全 文 ：[ 收稿日期] 　2003-08-12
[ 作者简介] 　张学武(1973-), 男 , 讲师 , 医学硕士 , 研究方
向为肝脏生物化学.
珍珠梅提取物中活性成分的分离及对自由基的清除作用
张学武1 ,关丽萍2 ,权迎春2 ,金明1 ,朴春梅1 ,崔长旭1
(1.延边大学医学院 生物化学与分子生物学教研室 , 吉林 延吉 133000;2.延边大学药学院 药物分析教研室 , 吉林 延吉
133000)
[ 摘要] 　 [目的] 探讨珍珠梅提取物中活性成分的分离方法及对自由基的清除作用.[ 方法] 用硅胶柱
色谱法对珍珠梅提取物进行分离纯化 ,通过物理化学常数和光谱分析法鉴定分离出的化合物结构.用四
氯化碳制作急性肝损伤模型 ,观察珍珠梅活性成分对大鼠血清 、肝匀浆 、肝线粒体超氧化物歧化酶及谷
胱甘肽过氧化物酶活性及丙二醛含量的影响.[ 结果] 从珍珠梅提取物中分离出 4 种化合物 , 分别为
5 , 2′, 4′-三羟基-6 , 7 , 5′-三甲氧基黄酮(Ⅰ)、5 , 7-二羟基-8-甲氧基黄酮(Ⅱ)、丁二酸(Ⅲ)及对羟基苯甲酸
(Ⅳ);珍珠梅提取物中的活性成分对急性肝损伤大鼠血清 、肝匀浆及线粒体超氧化物歧化酶及谷胱甘肽
过氧化物酶的活性具有明显的升高作用 ,并具有降低丙二醛含量的作用.[ 结论] 从珍珠梅提取物中分
离出的 4 种化合物中化合物Ⅰ , Ⅲ是首次得到的 , 具有清除自由基的作用.
[ 关键词] 　自由基类;植物 , 药用;大鼠
[ 中图分类号] 　R285.5　　　[ 文献标识码] 　A　　　[文章编号] 　1000-1824(2003)04-0258-03
Studies on extraction and isolation of active constituents from Sorbaria
Sorbifolia and clear free radicals effect of the constituents
ZHANG Xue-wu1 , GUAN Li-ping2 , QUAN Ying-chun2 , JIN Ming1 , PIAO Chun-mei1 , CUI Chang-xu1
(1.Department of Biochemical and Molecular Biology , Yanbian University College of Medicine , Yanji 133000 , Jilin , China;
2.Department of Pharmaceutical Analysis , Yanbian University College of Pharmacy , Yanji 133000 , Jilin , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE To study the constituents f rom the Sorbaria Sorbi folia and its effects of clearing
free radicals.METHODS The consti tuents were isolated wi th silia gel column chromatography and indent ified
by phy sicochemical properties and spect roscopic analysis.The models of acute hepatic injury were established by
the subcutaneous injection of carbon tet rachlo ride in rats , and the activity of SOD and GSH-PX and the content
of MDA were measured by colorimetric method.RESULTS Four compounds w ere isolated from its ethy l acetate
ex tract and identified as 5 , 2′, 4′-trihydroxy-6 , 7 , 5′-trimet hoxyflavone(Ⅰ), 5 , 7-hydroxy-8-methoxy flavone
(Ⅱ), succinic acid(Ⅲ)and phydro xybenzoic acid(Ⅳ).The ext ract from Sorbaria Sorbi fol ia rised significantly
the activity of SOD and GSH-PX , and decreased the content of MDA in serum of rat acute hepatic injury ,
respectively.CONCLUSION Compounds Ⅰand Ⅲ were isolated f rom the Sorbaria Sorbifolia ethyl acetate for
the f irst time , and i t could clear free radicals in serum , liver cell homogenate and liver cell mitochondria of rat
acute hepatic injury .
