全 文 ：［收稿日期］ 20131102(006)
［基金项目］ 国家“重大新药创制”科技重大专项(2009ZX09103-370) ;教育部中央高校基本科研业务费专项资金(WJTU09CX063)
［第一作者］ 许科科，在读硕士，从事中药药理研究，E-mail:759780290@ qq． com
［通讯作者］ * 闫智勇，博士，教授，从事神经及肿瘤药理研究，Tel:028-66367214，E-mail:yzhiy@ swjtu． edu． cn
蜘蛛香总环烯醚萜中 chlorovaltrate和蜘蛛香素 B的测定
许科科1，李少华1，左长英1，陈朝勇1，张瑞桐1，兰明1，林玉1，张天娥2，闫智勇1*
( 1. 西南交通大学生命科学与工程学院，成都 610031;
2. 成都中医药大学基础医学院，成都 611137)
［摘要］ 目的:运用高效液相色谱法测定蜘蛛香总环烯醚萜中 chlorovaltrate 和蜘蛛香素 B 的含量。方法:采用高效液相
色谱法，waters C18色谱柱(4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ;chlorovaltrate和蜘蛛香素 B的流动相分别为乙腈-水(60∶ 40) ，(50∶ 50) ;检
测波长分别为 254，203 nm;流速均为 1. 0 mL·min －1;柱温均为 30 ℃。结果:蜘蛛香总环烯醚萜中 chlorovaltrate 和蜘蛛香素 B
进样量分别在 15. 5 ～ 155，20 ～ 200 pg与各自峰面积积分值呈良好线性关系(r分别为 0. 998 6，0. 998 7) ;测得 chlorovaltrate和
蜘蛛香素 B含量分别为 8. 91，7. 00 mg·g －1。结论:确定了蜘蛛香总环烯醚萜中 chlorovaltrate和蜘蛛香素 B的含量，为蜘蛛香
总环烯醚萜的质量控制提供了一定依据。
［关键词］ 蜘蛛香总环烯醚萜;chlorovaltrate;蜘蛛香素 B
［中图分类号］ Ｒ284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2014)16-0064-03
［doi］ 10． 13422 / j． cnki． syfjx． 2014160064
［网络出版地址］ http:/ /www． cnki． net /kcms /detail /11． 3495． Ｒ． 20140627． 0946． 103． html
［网络出版时间］ 2014-06-26 11:10
Content Determination of Chlorovaltrate and Valjatrate B in Total Iridoids
of Valerianae Jatamansi Ｒhizoma et Ｒadix
XU Ke-ke1，LI Shao-hua1，ZUO Chang-ying1，CHEN Chao-yong1，ZHANG Ｒui-tong1，
LAN Ming1，LIN Yu1，ZHANG Tian-e2，YAN Zhi-yong1*
(1. School of Life Science and Engineering，Southwest Jiaotong University，Chengdu 610031，China;
2. School of Basic Medical，Chengdu University of Traditional Chinese Medicine，Chengdu 611137，China)
［Abstract］ Objective:The purpose of this study was to determine the content of chlorovaltrate and
valjatrate B in total Iridoids of Valerianae Jatamansi Ｒhizoma et Ｒadix． Method:HPLC method was adopted． The
chromatographic column was waters C18 column (4. 6 mm ×250 mm，5 μm) ;the mobile phase for chlorovaltrate and
valjatrate B was acetonitrile water (60∶ 40) ，(50∶ 40) ;the detection wavelength for chlorovaltrate and valjatrate B
