全 文 ：[ 收稿日期] 　2005-08-03
＊[ 通讯作者] 　柳明洙(1963—), 男(朝鲜族), 副教授 , 博
士 ,研究方向为心血管分子生物学.
珍珠梅提取物对 S180荷瘤小鼠肿瘤增长的抑制作用
陈丽艳1 ,柳明洙1＊ ,郑寿焕2 ,张学武1 ,张琚3
(1.延边大学基础医学院 生物化学与分子生物学教研室;2.延边大学医院:吉林 延吉 133000;3.南开大学 医学分子生物学
研究所 ,天津 300073)
[ 摘要] 　[ 目的] 研究珍珠梅提取物对 S180荷瘤小鼠的肿瘤增长抑制作用.[ 方法] 取 60 只小鼠制作
S180荷瘤模型 ,观察给予珍珠梅提取物后小鼠 S180荷瘤的增长抑制率 、脾脏指数及胸腺指数的变化;应用
RT-PCR方法检测肿瘤组织和瘤旁组织中血管内皮生长因子(VEGF)基因的表达率.[ 结果] 珍珠梅提取
物对小鼠S180荷瘤的增长有明显的抑制作用 ,并能显著提高 S180荷瘤小鼠的脾脏指数及胸腺指数;VEGF
mRNA在珍珠梅提取物大 、中剂量组及环磷酰胺组小鼠肿瘤组织中的表达率与对照组相比较均有显著
性差异.[ 结论] 珍珠酶提取物改善 S180荷瘤小鼠的免疫功能 , 下调 VEGF 在肿瘤组织中的表达 ,抑制肿
瘤增长.
[ 关键词] 　肉瘤;植物 , 药用;内皮生长因子
[ 中图分类号] 　R285.5　　　[ 文献标识码] 　A　　　[文章编号] 　1000-1824(2005)04-0261-03
Inhibitory effects of Sorbaria sorbifolia aqueous extract on tumor growth
of S180 in mice
CHEN Li-yan1 , LIU Ming-zhu1＊ , ZHENG Shou-huan2 , ZHANG Xue-wu1 , ZHANGJu3
(1.Departmentment of Biochemistry and Molecular Biology , Y anbian University College of Basic Medicine;2.Af filiated Hospital
of Yanbian University:Yanji 133000 , Jilin , China;3.Departmentment of Biochemistry and Molecular Biology , Naikai
University , Tianjin 300073 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE To study the effects of the Sorbaria sorbi fol ia aqueous ext ract fo r the expression of
v ascular endothelial grow th factor(VEGF)in S180 in mice.METHODS The S180 sarcomas w as t ransplanted into
60 of mice.The inhibi tion ratio of the tumor weight , the spleen index and thymus index w ere calculated out ,
and the expression levels of VEGF were assayed w ith RT-PCR.RESULTS The aqueous ext ract of the Sorbaria
sorbifolia could increase the levels of inhibition ratio of tumo r w eight and the spleen index and thymus index in
mice and markedly dow nregulate the expression of VEGF gene with compared to the control g roup.
CONCLUSION The aqueous ext ract of the Sorbaria sorbifolia can improve immune function , and inhibite the
expression of VEGF and tumor g row th.
Key words:sarcoma;plants , medical;endothelial g row th factors
　　珍珠梅(Sorbaria sorbi folia)属蔷薇科植物 ,又
称山高粱或八木条 ,广泛分布于云南 、贵州 、四川 、湖
北 、甘肃 、宁夏等省及东北地区 ,具有活血化瘀及消
肿止痛等功效 ,常用于治疗骨折及跌打损伤等.珍珠
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梅水提取物有抗缺氧作用[ 1] ,乙酸乙酯提取物对亚
硝酸钠和四氯化碳致急性肝损伤具有保护作
用[ 2 ,3] .内皮生长因子(VEGF)被认为是作用最强 、
特异性最高的血管生成调控因子 ,可特异性地作用
于血管内皮细胞 ,促进其增殖及新生血管形成 ,并能
增加血管的通透性.本实验观察了珍珠梅水提取物
对小鼠 S180荷瘤的增长抑制作用 ,并从肿瘤血管生
成的角度探讨了其机制.
