全 文 ：上海中医药杂志 2016 年第 50 卷第 7 期 SH． J． TCM Jul．，2016;Vol． 50 No． 7
DOI:10． 16305 / j． 1007-1334． 2016． 07． 027
一测多评法测定假马齿苋中间体中的 5种三萜皂苷类
成分含量
崔雨晴1，2，张继全1，2，吴 飞1，2，3，阮克锋1，2
1．上海中医药大学中药现代制剂技术教育部工程研究中心(上海 201203);2．上海张江中药现代制剂技术工程研究中心(上海
201203);3．上海中医药大学中药学院(上海 201203)
【摘要】 目的 利用一测多评法建立假马齿苋中间体中 5 种三萜皂苷类成分的高效液相色谱分析方法。方法 以 BacopasideⅠ为
内参物，建立 Bacoside A3、BacopasideⅡ、Bacopasaponin C isomer、Bacopasaponin C的相对校正因子，从而计算各成分含量，并将一测多
评结果与外标法实测值用相对误差评价，验证一测多评法的准确性。结果 BacopasideⅠ与 Bacoside A3、BacopasideⅡ、Bacopasaponin
C isomer、Bacopasaponin C的相对校正因子分别为 0． 980、0． 747、1． 046、0． 836，一测多评法计算结果与外标法无显著差异，相对误差小
于 5%。结论 该方法准确可靠，简便可行，可作为假马齿苋中间体多指标成分测定质量控制方法。
【关键词】 假马齿苋;一测多评法;相对校正因子;外标法;假马齿苋皂苷Ⅰ;苦艾素 A3;假马齿苋皂苷Ⅱ;假马齿苋皂苷 C异构体;假
马齿苋皂苷 C
Simultaneous determination of five triterpenoid saponins in Bacopa monnieri extract by
quantitative analysis of multi-components with a single marker
CUI Yu-qing1，2，ZHANG Ji-quan1，2，WU Fei1，2，3，ＲUAN Ke-feng1，2
1． Engineering Ｒesearch Center of Modern Preparation Technology of Traditional Chinese Medicine，Ministry of Education，
Shanghai University of Traditional Chinese Medicine，Shanghai，201203;2． Engineering Ｒesearch Center of Modern
Preparation Technology of Traditional Chinese Medicine of Zhangjiang，Shanghai，201203;3． College of Chinese Material
Medica，Shanghai University of Traditional Chinese Medicine，Shanghai，201203
Abstract:Objective To establish a quantitative analysis of multi-components by single-marker (QAMS)HPLC method for the determination of five triterpenoid
saponins in the intermediates of Bacopa monnieri． Methods BacopasideⅠwas used as the internal marker to establish relative correction factor (ＲCF)between
BacopasideⅠand other four triterpenoid saponins，and ＲCF was used in the calculation of their content． Ｒelative error was used in the appraisal of the result
between external standard method and QAMS． Ｒesults The ＲCF between BacopasideⅠand other four triterpenoid saponins were 0． 980，0． 747，1． 046 and 0．
