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不同产地大麻药根、茎、叶中苜蓿酸-3-O-β-D-葡萄糖苷的含量测定



全 文 :收稿日期:2015-01-07; 修订日期:2015-03-20
基金项目:大学生创新创业训练计划项目 (No. GCX15007;xcx15163);
湖北省自然科学基金创新群体项目(No. 2013CFA013);
国家自然科学基金项目(No. 81303284;81403157)
作者简介:马 超(1993-),男(回族),山东新泰人,中南民族大学学生.
* 通讯作者简介:陈旅翼(1983-),男(汉族),湖南双峰人,中南民族大学
讲师,博士学位,主要从事民族药学研究工作.
不同产地大麻药根、茎、叶中
苜蓿酸 - 3 - O - β - D -葡萄糖苷的含量测定
马 超1,黄 蕴1,李 爽1,罗 维1,林亲雄1,兰 洲2,梅之南1,陈旅翼1*
(1.中南民族大学药学院,湖北 武汉 430074;
2.湖北中医药大学,湖北 武汉 430065)
摘要:目的 HPLC法测定云南 7 个不同产地的大麻药根、茎、叶中苜蓿酸 - 3 - O - β - D -葡萄糖苷的含量,评价其不同
产地及不同部位的药材质量。方法 Phecda C18色谱柱 (2. 1 × 150 mm,3μm),柱温 30℃,流动相为 0. 1%乙酸乙腈 - 0.
1%乙酸溶液,检测波长为 210 nm,流速为 0. 3 mL·min -1。结果 7 个不同产地样品中苜蓿酸 - 3 - O - β - D -葡萄糖苷
含量差异较大,其中以鹤庆县产大麻药含量最高,根、茎、叶分别为 10. 49%、1. 38%、3. 68%,其次为产自宾川县的样品,
永胜、禄劝县的样品含量居中,而漾濞、大理及洱源的样品中含量相对较低。且大麻药不同部位苜蓿酸 - 3 - O - β - D -
葡萄糖苷含量亦有差异,各产地均表现为根 >叶 >茎。结论 大麻药药材以鹤庆与宾川的质量最好,两地为优势产区。
关键词:大麻药; 苜蓿酸 - 3 - O - β - D -葡萄糖苷; 含量测定
DOI标识:doi:10. 3969 / j. issn. 1008-0805. 2015. 07. 025
中图分类号:R284. 1 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2015)07-1603-02
大麻药为傣药,白族、彝族、傣族民间常用药之一,为豆科植
物丽江镰扁豆(Dolichos appendiculatus Hand. - Mazz)的根或叶,
又名麻里麻、麻三段、豆叶百步还阳等。分布于我国云南、四川、
甘肃、广东等地,尤以云南为多。本品辛麻,温,有小毒,具有祛风
活血、止血止痛等功效,主治风湿疼痛、跌打损伤、骨折、外伤出
血、吐血、衄血、便血[1,2]。现代研究还发现大麻药具有抗癌、利
尿、抗痛风等功效[3 ~ 6]。其根的主要化学成分有三萜皂苷、生物
碱、黄酮等[7 ~ 10]。
大麻药在云南分布较广,大理、昆明、丽江、楚雄、临沧等地均
有,通常分布于 2000 ~ 2500m旷野灌丛中,不同生长环境下大麻
药药材品质有所差异。此次采用 HPLC 测定 7 个不同产地大麻
药根、茎、叶中苜蓿酸 - 3 - O - β - D -葡萄糖苷的含量,以期为
今后大麻药的综合利用和发展新资源提供参考。
1 仪器与试药
1. 1 仪器 KQ -400KDE型高功率数控超声波清洗器(昆山市超
声仪器有限公司);DGF - 4AB型电热鼓风干燥箱(天津市泰斯特
仪器有限公司);高效液相色谱仪(戴安 Ultimate 3000 分析型液
相色谱仪);Phecda C18色谱柱(2. 1 mm × 150 mm,3 μm);梅特勒
-托利多 AB135 - S 电子分析天平(梅特勒 -托利多国际股份有
限公司)。
1. 2 试药 大麻药根、茎、叶部位,于 2014 年 7 月至 8 月采自云
南大理市、洱源、鹤庆、永胜、宾川、漾濞县及昆明市禄劝县,共 7
个产区,21 份样品,经陈旅翼老师鉴定为丽江镰扁豆,模式标本
(No.:S20120725)保存于中南民族大学药学院药理教研室;苜蓿
酸 - 3 - O - β - D -葡萄糖苷对照品(自制,经氢谱与碳谱分析,
为苜蓿酸 - 3 - O - β - D -葡萄糖苷,HPLC 归一法计算纯度 >
98%);乙腈为色谱纯,甲醇、乙酸等为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 样品处理 从每个产地样品中挑选大小均一的大麻药根、
茎、叶若干,阴干后,粉碎,过 60 目筛,密封保存,备用。
2. 2 溶液的制备
2. 2. 1 供试品溶液 称取 7 个产地大麻药样的根、茎、叶粉末约
1. 0 g,每份重复 3 次,精密称定后,分别置于 100 ml 具塞锥形瓶
中,精密加入甲醇 50 ml,称定重量,超声(250 W,40 kHz)提取 30
min,提取温度为 40 ℃,放冷,甲醇补足损失量,过滤,取续滤液适
量,以微孔滤膜(0. 45 μm)滤过,转入液相小瓶,即得供试品溶
液。
2. 2. 2 对照品溶液 精密称取苜蓿酸 - 3 - O - β - D -葡萄糖苷
对照品适量,加甲醇配制成 300 μg /ml的对照品溶液,备用。
