全 文 ：P O B o x 2 3 45B e ij i
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W b r d C h i n J D ig e s t o l 2 0 0 5 A P r i l l ; 1 3 ( 7 ) : 8 64
一
8 6 6
世界华人消化杂志 I S S N 1 0 0 9 一3 0 7 9 C N 1 4 一 1 2 6 0 /R
2 0 0 5 年版权归世界胃肠病学杂志社
. 基础研究 BA S IC RE sE姗 H ’
水蓑衣提取物对裸鼠肝癌移植瘤生长的影响
冯大明 , 王 双 , 冬毕华 ,孙玉慧 , 叶 旭 , 王 佐 ,杨永宗 ,颜迪忠
冯大明 , 王双 , 冬毕华 , 孙玉慧 , 叶旭 , 王佐 , 杨永宗 , 颜迪忠 , 南华大学病理生理学教研室 , 分子生物学研究中心 湖南省衡阳市 4 21 0 1
冯大明 女 , 1 9 51 一 01 一 2 5 生 湖南省湘潭市人 汉族 病理生理学副教授 .
通讯作者 : 颜迪忠 4 21 0 01 湖南省衡阳市 南华大学病理生理学教研室 分子生物学研究中心 ` v z v a n g h丫@ 1 6 3 刀 o m
电话 : 0 7 3 4 一 8 2 8 1 2 8 8 传真 : 0 7 3 4 一 8 2 8 1 2 8 8
收稿日期 : 2 0 0 5 一 0 1 一 1 7 接受日期 : 2 0 0 5 一 0 2 一 0 2
o b v io u s d if e er n e e in t h e w e ig h ts a n d th e s e r u m Ie v e ls o f
A S工 A LT, LD H, C R E t h e m ie e t r e a t e d w it h Hy g r o P h ila
s a l ie if o lia a n d t h o s e t r e a t e d w ith h y d r o Xy e a m Pt of h e e i n
.
E f e c t s o f e x t ar c t i o
n f or m H y g or P h il a
乌a l i c i f o l i a o n h e P a t o c a r c i n o m a c e l l
x e n o g ar ft
s i n n u d e m i c e
C O N C L U S IO N : T h e e Xt r a tC io n f r o m Hy g or P h ila s a lie ifo lia
e a n s ig n if ie a n t ly i n h ib it th e g or wt h of h e Pa t o e a or i n o m a e e ll
x e n o g ar ft s in n u d e m ie e in a d o s e
一
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.
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t h e h e a rt
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th e liv e r a n d t h e k id n e y a er a lm o s t t h e s a m e a s
t h o s e o f h y d r o xy e a m P t o th e e i n
.
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o f h e Pat o e a cr i n o m a
·
摘要
目的 : 观察水蓑衣提取物的抗肝癌细胞增生活性 , 为
水蓑衣提取物用于肝癌治疗提供实验依据 .
M E T HO D S : 丁W e n ty 一 f o u r f e m a le n u d e m ie e w e r e s u b e u -
t a n e o u s ly in ie tC e d w it h h u m a n H C C c e l ls
.
Af t e r 1 4 d a y s
,
t h e m ie e w e r e d iv id e d e q u a l ly i n t o e o n t r o l g r o u P
,
lo w
d o s e yH g
r o Ph ila s a li e if o lia g r o u P
,
h ig h d o s e H y g r o Ph jla
s a li e if o lia g r o u P a n d h y d r o x y e a m P t o th e e i n g r o u P
.
T h e
v o l u m e a n d w e ig h t o f t u m o r w e r e m e a s u r e d 2 0 d a y s
a f t e r t r e a t m e n t
.
H is t o lo g ie a l e h a n g e s o f th e x e n o g r a f t s
a n d t h e s e r u m l e v e ls o f A S T, A LT, LD H
,
a n d C R E w e r e
d e t e rm i n e d
.
方法 : B A L B / c A 雌性裸鼠 2 4 只 , 背侧皮下接种
SMM C 一 7 21 人肝癌细胞建立荷瘤裸鼠模型 , 14 d 后
随机分为对照组 , 低剂量水蓑衣组 , 高剂量水蓑衣组和
羚基喜树碱组 ;给药 20 d后检测各组移植瘤的体积和质
量 ;并观察移植瘤的组织学变化和血清丙氨酸转氨酶
(AL )T
、 天冬氨酸转氨酶 (A S )T 、 乳酸脱氢酶伍D )H 活性
和肌醉 (C R E )水平 .