836，respectively． The two methods did not show significant difference in assay results and the ＲCFs were reliable with the relative error less than 5% ．
Conclusion The established QAMS method is feasible，accurate，simple and can be used as a method for the determination of multi-component index in the
extract of Bacopa monnieri．
Keywords:Bacopa monnieri;quantitative analysis of multi-assessment by single marker (QAMS);relative correction factor (ＲCF) ;external standard method
(ESM) ;BacopasideⅠ;Bacoside A3;BacopasideⅡ;Bacopasaponin C isomer;Bacopasaponin C
［基金项目］上海市科委资助项目(15DZ2292000);上海市科委
科技支撑项目(15401902100)
［作者简介］崔雨晴，女，硕士生，主要从事中药新药研发与中药
药剂学方面的研究工作
［通讯作者］吴飞，助理研究员。E-mail:a1983d3891h@ 126． com
假马齿苋为玄参科植物假马齿苋 Bacopa monnieri
(L．)Wettst 的全草，又名白花猪母菜，其味甘淡，性寒，
具有清热凉血、解毒消肿的功效［1］，临床上用于治疗结
膜炎、大便秘结、外痔红肿热毒等。其在印度已有
3 000年的用药历史，现代标准提取物主要用于治疗精
神病和癫痫［2］。国内对其研究开发较少，尚无临床上
市药物。假马齿苋中的化学成分主要是三萜皂苷类和
黄酮类，其中的达玛烷型三萜皂苷为主要的药效成分。
Bacoside A(假马齿苋皂苷 A)和 Bacoside B(假马齿苋
皂苷 B)可以促进正常大鼠的学习记忆能力，还可抑制
东莨菪碱、电休克和束缚应激所引起的遗忘症［3］;
BacopasideⅠ(假马齿苋皂苷Ⅰ，BacoⅠ)，可以通过调
节先天免疫和吞噬作用，促进淀粉样蛋白的减少，改善
小鼠的长期空间记忆障碍［4］。假马齿苋中皂苷类活性
成分已成为潜在的治疗或辅助治疗阿尔茨海默病重点
研发药物之一［5-6］。
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目前假马齿苋提取物测定指标主要是 Bacoside A
和 BacoⅠ［7］。课题组前期发现，假马齿苋药材中的含
量较多的原生皂苷主要有 BacoⅠ、BacopasideⅡ(假马
齿苋皂苷Ⅱ，BacoⅡ)、Bacoside A3(苦艾素 A3，Baco
A3)和 Bacopasaponin C(假马齿苋皂苷 C，Baco C)以及
Bacopasaponin C isomer(假马齿苋皂苷 C 异构体，Baco
Ci)，它们的母核结构类似，苷元均为 jujubogenin(酸枣
仁苷元)或 pseudojujubogenin(伪酸枣仁苷元)，并且后
四者中 BacoⅡ和 Baco A3、Baco C 和 Baco Ci 互为同分
异构体［8］，在此基础上建立了假马齿苋药材中 5 种皂
苷同时测定的液相方法，为进一步完善其药材质量控
制与后续的新药研发提供了依据。由于 BacoⅡ、Baco
A3，Baco C以及 Baco Ci 对照品价格昂贵且不容易获
得，该方法在实际工作中难以广泛使用，限制该药材及
提取物实现多指标质量控制。一测多评法(QAMS)是
利用中药有效成分之间的内在函数和比例关系测定一
个成分而实现多个成分的同步测定。该法已在三七、
人参、淫羊藿等药材含量测定中得到应用［9］，2015 版
《中华人民共和国药典》［10］中收载了丹参、黄连等药材
的一测多评法含量测定。
本实验以 BacoⅠ为内参物，建立了 Baco A3、Baco
Ⅱ、Baco Ci 、Baco C与 BacoⅠ的相对校正因子，采用一
测多评法测定假马齿苋提取物中 5 种皂苷成分，操作
成本低、简单快捷，符合中药多成分、多功效的作用特
点，可更为准确方便地实现对假马齿苋药材、提取物及
制剂的质量评价。
1 材料
1． 1 药物与试剂 Bacopaside Ⅰ (批号:ASB-
00002002，纯度 87． 9%)，上海迈瑞尔化学技术有限公
司。Bacoside A3、BacopasideⅡ、Bacopasaponin C isomer
及 Bacopasaponin C 对照品(纯度分别为 93． 9%、
