1. 598
K2 1. 639 1. 565 2. 019
K3 1. 740 1. 741 1. 376
R 0. 126 0. 176 0. 643
多糖含量 K1 34. 593 37. 513 33. 851
K2 38. 065 36. 628 37. 573
K3 37. 387 35. 904 38. 622
R 3. 472 1. 609 4. 771
综合值 K1 78. 230 80. 020 76. 080
K2 84. 713 85. 080 86. 267
K3 84. 400 82. 243 84. 997
R 6. 483 5. 060 10. 187
注:综合值 =(干膏得率 /最大干膏得率)× 20 +(党参多糖含量 /最大党参多糖含量)× 40 +(党参炔苷含量 /最大党参炔苷含量)× 40。
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表 3 党参炔苷含量方差分析结果
方差来源 偏差平方和 SS 自由度 f F P
A 0. 027 2 0. 443
B 0. 049 2 0. 803
C 0. 640 2 10. 492 < 0. 1
误差 0. 06 2
注:F0. 1(2,2)= 9. 00。
2. 6 结果分析
试验考虑要结合多因素分析,设定总分值为
100 分,将中药多成分提取的总物质干膏得率定为
20 分,党参多糖和党参炔苷的含量分别定为 40 分,
来综合考察试验结果。直观分析结果表明,各因素
对产地加工的影响大小依次为循环干燥温度、干燥
方法和揉搓次数,最佳组合为 A2B2C3,综合值的方
差分析结果表明各因素影响都不显著。党参炔苷含
量的方差分析结果是循环干燥温度对含量有显著的
影响,其他两个因素影响不显著。干燥方法最优的
水平是晒干,与循环干燥温度因素的水平对结果影
响的趋势一致,因此选择可以控制温度的循环干燥
对结果影响应该不大。因此根据结果最佳的产地加
工方法定为 70℃循环干燥,揉搓 1 次为最佳的产地
加工方法。
2. 7 验证试验
按最佳产地加工方法制得 3 批样品,测定样品
中干膏得率及党参炔苷、党参多糖含量,结果干膏得
率及党参炔苷、党参多糖含量平均值分别为
30. 31%、2. 37 mg · g -1、39. 49%,RSD 分别为
1. 04%、2. 35%、2. 85%(n = 3)。说明该加工方法
稳定可行。见表 4。
表 4 工艺验证试验结果(n =3)
组别 干膏得率(%)
党参炔苷含量
(mg·g - 1)
党参多糖含量
(%)
1 30. 67 2. 38 40. 40
2 30. 10 2. 42 38. 23
3 30. 15 2. 31 39. 83
平均值 30. 31 2. 37 39. 49
3 讨论
党参在我国具有悠久的药用历史,是传统的补
气药,具有补中益气、补养脾胃、润肺生津止血、健运
中气的功效,主治脾肺虚弱,气短心悸,虚喘咳嗽,内
热消渴等症。党参含有甾体类,黄酮类、木脂素苷、
香豆素类、生物碱、挥发油、有机酸和氨基酸等多种
化学成分。现代药理研究发现,党参炔苷对乙醇所
致的胃黏膜损伤有很好的保护作用[8],与党参补益
脾胃的传统功效相符,是党参保护胃黏膜的活性成
分之一。党参多糖具有调节血液系统,抗癌、抗炎、
抗病毒、抗衰老等免疫增强作用。因此本文把党参
炔苷和党参多糖的含量作为主要的评价指标。从试
验的结果来看干燥方法对这两个评价指标影响不
大,循环干燥温度对党参炔苷的含量影响较显著。
从而优选出采用人工干燥控制循环干燥 70℃充分
烘干、揉搓 1 次的产地加工方法为最佳,验证方法证
实该法简单实用,加工的药材符合药用要求,且外观
品质优良,本试验为推广最优的产地批量加工方法
提供了试验依据,值得推广应用。
参 考 文 献
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(2015-04-20 收稿 2015-06-04 修回
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