全 文 ：基金项目:国家科技重大专项“重大新药创制”课题(2012ZX09102201-009)
作者简介:于宁，女，硕士，助理研究员 研究方向:中药新药研究 * 通讯作者:邢建国，男，研究员 研究方向:中药新药研究 Tel:
(0991)2300682 E-mail:xjguodd@ 163. com
香青兰提取物中苯丙素类和黄酮类 3 个化合物的含量测定
于宁1，何承辉1，邢建国1* ，帕依曼·亥米提1，曾诚2(1. 新疆维吾尔自治区药物研究所，乌鲁木齐 830004;2. 新疆医科大学中
医学院，乌鲁木齐 830054)
摘要:目的 建立同时测定香青兰提取物中 1 种苯丙素类成分(迷迭香酸)和 2 种黄酮类成分(木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸
苷和田蓟苷)的含量测定方法。方法 采用 Purospher STAＲLP ＲP-18 endcapped(4. 6 mm × 250 mm，5μm)色谱柱，流动相为
乙睛(A)-0. 5%甲酸水溶液(B) ，梯度洗脱(0 ～ 28 min，20% A;28 ～ 55 min，20%→28% A;55 ～ 80 min，28%→30% A) ，流速为
1. 0 mL·min －1，检测波长为 330 nm，柱温为 35 ℃。结果 迷迭香酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷和田蓟苷分别在
2. 184 ～ 21. 84 μg·mL －1(r = 0. 999 6) ，3. 14 ～ 31. 84 μg·mL －1(r = 0. 999 6) ，7. 9 ～ 39. 5 μg·mL －1(r = 0. 999 5)内呈良好线
性关系。香青兰提取物迷迭香酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷和田蓟苷的平均回收率(n = 9)分别为 99. 62%、99. 64%和
100. 12%，且 ＲSD分别为 1. 27%、1. 05%和 1. 09%。结论 本方法准确、简便，重复性好。可用于同时测定香青兰提取物中木
犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、迷迭香酸和田蓟苷的含量。
关键词:香青兰;迷迭香酸;木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷;田蓟苷;高效液相色谱法
doi:10. 11669 /cpj. 2015. 13. 014 中图分类号:Ｒ917 文献标志码:A 文章编号:1001 － 2494(2015)13 － 1138 － 04
Simultaneous Determination the Contents of Phenylpropanoids and Flavonoids in Dracocephalum moldavica
L. Extract
YU Ning1，HE Cheng-hui1，XING Jian-guo1* ，Payiman·Haimiti1，ZENG Cheng2(1. Xinjiang Institute of Meteria Medi-
ca，Urumqi 830004，China;2. Institute of Traditional Chinese Medicine，Xinjiang Medical University，Urumqi 830054，China)
ABSTＲACT:OBJECTIVE To establish an HPLC method for simultaneous detemination the contents of rosmarinic acid (phenylpro-
panoids) ，luteolin-7-O-β-D-glucuronide and tilianin (flavonoids)in Dracocephalum moldavica L. Extract. METHODS The samples
were separated on Purospher STAＲLP ＲP-18 endcapped column(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)by gradient elution with acetonitrile (A)-
0. 5% formic acid solution(B) (0 － 28 min，20% A;28 － 55 min，20%→28% A;55 － 80 min，28%→30% A)as the mobile phase at
a flow ratio of 1. 0 mL·min －1. The detection wavelength was set at 330 nm and the column temperature was maintained at 35 ℃ ． ＲE-
SULTS The calibration curves of rosmarinic acid，luteolin-7-O-β-D-glucuronide，tilianin were in good linearity over the ranges of
2. 184 － 21. 84 μg·mL －1(r = 0. 999 6) ，3. 14 － 31. 84 μg·mL －1(r = 0. 999 6) ，7. 9 － 39. 5 μg·mL －1(r = 0. 999 5)respective-
ly. The average recoveries were 99. 62%，99. 64% and 100. 12% with ＲSD values of 1. 27%，1. 05% and 1. 09% . CONCLU-
SIONThe method is reliable，simple，and accurate，and can be used for the comprehensive quality control of Dracocephalum moldavica