92． 9%、85． 8%和 93． 3%)，实验室自制;无水乙醇、磷
酸(均为分析纯)，国药集团化学试剂有限公司;乙腈
(色谱纯)，上海星可生化有限公司。
假马齿苋中间体 20 批(批号分别为 140428、
140429、140514、140518、140519、140526、140531、
140627、140702、140708、150523、150604、150605、
150606、150609、150610、150611、150613、150614 和
150629)，浙江天草生物制品有限公司协助制备。
1． 2 仪器 Agilent 1200 型、1260 型高效液相色谱仪，
美国安捷伦科技有限公司，分析天平(XP205 型，
0． 01 mg)，梅特勒-托利多仪器有限公司。
2 方法与结果
2． 1 色谱条件 资生堂 Capcell-C18(5 μm，4． 6 mm ×
250 mm)色谱柱;乙腈:0． 2%磷酸水溶液(NaOH 溶液
调 pH 5． 0)= 31． 5 ∶ 68． 5;流速为 1． 0 ml /min;检测波
长为 205 nm;柱温为 40 ℃;进样量为 10 μl。样品和对
照品分离情况良好。见图 1。
注:A为混合对照品;B为样品;1． BacoⅠ;2． Baco A3;
3． Baco Ⅱ;4． Baco Ci;5． Baco C
图 1 假马齿苋中间体中的 5 种三萜皂苷
2． 2 对照品溶液的制备 精密称取各对照品适量，加
甲醇溶解，制成 5 种对照品溶液，浓度分别为 BacoⅠ
1． 019 9 g /L、Baco A3 0． 702 4 g /L、Baco Ⅱ0． 888 1 g /L、
Baco Ci 0． 552 5 g /L、Baco C 0． 628 8 g /L。依次取上述
溶液 0． 8、0． 6、0． 5、0． 9、0． 7 ml 于同一 5 ml 量瓶中，甲
醇定容，制得假马齿苋混合对照品溶液，其中 BacoⅠ
0． 163 2 g /L、Baco A3 0． 084 3 g /L、BacoⅡ0． 088 8 g /L、
Baco Ci 0． 099 5 g /L、Baco C 0． 088 0 g /L。
2． 3 供试品溶液的制备 精密称取假马齿苋中间体
15 mg，80%乙醇溶解于 10 ml容量瓶中，密塞，称重，超
声 30 min后，放冷，补足，摇匀后经 0． 45 μm 微孔滤膜
滤过，即得供试品溶液。
2． 4 方法学考察
2． 4． 1 线性关系考察 取混合对照品溶液，进样 2、
5、8、10、12 和 15 μl，各 2 次，分析记录峰面积。以对照
品的峰面积为纵坐标(Y)，对照品进样量(mg)为横坐
标(X)绘制标准曲线，得到各对照品的回归方程和线
性范围，见表 1。表明各对照品的样品量与峰面积积分
值均呈良好线性关系。
表 1 五个化合物的回归方程和线性关系
化合物 回归方程 r 线性范围 (μg)
BacoⅠ Y =28 349x － 9． 831 1 0． 326 4 ～ 2． 447 8
Baco A3 Y = 28 723x － 4． 015 0． 999 6 0． 168 6 ～ 1． 264 3
Baco Ⅱ Y =37 830x － 6． 908 0． 999 9 0． 177 6 ～ 1． 332 2
Baco Ci Y = 26 968x － 5． 279 1 0． 198 9 ～ 1． 491 9
Baco C Y = 33 822x － 5． 987 0． 999 7 0． 176 1 ～ 1． 320 6
2． 4． 2 精密度试验 取混合对照品溶液，连续进样
6 次，测定 BacoⅠ、Baco A3、Baco Ⅱ、和 Baco Ci 、Baco C
成分，结果显示各成分峰面积的 ＲSD%分别为 0． 70%、
1． 3%、1． 3%、1． 8%和 2． 0%，表明仪器的精密度良好。
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2． 4． 3 重复性试验 取假马齿苋中间体(批号:
150523)6 份，照“2． 3”项下制备供试品溶液，依法测
定，计算 BacoⅠ、Baco A3、BacoⅡ、和 Baco Ci 、Baco C成分
的 ＲSD分别为 0． 9%、1． 1%、1． 7%、2． 1%和 1． 8%，表明
方法的重复性良好。1 mg 中间体中的 5 个皂苷平均含
量依次是为 0． 108 1 mg、0． 046 4 mg、0． 063 3 mg、
0． 066 5 mg、0． 050 9 mg。
2． 4． 4 稳定性试验 取假马齿苋中间体(批号:
150523)1 份，照“2． 3”项下制备供试品溶液，0、2、4、8、