were 254，203 nm;the flow rate was 1. 0 mL·min －1;the column temperature was 30 ℃． Ｒesult:The fine linear
correlation displayed when the injection volumn were 15. 5-155 pg (r = 0. 998 6) ，20-200 pg (r = 0. 998 7)for
chlorovaltrate and valjatrate B in total iridoids of Valerianae Jatamansi Ｒhizoma et Ｒadix，respectively． The contents
of chlorovaltrate and valjatrate B were 8. 91 mg·g －1 and 7. 00 mg·g －1，respectively． Conclusion:The contents of
chlorovaltrate and valjatrate B in total Iridoid of Valerianae Jatamansi Ｒhizoma et Ｒadix were determined to provide
evidence for quality control of total iridoids of Valerianae Jatamansi Ｒhizoma et Ｒadix．
［Key words］ total iridoids of Valerianae Jatamansi Ｒhizoma et Ｒadix;chlorovaltrate;valjatrate B
·46·
第 20 卷第 16 期
2014 年 8 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 20，No． 16
Aug．，2014
蜘蛛香是败酱科植物蜘蛛香的根及根茎。曾载
于《本草纲目》［1］，在多版《中国药典》中也有收载，
功能镇静安神、理气止痛、消食止泻、祛风除湿，治疗
脘腹胀痛、食积不化、腹泻痢疾、风湿痹痛、腰膝酸
软、失眠［2］。蜘蛛香中主含环烯醚萜类、挥发油类、
黄酮类等［3-4］化学成分，具有镇静催眠、抗肿瘤、降
血脂、抗焦虑等药理作用［5-8］。
本课题组在研发蜘蛛香总环烯醚萜抗焦虑中药
新药过程中，分离纯化得到 chlorovaltrate、蜘蛛香素
B等 20 余种环烯醚萜类单体化合物。chlorovaltrate
曾先后被 Fuzzati［9］等、Lin［10］等从蜘蛛香中分离纯
化得到，具有抗真菌［9］，抑制肺癌、前列腺癌、肝癌、
结肠癌等多种肿瘤细胞［10］，适度的神经保护作
用［11］;蜘蛛香素 B是本课题组首次从蜘蛛香中分离
得到，具有一定的神经保护作用［12］，两者皆是蜘蛛
香中重要的环烯醚萜类成分。本实验拟通过测定这
两种成分在蜘蛛香总环烯醚萜中的含量，为其质量
标准的制定提供一定的参考依据，相关研究尚未发
现有公开的报道。
1 仪器与试药
LC20A高效液相色谱仪(SPD-20A 检测器，LC-
20AT泵，CBM-102，Chromato-Solution Light 软件，日
本岛津) ，TU-1901 型双光束紫外-可见分光光度计
(北京普析通用仪器有限责任公司) ，BSA224S 型精
密天平(赛多利斯科学仪器有限公司)。
蜘蛛香总环烯醚萜由西南交通大学生命学院实
验室制备，chlorovaltrate和蜘蛛香素 B 对照品(实验
室自制，纯度≥95%) ，甲醇、乙腈(色谱纯，美国
Fisher公司) ，二次蒸馏水(成都恒信化学试剂有限
公司)。
2 方法与结果
2. 1 对照品溶液的制备 精密称取 chlorovaltrate 对
照品适量，加甲醇溶解后定容至25 mL量瓶中，得 628
mg·L －1的母液，摇匀;精密吸取上述母液适量，甲醇
溶解稀释为 7. 75 mg·L －1 的溶液，摇匀，作为
chlorovaltrate对照品贮备液。精密称取蜘蛛香素 B
对照品适量，甲醇溶解定容，再精密吸取适量稀释为
10. 0 mg·L －1的蜘蛛香素 B对照品贮备液。
2. 2 供试品溶液的制备 精密称取蜘蛛香总环烯
醚萜样品 6. 0 mg，甲醇溶解并定容至 25 mL 量瓶
中，摇匀;从中精密吸取 5 mL置 25 mL量瓶中，甲醇
定容至刻度，摇匀;经 0. 45 μm 的微孔滤膜过滤，取
续滤液作为供试品溶液。
2. 3 色谱条件 测定 chlorovaltrate waters C18色谱
