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香青兰挥发油抗菌、抗流感病毒作用的实验研究



全 文 :香青兰挥发油抗菌、抗流感病毒作用的实验研究
骆红飞△ 申屠乐
( 浙江中医药大学附属第二医院·杭州 310005)
摘 要 目的: 观察香青兰挥发油的抗菌、抗流感病毒作用。方法: 测定香青兰挥发油最小抑菌浓度
( MIC) 。以流感病毒滴鼻制备肺炎模型,计算肺指数及肺指数抑制率,并观察各组小鼠的死亡率和存活
时间。结果:香青兰挥发油对大肠杆菌、痢疾杆菌、变形杆菌、枯草杆菌具有较好的抑制作用; 25、45、
90mg /kg剂量组可明显降低流感病毒感染小鼠的肺指数,延长小鼠的存活时间。结论:香青兰挥发油具
有抗菌及抗流感病毒作用。
主题词 香青兰 /药理学 细菌 /药物作用 流感病毒 /药理学 小鼠
香青兰为唇形科青兰属香青兰 Dracocephalum moldavica
L. 干燥地上部分,为江浙民间中草药,具有清肺解毒、凉肝
止血之功效,主治感冒、喉痛、气管炎、哮喘、黄疸等[1 - 2]。现
代研究表明,其具有降血糖、降血脂、心脏保护等作用[1 - 4]。
香青兰全草含挥发油 1. 2%左右,主要成分为柠檬醛、香叶
醇、百里香酚和牻牛儿醇等[5]。目前尚未见对其挥发油体外
抗菌、抗病毒作用的研究报道。为充分利用开发该植物资
源,本实验在前期研究的基础上提取香青兰挥发油,进行抗
菌及体内抗流感病毒实验,现将结果报告如下。
1 实验材料
1. 1 药物及试剂 香青兰:购于安徽省禾田中药饮片有限
公司,批号:20110914,经浙江中医药大学蔡伟博士鉴定为
Dracocephalum moldavica L. 干燥地上部分。按《中国药典》
(2010 版)附录水蒸气蒸馏提取,得淡黄色挥发油(DMEO) ;
达菲:上海罗氏制药有限公司。MH 培养基:杭州四季青生
物化工有限公司。
1. 2 菌种及病毒株 实验菌种〔金黄色葡萄球菌(ATCC
25923)、大肠杆菌(ATCC 25922)、铜绿假单胞菌(ATCC
27853)、临床分离株(伤寒杆菌、痢疾杆菌、表皮葡萄球菌、
变形杆菌、枯草杆菌)〕:由浙江中医药大学生命科学院微生
物免疫教研室提供。病毒株(甲型流感病毒小鼠肺适应株
A/PR /8 /34) :由浙江省疾病预防控制中心提供,经鸡胚尿囊
腔接种传代,滴定病毒效价为 1:512。
1. 3 动物 ICR小鼠,雌雄各半,体重 18 ~ 22g,由中国科学
院上海实验动物中心 /上海斯莱克实验动物有限公司提供。
2 方法与结果
2. 1 抑菌实验 采用纸片琼脂扩散法[4]初步观察香青兰挥
发油的抑菌作用。采用倍比稀释法[5]测定 MIC,加入 0. 1ml
各菌液(0. 5 麦氏比浊浓度) ,37℃培养 18 小时后接种于 MH
平板,37℃培养过夜,观察结果,未见细菌生长的最低浓度即
为 MIC,结果见表 1。
表 1 DMEO的抑菌作用
组别 金黄色葡萄球菌 大肠杆菌 铜绿假单胞菌 伤寒杆菌 痢疾杆菌 表皮葡萄球菌 变形杆菌 枯草杆菌
空白组 + + + + + + + +
原液 + - + + - + - -
1∶ 2 + - + + - + - -
1∶ 4 + - + + - + - -
1∶ 8 + + + + + + + +
1∶ 16 + + + + + + + +
+:细菌生长;-:细菌不生长
△通讯作者
2. 2 抗流感病毒实验
2. 2. 1 对流感病毒肺炎小鼠的肺脏保护作用 小鼠随机分
为 6 组,见表 2,每组 10 只,雌雄各半。药物组于感染前 2 天