12 和 24 h 测定 BacoⅠ、Baco A3、Baco Ⅱ、和 Baco Ci、
Baco C 成分，结果显示各成分峰面积的 ＲSD 分别为
0． 3%、2． 3%、1． 1%、1． 2%和 2． 1%，表明 24 h 内供试
品溶液的稳定性良好。
2． 4． 5 加样回收试验 取假马齿苋中间体(批号:
150523)6 份，每份 7． 5 mg，精密称定，分别按样品-对照
品(1 ∶ 1)比例加入各单一对照品溶液，按“2． 3”项下制
备供试品，依法测定计算各成分的加样回收率。结果
表明方法准确性良好。见表 2。
表 2 加样回收率试验结果(n = 6)
化合物 样品质量(mg) 样品中含量(mg) 对照品加入量(mg) 测得量(mg) 回收率(%) 平均回收率(%) ＲSD(%)
BacoⅠ
7． 55 0． 816 0． 816 1． 630 99． 7
7． 48 0． 808 0． 816 1． 639 101． 8
7． 54 0． 815 0． 816 1． 626 99． 4
7． 52 0． 813 0． 816 1． 617 98． 6
7． 50 0． 811 0． 816 1． 644 102． 1
7． 51 0． 812 0． 816 1． 629 100． 1
100． 3 1． 4
Baco A3
7． 55 0． 351 0． 351 0． 697 98． 6
7． 48 0． 347 0． 351 0． 691 97． 9
7． 54 0． 350 0． 351 0． 706 101． 2
7． 52 0． 349 0． 351 0． 701 100． 2
7． 50 0． 348 0． 351 0． 686 96． 3
7． 51 0． 349 0． 351 0． 683 95． 3
98． 2 2． 3
Baco Ⅱ
7． 55 0． 478 0． 444 0． 924 100． 4
7． 48 0． 474 0． 444 0． 915 99． 5
7． 54 0． 478 0． 444 0． 920 99． 7
7． 52 0． 476 0． 444 0． 929 101． 9
7． 50 0． 475 0． 444 0． 932 102． 9
7． 51 0． 476 0． 444 0． 912 98． 2
100． 4 1． 7
Baco Ci
7． 55 0． 502 0． 497 1． 001 100． 3
7． 48 0． 497 0． 497 0． 998 100． 6
7． 54 0． 501 0． 497 1． 005 101． 3
7． 52 0． 500 0． 497 1． 012 103． 1
7． 50 0． 499 0． 497 1． 003 101． 5
7． 51 0． 499 0． 497 0． 999 100． 6
101． 2 1． 0
Baco C
7． 55 0． 384 0． 377 0． 756 98． 4
7． 48 0． 381 0． 377 0． 758 99． 9
7． 54 0． 384 0． 377 0． 774 103． 5
7． 52 0． 383 0． 377 0． 775 98． 5
7． 50 0． 382 0． 377 0． 764 101． 4
7． 51 0． 382 0． 377 0． 777 104． 5
101． 0 2． 8
2． 5 相对校正因子的测定 取混合对照品溶液，按
“2． 1”项下进行测定，分别进样 2、5、8、10、12、15 μl，各
2 次，按公式 fsi = fs / fi =(AsCi)/(Ai /Cs)(其中 As 为
内参物对照品峰面积，Cs 为内参物对照品浓度，Ai 为
待测成分对照品峰面积，Ci 为待测成分对照品浓度)，
以 BacoⅠ为内参物分别计算其对其他 4 种皂苷成分相
对校正因子。见表 3。
2． 6 耐用性和系统适用性评价［11-14］
2． 6． 1 柱温对 ＲCF值的影响 采用 Agilent 1200 型高
效液相色谱系统和资生堂 Capcell-C18色谱柱，考察柱温
(39 ℃、40 ℃和 41 ℃)对假马齿苋中间体中 Baco A3、
Baco Ⅱ、Baco Ci 、Baco C 的 ＲCF 值的影响，混合对照
品溶液分别进样 2、5、8、10、12 和 15 μl。结果显示，内
参物与各成分的相对校正因子的 ＲSD 值在 0． 3%以
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内，表明柱温对各成分 ＲCF值无显著影响。见表 4。
表 3 假马齿苋中间体中三萜皂苷成分相对因子考察
(n = 2)
进样体积(μl)