结果 : 与对照组相比 , 水蓑衣组裸鼠移植瘤的体积明显
减小 (p < 0 . 05 ) , 质量显著减轻 (p < 0 . 05 ) ;低 、 高剂量水蓑
衣组的抑瘤率分别为 46 % 和 62 %( P< .0 05 ) .水蓑衣组裸鼠
瘤组织病理改变与舟基喜树碱组相似 ;体质量和血清A L T ,
sA T
,
DL H 活性及 C R E 与舟基喜树碱组无明显差别 .
R E S U LT S : In e o m Pa ris o n w it h t h e e o n t ro l g or u P
,
t h e t u
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m o r vo iu m e a n d w e ig h t of b ot h Hy g r o Ph i Ia s a lie ifo lia g or u P s
w e re d e e er a s e d s ig n if ie a n t ly (尸司 . 0 5 ) . T h e t u m o r in h ib iot n
献 e s w e er 4 6% a n d 6 2% (P< 0 . 0 5 ) in lo w 一 a n d h ig h一 d o s e
g or u P
,
er s Pe e t iv e ly
.
H is t o lo g ie a l e x a m in st io n r e s u lt s f ro m
Hy g r o P h i la s a lic if o lia g r o u P s w e r e a lm o s t t h e s a m e a s
th o s e f r o m h y d r o x y e a m P t o t h e e in g r o u P
.
T h e r e w e r e n o
结论 : 水蓑衣提取物可显著抑制肝癌移植瘤的生长 ,
且呈一定的剂量依赖性 ;其对动物整体状况及心 、 肝 、
肾功能的影响与羚基喜树碱相当 .
关键词 : 肝癌 ;水蓑衣 ; 提取物 ;裸鼠;移植瘤
冯大明 王双 冬毕华 孙玉慧 叶旭 王佐 杨永宗 颜进忠 . 水蓑衣提取牧叫甘
裸鼠肝癌移植瘤生长的影响 . 世界华人消化杂志 2。 。 5门 3 (7) : 8 6 4一 8 6 6
h t t P : / w w w
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3 0 7 9 / 1 3 /8 6 4
.
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冯大明 , 等 . 水蓑衣提取物对裸鼠肝癌移植瘤生长的影响 8 6 5
0 引言
水蓑衣提取物是以中药水蓑衣为原料开发的新药 . 水蓑
衣 ( h y g r oP h i al S al i c i f ol i a) 属爵床科 , 别名焦骨
草 , 墨菜 , 味甘 、 微苦 , 具有清热解毒 , 散淤消肿 , 健
胃 , 化淤止痛等功效 , 民间多用于治疗炎症和外伤 lj[ .
近年来 , 我们在临床实践中观察到水蓑衣提取物对病
毒性肝炎具有较好疗效 ; 而且我们 已有的实验资料表
明 , 水蓑衣提取物可有效防治 C C1 4引起的小鼠肝损伤 .
由于中药作用的多元性 , 我们将观察水蓑衣提取物对
肝癌可能具有的治疗作用 , 以进一步拓宽水蓑衣的应
用范围 , 为临床治疗提供实验依据 .
瘤体积 一治疗组结束平均瘤体积 ) (/ 对照组开始平均瘤
体积 一对照组结束平均瘤体积 )」x 1 0&0 计算水蓑衣提
取物的抑瘤率 . 实验 21 d 处死动物 , 眼球采血 , 分
离血清用 于心 、 肝 、 肾功能检测 ; 切取瘤组织 , 称
瘤质量 , 测量瘤体积并计算抑瘤率 ; 然后浸泡固定 ,
固定好的癌组织常规石蜡包埋切片 , H E 染色 , 光镜
下观察组织病理学变化 , 以观察水蓑衣提取物对移植
瘤生长的影响 .
统计学处理 实验结果以 m e a n 士S D表示 , t 检验
分析实验数据 , 以只 0 . 0 5 判定差异显著性 .
1 材料和方法
1
.
