全 文 ：China Pharmacy 2010 Vol. 21 No. 35 中国药房 2010年第21卷第35期
道光年间的《蚕桑说》中有荷叶桑、黄头桑、木竹青、火桑、望海桑
等桑种名称。1998年出版的《中国植物志》桑科桑属下记载了11
个种[1]，而目前全国各地人工培育的桑树品种多达上千个。
本研究所分析的16批桑叶药材产地不同、品种各异，具有
一定代表性。历代医家认为经霜桑叶质量为佳，故自采样品
均为11月下旬至12月上旬采摘。16批样品HPLC图谱有7个
共有峰，反映出桑属植物在化学成分上的共性。以中检所提
供的桑叶药材为对照，其余 15批次桑叶样品的相似度为
0.658～0.982，相互吻合程度不高，说明桑叶样品药材化学成
分的质与量有较大差异，这与立地条件、种质等因素有关。
对16批样品进行聚类，聚类数为3时，来自于贵州凯里的
野生裂叶桑S16单独为一类；S8～S11共 4个来源于广东省的
样品聚为一类；其它11个样品聚为一类。聚类结果与产地、基
原有较明显的相关性。来源于广东省的 4个样品购自药材市
场或药店，原植物品种不明确。从文献资料获知，广东地区桑
树种质资源主要为广东桑类型[2]。广东桑在蚕桑界被认作M.
atropurpurea Roxb.，尽管《中国植物志》从形态分类学角度已
将其并入M. alba L.之中，但广东桑与其它M. alba L.植物在种
质上仍有所区别；加之珠江流域具热带、亚热带季风湿润气
候，有特定的生态环境，使来源于广东的桑叶药材有别于其它
样品而单独聚为一类。与中检所提供的对照药材S1聚为同一
类的有10个样品，虽然基原并不完全符合药典规定的M. alba
L.，但质量与对照药材较为一致。
桑叶药材来源多为秋末冬初饲蚕完毕后桑树所余的叶
片。各养蚕区桑树的品种基原复杂，使用者不易对商品药材
作出是否为药典所载品种的判断。因此，应根据各地桑树的
主流品种情况对桑叶进行品质研究，从众多桑树品种中寻找
优质的药用桑叶，更科学、合理地利用桑资源。
参考文献
[ 1 ] 中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志（第二十
三卷第一分册）[M].北京：科学出版社，1998：6~23.
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其应用前景[J].科技通报，2004，20（4）：289.
（收稿日期：2009-08-03 修回日期：2009-09-10）
东北铁线莲三萜皂苷对照品的制备Δ
崔国贺 1，2＊，董方言 1，张英华 1，王 藜 1，2，王 威 1 #（1.吉林省中医药科学院植物化学研究所，长春市 130012；2.
延边大学药学院，延吉市 133000）
中图分类号 R284.1；R284.2 文献标识码 A 文章编号 1001-0408（2010）35-3316-03
摘 要 目的：制备一种用于东北铁线莲含量测定的三萜皂苷对照品。方法：采用大孔吸附树脂柱色谱和制备液相色谱进行分
离，质谱和核磁共振波谱数据鉴定结构，高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定纯度。结果：制备了符合含量测定用要求的三萜皂
苷对照品3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-（1→6）-β-D-吡喃葡萄糖基-（1→4）-β-D-吡喃葡萄糖基-（1→4）-β-D-吡喃核糖基-（1→
3）-α-L-吡喃鼠李糖基-（1→2）-α-L-吡喃阿拉伯糖基齐墩果酸 28-O-α-L-吡喃鼠李糖基-（1→4）-β-D-吡喃葡萄糖基-（1→
6）-β-D-吡喃葡萄糖苷。结论：本试验结果可为东北铁线莲质量评价提供物质基础。
关键词 东北铁线莲；对照品；三萜皂苷；3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-（1→6）-β-D-吡喃葡萄糖基-（1→4）-β-D-吡喃葡萄糖基-
（1→4）-β-D-吡喃核糖基-（1→3）-α-L-吡喃鼠李糖基-（1→2）-α-L-吡喃阿拉伯糖基齐墩果酸28-O-α-L-吡喃鼠李糖基-（1→
4）-β-D-吡喃葡萄糖基-（1→6）-β-D-吡喃葡萄糖苷
Preparation of Triterpenoid Saponin Reference Substance from Clematis manshurica
CUI Guo-he，DONG Fang-yan，ZHANG Ying-hua，WANG Li，WANG Wei（Institute of Phytochemistry，Jilin
Academy of Chinese Medicine Sciences，Changchun 130012，China）
CUI Guo-he，WANG Li（College of Pharmaceutical Sciences，Yanbian University，Yanji 133000，China）
ABSTRACT OBJECTIVE：To prepare triterpenoid saponin reference substance for the content determination of Clematis mansh-
urica. METHODS：The triterpenoid saponin was isolated and purified by macroporous resin chromatography and preparative
HPLC，and its structure was identified by ESI-MS and NMR spectral techniques. The purity of triterpenoid saponin was deter-
mined by HPLC-ELSD. RESULTS：The reference substance 3-O-α-L-rhamnopyranosyl-（1→6）-β-D-glucopyranosyl-（1→
4）-β-D-glucopyranosyl-（1→4）-β-D-ribopyranosyl-（1→3）-α-L-rhamnopyranosyl-（1→2）-α-L-arabinopyranosyloleanolic ac-
id 28-O-α-L-rhamnopyranosyl-（1→4）-β-D-β-D-glucopyranosyl-（1→6）-β-D-glucopyranoside was prepared in line with the
standard of quantitative analysis. CONCLUSION：The study provide substantial basis for the quality evaluation of C. manshurica.