2. 3 色谱条件 Phecda C18 色谱柱(2. 1 mm × 150 mm,3 μm),柱
温:30℃;流速:0. 3 ml /min;检测波长:210 nm;流动相:A:0. 1%
乙酸乙腈,B:0. 1%乙酸水溶液;流动相梯度:0 - 16 min (A∶ B =
30∶ 70 - 62∶ 38),16 - 18 min (A∶ B = 62∶ 38 - 30∶ 70) ,18 -
20 min (A∶ B = 30∶ 70 - 30∶ 70) ,进样量 10 μl。该条件下,阴
性对照、对照品及供试品色谱图见图 1。
2. 4 方法学考察
2. 4. 1 线性关系考察 精密吸取苜蓿酸 - 3 - O - β - D -葡萄糖
苷对照品溶液 0. 5,1. 0,2. 0,5. 0,7. 5,10. 0 ml 加甲醇定容至 10
ml,摇匀。按“2. 3”项下色谱条件进样分析,测定色谱峰峰面积,
分别以色谱峰面积(A)对质量浓度(C)绘制标准曲线。得苜蓿
酸 - 3 - O - β - D -葡萄糖苷回归方程 Y = 8. 2141X + 0. 7151(r =
0. 9999),进样量在 0. 15 ~ 3. 0 μg浓度范围呈良好的线性关系。
2. 4. 2 稳定性试验 取同一份供试品溶液,分别于制备后 0,2,
4,6,8,10,12,24 h按“2. 3”项下色谱条件进样分析,计算苜蓿酸
- 3 - O - β - D -葡萄糖苷峰面积,结果 RSD 为 1. 14%(n = 6),
表明样品溶液在 24 h内稳定。
2. 4. 3 精密度试验 取同一质量浓度的苜蓿酸 - 3 - O - β - D -
葡萄糖苷对照品溶液,按“2. 3”项下色谱条件进样分析,重复进
样 6 次,计算苜蓿酸 - 3 - O - β - D -葡萄糖苷峰面积,结果 RSD
为 2. 01%(n = 6),表明精密度良好。
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2015 VOL. 26 NO. 7 时珍国医国药 2015 年第 26 卷第 7 期
A. 阴性对照色谱图
B. 苜蓿酸 - 3 - O - β - D -葡萄糖苷对照品色谱图
C. 宾川产大麻药根色谱图
图 1 HPLC色谱图
2. 4. 4 重现性试验 取宾川大麻药根粉末 1. 0 g,精密称定 6 份,
按“2. 2. 1”项下方法制备样品溶液,按“2. 3”项下色谱条件进样
分析,计算苜蓿酸 - 3 - O - β - D -葡萄糖苷峰面积,结果 RSD =
1. 58%(n = 6),表明方法重现性较好。
2. 4. 5 回收率试验 精密称取 6 份已测定含量的样品 1. 0 g,分
别精密加入苜蓿酸 - 3 - O - β - D -葡萄糖苷对照品储备液 5
ml,定容到 10 ml,按供试品溶液处理,记录苜蓿酸 - 3 - O - β - D
-葡萄糖苷峰面积,结果平均加样回收率为 97. 03%,RSD = 1.
15%(n = 6),表明回收率试验合格。
2. 4. 6 样品含量测定 取供试品溶液,按“2. 3”项下色谱条件进样
分析,计算苜蓿酸 -3 -O - β -D -葡萄糖苷含量。结果见表 1。
3 讨论
产地作为中药质量的本草学属性在中药质量评价中有着不
可或缺的重要地位。优质药材的产地称为“道地”。大麻药分布
于我国云南、四川、甘肃、广东等地,尤以云南为多。在白族、彝
族、傣族民间应用较多,主要以根入药。大麻药皂苷类成分是大
麻药中重要的活性成分,且含量相对较高。实验选取云南主产区
7 个不同产地大麻药根、茎、叶为研究对象,采用高效液相色谱法
测定其苜蓿酸 - 3 - O - β - D -葡萄糖苷的含量。结果表明,不
同产地大麻药的根、茎、叶中苜蓿酸 - 3 - O - β - D -葡萄糖苷含
量不同,其中以鹤庆县的大麻药苜蓿酸 - 3 - O - β - D -葡萄糖
苷含量最高,根、茎、叶分别为 10. 49%、1. 38%、3. 68%,其次为产
自宾川县的样品,永胜、禄劝县的样品含量居中,而漾濞、大理及
洱源的样品中苜蓿酸 - 3 - O - β - D -葡萄糖苷含量相对较低。
且大麻药不同部位中苜蓿酸 - 3 - O - β - D -葡萄糖苷含量亦有
差异,各产地均表现为根 >叶 >茎。
表 1 不同产地大麻药根、茎、叶中
苜蓿酸 - 3 - O - β - D -葡萄糖苷含量 %
产地
苜蓿酸 - 3 - O - β - D -葡萄糖苷含量
根 茎 叶
洱源 0. 26 0. 22 -
永胜 5. 86 0. 63 1. 19
鹤庆 10. 49 1. 38 3. 68
漾濞 2. 84 0. 38 0. 39
禄劝 3. 77 0. 82 1. 17
宾川 7. 57 1. 44 2. 16
大理 1. 03 0. 15 0. 92
n = 3
总之,本次实验结果表明,大麻药药材以鹤庆与宾川产的质
量最好,且资源蕴藏量也最大,传统上以这两地作为大麻药优势
产区是合理的。另外,部分地区大麻药药材中,其茎与叶中大麻
药苜蓿酸 - 3 - O - β - D -葡萄糖苷的含量也比较高,后续可以
进行药用部位的替代研究,毕竟大麻药根的生长周期需要 2 年以
上,且以野生为主,挖掘后,原植株会死亡。上述研究,将为今后
大麻药的综合利用和发展新资源提供重要参考。
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