1 材料 水蓑衣提取物由南华大学附属南华医院药
剂科制备 . 流程如下 : 晾干草药 1 6 0 0 9 切片 , 浸泡
于 70 0 m L / L 乙醇 10 L 中 , 在 6 0一 7 0 0C条件下循环蒸
馏 Z ;h 此过程反复 2 次后 , 收集蒸馏液 , 2 00 r/ m i n
离心 3 0 m i n , 过滤 , 最后收集药液 2 0 0 0 m L . 实验
前取一定量的药液 , 分别浓缩 10 倍和 20 倍 , 制成低
浓度水蓑衣提取物药液 (生药 8 k g / )L 和高浓度水蓑衣
提取物药液 (生药 16 k g / )L , 4 ℃保存备用 . 轻基喜
树碱 ( 1 k g / )L , 由贵州六枝工矿大华药业公司生产 .
EMD M培养基为 Hy c 1 0 n e 公司产品 . 新生小牛血清购自
杭州四季清公司 . SM C一 7 7 21 人肝癌细胞株由中国典型
培养物武汉大学保藏中心传代培养 . B ALB / c A雌性 6周
龄裸鼠 24 只 , 体质量 ( 16 士 1 . 4) 9 , 由上海斯莱克实
验动物有限公司提供 . 实验期 间所有动物在无特定病
原体 ( S P )F 实验室中饲养 .
1
.
2 方法降 3] 将 S MMC一 7 7 21 细胞按常规方法培养 , 取
对数生长期的细胞 , 用 0 . 25 9 / L 胰蛋白酶消化 , 制成
单细胞悬液 ;每只裸鼠背侧皮下接种 2 . 5 x 1 0 9L/ SM C-
7 7 21 细胞 0 . Z mL 建立荷瘤裸鼠模型 , 接种 14 d 后可
见所有裸鼠均长 出肿瘤 , 将 24 只裸鼠随机分为 4组 , 每
组 6只 . 对照组 10 m L / k g 蒸馏水灌胃 ;水蓑衣低剂量组 、
高剂量组分别以低浓度和高浓度水蓑衣药液 10 m L / k g
灌胃 ;轻基喜树碱组从 i p 轻基喜树碱 3 m g / k g . 隔 日 1
次 , 治疗 20 d . 隔 日 1次测量皮下移植瘤的最长径 (a)
和最短径 ( b) , 按公式 V = a X b Z x 0 . 52 计算肿瘤
体积 (m m 3 ) . 按公式抑瘤率 (%) = 「1一 (治疗组开始平均
2 结果
2
.
1水蓑衣提取物对裸鼠肝癌移植瘤的影响 水蓑衣提取
物对 SMMC一 7 7 21 移植瘤有明显的剂量依赖性抑制作用 ,
高剂量水蓑衣的抑制作用与经基喜树碱相近 (表 1 ) .
表 1 水蓑衣提取物对裸鼠肝癌移植瘤体积 、 瘤重量和抑瘤率的影响
《m e a n 士S D , n = 6 )
为韭
卿焉组
水蓑衣{邸日量组
瘤质量 (m g ) 抑瘤率(% )
12 19 7 士 2 58
.
2 a
78 2
,
9 上 16 4 B
4 7 4
.
2 士 2 0 5 7 a
4 6
6 2 a
4 2 8
.
2 土 2 6 4 6 a
瘤推析只(m m3 )
5 13
.
7 士 18 9
.
2 a
29 0忍士 7 3忍
19 9 2 士 9 5
.
0 a
16 3
,
9 士 6 7
1
2
a
”
P< 0
.
05 vs 水蓑洲筋日量乡巨
2
.
2 肿瘤组织学检查 对照组瘤细胞整齐地成片排列 ,
细胞核大 , 胞质少 , 瘤细胞生长活跃 , 核分裂多 , 瘤
细胞异型性大 , 瘤块中央有少量坏死组织 (图 1A ) ;水
蓑衣低剂量组肿瘤细胞体积缩小 , 核分裂可见 , 出血
坏死较对 照组明显增多 , 有较多肿瘤细胞凋亡 ( 图
I B ) ; 水蓑衣高剂量组肿瘤细胞体积变小 , 偶见核分
裂 , 瘤组织中出血 、 坏死多见 (图 1C ) ;经基喜树碱组
肿瘤细胞体积 明显变小 , 极少核分裂 , 瘤组织中见广
泛的出血 、 坏死现象 (图 1D ) .