L. extract.
KEY WOＲDS:Dracocephalum moldavica L;rosmarinic acid;luteolin-7-O-β-D-glucuronide;tilianin;HPLC
香青兰(Dracocephalum moldevica L. )为唇形科
植物香青兰的干燥地上部分，具有补益心脑、活血化
瘀、通路开窍之功能，在维吾尔医学和民间用于治疗
冠心病及高血压、寒性神经性头疼、寒性感冒、气管
炎等疾病。香青兰分布于新疆、吉林、辽宁、甘肃、青
海及黑龙江［1］。研究表明，香青兰含有多种具有生
物活性的化学成分，主要含有黄酮类、苯丙素类、三
萜类、甾体类、环烯醚萜类和多糖类等成分，其中，黄
酮类成分是扩张冠脉、降低冠脉血管阻力的主要活
性成分［2-4］，苯丙素类化合物迷迭香酸在香青兰提取
物中含量较高，且文献［5-7］报道其具有抗血栓、抗
血小板凝集、抗炎、抗氧化、抗菌、抗病毒和免疫调节
的作用，这些成分在香青兰开发中的价值很大。结
合药理学研究，采用大孔吸附树脂分离富集技术，筛
选制备总黄酮含量大于 50%的香青兰提取物，阐明
香青兰提取物中含量较高的黄酮类和苯丙素类化合
物的含量，并控制提取物质量，本实验建立了高效液
相色谱同时测定香青兰提取物中 1 种苯丙素类成分
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(迷迭香酸)和 2 种黄酮类成分(木犀草素-7-O-β-D-
葡萄糖醛酸苷和田蓟苷)含量的分析方法［8-10］，为后
期香青兰的综合利用和深入开发研究提供参考。
1 仪器与试药
LC － 20A 型高效液相色谱仪(日本岛津制造
所) ;AB135 － S梅特勒-托利多电子天平(梅特勒-托
利多国际股份有限公司) ;WP-UP-IV － 10 型 Water
Purifier实验室专用超纯水机(四川沃特尔科技发展
有限公司) ;KDM型调温电热套(山东省鄄城永兴仪
器厂) ;KQ －100 DE 型数控超声波清洗器(昆山市
超声仪器有限公司)。
香青兰采自新疆吉木萨尔，经新疆药物研究所
何江副研究员鉴定为唇形科植物香青兰(Dracoceph-
alum moldevica L. )的干燥地上部分;对照品木犀草
素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷和田蓟苷(批号:131227，
131231，上海医药工业研究院，纯度经 HPLC 归一法
测定纯度在 98%以上)。对照品迷迭香酸(批号:
111871-201001，中国食品药品检定研究院)。乙腈
为色谱纯，甲酸为优级纯，水为重蒸水，其余试剂均
为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 溶液的制备
2. 1. 1 香青兰提取物的制备 称取香青兰药材 2
kg，用 20 倍量体积分数 40%乙醇水溶液回流提取 2
次，每次提取 1. 5 h，过滤，浓缩滤液得浓缩液，将浓
缩液采用 HPD 100 型大孔吸附树脂纯化，经水和体
积分数 70%乙醇水溶液分别洗脱，收集体积分数
70%乙醇洗脱液，浓缩，干燥即得香青兰提取物约
97 g。
2. 1. 2 供试品溶液的制备 精密称取香青兰提取
物粉末 20 mg，置 100 mL 量瓶中，加体积分数 70%
乙醇水溶液适量。超声处理(功率 40 W，频率 100
kHz)45 min，使其完全溶解，再加入体积分数 70%
乙醇水溶液定容至刻度，摇匀，经 0. 45 μm 微孔滤
膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。
2. 1. 3 对照品溶液的制备 分别精密称取迷迭香
酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷和田蓟苷对照
品适量，加入适量体积分数 70%乙醇水溶液制成每
1 mL含迷迭香酸 218. 4 μg、木犀草素-7-O-β-D-葡萄
糖醛酸苷 159. 2 μg、田蓟苷 395 μg的混合对照品储
备液。
2. 2 色谱条件
色谱柱:Purospher STAＲLP ＲP-18 endcapped
(4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ，流动相为乙腈(A)和
0. 5%甲酸溶液(B)梯度洗脱(0 ～ 28 min，20% A;
28 ～ 55 min，20%→28% A;55 ～ 80 min，28%→30%