KEY WORDS Clematis manshurica；Reference substance；Triterpenoid saponin；3-O-α-L-rhamnopyranosyl-（1→6）-β-D-glu-
copyranosyl-（1→4）-β-D-glucopyranosyl-（1→4）-β-D-ribopyranosyl-（1→3）-α-L-rhamnopyranosyl-（1→2）-α-L-arabinopy-
ranosyloleanolic acid 28-O-α-L-rhamnopyranosyl-（1→4）-β-D-β-D-glucopyranosyl-（1→6）-β-D-glucopyranoside
Δ国家科技支撑计划课题（2007BAI38B05）
＊硕士研究生。研究方向：抗类风湿性关节炎有效成分。电话：
0431-86058616。E-mail：cuiguohe0616@yahoo.com.cn
#通讯作者：主任药师，硕士研究生导师，博士。研究方向：天然药
物化学与创新药物。电话：0431-86058670。E-mail：w.w.wangwei@
263.net
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中国药房 2010年第21卷第35期 China Pharmacy 2010 Vol. 21 No. 35
毛茛科铁线莲属植物东北铁线莲 Clematis manshurica
Rupr.的干燥根及根茎收载于2010年版《中国药典》（一部）威灵
仙项下，具有祛风除湿、通络止痛之功能，用于风湿痹痛、肢体
麻木、筋脉拘挛、屈伸不利、骨哽咽喉等证的治疗[1]。现代药理
学研究表明，东北铁线莲具有抗炎和抗肿瘤等作用[2，3]，其主要
化学成分为三萜皂苷、酚苷和大环苷等[4～6]。关于东北铁线莲
的含量测定方法，2010年版《中国药典》和文献均采用高效液
相色谱（HPLC）法测定酸水解产物中齐墩果酸和常春藤皂苷
元的含量[7]。测定原型成分来评价药材质量更为科学，但目前
尚未有东北铁线莲三萜皂苷对照品。本课题组制备了一种东
北铁线莲中含量最高的三萜皂苷 3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-
（1→6）-β-D-吡喃葡萄糖基-（1→4）-β-D-吡喃葡萄糖基-
（1→4）-β-D-吡喃核糖基-（1→3）-α-L-吡喃鼠李糖基-（1→
2）-α-L-吡喃阿拉伯糖基齐墩果酸 28-O-α-L-吡喃鼠李糖
基-（1→4）-β-D-吡喃葡萄糖基-（1→6）-β-D-吡喃葡萄糖苷
对照品，以为东北铁线莲质量评价提供物质基础。
1 仪器与试药
AV-500型核磁共振波谱仪、Micro TOFQ飞行时间质谱仪
（德国布鲁克光谱仪器公司）；LC-6AD型制备液相输液泵、
LC-20AT型溶剂输液泵、LC solution色谱工作站（日本岛津制
作所）；RI-102型制备液相示差折光检测器（日本昭光通商株
式会社）；2000ES型蒸发光检测器（ELSD，美国奥泰公司）；
BP211D型分析天平（德国赛多利斯集团）。
色谱柱：Shim-Pack PREP-ODS（250 mm×21.2 mm，5 μm）
购自日本岛津制作所；Agilent Zorbax XDB-C18（250 mm×4.6
mm，5 μm）、Agilent Zorbax SB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）购
自美国安捷伦科技有限公司；Diamonsil ODS（250 mm×4.6
mm，5 μm）购自北京迪科马科学仪器有限公司。
柱色谱用D101大孔吸附树脂（天津市海光化工有限公司）；
D941脱色树脂（山东鲁抗医药股份有限公司）；薄层色谱用ODS
板（RP-18 F254，德国Merck公司）；氘代吡啶（日本和光纯药工
业株式会社）；液相色谱用甲醇和乙腈均为色谱纯（美国Fisher
公司，批号分别为 061495、063507）；水为重蒸馏水，其它试剂
均为分析纯；东北铁线莲药材于 2008年 8月采集于吉林省磐
石市烟筒山，经吉林省中医药科学院严仲恺教授鉴定为毛茛
科铁线莲属植物东北铁线莲C. manshurica Rupr.的干燥根和
