全 文 ：[ 收稿日期] 　2004-09-29
[ 作者简介] 　关丽萍(1970-), 女(满族), 讲师 , 硕士 , 研究
方向为天然化合物的提取 、合成及生物活性研究.
用均匀设计法筛选珍珠梅中槲皮素的最佳提取工艺
关丽萍1 ,权迎春1 ,张学武2 ,金晴昊1
(1.延边大学药学院 , 吉林 延吉 133000;2.延边大学医学院 生物化学与分子生物学教研室 , 吉林 延吉 133000)
[ 摘要] 　[ 目的] 探讨珍珠梅中提取槲皮素的最佳工艺.[方法] 采用均匀设计法 , 以槲皮素的收率作为
主要评价指标 ,考察乙醇浓度 、溶媒用量 、回流时间及回流温度对槲皮素提取的影响 ,筛选出合理的提取
工艺.[ 结果] 槲皮素的最佳提取工艺为所用乙醇浓度为 950 mL/ L , 乙醇用量为药材的 5 倍量 , 提取时
间为60 min ,提取温度为 60 ℃.[结论] 经验证性实验证明所优化的条件可靠 ,适用于提取珍珠梅中的槲
皮素.
[ 关键词] 　植物 ,药用;槲皮素;均匀设计;提取工艺
[ 中图分类号] 　R284.2　　　[ 文献标识码] 　A　　　[文章编号] 　1000-1824(2005)01-0042-03
Explore of a better extraction technique of quercetin in the Sorbaria
sorbifolia
GUAN Li-ping1 , QUAN Ying-chun1 , ZHANG Xue-wu2 , JIN Qing-hao1
(1.Yanbian University College of Pharmacy , Y anji 133000 , Jilin , China;2.Department of Biochemistry and Molecular
Biology , Yanbian University College of Medicine , Yanji 133000 , Jilin , China)
ABSTRACT:OBJECTI VE To explore a bet ter ext raction technique of quercet in in So rbaria sorbi folia.METH-
ODS Using quercetin as the indexes , the effects of alcohol concentration , solvent amount , ext raction time and
ex traction temperature on ex t raction technology were evaluated by uniform design method.RESULTS The su-
perio r technology w as as follows:950 mL/L alcohol , 5-fold solvent amount , 60 minutes and the reflux tempera-
ture is 60 ℃.CONCLUSION The better ex t raction process is proved to be stable and accurate by verificated
test , and it is suitable for ex traction of quercetin in the Sorbaria sorbifolia.
Key words:plants , medicinal;quercetin;uniform design;ext raction technique
　　珍珠梅(Sorbaria sorbifolia)属蔷薇科植
物 ,又称山高粱及八木条 ,广泛分布于我国云
南 、贵州 、四川 、湖北 、甘肃 、宁夏及东北地区 ,
具有活血化瘀及消肿止痛等功效 ,临床上主
要用于治疗骨折及跌打损伤等 ,主要成分为
黄酮类化合物[ 1] ,药理作用有耐缺氧 、保护肝
脏及抗肿瘤等[ 2 , 3] .槲皮素为珍珠梅中黄酮类
化合物的一种 ,具有抗炎 、抗抑郁 、抗自由基
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DOI :10.16068/j.1000-1824.2005.01.013
及抑制酪蛋白激酶 Ⅱ的作用[ 4～ 6] .本实验采
用均匀设计法进行实验 ,筛选出槲皮素最佳
提取工艺 ,为生产工艺的参数选择提供实验
依据.
1　材料
所用仪器有 SCL-10 Avp 型高效液相色
谱仪(日本岛津)、SPD-10 Avp型紫外线可见
检测器(日本岛津)、XW-80 A 旋涡混合器(上
海青浦沪西仪器厂)及 AS 3120 A 型超声波
清洗脱气器(奥特宝恩斯仪器有限公司);所
用试剂有甲醇(色谱纯)及槲皮素(对照品 ,中
国药品生物制品检定所);所用样品采自吉林
省延吉市市郊 ,由延边大学药学院刘永镇教
授鉴定为真品.
2　方法与结果
2.1　因素与水平　根据文献及预试验结果 ,
确定本试验考察的因素与水平为乙醇浓度
(A)、溶媒用量(B)、回流时间(C)及回流温度
(D),具体因素与水平见表 1.采用 U7(76)均
匀设计 ,以珍珠梅中槲皮素的收率作为主要
评价指标 ,同时参考其得膏率 ,筛选槲皮素乙
醇回流提取的最佳条件.
2.2　提取与分离　将珍珠梅粉碎 ,精密称取
20.00 g 置于 250 mL 圆底烧瓶中浸泡过夜 ,
按表 1各水平工艺条件分别进行提取 ,回收
乙醇得浸膏 ,加适量水溶解后过滤 ,滤液用乙
酸乙酯萃取 ,减压蒸除乙酸乙酯 ,干燥残渣 ,
精密称取残渣 0.50 g ,置于 50 mL 量瓶中 ,加
入甲醇溶解并定容于 50 mL ,作为供试品溶
液.利用高效液相色谱法测定槲皮素的收率 ,
结果见表 2.