1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1　实验动物与瘤株　取昆明种小鼠 ,均为雄
性 ,体重为 18 ～ 22 g ,由延边大学医学部实验动物科
提供;S180瘤株由延边大学肿瘤研究中心提供.
1.1.2　试剂与仪器　珍珠梅茎 、叶及花采集于吉林
省延吉市市郊 ,经延边大学药学院刘永镇教授鉴定
为正品;RT-PCR 试剂盒购自美国 Promega 公司 ,
DNA分子质量 Marker 购自大连宝生物公司 ,实验
用引物为北京奥科生物公司产品.低温离心机
5415 R为德国 Eppendrof公司产品 , 2400 型 PCR仪
为 Perkin Elmer公司产品 , Thermolyne热循环仪为
TEP·TRON IC 公司产品 ,DYY-III 型电泳仪为北京
六一仪器厂产品.
1.2　方法
1.2.1　S180荷瘤小鼠模型的制作　无菌条件下取传
代第 5日的 S180荷瘤小鼠腹水 ,用生理盐水稀释至
含瘤细胞 2×109 个/L ,分别取 0.2 mL 接种于小鼠
左前肢外侧皮下 ,制作荷瘤小鼠模型.将 60只荷瘤
小鼠随机分为珍珠梅水提取物大 、中 、小剂量组 、阴
性对照组及环磷酰胺组 ,每组各为 12只.
1.2.2　给药　于接种瘤株后第 2日开始给药 ,珍珠
梅水提取物大 、中 、小剂量组小鼠每日分别灌胃给予
0.500 ,0.250 , 0.125 g/kg 珍珠梅水提取物 ,阴性对
照组小鼠每日灌胃给予 0.2 mL 生理盐水 ,环磷酰
胺组小鼠隔日腹腔注射 0.02 g/kg 环磷酰胺;各组
小鼠均连续给药 10 d.停药后第 2日称取小鼠体重 ,
剖取小鼠肿瘤 、瘤旁组织 、胸腺及脾脏 ,分别称其质
量 ,置于低温冰箱中保存 ,待行指标测定.
1.2.3　肿瘤增长抑制率 、免疫器官脾脏指数及胸腺
指数的计算　采用下列公式计算:
肿瘤增长抑制率=对照组平均肿瘤质量-实验组平均肿瘤质量对照组平均肿瘤质量 ×100%
脾脏指数=平均脾质量平均体重 (mg/g)
胸腺指数=平均胸腺质量平均体重 (mg/g)
1.2.4　VEGF mRNA 表达率的测定 　采用 RT-
PCR方法测定.组织中总 RNA 的提取按 Trisol试
剂盒说明书操作 , VEGF 引物的设计参照文献[ 4]进
行 , 即 sence primier ∶5′-CCTGGTGGACATCTT-
CCAGGAGTAC-3′, ant isence primier∶5′-GAAGCT-
CATCTCTCCTATGTGCTGGC-3′, 扩增产物长度
为 196;以 GAPDH 为内参物 , 引物序列为 sence
primier:5′-ACCACAG TCCATGCCATCAC-3′, ant i-
sence primier:5′-TCCACCACCCTGTTGCTGTA-
3′,扩增产物长度为 450.扩增条件为 37 ℃逆转录
90 min ,94 ℃预变性 3 min ,循环30次(94 ℃30 s ,
58 ℃30 s ,72 ℃20 s), 72 ℃充分延伸 3min ,取 PCR
产物 10μL ,加入 2μL 电泳上样缓冲液(30 mmol/L
EDTA , 360 mL/L Glycerol , 5 g/L Xy lene
CyanolFF , 5 g/L , Bromophenol Blue), 混匀 , 取 10
μL 上样电泳.电泳完毕后将凝胶置于 Gene Genius
凝胶成像分析系统内 ,扫描分析各 DNA 荧光带的
光密度值 ,分别计算各样品中 VEGF 基因的表达率
(GER).
基因表达率=待测基因扩增产物的荧光带光密度扫描值持加基因扩增产物荧光带光密度扫描值 ×
100%
1.2.5　统计学处理　所有数据均采用 SPSS 11.0
统计软件进行统计学处理.