f
f BacoⅠ /BacoA3 f BacoⅠ /BacoⅡ fBacoⅠ /Baco Ci fBacoⅠ /Baco C
2 0． 977 0． 740 1． 036 0． 833
5 0． 993 0． 744 1． 050 0． 832
8 0． 979 0． 743 1． 041 0． 830
10 0． 961 0． 757 1． 050 0． 841
12 0． 981 0． 751 1． 051 0． 842
15 0． 992 0． 746 1． 050 0． 836
x 0． 980 0． 747 1． 046 0． 836
ＲSD(%) 1． 2 0． 8 0． 6 0． 6
2． 6． 2 流速对 ＲCF值的影响 采用 Agilent 1200 型高
效液相色谱系统和资生堂 Capcell-C18色谱柱，考察流速
(0． 9、1． 0 和 1． 1 ml /min)对假马齿苋中间体中 Baco
A3、Baco Ⅱ、Baco Ci 、Baco C的 ＲCF值的影响，混合对
照品溶液分别进样 2、5、8、10、12 和 15 μl。结果显示，
内参物与各成分的相对校正因子的 ＲSD 值在 0． 3%以
内，表明流速对各成分 ＲCF值无显著影响。见表 4。
2． 6． 3 不同色谱柱对 ＲCF 值的影响 分别采用
Agilent 1200 型液相色谱系统和资生堂 Capcell-C18色谱
柱、Agela Promsil C18色谱柱，考察色谱柱更换时对假马
齿苋中间体中 Baco A3、Baco Ⅱ、Baco Ci 、Baco C 的
ＲCF值的影响，混合对照品溶液分别进样 2、5、8、10、12
和 15 μl。结果显示，内参物与各成分的相对校正因子
的 ＲSD值在 0． 3%以内，表明不同色谱柱时，方法的重
复性良好。见表 4。
表 4 不同因素对校正因子的影响
影响因素
f
fBacoⅠ /BacoA3 fBacoⅠ /BacoⅡ fBacoⅠ /Baco Ci fBacoⅠ /Baco C
不同柱温
39 ℃ 0． 979 0． 748 1． 047 0． 837
40 ℃ 0． 980 0． 745 1． 044 0． 832
41 ℃ 0． 978 0． 745 1． 047 0． 832
x 0． 979 0． 746 1． 046 0． 834
ＲSD(%) 0． 1 0． 3 0． 2 0． 3
不同流速
0． 9 ml /min 0． 979 0． 748 1． 049 0． 836
1． 0 ml /min 0． 980 0． 745 1． 044 0． 832
1． 1 ml /min 0． 981 0． 746 1． 045 0． 836
x 0． 980 0． 746 1． 046 0． 835
ＲSD(%) 0． 1 0． 2 0． 3 0． 2
不同色谱柱
资生堂 Capcell-C18 0． 980 0． 745 1． 044 0． 832
Agela Promsil C18 0． 979 0． 748 1． 044 0． 834
x 0． 979 0． 746 1． 044 0． 833
ＲSD(%) 0． 07 0． 3 0． 02 0． 1
三因素考察
结果合并计算
x 0． 979 0． 746 1． 046 0． 834
ＲSD(%) 0． 1 0． 2 0． 2 0． 2
2． 6． 4 不同液相色谱系统对 ＲCF 值的影响 分别采
用 Agilent 1200型、Agilent 1260 型液相色谱系统和资生
堂 Capcell-C18色谱柱、Agela Promsil C18色谱柱，考察液相
色谱系统和色谱柱更换时对假马齿苋中间体中 Baco A3、
BacoⅡ、Baco Ci 、Baco C的ＲCF值的影响，混合对照品溶
液分别进样 2、5、8、10、12和 15 μl。结果显示，内参物与
各成分的相对校正因子的 ＲSD 值在 0． 2%以内，表明
不同液相系统时，方法的重复性良好。见表 5。
表 5 不同液相系统和色谱柱对校正因子的影响
影响因素
液相系统 色谱柱
f
fBacoⅠ /BacoA3 fBacoⅠ /BacoⅡ fBacoⅠ /Baco Ci fBacoⅠ /Baco C
Agilent 1200 型 HPLC
资生堂 Capcell-C18 0． 980 0． 745 1． 044 0． 832
Agela Promsil C18 0． 979 0． 748 1． 044 0． 834
Agilent 1260 型 HPLC
资生堂 Capcell-C18 0． 978 0． 747 1． 043 0． 835
Agela Promsil C18 0． 978 0． 746 1． 040 0． 835