根茎，标本存放于吉林省中医药科学院植物化学研究所，样品
编号为DTXL-2008-01。
2 方法与结果
2.1 提取与分离
取东北铁线莲根和根茎 5 kg，加 70％乙醇回流提取 2次，
每次 2 h，第 1次加 8倍量，第 2次加 6倍量，分次滤过，合并滤
液，减压回收乙醇得乙醇提取物1.2 kg。取乙醇提取物1.1 kg，
加水溶解，经D101大孔吸附树脂柱，依次用水和30％乙醇洗脱，
弃去洗脱液，再用 70％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇
得70％乙醇洗脱部位220 g。70％乙醇洗脱部位加乙醇溶解，
经D941脱色树脂柱，用乙醇洗脱得总皂苷 127.7 g。取总皂苷
12 g，经制备 HPLC（流动相为甲醇-水（65 ∶ 35），流速为 2.2
mL·min-1，检测器为示差折光检测器 RI）得化合物 1 197.40
mg。
2.2 结构鉴定
白色粉末，Liebermann-Burchard反应呈阳性，Molish反应
呈 阳 性 。 1H-NMR（C6D5N，500 MHz）δ 6.24（1H，br s，
H-Rha-1），6.23（1H，d，J＝8.3 Hz，H-Glu-1），5.85（1H，br s，
H-Rha），5.84（1H，d，J＝5.5 Hz，H-Rib-1），5.43（1H，d，J＝
0.8 Hz，H-Rha-1），5.41（1H，br t，H-12），5.10（1H，d，J＝7.8
Hz，H-Glu-1），5.00（1H，d，J＝8.0 Hz，H-Glu-1），4.96（1H，
d，J＝7.6 Hz，H-Glu-1），4.86（1H，d，J＝6.0 Hz，H-Ara-1），
3.29（1H，dd，J＝11.4，4.0 Hz，H-3），1.70（1H，d，J＝6.2 Hz，
H-Rha-6），1.59（1H，d，J＝6.0 Hz，H-Rha-6），1.54（1H，d，
J＝6.0 Hz，H-Rha），1.29（3H，s，H-23），1.25（3H，s，H-27），
1.14（3H，s，H-24），1.07（3H，s，H-26），0.91（6H，s，H-29，30），
0.88（3H，s，H-25）。 13C-NMR（C6D5N，125 MHz）δ 176.59
（C-28），144.20（C-13），122.92（C-12），105.23（C-Ara-1），
104.98（C-Glc-1），104.88（C-Glc-1），104.69（C-Rib-1），
103.21（C-Glc-1），102.80（C-Rha-1，Rha-1），101.53
（C-Rha-1） ， 95.71 （C-Glc-1） ， 88.84 （C-3） ， 82.03
（C-Rha-3），81.94（C-Glc-4），78.78（C-Glc-3），78.42
（C-Glc-4），78.25（C-Glc-3），78.10（C-Glc-5），77.20
（C-Glc-5），76.82（C-Glc-5），76.67（C-Glc-5），76.59
（C-Rib-4，Glc-3），76.42（C-Glc-3），75.59（C-Ara-2），75.39
（C-Glc-2），74.89（C-Glc-2），74.59（C-Ara-3），74.19
（C-Glc-2），74.12（C-Rha-4），74.04（C-Rha-4），73.93
（C-Glc-2），72.82（C-Rha-4，Rha-3），72.67（C-Rha-3），
72.60（C-Rha-2），72.53（C-Rib-2），71.97（C-Rha-2，
Glc-4），71.81（C-Rha-2），70.95（C-Glc-4），70.37
（C-Rha-5），69.92（C-Rib-3，Rha-5，Rha-5），69.30
（C-Ara-4，Glc-6），68.64（C-Glc-6），65.58（C-Ara-5），61.96
（C-Glc-6），61.78（C-Rib-5），61.39（C-Glc-6），56.12（C-5），
48.16（C-9），47.12（C-17），46.33（C-19），42.21（C-14），41.74
（C-18），39.97（C-8），39.65（C-4），39.05（C-1），37.12（C-10），