A) ;流速为 1. 0 mL·min －1;检测波长 330 nm;柱
温:35 ℃。在上述色谱条件下，取混合对照品溶液
及供试品溶液各 10 μL进样。香青兰提取物中的 3
个成分与其相邻峰均能达到很好的分离，且分离度
大于 1. 5。色谱图见图 1。
2. 3 线性关系考察
取“2. 1. 3”项下各对照品储备液，分别精密吸
取质量浓度为 218. 4 μg·mL －1的迷迭香酸对照品
溶液 0. 1、0. 3、0. 5、0. 7、1. 0 mL，精密吸取质量浓度
为 159. 2 μg·mL －1的木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛
酸苷对照品溶液 0. 2、0. 5、1. 0、1. 5、2. 0 mL，精密吸
取质量浓度为 395. 0 μg·mL －1的田蓟苷对照品溶
液 0. 2、0. 3、0. 5、0. 7、1. 0 mL，将以上分别精密吸取
的 3 种不同量的对照品溶液分别按由低到高的次序
依次加入至 5 个 10 mL 量瓶中，再分别加体积分数
70%乙醇水溶液稀释至刻度，摇匀，0. 45 μm微孔滤
膜滤过，即得系列混合对照品溶液。取系列混合对
照品溶液各 10 μL，按“2. 2”项下色谱条件进行分
析，以对照品溶液质量浓度 ρ(μg·mL －1)为横坐
标，峰面积 Y 为纵坐标，绘制标准曲线并进行回归
计算，得 3 成分的回归方程，结果见表 1。
图 1 混合对照品(A)与香青兰提取物样品(B)HPLC 色
谱图
1 －木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷;2 －迷迭香酸;3 －田蓟苷
Fig. 1 HPLC Chromatograms of reference substances (A)and-
sample (B)of Dracocephalum moldevica L. extract
1 － luteolin-7-O-β-D-glucuronide;2 － rosmarinic acid;3 － tilianin
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中国药学杂志 2015 年 7 月第 50 卷第 13 期 Chin Pharm J，2015 July，Vol. 50 No. 13
采用信噪比(S /N)法测定 3 个成分的检测限和
定量限。取“2. 1. 3”项下各对照品储备液，分别用
体积分数 70%乙醇水溶液稀释成不同浓度的系列
对照品溶液，按“2. 2”项下色谱条件进行分析，以各
物质峰高约为噪音峰高的 2 ～ 3 倍时的浓度为最低
检测限，以 10 倍信噪比浓度为定量限，结果见表 1。
2. 4 精密度实验
精密吸取混合对照品溶液 10 μL，依“2. 2”项下
色谱条件测定，连续进样 5 次，计算迷迭香酸、木犀
草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷和田蓟苷的峰面积的相
对标准偏差(ＲSD)值，结果迷迭香酸、木犀草素-7-
O-β-D-葡萄糖醛酸苷、田蓟苷的峰面积 ＲSD 值分别
为 0. 89%，0. 88%和 0. 94%，表明精密度良好。
2. 5 稳定性实验
取供试品溶液，室温下放置，分别于 0、2、4、6、
8、12 h依“2. 2”项下色谱条件测定。分别计算迷迭
香酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、田蓟苷的峰
面积相对标准偏差(ＲSD)值，为 1. 12%，0. 97%和
1. 37%，表明供试品溶液在室温放置 12 h 内均
稳定。
2. 6 重复性实验
取同一批香青兰提取物共 6 份，每份 20 mg，精
密称定，依法制备样品，按“2. 2”项下色谱条件测
定，并计算迷迭香酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸
苷和田蓟苷含量的 ＲSD 分别为 1. 11%、1. 56%和
1. 41%。结果表明，该方法重现性好，实验结果
可靠。
2. 7 回收率实验
精密称取已知含量的香青兰提取物约 10 mg，
共 10 份，分别置 100 mL 量瓶中，其中 1 组为空白
组，其余平均分为 3 组，每组分别精密加入 218. 4
μg·mL －1的迷迭香酸对照品溶液 2. 4，3. 4，4. 4 mL;
159. 2 μg·mL －1的木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸
苷对照品溶液 2. 4，3. 4，4. 4 mL;395 μg·mL －1的田
蓟苷对照品溶液 1. 4，2. 0，2. 6 mL，再加体积分数
70%乙醇水溶液溶解定容至刻度，按“2. 1. 2”项下
方法制备供试溶液，并按“2. 2”色谱条件进样分析，
记录峰面积。以外标法计算加样回收率。结果见
表 2。
2. 8 耐用性实验
取同一批香青兰提取物约 20 mg，精密称定，按
“2. 1. 2”项下方法制备供试溶液，分别用 Purospher
STAＲLP ＲP-18 endcapped(4. 6 mm × 250 mm，5
μm)、Diamonsil C18(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)和
Shim-pack ODS(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)3 种品牌
的色谱柱，按“2. 2”项下色谱条件对其进行测定，结
果无明显差别。
2. 9 样品的测定
取不同批次香青兰提取物，按“2. 1. 2”项下
方法制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液 10
μL，按“2. 2”项下色谱条件进行分析，测定峰面
积，按外标法计算各样品中各成分的量，结果见
表 3。
3 结果与讨论
3. 1 提取方法的选择
考察不同提取方法(超声提取法和加热回流提
取法)对香青兰提取物中迷迭香酸、木犀草素-7-O-
β-D-葡萄糖醛酸苷、田蓟苷含量测定的影响，结果表
明，两种提取方法提取的样品中 3 成分含量接近，考
虑超声提取法操作简单，故选择超声提取法;提取溶
剂考察了不同浓度的甲醇和乙醇水溶液作为提取溶
剂的提取效果，迷迭香酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖
醛酸苷和田蓟苷 3 成分含量比较结果为:体积分数
70%乙醇 ＞体积分数 70%甲醇 ＞体积分数 50%乙
醇 ＞体积分数 50%甲醇 ＞体积分数 30%乙醇 ＞体
积分数 30%甲醇，故选择体积分数 70%乙醇水溶液
为提取溶剂;对不同提取时间进行考察，提取时间分
别为 30，45，60 min，结果表明 45 min 可提取完全，
故提取时间定为 45 min。最终确定提取方法为:精
密称取香青兰提取物 20 mg，加入体积分数 70%乙
醇水溶液 100 mL，超声提取 45 min(功率 40 W，频
率 100 kHz)。
3. 2 色谱条件的选择
表 1 香青兰提取物中 3 种成分的线性关系
Tab. 1 Linearity of calibration curves of the three components
Components ρ(linear range)/μg·mL －1 r Ｒegression equation LOD /μg·mL －1 LOQ /μg·mL －1
Ｒosmarinic acid 2. 184 － 21. 84 0. 999 6 Y =2. 92 × 104ρ +4. 73 × 103 0. 109 2 0. 349 4
Luteolin-7-O-β-D-glucuronide 3. 184 － 31. 84 0. 999 6 Y =2. 19 × 104ρ +2. 18 × 103 0. 106 1 0. 382 3
Tilianin 7. 9 － 39. 5 0. 999 5 Y =3. 41 × 104ρ +1. 98 × 104 0. 190 0 0. 632 0
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表 2 香青兰提取物中 3 种成分回收率实验结果
Tab. 2 The results of recovery test of the three compounds
Components
m(sample)
/mg
m(added)
/mg
m(found)
/mg
Ｒecovery
/%
ＲSD
/%
Ｒosmarinic acid 0. 719 3 0. 524 2 1. 243 3 99. 96 1. 39
0. 717 9 0. 524 2 1. 247 2 100. 99
0. 716 5 0. 524 2 1. 231 4 98. 25
0. 723 6 0. 742 6 1. 464 4 99. 76 1. 44
0. 719 3 0. 742 6 1. 468 3 100. 87