2　结果
2.1　珍珠梅水提取物对小鼠 S180肉瘤增长的抑制
率　由 Table 1可见 ,珍珠梅大 、中剂量组及环磷酰
胺组小鼠肿瘤质量明显低于阴性对照组 ,并均有显
·262· Journal of Medical Science Yanbian Univ ersity　Dec.2005 Vol.28 No.4
著性差异(P <0.05), 肿瘤增长抑制率分别为
52.3%,51.0%,46.0%.
2.2　珍珠梅水提取物对 S180荷瘤小鼠脾脏指数及
胸腺指数的影响　由 Table 2可见 ,珍珠梅大 、中剂
量组小鼠的脾脏指数和胸腺指数与阴性对照组相比
较有明显提高 ,均有显著性差别(P<0.05).
2.3　VEGF mRNA在小鼠 S180荷瘤组织及瘤旁组织
中的表达　Fig 1为小鼠 S180荷瘤组织 VEGF 及内参
物GAPDH的 RT-PCR产物电泳图;Fig 2为根据计算
VEGF的基因表达速率值所绘制的直方图;Table 3 ,
Table 4为VEGF的 RT-PCR产物电泳结果的光密度
扫描值及 VEGF 基因的表达率.由 Fig 1 , Fig 2可见
珍珠梅大 、中剂量组VEGF mRNA表达率与对照组相
比较均有显著性差异(P<0.05).
Table 1　Tumor weight of mice inoculated sarcoearcinoma 180
group n
tumor w eight
(g , x±SD)
rat io of inhibi tion
(%)
cont rol 11 3.54±0.60
CTX 11 1.90±0.61＊ 46.0
low dose of SSAE 12 2.11±0.59 40.3
middle dose of SSAE 12 1.73±0.68＊ 51.0
high dose of S SAE 10 1.69±0.43＊ 52.3
SSAE:S orbaria sorbi folia acqueous ext ract
compared w ith cont rol group , ＊ P<0.05
Table 2 　Spleen index and thymus index of mice inoculated
sarcoearcinoma 180( x±SD) mg/ g　
group n spleen index thymus index
control 11 4.69±0.22 1.94±0.01
CTX 11 5.96±0.21 2.40±0.05
low dose of S SAE 14 5.81±0.16 3.02±0.18＊
middle dose of S SAE 14 7.65±0.41＊ 3.31±0.11＊
high dose of SSAE 10 8.29±0.44＊ 4.59±0.08＊
compared w ith cont rol group , ＊ P<0.05
a:VEGF mRNA(196 bp);b:GAPDH mRNA(450 bp).
marker:2 000 , 1 000 , 750 , 500 , 250 , 100 bp;Lane 1:high
dose g roup;Lane 2:medium dose group;Lane 3:low dose
group;Lane 4:control group;Lane 5:CTX group
Fig 1　Agarose gel electrophoresis of RT-PCR products
in tumor
a:VEGF mRNA(196 bp);b:GAPDH mRNA(450 bp);
marker:2 000 , 1 000 , 750 , 500 , 250 , 100 bp;Lane 1:tu-
mor treated with high do se group;Lane 2:tumor s con-
tig uous tissue treated with high dose group;Lane 3:tumor
treated with medium dose group;Lane 4:tumor s con-
tig uous tissue treated with medium dose g roup;Lane 5:
tumor treated with low dose group;Lane 6:tumor s con-
tig uous tissue treated with high do se g roup
Fig 2　Agarose gel electrophoresis of RT-PCR products
in tumor and it s contiguous tissue
Table 3　Optical density data of RT-PCR products from Fig 1
Lane 1 Lane 2 Lane 3 Lane 4 Lane 5
GAPDH 219.5 168.5 173.4 212.1 216.4
VEGF 0.01 0.21 40.01 152.3 25.7
VEGF GER 0.000 4 0.001 3 0.2300 0.720 0 0.120 0
Table 4　Optical density data of RT-PCR products from Fig 2