表 1　均匀设计因素水平表
水平
A
乙醇浓度(mL/ L)
B
溶媒用量(倍)
C
回流时间(min)
D
回流温度(℃)
1 650 6 90 85
2 700 8 180 80
3 750 10 60 75
4 800 5 150 70
5 850 7 30 65
6 900 9 120 60
7 950 11 210 90
表 2　槲皮素的收率及得膏率
水平 槲皮素收率(mg/g) 得膏率(%)
1 1.200 21.4
2 1.600 21.5
3 2.010 22.0
4 0.070 14.3
5 0.065 13.2
6 0.095 12.2
7 1.265 16.4
2.3　含量测定方法的建立与评价
2.3.1 　色谱条件 　色谱柱为 YMC-pack
ODS-A(4.6 mm×250 mm , 5μm)色谱柱 ,流
动相为甲醇-2 g/L 磷酸溶液(50∶50),柱温为
25 ℃,流速为 0.4 mL/min.
2.3.2　标准曲线的绘制
2.3.2.1　对照品溶液的配制　精密称取槲
皮素对照品 50 mg ,置于 50 mL 量瓶中 ,加入
甲醇溶解并定容于 50 mL备用.精密吸取对
照品溶液 1 mL ,置于 100 mL量瓶中 ,加甲醇
稀释至刻度 ,摇匀 ,即得 0.01 g/L 槲皮素溶
液 ,作为对照品溶液.
2.3.2.2　线性范围　取对照品溶液 ,分别进
样 1.0 , 2.5 , 5.0 , 7.5 , 10.0 , 12.5μL ,按色谱
条件测定峰面积积分值.以峰面积为纵坐标 ,
浓度为横坐标 ,绘制标准吸收曲线 ,并用最小
·43·延边大学医学学报　2005 年 3 月　第 28卷　第 1期
二乘法求得回归方程 ,即槲皮素(C)与峰面
积(A)的关系 , A =4 8609 C+7 120.9 ,相关
系数 r=0.999 8.结果表明 ,槲皮素溶液的浓
度在 0.010 ～ 0.125 μg 内时 ,槲皮素峰面积
(A)与浓度(C)之间呈良好的线性关系.
2.4　数据处理与结果分析　将各因素用均
匀设计软件进行多元回归分析处理 ,得出线
性回归方程 Y =1.01+0.024 4 A -0.126
B -0.021D , S =0.0168 , γ=0.999 6 , F t=
1 297.4>F 0.05(3 , 3).根据回归方程可知回流
时间对实验结果无大的影响 ,所以剔除 C 因
素(回流时间),重新进行多元回归分析 ,得到
因素对结果影响的大小顺序依次为 B ,A , D ,
即溶媒用量 、乙醇浓度 、回流温度.由直观分
析得最佳工艺为 A7B4D6 , 即乙醇浓度为
950 mL/L ,溶媒用量为药材的 5 倍量 ,回流
温度为 60 ℃.
2.5　工艺条件的验证　根据回收方程计算
所得的最佳工艺条件下槲皮素收率最大值为
1.60.按优化条件重复进行 3 次实验 ,测定槲
皮素提取液的浓度分别为 1.98 , 1.90 ,
1.96 mg/g ,平均为 1.95 mg/g.
3　讨论
按均匀设计法安排实验条件 ,明显减少
了多影响因素实验的实验次数 ,而本实验所
得出的实验方程可指导今后的实验.按最佳
工艺条件进行验证性实验发现 ,测得的结果
较预测值稍大 ,其原因可能为槲皮素在不同
的提取条件下含量不同所致.根据回归方程
可知 ,溶媒用量 、乙醇浓度及回流温度对槲皮
素提取的影响较大 ,而提取时间对实验结果
的影响不大 ,因此 ,最终筛选出的提取槲皮素
的最佳工艺为乙醇浓度为950mL/ L ,乙醇用
量为药材用量的 5倍 ,提取时间为 60 min ,提
取温度为 60 ℃.
[参　考　文　献]
[ 1] 　江苏新医学院.中华大辞典[ M ] .上海:上海科学技术
出版社 , 1994.8.
[ 2] 　张学武 ,金海玲 , 赵红 ,等.珍珠梅提取物对四氯化碳所
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2001 , 8(6):373.
[ 3] 　Zhang XW , Zhang XB , Quan JS , et al..Inhibitory effect
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2003 , 10(11):1 137.
[ 4] 　Comish KM , Williamson G , Sanderson J.Quercetin
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oxide induced cataract[ J] .Free Radical Biology and
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[ 5] 　俞一心 ,戈升荣 , 王桂珍.槲皮素及其衍生物的药理作
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[ 6] 　康铁邦 ,黄才 , 梁念慈.槲皮素对大鼠肝酪蛋白激酶 Ⅱ
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