Key words:free radicals;plants , medicinal;rats
　　珍珠梅(Sorbaria Sorbi folia)属蔷薇科植
物 ,又称山高粱或八木条 ,广泛分布于云南 、
贵州 、四川 、湖北 、甘肃 、宁夏及东北 ,具有活
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DOI :10.16068/j.1000-1824.2003.04.010
血化瘀 、消肿止痛 、治疗骨折及跌打损伤的作
用 ,其主要成份为黄酮类化合物[ 1] .1980 年
代初期 ,国内学者研究发现 ,珍珠梅水提取物
具有抗缺氧作用[ 2] ,而且珍珠梅提取物对亚
硝酸钠和四氯化碳所致急性肝损伤具有保护
作用[ 3] ,对大鼠肝脏癌前病变具有抑制作
用[ 4] .本实验从珍珠梅中分离出了 4 种化合
物 ,其中 5 , 2′, 4′-三羟基-6 , 7 , 5′-三甲氧基黄
酮及丁二酸为首次从珍珠梅中获得 ,并用分
离物进行了清除自由基实验 ,为进一步系统
地研究该植物的药用价值提供了实验依据.
1　材料
仪器为 XRC-1 型显微熔点测定仪(北京
桂兴仪器公司)、Perkin-Elmer 577 红外光谱
仪(KBr压片)、UV-210 A 紫外光谱仪(日本
岛津制作所)、VG-7070 H 型质谱仪(美国安
捷仑公司)、JEOL-300型核磁共振仪(瑞士布
普特公司)、Centrikon-1055型超速离心机(日
本岛津制作所)、CSS-200 型超声波粉碎机及
722型分光光度计(厦门分析仪器厂).薄层
色谱硅胶GF254和柱层色谱硅胶 H 为青岛海
洋化工厂产品 ,超氧化物歧化酶及丙二醛试
剂盒为南京建成生物工程研究所产品 ,其他
试剂均为国产分析纯.
2　方法与结果
2.1　提取与分离　珍珠梅采集于吉林省延
吉市市郊 ,由延边大学药学院刘永镇教授鉴
定为真品.取晒干的珍珠梅茎 、叶及花 15 kg ,
粉碎后用乙酸乙酯回流提取 3 次 ,每次 2 h ,
提取液减压浓缩 ,得粘稠浸膏 450 g.用少量
乙酸乙酯溶解浸膏 ,拌入 450 g 硅胶 ,干燥后
上硅胶柱 ,反复分离 ,氯仿-甲醇梯度洗脱及
重结晶 ,分别获得 4种化合物Ⅰ ～ Ⅳ.
2.2　结构鉴定 　化合物 Ⅰ为黄色粉末 ,
C18H16O8 ,熔点在 300 ℃以上 ,盐酸-镁粉反应
呈阳性.UVλmaxMeOH nm:337 , 274 , 263;IR
(KBr)cm-1:3 415(-OH), 3 200(-OH), 1 640
(-CO-), 1 605(Ar-).EI-MS m/ z:360(M + ,
100), 345(90), 331(19), 317(13), 314(20),
181(34), 167(7), 165(25), 153(29).1HNM R
(DMSO-d6)δ:3.72(3H , s ,-OCH3), 3.74(3H ,
s ,-OCH3), 3.73(3H , s ,-OCH3), 6.07(1H , s ,
3′-H), 6.45(1H , s , 6′-H), 6.14(1H , s , 3-H),
10.02(1H , br. s ,-OH), 10.44(1H , br. s ,
-OH).13CNM R(DMSO-d6)δ:57.0(-OCH3),
57.1(-OCH3), 56.3(-OCH3), 162.6(C-2),
98.6(C-3), 184.6(C-4), 153.2(C-5),
129.7(C-6), 159.1(C-7), 95.7(C-8),
153.7(C-9), 105.3(C-10), 107.3(C-1′),
152.3(C-2′), 104.8(C-3′), 144.7(C-4′),
142.1(C-5′), 111.9(C-6′).分析以上数据可
确定为 5 , 2′, 4′-三羟基-6 , 7 , 5′-三甲氧基黄
酮.化合物Ⅱ为黄色针晶 , C3H 6O ,熔点在 202
～ 204 ℃,盐酸-镁粉反应呈阳性 ,波谱数据与
文献[ 1]相一致 ,确定为 5 , 7-二羟基-8-甲氧基
黄酮.化合物 Ⅲ为白色方晶 , C4H 6O4 ,熔点在
181 ～ 183 ℃,波谱数据与丁二酸相一致 ,并
与丁二酸做薄层对照 , R f 值相同 ,确定该化
合物为丁二酸.化合物 Ⅳ为无色方晶 ,
C7H6O ,熔点在 212 ～ 213 ℃,波谱数据与对
羟基苯甲酸相一致 ,并与对羟基苯甲酸做薄
层对照 , R f 值相同 ,确定该化合物为对羟基
苯甲酸.