考察结果合并计算
x 0． 978 0． 747 1． 043 0． 834
ＲSD(%) 0． 09 0． 2 0． 2 0． 1
2． 7 色谱峰定位考察 在仅使用 BacoⅠ对照品，计
算 Baco A3、Baco Ⅱ、和 Baco Ci 、Baco C对 BacoⅠ的相
对保留时间为指标，Ｒas = tＲa / tＲs(Ｒas 为相对保留时
间，tＲa为待测成分对照品保留时间，tＲs为内参物的保
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留时间)，从而确认 Baco A3、Baco Ⅱ、Baco Ci 、Baco C
色谱峰的位置，并根据 ＲCF 计算其他 4 种皂苷的量。
不同液相色谱系统和色谱柱时得到的 Ｒas值(见表 6)，
其 ＲSD均小于 5%，因此可以以 Ｒas值来定位 4 种皂苷
的色谱峰。
表 6 不同液相色谱系统、不同色谱柱对 BacoⅠ与其他成分的相对保留时间考察
仪器 色谱柱 Baco A3 Baco Ⅱ Baco Ci Baco C
Agilent 1200 型 HPLC
资生堂 Capcell-C18 1． 068 1． 128 1． 348 1． 484
Agela Promsil C18 1． 063 1． 122 1． 357 1． 487
Agilent 1260 型 HPLC
资生堂 Capcell-C18 1． 062 1． 127 1． 351 1． 493
Agela Promsil C18 1． 064 1． 123 1． 359 1． 492
考察结果合并计算
x 1． 064 1． 125 1． 354 1． 489
ＲSD(%) 0． 2 0． 2 0． 4 0． 3
2． 8 一测多评法与外标法结果的比较 取 15 批假马
齿苋中间体(批号 140428、140429、140514、140518、
140519、140526、140531、140627、140702、140708、
150523、150604、150605、150606、150609)，按“2． 3”项
下方法制备供试品溶液，进行分析，记录各成分的峰面
积，按照外标法和一测多评法来计算 Baco A3、Baco Ⅱ、
Baco Ci 、Baco C成分含量。按照外标法和一测多评法
测得的相对误差依次为 1． 1%、0． 7%、1． 4%、2． 3%，无
显著差异，可以用一测多评法来测定假马齿苋中间体
中的 4 种皂苷成分。见表 7。
表 7 样品测定结果(n = 2)
编号
BacoⅠ(mg /L)
外标法
Baco A3(mg /L)
外标法 一测多评法
Baco Ⅱ(mg /L)
外标法 一测多评法
Baco Ci(mg /L)
外标法 一测多评法
Baco C(mg /L)
外标法 一测多评法
140428 156． 15 70． 75 69． 31 102． 24 101． 53 129． 99 131． 85 97． 10 99． 07
140429 160． 07 70． 68 69． 24 103． 38 102． 65 94． 67 96． 02 96． 04 97． 99
140514 125． 66 62． 07 60． 80 86． 28 85． 68 93． 04 94． 37 85． 11 86． 84
140518 130． 66 63． 68 62． 38 86． 60 85． 99 100． 23 101． 66 89． 62 91． 43
140519 144． 70 71． 73 70． 27 92． 21 91． 56 99． 22 100． 64 92． 14 94． 01
140526 142． 67 69． 18 67． 76 90． 71 90． 07 97． 67 99． 06 89． 79 91． 61
140531 165． 95 73． 91 72． 40 102． 80 102． 08 98． 79 100． 20 100． 86 102． 90
140627 165． 43 72． 92 71． 44 103． 14 102． 42 98． 79 100． 20 100． 86 102． 90
140702 125． 55 63． 85 62． 55 84． 68 84． 08 95． 61 96． 98 87． 67 89． 44
140708 134． 93 69． 95 68． 52 87． 84 87． 22 95． 06 96． 43 86． 43 88． 18
150523 154． 40 75． 06 73． 53 92． 95 92． 30 92． 36 93． 68 71． 41 72． 85
