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珠子参叶总皂苷抗炎镇痛作用的实验研究



全 文 :珠子参叶总皂苷抗炎镇痛作用的实验研究*
姜 礻韦  考玉萍* *   宋小妹 陕西中医学院 ( 712046)
  摘 要 目的:研究珠子参叶总皂苷的抗炎镇痛作用。 方法:采用小鼠耳廓肿胀、小鼠腹腔毛细血
管通透性、棉球肉芽肿和热板实验。结果:大、中剂量组可对抗二甲苯所致小鼠耳廓肿胀 ,
减少醋酸致小鼠毛细血管通透性增加 ,大剂量组可抑制肉芽组织增生 ,对热板引起的疼
痛有一定的镇痛效果。结论:珠子参叶总皂苷有一定的抗炎镇痛作用。
 主题词 珠子参叶 /药理学 珠子参叶 /化学 人参皂苷 /药理学 @抗炎镇痛
  珠子参叶 ,亦称汉中参叶 ,为五加科植物珠子参 ( Panax
japonicus C. A. Mey. v a r. ma jo r( Burk) C. Y. Wu et K. M. Feng
的干燥带茎叶 ,珠子参叶作为民间药 ,具有清热解毒 ,滋补强壮
等功效。在民间多以其叶泡茶饮用以保护嗓音。化学研究证明 ,
珠子参叶主要化学成分为多种皂苷类 ,主要有人参皂苷 Re、
Rg1、 Rg2、 F2、、 Rd、 Rb3、 Rb1、 Rc、珠子参苷 R1, R2 , F1, F2,
F3, F4, F5, F6。 但对珠子参叶的药理研究尚未见报道。
1  实验材料与仪器
1. 1  动物  昆明种小鼠 ,雌雄各半 ,体重 18~ 22g ,由第
四军医大学提供。
1. 2  药品  珠子参叶总皂苷水溶液: 珠子参叶 (购于陕
西宁强 ,经陕西中医学院生药教研室雷国莲教授鉴定为珠子参
的干燥带茎叶 ) ,大剂量: 每毫升相当于生药 0. 500g;中剂量:每
毫升相当于生药 0. 250g;小剂量:每毫升相当于生药 0. 125g。
阿司匹林: 5片配成 100 m l混悬液 ,用时摇匀。西安博华制
药有限责任公司 ,批号: 0701004。
伊文思蓝 (上海化学试剂公司 ,批号 040304)。 其他试剂均
为分析纯。
1. 3 仪器  UV-1102型紫外 -可见分光光度计 (上海天
美科学仪器有限公司 ) ;萨多利斯 GB204-电子天平 (瑞典 )。
2  实验方法
2. 1  小鼠耳廓肿胀实验  取小鼠 50只 ,雌雄各半 ,随机
均分为 5组。大、中、小剂量灌胃珠子参叶总皂苷 0. 4 ml /只 ,空
白组给予等量生理盐水 ,对照组灌胃给予阿司匹林 0. 4 m l /只。
连续给药 7天 ,末次给药后 1h ,将 20μl二甲苯涂于小鼠右耳廓
两面致炎 ,左耳不涂为对照 , 2h后将小鼠麻醉 ,剪下双耳 ,用直
径 6mm的打孔器分别在同一部位打下圆耳片 ,称重 ,以左右耳
片重量差作为肿胀度 ,计算肿胀率 (右耳重减左耳重的平均值
除左耳重平均值 )。
2. 2  小鼠毛细血管通透性实验  取小鼠 50只 ,雌雄各
半 ,随机均分为 5组。给药方法及剂量同实验 2. 1项 ,末次给药
后 1h,尾静脉注射 0. 5%伊文思蓝溶液 0. 20ml /只 , 立即腹腔
注射 0. 6%醋酸 0. 2ml /只 , 20min后 ,断头处死小鼠 ,剪开腹腔
用 5ml生理盐水冲洗腹腔数次 ,收集洗涤液 ,离心 5min
( 1000r /min) ,在紫外分光光度计 590nm处测定吸收度 (值 )。
2. 3  小鼠肉芽肿增生实验  取小鼠 50只 ,雌雄各半 ,将
* 陕西省中医管理局科研课题 (课题编号: 2005095)
* * 陕西省中医医院 ( 710003)
两个 20mg的无菌棉球分别植入两侧腋下。术后随机分为 5组 ,
每组 10只 , 1h后开始给药 ,给药方法及剂量同实验 2. 1项 ,。第
14天处死小鼠 ,取出棉球肉芽肿组织 ,于 60℃烘干 ,称重 ,减去
