全 文 ：［收稿日期］ 20120906(011)
［基金项目］ 贵州省中药现代化项目(黔科合中药字［2010］
5029 号) ;贵 阳 市 科 技 局 项 目 (筑 科 合 字
［2012204］)
［第一作者］ 杨保成，博士，副教授，从事药物开发研究，
E-mail:baochengyang@ yahoo． com
［通讯作者］ * 康文艺，教授，从事中药活性成分及新药研究，
Tel:0378-3880680，E-mail:kangweny@ hotmail． com
疏花假地豆体外抗氧化活性研究
杨保成1，彭涛1，黄钟碧2，张前军2，康文艺1，2*
( 1. 黄河科技学院，郑州 450063; 2. 贵州大学化学化工学院，贵阳 550025)
［摘要］ 目的:对疏花假地豆体外抗氧化活性进行研究。方法:采用清除二苯代苦味酰基(DPPH)自由基、清除［2，2-联
氨-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二氨盐］(ABTS)自由基及铁离子还原 /抗氧化能力(FRAP)测定法，评价疏花假地豆体外抗氧
化活性，并与阳性对照二丁基羟基甲苯(BHT)比较。结果:疏花假地豆体外抗氧化活性较好。其中乙酸乙酯提取部位清除
DPPH自由基(IC50 = 35. 66 mg·L
－1)、ABTS自由基(IC50 = 8. 49 mg·L
－1)及还原 Fe3 +的能力(TEAC = 756. 20 μmol·g －1)较好，
但仍低于阳性对照 BHT(IC50 = 3. 69 mg·L
－1，IC50 = 6. 64 mg·L
－1和 TEAC = 4 997. 76 μmol·g －1)。结论:疏花假地豆乙酸乙酯
提取部位体外抗氧化活性相对于其他部位最好。
［关键词］ 疏花假地豆;抗氧化活性;二苯代苦味酰基自由基;2，2-联氨-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二氨盐;铁
离子还原 /抗氧化能力
［中图分类号］ R284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)06-0103-03
In Vitro α-Glucosidase Inhibitory Activity of Desmodium heterocarpon
YANG Bao-cheng1，PENG Tao1，HUANG Zhong-bi2，ZHANG Qian-jun2，KANG Wen-yi1，2*
(1. Huanghe Science and Technology College，Zhengzhou 450063，China;
2. School of Chemistry and Chemical Engineer of Guizhou University，Guiyang 550025，China)
［Abstract］ Objective:To evaluate antioxidant activity of Desmodium heterocarpon in vitro． Method:
1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) radical scavenging， ［2，2-azino-bis (3-ethylbenzothiazoline)-6-
sulphonic acid］ diamonium salt (ABTS) radical scavenging and ferric reducing antioxidant power (FRAP)
assay were used to evaluated D． heterocarpon with BHT as positive control． Result:Antioxidant activity of D．
heterocarpon was good． Ethyl acetate extract of D． heterocarpon showed the DPPH radical scavenging (IC50 =
35. 66 mg·L －1) ，ABTS radical scavenging (IC50 = 8. 49 mg·L
－1) ，and ferric reducing antioxidant power
(TEAC =756. 20 μmol·g －1)and those were higher than that of other extracts． But it was still inferior to positive
control BHT (IC50 = 3. 69 mg·L
－1，IC50 = 6. 64 mg·L
－1 and TEAC = 4 997. 76 μmol·g －1，respectively)．
Conclusion:Ethyl acetate extract showed the best antioxidant activity in three extracts．
［Key words］ Desmodium heterocarpon;antioxidant activity;DPPH;ABTS;FRAP
疏花假地豆为豆科山蚂蝗属植物，别名山花生、
大叶青等。根据文献记载它具有清热利尿，透邪外
出，解毒，消肿止痛的功效。民间用于虚寒性咳嗽，
小儿疳积，小儿惊风，淋巴结核，脓肿，肺热咳嗽，哮
喘，尿道结石，小便淋涩，筋骨痛，腰痛。外用可以治
毒蛇咬伤，跌打损伤。另外，还可以用于流行性乙型
脑炎，肝炎，喉痛，腮腺炎［1］。
目前，仅有本课题组对疏花假地豆的化学成分
进行了报道［2］，未见生物活性的研究报道。本课题
对疏花假地豆提取物的生物活性研究，为综合利用
该药用植物资源奠定理论基础。
1 材料
电子天平(美国 Mettler-Toledo 公司) ，UV-2000
型紫外可见分光光度计(上海尤尼科仪器有限公