.2 3 水蓑衣提取物对动物血清 A s T 、 AL T 、 DL H 、 C R E
含量和体质量 变化的影响 水蓑衣提取物治疗 20 d 后
血清丙氨酸转氨酶 ( AL T ) 、 天冬氨酸转氨酶 ( A S T ) 、
乳酸脱氢酶 (LD)H 活性和肌配 (CRE )含量与经喜树碱组
比无明显差异 (乃 0 . 05 ) , 水蓑衣提取物治疗前后裸鼠
表 2 各组肝癌裸鼠血清 As T 、 A LT 、 LD H 、 C RE含量和体质量变化 (m e a n 士S D )
6054
尸匕门é7了78
分组
对照组
水蓑衣低剂量组
水蓑衣高剂量组
轻基喜树碱组
体质量变化 g() A S T ( n k a t/ L ) A LT ( n k a t / L ) LD H (n k a t / L )
1
.
5 士 0
.
3 1 3 1 0
.
3 士 4 8 6
.
8 9 3 6另 士 1 1 0 . 0 2 0 3 3 . 7 士 6 5 1 . 8
1
.
7 士 0
.
8 1 1 2 3
.
5 士 4 4 1
.
6 8 士 1 10
.
1 2 2 0 0
.
4 士 8 0 0
.
2
1 8 士 0
.
6 1 1 5 3
.
6 土 5 0 1
.
8 士 1」6 . 7
1
.
8 土 0
.
9 2 3 6
,
9 士 4 1 0
.
1 2 士 1 3 1
.
7
4 0 7
4 3 0
4 8 5
.
1
6 3 3
.
5
C RE (林m o l/ L )
5 5
.
3 士 17
.
9
5 1
.
6 士 2 3
.
4
5 4
.
7 士 2 9
.
5
5 5
.
4 土 1 3
.
2
6 86 IS S N 1 0 0 9
一
3 0 7 9 C N 1 4
一
12 6 0 / R 世界华人消化杂志 2 0 0 5年 4 月 1 日 第 13 卷 第 7 期
图 飞各组肝癌移植瘤 HE x 40 . A : 对照组 ;B : 水蓑侧氏剂量组二C : 水蓑衣高剂量组: O : 轻基喜树碱组
体质量变化与经喜树碱组比亦无明显差异 (乃 0 . 0 5 ) ,
表明水蓑衣提取物在治疗过程中对机体的整体状况及
心 、 肝 、 肾功能 的影响与轻喜树碱相 当 (表 2 ) .
3 讨论
肝癌是世界上最常见 的恶性肿瘤之一 , 不仅发病率
高 , 预后也极为严重 , 因而肝癌的防治工作极为重
要 . 由于临床上大多数患者不能切除肝癌 , 故保守治
疗仍为多数患者的主要治疗方法 . 我国的中医药理论
基础雄厚 , 药源丰富 , 是一个伟大的宝库 , 充分挖掘
这一宝库 , 辨证合理用药 , 极有可能为癌症的防治做
出贡献 〔连」. 传统中的抗肿瘤药物具有一定的毒性 , 如
砒霜 、 砷化物等 , 而无毒性的抗肿瘤药物则是人们 的
新的开发 目标 . 肝癌裸鼠移植瘤是研究抗肝癌药物的
理想模型 , 即在裸 鼠身上复制 出人的肝癌模型 , 然后
应用具有抗癌作用的药物进行防治 , 研究此种药物的
抗癌疗效 . 水蓑衣提取物作为一种治疗急性肝炎的中
药 , 临床上具有很好的疗效 , 但是否具有抑制肝癌的
作用仍有待探讨 . 己知轻基喜树碱是植物有效成分的
衍生物 , 经研究证 明具有较好的抗肝癌作用并已上
市进入临床应用 , 且毒副作用较小 [ 5 一 6 ] . 其抑制肝癌
的作用机制被认 为与选择性抑制拓朴异构酶而干扰
DNA 的复制有关 , 水蓑衣提取物对该酶亦具有抑制作
用 . 我们以此种药物作为阳性对照 , 研究不 同浓度水
蓑衣提取物对肝癌的作用 . 实验结果表明 , 水蓑衣提
取物对裸鼠移植瘤的抑制效应呈剂量依赖关系 , 其抑
制功效与轻喜树碱相近 , 而且对动物血清 AsT 、 ALT 、
LDH
、
CRE含量和体质量变化的影响也与经基喜树碱无
明显差异 , 表明水蓑衣提取物在治疗过程中对机体的
整体状况及心 、 肝 、 ’肾功能的影响与轻喜树碱相当 . 若
能合理配伍 , 可能取得更好疗效 . 水蓑衣提取物抑制
肝癌细胞生长的机制有待进一步研究 .
参考文献
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编辑 潘伯荣 审读 张海宁