150604 149． 88 74． 61 73． 08 96． 29 95． 62 90． 77 92． 07 70． 72 72． 15
150605 149． 36 64． 59 63． 27 88． 34 87． 72 92． 14 93． 46 70． 52 71． 95
150606 157． 87 65． 67 64． 33 89． 79 89． 16 95． 79 97． 16 74． 04 75． 54
150609 156． 47 66． 16 64． 81 92． 18 91． 54 97． 05 98． 44 73． 64 75． 13
150610 154． 12 64． 76 63． 44 92． 16 91． 51 98． 75 100． 16 77． 05 78． 62
150611 157． 59 64． 45 63． 13 91． 24 90． 60 97． 56 98． 95 74． 82 76． 33
150613 155． 59 65． 08 63． 75 90． 58 89． 94 96． 29 97． 67 73． 99 75． 49
150614 154． 82 64． 73 63． 41 89． 63 89． 00 95． 90 97． 27 73． 50 74． 99
150629 160． 32 67． 15 65． 77 92． 18 91． 54 99． 65 101． 08 76． 40 77． 94
2． 9 一测多评法的再验证 取中试规模下制备的 5
批假马齿苋中间体(批号 150610、150611、150613、
150614 和 150629)按“2． 3”项下方法制备供试品溶液，
进行分析，记录各成分的峰面积，分别按照两种方法计
算 Baco A3、Baco Ⅱ、Baco Ci 、Baco C成分含量，测定结
果相对误差均小于 5%，无显著差异。见表 7。
3 讨论
假马齿苋中间体主要成分为三萜皂苷，在水-醇溶
液中溶解性能较好，采用超声方法进行处理，分别对超
声溶剂(水、30%乙醇、50%乙醇、80%乙醇和无水乙
醇)、超声时间(15、30 和 45 min)、溶剂量(5、10 和
25 ml)进行考察，确定最佳处理方法为 80%乙醇超声
30 min，溶剂量 10 ml最佳。
实验中使用的 Baco A3、Baco Ⅱ、Baco Ci 、Baco C
对照品均为课题组自制，以质谱法和核磁共振光谱法
进行结构确证，通过水分测定、炽灼残渣测定和色谱法
·29·
上海中医药杂志 2016年第 50卷第 7期 SH． J． TCM Jul．，2016;Vol． 50 No． 7
测定确定对照品纯度，保证了对照品纯度的准确性。
单一对照品液相图谱上无保留时间与其他 4 个峰重合
的峰，测定计算所得的相对校正因子更加准确可靠。
耐用性和系统适应性评价时，对流动相酸度进行
考察(0． 05%、0． 1%和 0． 2%磷酸溶液分别用 NaOH溶
液调节 pH 2． 0、3． 0、4． 0、5． 0 和 6． 0)，由于 BacoⅠ的糖
链上含有磺酰基基团，在不同流动相酸度时峰的保留时
间和峰形变换较大，仅在 0． 2%磷酸水溶液(pH 5． 0 ～
6． 0)时峰形和位置最为稳定，分离度最好;对柱温进行
考察时(25 ℃、30 ℃、35 ℃和 40 ℃)，在 40 ℃左右微
调时，5 个皂苷峰的分离度不变，其他温度时 BacoⅠ和
Baco A3 的色谱峰存在不同程度的重叠。对不同牌子
的色谱柱进行考察，仅使用 Capcell-C18色谱柱、Agela
Promsil C18色谱柱时 5 个皂苷峰均达到基线分离。三
萜皂苷类紫外响应值较低及假马齿苋中 5 种皂苷极性
相近且对流动相酸度变化过于灵敏，因此采用一测多
评法测定时，要严格控制流动相比例和酸度以及样品
的进样质量，柱温、流速、色谱柱及液相系统可适度
微调。
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编辑:季春来
收稿日期:2016-03-
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14
(上接第 75 页)
够促进 BMSCs 的成骨分化，上调 BMSCs 中成骨基因
BMP-7 的表达，从而为补肾中药防治骨质疏松症提供
科学依据，进一步阐明“肾主骨”理论的科学内涵。
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编辑:季春来
收稿日期:2016-03-18
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