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第 19 卷第 6 期
2013 年 3 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 6
Mar．，2013
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2013.06.048
司) ，DELTA 320 型 pH 计(美国 Mettler-Toledo 公
司)。二苯代苦味酰基自由基(1，1-diphenyl-2-
picrylhydrazyl，DPPH，日本东京化成工业株式会
社) ;Fe3 + -三吡啶三哑嗪(2，4，6-Tri(2-pyridyl)-s-
triazine，TPTZ;比利时 Acros organics 公司) ; ［2，2-
联氨-(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二氨盐］(ABTS，
美国 Fluka 公司) ;BHT(二丁基羟基甲苯，比利时
Acros organics 公司) ;Trolox(6-hydroloxy-2，5，7，8-
tetramethylchroman-2-carboxylic acid，Aldrich) ;其他
试剂均为分析纯。
疏花假地豆于 2009 年 7 月采自贵州省贵阳市
花溪区，经贵阳中医学院陈德媛教授鉴定为豆科山
蚂蝗属植物疏花假地豆 Desmodium heterocarpon
(L．)DC．的全草。
2 方法与结果
2. 1 提取物的制备 将疏花假地豆全草阴干，粉
碎，用 75%乙醇冷浸提取 3 次(每次 7 ～ 10 d) ，合并
提取滤液，减压回收乙醇，得提取总浸膏(JDD 醇提
物)。总浸膏分散于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯
和正丁醇萃取，减压回收溶剂，依次得到疏花假地豆
石油醚部位(JDDPE)、乙酸乙酯部位(JDDEA)和正
丁醇部位(JDDBU)。
2. 2 抗氧化活性筛选方法
2. 2. 1 DPPH 方法 按照文献［3］，将样品用甲醇
配制成一系列浓度，取 0. 1 mL 样品加入 3. 5 mL
DPPH甲醇溶液(0. 06 mmol·L －1) ，混匀，30 min 后
测定 515 nm处吸光度;同法 0. 1 mL 甲醇 + 3. 5 mL
DPPH溶液混匀测定吸光度。每份样品平行操作 3
次，取平均值。按照以下公式计算自由基清除率:
DPPH自由基清除率 =［(Acontrol － Asample)/Acontrol］× 100
式中，Acontrol为 DPPH 本身在测定波长的吸收，
Asample为样品对 DPPH作用后的吸收度数值(除去样
品自身吸收)。
2. 2. 2 ABTS 方法 按照文献［4］，将样品用甲醇
配制成一系列浓度，取 0. 15 mL 样品加入 2. 85 mL
ABTS自由基工作液，混匀，10 min后测定 734 nm处
吸光度;同法 0. 15 mL甲醇 + 2. 85 mL ABTS自由基
工作液混匀测定吸光度。每份样品平行操作 3 次，
取平均值。按照以下公式计算自由基清除率:
ABTS自由基清除率(%)=［(Acontrol － Asample)/Acontrol］× 100
式中，Acontrol为 ABTS 本身在测定波长的吸收，
Asample为样品对 ABTS 作用后的吸收度数值(除去样
品自身吸收)。
2. 2. 3 FRAP方法 按照文献［5］，将样品用甲醇
配制成一系列质量浓度，取 0. 2 mL 样品加入
3. 8 mL新鲜配制的 TPTZ 工作液作为反应体系，混
匀后 37 ℃反应 30 min 后测定 593 nm 处吸光度。
每份样品平行操作 3 次，取算术平均值，计算出清除
率，结果以抗氧化当量(即每克样品的自由基清除
能力相当于 Trolox 的自由基清除能力的微摩尔数
TEAC)表示。
2. 2. 4 IC50值的计算 依据计算得到的清除率，用
Origin 6. 0 软件处理，得到样品清除 DPPH自由基和
ABTS自由基的半数清除率 IC50值。
2. 3 结果与分析
2. 3. 1 对 DPPH自由基的清除作用 疏花假地豆各
溶剂提取物在初筛浓度为 55. 56 mg·L －1时对 DPPH
自由基的清除率见表1。表1显示除乙酸乙酯提取部
位外，其他提取物清除率均 ＜50%。与阳性对照 BHT
(IC50 =3. 69 mg·L
－1)相比，其清除 DPPH自由基能力
较差。其清除 DPPH 自由基的能力顺序为 BHT ＞
JDDEA ＞ JDD醇提物 ＞ JDDBU ＞ JDDPE。
表 1 疏花假地豆不同提取部位的抗氧化活性
提取物
DPPH方法 ABTS方法 FRAP方法
清除率
/%
IC50
/mg·L －1
清除率
/%
IC50
/mg·L －1
TEAC
/μmol·g － 1
JDD醇提物 38. 78 NT 97. 82 22. 48 617. 2
JDDPE 7. 29 NT 57. 04 77. 5 154. 55
JDDEA 64. 89 35. 66 100. 27 8. 49 756. 2
JDDBU 33. 51 NT 93. 17 35. 79 307. 6
BHT 99. 86 3. 69 100 6. 64 4 997. 76
注:BHT为阳性对照品，NT为未测定。
2. 3. 2 对 ABTS自由基的清除作用 表 1 显示疏
花假地豆不同溶剂提取物在初筛浓度为 100. 00
mg·L －1时清除 ABTS自由基的能力均较好。不同提
取物相比较得出乙酸乙酯提取物清除 ABTS 自由基
的能力最好(IC50 = 8. 49 mg·L
－1) ，其清除率与阳性
对照 BHT相当(IC50 = 6. 64 mg·L
－1)。4 种提取物
和阳性对照对 ABTS自由基清除能力顺序为 BHT ＞
JDDEA ＞ JDD醇提物 ＞ JDDBU ＞ JDDPE。
2. 3. 3 对 Fe3 +的还原能力 由表 1 显示，疏花假