2.3　清除自由基实验
2.3.1 　被检物的制备及检测方法 　取
Wistar大鼠 30 只 ,由延边大学医学院实验动
·259·延边大学医学学报　2003 年 12月　第 26 卷　第 4 期
物科提供 ,体重为 150 ～ 180 g ,随机分为正常
组 、模型组及给药组.珍珠梅提取物按 0.8
g/kg灌胃给药 ,正常组和模型组给予等容量
生理盐水 ,每日 1次 ,连续给药 5 d.给药第 4
日 ,除按 5.0 mL/kg 剂量往正常组大鼠背部
皮下注射生理盐水外 ,按 5.0 mL/kg 剂量给
其他各组大鼠背部皮下注射四氯化碳 , 24 h
后眼球取血 ,分离血清;处死大鼠后 ,迅速取
出肝脏 ,称取 1.0 g 新鲜肝组织放入置有冰冷
的匀浆介质(pH 为 7.5 , 0.25 mol/ L 蔗糖 ,
5 mmol/L Tris-盐酸及 1 mmol/L EDTA)的玻
璃匀浆器中 ,在冰浴中制成 100 g/ L匀浆 ,在
2 000 r/min 下离心 10min ,取上清液 ,为肝匀
浆;用低温超速离心机以 16 000 r/min 离心
20 min ,取其沉淀部分 ,即为线粒体.再加入
同样匀浆介质 2 mL ,用超声波打碎线粒体膜
性结构 ,制成线粒体悬浮液.用比色分析法检
测大鼠血清 、肝匀浆及肝线粒体中的超氧化
物歧化酶及谷胱甘肽过氧化物酶的活性和丙
二醛的含量.采用双缩脲法测定蛋白质的
含量.
2.3.2　统计学处理　数据以平均值±标准
偏差表示 ,应用 SPSS 10.0统计软件进行方
差分析.
2.3.3　珍珠梅活性成分分离物对超氧化物
歧化酶 、谷胱甘肽过氧化物酶活性及丙二醛
含量的影响　四氯化碳所致肝损伤模型组大
鼠血清超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物
酶活性明显降低 ,丙二醛含量明显升高.与模
型组比较 ,珍珠梅活性成分分离物(给药组)
明显升高四氯化碳所致急性肝损伤大鼠血清
超氧化物歧化酶及谷胱甘肽过氧化物酶的活
性 ,降低丙二醛的含量(P <0.05 或 P <
0.01),见 Table 1.
Table 1　Effects of Sorbaria sorbifolia extract on SOD , GSH-PX and MDA in serum , liver cell homogenate and liver cell mitochon-
dria of rat acute hepatic injury( x±SD)
group number
SOD
serum
(U/mL)
liver cell
homogenate(U/mL)
liver cell
mitochondria(U/mL)
GSH-PX
serum
(U/mL)
liver cell
homogenate(U/mL)
liver cell
mi tochondria(U/mL)
M DA
serum
(nmol/ L))
liver cell
homogenate(mmol/ kg)
liver cell
mitochondria(mmol/ kg)
model 9 14.5±6.2 20.1±6.5 22.3±9.3 2.7±1.0 5.4±1.3 7.0±3.6 2.7±0.8 6.9±1.2 5.2±1.7
control 10 40.1±1.5＊ 49.7±8.0＊ 59.8±8.3＊ 4.4±1.3＊ 7.6±2.4＊ 12.4±2.4＊ 1.3±0.6＊ 1.3±0.4＊ 0.8±0.2＊＊
t reatment 10 24.7±3.0＊ 30.7±9.1＊ 34.4±5.8＊ 3.5±0.9＊ 8.1±3.0＊ 11.6±3.0＊ 1.8±0.7＊ 4.0±1.7＊ 2.4±2.2＊＊
compared with model group , ＊ P<0.05 , ＊＊ P<0.01
3　讨论
本实验从珍珠梅提取物中分离出 4 种化
合物 ,其中 2种为首次分离得到.超氧化物歧
化酶为高效的清道夫 ,可抑制自由基启动的
脂质过氧化 ,丙二醛是脂质过氧化的最终产
物 ,可严重破坏细胞膜的结构 ,导致细胞肿
胀 、坏死 ,其含量反映了组织过氧化的损伤程
度.目前 ,公认四氯化碳引起肝损伤的机制系
四氯化碳在肝微粒体细胞色素 P450激活下生
成自由基 CCL 3+及 Cl- ,这些自由基可与肝
细胞内大分子发生共价结合 ,也可攻击膜下
不饱和脂质 ,引起脂质过氧化 ,使肝细胞损
伤[ 5] .本实验中给药组大鼠血清超氧化物歧
化酶较模型组显著升高 ,而丙二醛含量显著
·260· Journal of Medical Science Yanbian Univ ersity　Dec.2003 Vol.26 No.4
降低 ,说明珍珠梅提取物中的黄酮类化合物
有一定的清除自由基作用 ,实验结果提示 ,珍
珠梅有效分离物有望成为治疗心血管病 、肝
硬化及恶性肿瘤等疾病的良药.