开始灌胃给药,剂量见表 2。对照组给予同容积蒸馏水灌
胃,于第 3 天乙醚轻度麻醉下,以 10 倍病毒株 LD50(2. 82)的
攻击量滴鼻感染,每鼠 0. 02ml,正常对照组在同一条件下,
用生理盐水代替病毒液滴鼻,逐日观察动物活动、进食、死亡
情况。感染后第 7 天脱椎处死,称体重,剖取肺脏称重,计算
肺指数,肺指数抑制率。结果见表 2。
2. 2. 2 对流感病毒肺炎小鼠生存情况的影响 取 ICR 小
鼠,雌雄各半,随机分 6 组,每组 14 只,见表 3,各组小鼠均灌
胃给药 7 天,剂量见表 3,0. 4ml /20g,于给药第 3 天各组小鼠
在乙醚浅麻醉下以 10 倍病毒株 LD50(2. 82)的攻击量感染
小鼠,20μl /只,正常对照组在同一条件下,用生理盐水代替
病毒液滴鼻,逐日观察动物活动、进食及死亡情况。继续给
药,观察动物感染后发病症状,记录感染 14 天后的死亡数和
死亡时间,并计算死亡保护率及平均存活天数。死亡保护率
(%)=(对照组病死率 -实验组病死率)× 100%。结果见
·462· 中国中医药科技 2013 年 5 月第 20 卷第 3 期 May 2013 Vol. 20 No. 3
表 3。
表 2 DMEO对小鼠流感病毒肺炎的抑制作用(n = 10)
组别
剂量
(mg·kg -1)
肺指数
(x ± s,%)
抑制率
(%)
正常对照组 - 0. 75 ± 0. 09** -
病毒对照组 - 1. 80 ± 0. 29 -
达菲对照组 20 1. 05 ± 0. 24** 41. 67
DMEO低剂量组 25 1. 12 ± 0. 44** 37. 78
DMEO中剂量组 45 1. 12 ± 0. 13** 37. 78
DMEO高剂量组 90 1. 15 ± 0. 50** 36. 11
t检验;与病毒对照组比较* P < 0. 05,**P < 0. 01
表 3 DMEO对小鼠体内感染流感病毒的保护作用
组别
剂量
(mg·kg - 1)
死亡率
(%)
平均存活天数
(x ± s,d)
正常对照组 - 0 15. 00 ± 0. 00
病毒对照组 - 71. 43 10. 36 ± 2. 74
达菲对照组 20 14. 29** 14. 00 ± 1. 71**
DMEO低剂量组 25 57. 14 10. 69 ± 3. 31
DMEO中剂量组 45 58. 33 9. 83 ± 2. 31
DMEO高剂量组 90 54. 55 11. 21 ± 3. 24
与病毒对照组比较* P <0. 05,**P <0. 01
3 讨论
香青兰为我国特有的香料植物,具有药食两用的特点。
本文抑菌实验研究结果表明,其对大肠杆菌、痢疾杆菌等肠
道疾病细菌具有良好的抑制作用,抗流感病毒实验结果表明
DMEO具有减轻甲型流感病毒感染小鼠肺部组织病变的作
用,可一定程度上延长小鼠生存时间,减少死亡率,由此提示
香青兰挥发油具有抗菌、抗流感病毒作用。
参考文献
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探讨香青兰保护心肌细胞缺氧 /复氧损伤物质基础.中国中药
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( 修回: 2013 - 01 - 30
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)
艾灸结合三阴交穴位注射维生素 K3 治疗原发性痛经 40 例
边晓东 楼志勇 俞燕燕 罗开涛 ( 浙江省嘉兴市中医院·嘉兴 314001)