0. 715 0 0. 742 6 1. 442 9 98. 02
0. 716 5 0. 961 0 1. 670 0 99. 23 0. 51
0. 722 2 0. 961 0 1. 685 0 100. 19
0. 722 2 0. 961 0 1. 677 9 99. 45
0. 545 9 0. 382 1 0. 920 8 98. 12 1. 52
Luteolin-7-O-β-D-glucu-
ronide
0. 544 8 0. 382 1 0. 925 5 99. 64
0. 543 7 0. 382 1 0. 930 2 101. 16
0. 549 2 0. 541 3 1. 092 3 100. 35 0. 46
0. 545 9 0. 541 3 1. 092 8 101. 05
0. 542 7 0. 541 3 1. 090 6 101. 24
0. 543 7 0. 700 5 1. 239 2 99. 29 0. 99
0. 548 1 0. 700 5 1. 240 6 98. 87
0. 548 1 0. 700 5 1. 253 8 100. 75
0. 843 4 0. 553 0 1. 391 2 99. 05 0. 87
Tilianin 0. 841 8 0. 553 0 1. 387 3 98. 66
0. 840 1 0. 553 0 1. 394 8 100. 31
0. 848 4 0. 790 0 1. 627 3 98. 58 0. 37
0. 843 4 0. 790 0 1. 620 8 98. 40
0. 838 4 0. 790 0 1. 621 3 99. 10
0. 840 1 1. 027 0 1. 872 2 100. 50 0. 69
0. 846 8 1. 027 0 1. 867 6 99. 40
0. 846 8 1. 027 0 1. 865 8 99. 22
表 3 样品香青兰提取物中 3 种成分测定结果． mg·g －1
Tab. 3 Determination of the three components in Dracoceph-
alum moldavica L. extract． mg·g －1
Sample No Ｒosmarinic acid Luteolin-7-O-β-D-glucuronide Tilianin
20140404 72. 23 54. 34 83. 33
20140411 71. 66 55. 01 83. 96
20140429 72. 56 55. 76 82. 53
查阅相关文献［7-10］，分别考察流动相为乙腈-
0. 4%磷酸水溶液(27 ∶ 73)、乙腈-0. 4%磷酸水溶液
(10%→30%)梯度洗脱、乙腈-0. 5% 甲酸水溶液
(20∶ 80) ，发现样品色谱峰中木犀草素-7-O-β-D-葡
萄糖醛酸苷前后有较多杂质峰干扰，不能得到很好
的分离。经调节流动相比例，考察乙腈-0. 5%甲酸
水溶液为流动相的梯度洗脱，结果迷迭香酸、木犀草
素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、田蓟苷三者分离效果均
较好，因此流动相最终确定为乙睛(A)-0. 5%甲酸
溶液为流动相，梯度洗脱(0 ～ 28 min，20% A;28 ～
55 min，20%→28% A;55 ～ 80 min，28%→30% A) ，
流速为 1. 0 mL·min －1，检测波长为 330 nm，柱温为
35 ℃。迷迭香酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷
和田蓟苷分离度均大于 1. 5。
3. 3 不同批次香青兰提取物中 3 成分含量的比较
本实验采用 HPLC梯度洗脱法同时测定香青兰
提取物中 1 种苯丙素类成分(迷迭香酸)和 2 种黄
酮类成分(木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷和田蓟
苷)的含量，并采用该方法分析不同批次香青兰提
取物中 3 成分的含量，方法准确、简便，重复性好。
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(收稿日期:2015-01-28)
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中国药学杂志 2015 年 7 月第 50 卷第 13 期 Chin Pharm J，2015 July，Vol. 50 No. 13