[参　考　文　献]
[ 1] 　李孝栋 , 吴立军 ,臧晓燕 , 等.东北珍珠梅化学成分的研
究[ J] .中国中药杂志 , 2002 , 27(11):841.
[ 2] 　李亦秀 , 张永春 , 李文汉.中草药山高粱的抗缺氧作用
的初步研究[ J] .哈尔滨医科大学学报 , 1981 , 4(1):1.
[ 3] 　金海玲 ,张学武 , 赵红 ,等.珍珠梅对四氯化碳所致大鼠
急性肝损伤的保护作用[ J] .世界华人消化杂志 , 2002 ,
10(7):783.
[ 4] 　张学武 ,柳明洙 , 全吉淑 ,等.珍珠梅提取物对肝脏癌前
病变大鼠体内自由基的清除作用[ J] .延边大学医学学
报 , 2003 , 26(1):15.
[ 5] 　Wei HS , Li DG , Lu HM , et al..Effects AT 1 recepto r
antagonist , losartanon rat hepatic fibro sis induced by CCl4
[ J] .World J Gastroentero , 2000 , 6(3):540.
[ 收稿日期] 　2003-09-08
[ 作者简介] 　尹明福(1977-),女(朝鲜族),硕士研究生 , 研
究方向为中药抗肝纤维化的研究.
丹参脂溶性提取物护肝作用的实验研究
尹明福1 ,吴文岘2 ,姜英子1 ,金学军1 ,崔兴日1 ,朴奉日2 ,南极星1
(1.延边大学药学院 , 吉林 延吉 133000;2.吉林延中药业 , 吉林 龙井 133400)
[ 摘要] 　[ 目的] 探讨丹参脂溶性提取物对肝脏的保护作用.[ 方法] 采用四氯化碳及 D-氨基半乳糖和
内毒素合用建立动物急性肝损伤模型 , 观察正常组 、模型组 、不同浓度丹参脂溶性提取物给药组动物
GOT , GPT 含量的变化.[ 结果] 腹腔注射 200 , 500 mg/ kg 丹参脂溶性提取物可以明显降低因 D-氨基半
乳糖和内毒素合用所致肝中毒小鼠的血清 GOT 及 GPT 水平的升高 , 0.5 , 1.5 g/ kg 丹参脂溶性提取物
降低口服四氯化碳所致肝中毒大鼠的血清中 GOT 及 GPT 水平的升高.[结论] 丹参脂溶性提取物对于
受损的动物肝脏有一定的保护作用.
[ 关键词] 　肝疾病;植物 , 药用;四氯化碳;半乳糖;内毒素类;大鼠;小鼠
[ 中图分类号] 　R285.5　　　[ 文献标识码] 　A　　　[文章编号] 　1000-1824(2003)04-0261-03
Experiment study on hepatoprotective function of ethanol extract of the
Radix Salviae Miltiorrhizae
YINMing-fu1 , WU Wen-xian2 , JIANG Ying-zi1 , JIN Xue-jun1 , CUI Xing-ri1 , PIAO Feng-ri2 ,NAN Ji-xing1
(1.Yanbian University College of Pharmacy , Yanji 133000 , Jilin , China ;2.Yanzhong Medical Co., Longjing 133400 , J ilin ,
China)
ABSTRACT:OBJECTIVE To study the ef fects of
ext ract of the Radix Salviae Mil tiorrhizae for
protecting the liver.METHODS The GOT and GPT
were detected in the model of acute lever lesion of rats
·261·延边大学医学学报　2003 年 12月　第 26 卷　第 4 期