1 临床资料 全部40 例患者均为嘉兴市中医院 2010 - 01 ~ 2012 -
01 妇科门诊转入针推科治疗的患者,年龄为 13 ~ 36 岁,平均 22 岁;
病程 5 个月 ~ 10 年;诊断参照 1993 年卫生部《中药新药临床研究指
导原则》中“痛经”的有关标准[1]。
2 方法
2. 1 治疗方法 (1)艾灸治疗:穴位处方为关元、子宫穴(双侧)。
操作方法:隔姜灸。每穴施灸 5 ~ 9 壮,施灸壮数依痛经程度而定,轻
度用 5 壮,中度用 7 壮,重度用 9 壮,治疗于每次行经前 1 周左右开
始,每日 1 次,7 日为 1 个疗程,连续治疗 3 个月经周期。(2)维生素
K3穴位注射:患者平卧位,取三阴交穴位,局部常规消毒,用 6. 5 号
针头注射器抽吸维生素 K3注射液(湖北信诚化工有限公司)8mg,将
针快速刺入三阴交穴,轻轻捻转针体,使患者产生酸、胀、麻等针感,
抽吸无回血后,慢慢注入药液 4mg,去针后按压针眼,贴以消毒邦迪
胶布,对侧同法注入 4mg。每次痛经注射 1 次,1 个月经周期为 1 个
疗程,随访 3 个月经周期。随访中发现痛经症状复发者,原法重复治
疗,3 个疗程无效停用。
2. 2 症状评分及分级标准 经期及其前后小腹疼痛 5 分(基础
分) ;腹痛难忍 1 分;腹痛明显 0. 5 分;坐卧不宁 1 分;休克 2 分;面色
白光白 0. 5 分;冷汗淋漓 1 分;四肢厥冷 1 分;需卧床休息 1 分;影响工
作学习 1 分;用一般止痛药不缓解 1 分;用一般止痛措施疼痛暂缓
0. 5分;伴腰部酸痛 0. 5分;伴恶心呕吐 0. 5分;伴肛周坠胀 0. 5 分;疼
痛在 1天以内 0. 5分(每增加 1天加 0. 5 分)。痛经症状积分在 14 分
以上者为重度;积分在 8 ~13. 5分为中度;积分在 8分以下为轻度。
3 结果
3. 1 疗效标准 参照《中药新药临床研究指导原则》标准[1]。
3. 2 治疗结果 40 例中,治愈 16 例,显效 14 例,有效 8 例,无效 2
例,愈显率 75%,总有效率 95%。
3. 3 治疗前后症状积分比较 治疗前症状积分(10. 24 ± 1. 76)分,
治疗后症状积分(3. 68 ± 1. 87)分,治疗前后比较差异显著(t检验;P
< 0. 05)。
4 讨论 原发性痛经属于祖国医学“痛经”、“经行腹痛”范畴。经
期或经期前后,受情志所伤或起居不慎或六淫之邪等乘机侵入,导致
冲任瘀阻或寒凝经脉,胞宫经血流通受阻,以至不通则痛;或冲任、胞
宫失于濡养,不荣则痛。艾灸施于穴位,其燃烧时所产生的近红外线
辐射有较高的穿透能力[2],从而发挥其药物和火热的温通作用,改
善微循环,抑制子宫平滑肌收缩,缓解疼痛。维生素 K3,具有解痉、
止痛效果,可用于治疗多种平滑肌痉挛引起的疼痛。三阴交穴为足
太阴脾经腧穴,又为足三阴经之交会穴,具有调补脾肾、疏肝理气、活
血化瘀之功。在三阴交穴注射维生素 K3,具有针刺和药物的双重作
用,能够迅速激发经气,疏经活血,并且使药物的作用明显增强,可以
在短时间内达到止痛效果。
本种治疗方法简便易行,安全无副作用,易于被患者接受,值得
推广。
参考文献
[1] 中华人民共和国卫生部. 中药新药临床研究指导原则:第 1
辑.北京:人民卫生出版社,1993:263.
[2] 杨华元,刘堂义. 艾灸疗法的生物物理机制初探. 中国针灸,
1996,16(10) :17. ( 收稿: 2012 - 04 - 05)
·562·中国中医药科技 2013 年 5 月第 20 卷第 3 期 May 2013 Vol. 20 No. 3