地豆乙酸乙酯提取物还原 Fe3 + 的能力(TEAC =
756. 20 μmol·g －1)较好，但仍弱于阳性对照 BHT 还
原 Fe3 +的能力(TEAC = 4 997. 76 μmol·g －1)。4 种
提取物和阳性对照对 Fe3 + 的还原能力为 BHT ＞
JDDEA ＞ JDD醇提物 ＞ JDDBU ＞ JDDPE。
结果表明，疏花假地豆不同溶剂提取物抗氧化
活性有一定的差异，其中 3 种抗氧化体系得到的结
果表明疏花假地豆乙酸乙酯抗氧化活性最好。
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第 19 卷第 6 期
2013 年 3 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 6
Mar．，2013
檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶
3 结论
本文采用 DPPH，ABTS，FRAP 3 种方法对疏花
假地豆不同溶剂提取物进行了体外抗氧化活性研
究，结果表明疏花假地豆不同溶剂提取物均有一定
的抗氧化活性。但是因为溶剂极性不同，其中提取
物极性也不同，这可能导致了不同溶剂提取物其抗
氧化活性有很大差别的根本原因。3 种抗氧化体系
结果表明其乙酸乙酯抗氧化活性高于总醇提物的抗
氧化活性，这可能是因为醇提物中含有的其他杂质
较多，在相同浓度时其抗氧化有效成分少于乙酸乙
酯提取物。综合上述结果可得出疏花假地豆乙酸乙
酯提取部位的抗氧化活性最好。
［参考文献］
［1］ 国家中医药管理局《中华本草》编委会．中华本草．第 4
册［M］．上海:上海科学技术出版社，1999:448.
［2］ 黄钟碧，张前军，康文艺，等． 假地豆化学成分研究
［J］．中国实验方剂学杂志，2010，16(17) :93.
［3］ Kang W Y，Li C F，Liu Y X． Antioxidant phenolic
compounds and flavonoids of Mitragyna rotundifolia
(Roxb．)Kuntze in vitro［J］． Med． Chem． Res，2010，19:
1222.
［4］ Kang W Y，Wang J M． In vitro antioxidant properties and
in vivo lowering blood lipid of Forsythia suspense leaves
［J］． Med Chem Res，2010，19:617.
［5］ 尹震花，顾雪竹，张一冰，等．三白草体外抗氧化活性
［J］．中国实验方剂学杂志，2012，18(4) :99.
［责任编辑 顾雪竹］
［收稿日期］ 20120110(120)
［基金项目］ 中国中医科学院医学实验中心自主课题项目(zz2007002)
［第一作者］ 闫寒，从事中药质量控制研究，Tel:010-64014411-3324，E-mail:yanhanarrow@ 163. com
［通讯作者］ * 彭娟，助理研究员，硕士，从事药物分析及药代动力学研究，Tel:010-64014411-3324，Email:lillejuan@ 163. com
LC-MS-MS法测定参体和参须中
人参皂苷 Rb1，Rb2 和 Rc含量
闫寒1，赵松岩2，刘运嘉3，吴睿凡4，范斌1，郭娜1，彭娟1*
( 1. 中国中医科学院医学实验中心，北京 100700; 2. 沈阳药科大学，沈阳 110016;
3. 沈阳市药品不良反应和医疗器械不良事件监测中心，沈阳 110013;
4. 新疆医科大学，乌鲁木齐 830011)
［摘要］ 目的:建立检测参体和参须中人参皂苷 Rb1，Rb2 和 Rc 的 LC-MS-MS 方法。方法:应用液质联用，C18色谱柱系
统，采用梯度洗脱方法，A-水(0. 05% FA) ，B-乙腈，A-B = 65∶ 35，梯度洗脱(0 ～ 3 min，65% B;3 ～ 4 min，100% B) ，流速 0. 35
mL·min －1，柱温 40 ℃，建立了参体和参须中人参皂苷 Rb1，Rb2 和 Rc含量测定方法并进行了方法学考察。结果:建立了同时
检测参体和参须中人参皂苷 Rb1，Rb2 和 Rc含量测定方法。结论:该方法准确、简便、快速，可用于参体和参须的质量控制。
［关键词］ 参体和参须;含量测定;人参皂苷 Rb1;人参皂苷 Rc;人参皂苷 Rb2
［中图分类号］ R284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)06-0105-03
Simultaneous Quantitation of Rb1，Rb2 and Rc in Ginseng Tail
and the Main Root of Ginseng by LC-MS-MS
YAN Han1，ZHAO Song-yan2，LIU Yun-jia3，WU Rui-fan4，FAN Bin1，GUO Na1，PENG Juan1*
(1. Experimental Research Center，China Academy of Chinese Medical Sciences，Beijing 100700，China;
2. Shenyang Parmaceutical University，Shenyang 110016，China;3. Shenyang Monitoring Center for
Adeverse Drug Reaction and Medical Device Adeverse Event，Shenyang 110013，China;
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第 19 卷第 6 期
2013 年 3 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 6
Mar．，2013