原棉球重量 ,即为肉芽肿净重。
2. 4  小鼠热板法致痛试验  取雌性小鼠 50只 ,随机均
分为 5组。给药方法及剂量同实验 2. 1项。调恒温水浴温度至
55~ 56℃ ,将铁板置于恒温水浴上 ,预热 10min。对小鼠进行痛
阀值筛选 (以 5~ 30s内舔足者为及格 ,跳跃者弃之不用 ) ,挑选
表现合格的 30只小鼠 ,给药方法及剂量同实验 2. 1项 ,分别在
给药前 30min及给药后 30、 60、 90min测定各组小鼠的痛阈值
(痛阈值为小鼠从被放到铁板上到其第 1次舔其后足的时间 )。
3  实验结果
3. 1  珠子参叶总皂苷对小鼠耳廓肿胀的影响  与对照
组比较 ,大、中剂量珠子参叶总皂苷均能对抗二甲苯所致小鼠
耳廓肿胀作用。 结果见表 1。
表 1 珠子参叶总皂苷对小鼠耳廓肿胀率的影响 (x-± s )
组 别 剂量 肿胀度 ( g ) 肿胀率 (% )
生理盐水 0. 4 ml /只 0. 0032± 0. 0011 39
阳性对照 0. 4 ml /只 0. 0024± 0. 0005 29
大剂量 0. 4 ml /只 0. 0026± 0. 0007
- 0. 0019± 0. 0014* 32
中剂量 0. 4 ml /只 0. 0027± 0. 0009
- 0. 0018± 0. 0017* 33
小剂量 0. 4 ml /只 0. 0026± 0. 0009 35
   P < 0. 05,与生理盐水组比较* P < 0. 01; n= 10
   3. 2 珠子参叶总皂苷对小鼠毛细血管通透性的影响 
与对照组比较 ,大、中剂量珠子参叶总皂苷均能明显降低醋酸
所致小鼠毛细血管通透性的作用。 结果见表 2。
表 2  珠子参叶总皂苷对小鼠毛细血管
通透性的影响 ( x-± s )
组 别 剂量 吸收值 ( ABS)
生理盐水 0. 4 ml /只 0. 460± 0. 067
阳性对照 0. 4 ml /只 0. 213± 0. 061
大剂量 0. 4 ml /只 0. 269± 0. 063
- 0. 191± 0. 149*
中剂量 0. 4 ml /只 0. 329± 0. 044
- 0. 131± 0. 130*
小剂量 0. 4 ml /只 0. 381± 0. 116
   P < 0. 05,与生理盐水组比较* P < 0. 01; n= 10
732 陕西中医 2008年第 29卷第 6期
   3. 3 珠子参叶总皂苷对小鼠肉芽肿的影响  与对照组
比较 ,大剂量珠子参叶总皂苷能明显降低肉芽组织的增生。 结
果见表 3。
表 3 珠子参叶总皂苷对小鼠肉芽肿的影响 (x-± s )
组 别 剂量 棉球重 ( g )
生理盐水 0. 4 ml /只 0. 0102± 0. 0034
阳性对照 0. 4 ml /只 0. 0056± 0. 0015
大剂量 0. 4 ml /只 0. 0052± 0. 0012
- 0. 0050± 0. 0047*
中剂量 0. 4 ml /只 0. 0086± 0. 0012
小剂量 0. 4 ml /只 0. 0088± 0. 0013
   P < 0. 05,与生理盐水组比较* P < 0. 01; n= 10
   3. 4 珠子参叶总皂苷对小鼠热板法致痛的影响  与对
照组比较 ,大、中剂量珠子参叶总皂苷均能明显升高小鼠的痛
阈值。 结果见表 4。
  讨 论  本实验证明 ,珠子参叶总皂苷能升高小鼠的痛
阈值 ,能对抗二甲苯所致小鼠耳廓肿胀和降低醋酸所致小鼠毛
细血管通透性 ,表明珠子参叶总皂苷对小鼠急性炎症模型有明
显对抗作用。 小鼠肉芽肿增生实验表明有抑制慢性炎症的作
用 ,而且 ,抗炎作用均随剂量的增加而增强。本实验结果为珠子
参叶的民间用药提供了科学依据 ,同时 ,为珠子参叶的进一步