柱(4. 6 mm × 250 mm，5 μm，美国 Phenomenex 公
司) ，流动相乙腈-水(60 ∶ 40) ，检测波长 254 nm，流
速 1. 0 mL·min －1，柱 温 30 ℃，理 论 板 数 按
chlorovaltrate峰计算不低于 5 000。见图 1。
A. 对照品;B. 供试品;1. chlorovaltrate
图 1 蜘蛛香环烯醚萜类有效部位 chlorovaltrate HPLC
测定蜘蛛香素 B waters C18色谱柱(4. 6 mm ×
250 mm，5 μm，美国 Phenomenex 公司) ，流动相乙
腈-水(50 ∶ 50) ，检测波长 203 nm，流速 1. 0 mL·
min －1，柱温 30 ℃，理论板数按蜘蛛香素 B峰计算不
低于 5 000。见图 2。
A. 对照品;B. 供试品;1. 蜘蛛香素 B
图 2 蜘蛛香环烯醚萜类有效部位蜘蛛香素 B含量 HPLC
2. 4 线性关系考察 在各自的色谱条件下，分别精
密吸取对照品溶液 2，4，8，12，16，20 μL，进样测定。
以对照品质量(pg)为横坐标，峰面积为纵坐标，绘
制标准曲线。chlorovaltrate回归方程 Y = 116. 24X +
42. 455(r = 0. 998 6) ，结果表明 chlorovaltrate 在
15. 5 ～ 155 pg与峰面积呈良好的线性关系。蜘蛛香
素 B回归方程 Y = 131. 48X + 191. 79(r = 0. 998 7) ，
结果表明蜘蛛香素 B在20 ～ 200 pg与峰面积有良好
的线性关系。
·56·
许科科，等:蜘蛛香总环烯醚萜中 chlorovaltrate和蜘蛛香素 B的测定
2. 5 精密度试验 分别精密吸取 chlorovaltrate、蜘
蛛香素 B对照品溶液各 20 μL，重复进样 5 次，记录
峰面积，测得 ＲSD 分别为 0. 049%，0. 26%，表明仪
器精密度良好。
2. 6 重复性试验 分别称取同批蜘蛛香总环烯醚
萜样品 5 份，按供试品溶液制备方法操作，按照 2. 3
项下方法分别进样 20 μL，测定，测得两者的 ＲSD分
别为 0. 42%，1. 45%，表明方法重复性良好。
2. 7 稳定性试验 精密吸取供试品溶液 20 μL，分
别于制备后 0，4，8，12，24，48 h 测定峰面积，计算
chlorovaltrate、蜘蛛香素 B含量 ＲSD分别为 1. 83%，
0. 61%，表明本品 48 h内稳定性良好。
2. 8 样品含量测定 分别精密吸取 chlorovaltrate、
蜘蛛香素 B供试品溶液各 20 μL，按 2. 3 项下色谱
条件进样分析，测定按 2. 4 项下方法计算样品中
chlorovaltrate、蜘蛛香素 B 的含量。结果表明，样品
中 chlorovaltrate、蜘蛛香素 B 的质量分数分别为
8. 91，7. 00 mg·g －1。
3 讨论
前期研究中，本课题组通过正交试验，得到了蜘
蛛香总环烯醚萜优化的提取工艺，即蜘蛛香药材
70%乙醇浸提 2 次，第 1 次 8 倍量浸渍提取 24 h，第
2 次 6 倍量 12 h，抽滤，合并滤液，减压浓缩至干。
然后通过对浸膏上样量与树脂湿重比例，洗脱剂浓
度梯度，洗脱剂用量等因素的考察，确定蜘蛛香总环
烯醚萜优化的纯化工艺为:D101 树脂，浸膏比上样
量 72 mg·g －1，上样静置 30 min后，依次用 6 BV水、
4 BV 60%乙醇、4 BV95%乙醇洗脱，收集 95%洗脱
部分，减压浓缩至干，得到的蜘蛛香总环烯醚萜含量
不低于 70%。
为了更好的对蜘蛛香总环烯醚萜进行质量控
制，本课题组对 chlorovaltrate、蜘蛛香素 B 这两个重
要的环烯醚萜指标成分进行了含量检测。但发现蜘
蛛香总环烯醚萜中 chlorovaltrate和蜘蛛香素 B 的含
量较少。下一步，本课题组拟在总环烯醚萜中寻找
含量更高、更具有代表性的指标性成分，以更好的对
蜘蛛香总环烯醚萜进行质量控制。
［参考文献］
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中国，201310077809. X［P］． 2013-06-12.
［责任编辑 顾雪竹］
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中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 20，No． 16
Aug．，2014