Lane 1 Lane 2 Lane 3 Lane 4 Lane 5 Lane 6
GAPDH 68.30 54.07 55.06 60.95 47.17 36.53
VEGF 13.83 0.01 50.62 0.01 119.40 0.01
VEGF GER 0.200 0.018 0.910 0.012 2.530 0.020
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3　讨论
研究结果表明 ,珍珠梅各剂量组 S180肉瘤的增
长均受到抑制 ,大 、中 、小剂量组的肿瘤增长抑制率
分别为 52.3%, 51.0%和 40.3%,与对照组比较均
有显著性差异(P <0.05),并随着珍珠梅水提取物
浓度的增加 ,抑制作用亦增强.荷瘤小鼠脾脏指数和
胸腺指数可反映机体的免疫功能状况.实验结果示
给予珍珠梅水提取物后 S180小鼠的免疫功能明显改
善.肿瘤血管的生成是一个非常复杂的过程 ,受局部
微环境和机体整体状态的影响.恶性肿瘤组织可分
泌多种促血管生成因子 ,而 VEGF 是在生理或病理
条件下血管生成的中心调节因子.近年来的研究结
果表明 ,VEGF 是一类多功能细胞因子 ,在肿瘤增长
转移过程中具有双重作用 ,即一方面诱导血管生成 ,
促进癌细胞转移 ,另一方面抑制树突状细胞成熟 ,降
低机体对癌细胞的免疫应答.本研究用半定量 RT-
PCR方法研究了 VEGF 基因在 S180荷瘤小鼠肿瘤
组织和瘤旁组织中的表达 ,发现珍珠梅水提取物能
显著降低肿瘤组织中 VEGF 基因的表达率 ,提示降
低 VEGF 基因的表达水平可能是珍珠梅水提取物
抑制肿瘤增长的机制之一.
[参　考　文　献]
[ 1] 　李亦秀 ,张永春 , 李文汉 ,等.中草药山高梁的抗缺氧作
用的初步研究[ J] .哈尔滨医科大学学报 , 1981 , 4(1):1.[ 2] 　张学武 ,金海玲 , 赵红 ,等.珍珠梅对四氯化碳所致大鼠
急性肝损伤的保护作用[ J] .世界华人消化杂志 , 2002 ,
10(7):783.[ 3] 　张学武 ,金海玲 , 朴春梅 ,等.珍珠梅对亚硝酸钠和四氯
化碳所致肝损伤的保护作用[ J] .延边大学医学学报 ,
2001 , 24(3):186.
[ 4] 　Zhang Zhong-lin , Liu Zhi-su , Sun quan.Effects of
thalidomide on angio genesis and tumo r g rowth and metas-
tasis o f human hepatocellular carcinoma in nude mice[ J] .
World J Gastroenterol , 2005 , 11(2):216.
[ 收稿日期] 　2005-08-02
[ 作者简介] 　尹秀梅(1971—),女(朝鲜族),实验师 ,研究方
向为药物成分分析.
水红花子中槲皮素的含量测定
尹秀梅1 ,陈丽艳2 ,张学武2
(1.延边大学药学院;2.延边大学基础医学院:吉林 延吉 133000)
[ 摘要] 　[ 目的] 测定水红花子中槲皮素的含量.[ 方法] 采用紫外分光光度法在25 ℃下 、最大吸收波长
为 370 nm 处对水红花子乙醇提取物进行吸光度测定.[ 结果] 得到槲皮素浓度与吸光度线性方程 y =
0.015 6 x+0.000 9 , 线性范围为 0.004 0 ～ 0.011 9 mg/ L(r=0.999 2).[ 结论] 紫外分光光度法测定水
红花子中槲皮素含量操作简便 、快速且灵敏度和准确度高.
[ 关键词] 　槲皮素;光谱测量 , 紫外线;植物 , 药用
[ 中图分类号] 　R284.1　　　[ 文献标识码] 　A　　　[文章编号] 　1000-1824(2005)04-0264-02
Determination of the quercetin content in the fructus polygoni orientalis
YIN Xiu-mei1 , CHEN Li-yan2 , ZHANGXue-wu2
(1.Yanbian University College of Pharmacy;2.Y anbian University College of Basic Medicine:Yanji 133000 , Jilin , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE The content of quercetin in the f ructus polygoni oriental is was determinated by
spect rophotometry. METHODS The detect ion
w aveleng th w as set at 370 nm and temperature at
25 ℃.RESULTS The method was liner wi thin the
range of 0.004 0 ～ 0.011 9 mg/ L(r =0.999 2).
·264· Journal of Medical Science Yanbian Univ ersity　Dec.2005 Vol.28 No.4