开发奠定了一定的基础。
表 4  珠子参叶总皂苷对小鼠痛阈值的影响
组 别 剂量   痛阈值前 30min 后 30min 后 60min 后 90min
生理盐水 0. 4 ml /只   21. 14± 2. 85 28. 43± 5. 18 27. 14± 7. 62 28. 71± 4. 66
阳性对照 0. 4 ml /只   28. 57± 5. 18 38. 86± 5. 18 41. 29± 11. 65 37. 29± 10. 18
大剂量 0. 4 ml /只   22. 43± 4. 10 45. 86± 5. 18 40. 86± 10. 41 37. 00± 9. 17
16. 00± 14. 58*
中剂量 0. 4 ml /只   21. 57± 2. 90 37. 29± 7. 91
15. 43± 13. 96*
35. 43± 7. 05
16. 29± 15. 06* 31. 86± 5. 47
小剂量 0. 4 ml /只   21. 29± 2. 95 34. 14± 5. 18 33. 43± 7. 06 24. 43± 5. 34
     P < 0. 05,与生理盐水组比较* P < 0. 01; n= 10
参考文献
[ 1 ] 陈  奇 .中药药理研究方法学 [ M ].北京: 人民卫生
出版社 , 1993.
[ 2] 徐  虹 ,姜 礻韦等 .汉中参叶总皂苷提取工艺研究 ,
现代中医药 , 2007, 27( 3): 78.
(收稿 2007-11-15;修回 2008-02-25)
HPLC法测定厚朴酚含量的探讨
丁郁文 西安医学院 ( 710068)
 摘 要 目的: 建立 HPLC法测定厚朴有效成分厚朴酚的含量。方法: 采用 C18色谱柱 ( 4. 6 mm×
250mm, 5μm) ,流动相为甲醇∶水 ( 85∶ 15) ;流速 0. 80ml /min;柱温室温 ;检测波长
294nm。结果:在 10~ 40μg /ml范围内呈良好线性关系 ; r= 0. 9996平均回收率为 99. 6% ,
RSD= 0. 38%。 结论:本法结果准确 ,重现性好 ,可作为厚朴中有效成分厚朴酚的定量分
析。
 主题词 厚朴 /化学 厚朴酚 /分析 色谱法 ,高压液相
   厚朴 ,为木兰科植物厚朴 Magnolia officina lis Rehd.
etWils.或凹叶厚朴 Magnolia o fficinalis Rehd. et Wils. v ar.
biloba Eehd. etWils.的干燥干皮、根皮及枝皮 ,具有燥湿、行气、
除螨的功效 ,临床用于治疗湿滞伤中、脘脾吐泻、食积气滞、痰
水喘咳等症。其主要抗炎、抗溃疡、止咳平喘有效成分为苯丙素
酚类化合物厚朴酚。
仪器与试药  高效液相色谱仪 (美国 SSI高压恒流泵 ;
Model1500紫外可变波长监测器 ) ;厚朴酚对照品 (中国药品生
物制品检定所 ,供含量测定用 ) ;厚朴粗品 (自制 );甲醇为色谱
纯。
色谱条件  Diamondsil C18色谱柱 ( 4. 6mm× 250mm, 5μm
迪马公司 ) ;流动相甲醇∶水 ( 85∶ 15); 流速 0. 80ml /min;柱温
室温 ;检测波长 294nm;理论板数以厚朴酚峰计算不少于 3800。
厚朴酚峰保留时间为 10. 93min,分离度大于 1. 5。
对照品溶液的制备  精密称取厚朴酚对照品适量 ,加甲
醇制成每毫升含厚朴酚 0. 50mg的溶液。
供试品溶液的制备  取本品约 0. 5g ,精密加甲醇 25ml,密
塞 ,称定重量 ,超声处理 40min,放冷 ,再称定重量 ,加甲醇补足
减少的重量 ,滤过 ,精密量取续滤液 5ml,置 25ml量瓶中 ,加甲
醇至刻度 ,摇匀。
733陕西中医 2008年第 29卷第 6期