34.09（C-21），33.20（C-7，29），32.60（C-22），30.82（C-20），
28.34（C-15），28.26（C-23），26.72（C-2），26.14（C-27），23.87
（C-11），23.77（C-30），23.46（C-16），18.66（C-Rha-6），18.56
（C-6，Rha-6），18.51（C-Rha-6），17.55（C-26），17.18
（C-24），15.73（C-25）。ESI-MS m/z 926 [M/2+23]。综合分析
数据并与文献[8]对照，鉴定化合物结构为3-O-α-L-吡喃鼠李
糖基-（1→6）-β-D-吡喃葡萄糖基-（1→4）-β-D-吡喃葡萄糖
基-（1→4）-β-D-吡喃核糖基-（1→3）-α-L-吡喃鼠李糖基-
（1→2）-α-L-吡喃阿拉伯糖基齐墩果酸28-O-α-L-吡喃鼠李
糖基-（1→4）-β-D-吡喃葡萄糖基-（1→6）-β-D-吡喃葡萄糖
苷。
2.3 纯度检测
2.3.1 HPLC-ELSD分析 （1）对照品溶液的制备：精密称取
该化合物适量，加 60％甲醇制成 1.442 mg·mL-1的溶液，即
得。（2）色谱条件 A：色谱柱为 Agilent Zorbax XDB-C18（250
mm×4.6 mm，5 μm），柱温为30℃，流动相为甲醇-水（60 ∶ 40），
流速为1.0 mL·min-1；ELSD条件：漂移管温度为95℃，载气流
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China Pharmacy 2010 Vol. 21 No. 35 中国药房 2010年第21卷第35期
速为 2.8 L·min-1。色谱条件 B：色谱柱为 Agilent Zorbax
SB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），柱温为30℃，流动相为甲醇-
水（60 ∶ 40），流速为 1.0 mL·min-1；ELSD条件：漂移管温度为
95℃，载气流速为2.8 L·min-1。色谱条件C：色谱柱为Agilent
Zorbax XDB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），柱温为 30℃，流动
相为乙腈-水（28 ∶ 72），流速为 1.0 mL·min-1；ELSD条件：漂移
管温度为 110 ℃，载气流速为 3.2 L·min-1。（3）测定方法与结
果：精密吸取对照品溶液20 μL，注入液相色谱仪，分别按不同
色谱条件记录色谱图（见图1）。结果表明，对照品为一个主色
谱峰，改变色谱柱和流动相测定均未出现异常峰，色谱峰保留
时间分别为31.938、34.814、19.051 min。
2.3.2 HPLC-ELSD面积归一化法和不加校正因子的主成分自
身对照法纯度测定 （1）对照品溶液的制备：精密称取上述化合
物适量，加60％甲醇制成5.768 mg·mL-1的溶液，即得。（2）自身
对照溶液的制备：精密吸取对照品溶液0.5 mL，置5 mL量瓶中，
加 60％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。（3）色谱条件：色谱柱为
Agilent Zorbax XDB-C18（250 mm × 4.6 mm，5 μm），柱温为
30℃，流动相为甲醇-水（60 ∶ 40），流速为1.0 mL·min-1；ELSD
条件：漂移管温度为95℃，载气流速为2.8 L·min-1。（4）面积归
一化法测定纯度方法与结果：精密吸取对照品溶液 20 μL，注
入液相色谱仪，记录时间比主色谱峰保留时间延长1倍的色谱
图。测定各杂质峰面积和色谱图总色谱峰面积，计算各杂质
峰面积之和占总色谱峰面积的百分数。结果表明，对照品的
纯度为 99.691％。（5）不加校正因子的主成分自身对照法测定
纯度方法与结果：精密吸取自身对照溶液 20 μL，注入液相色
谱仪，调节检测器灵敏度，使主色谱峰的峰高达满量程的10％
以上。分别精密吸取对照品溶液和自身对照溶液20 μL，注入
液相色谱仪，记录时间比主色谱峰保留时间延长1倍的色谱图
（见图 2）。测定对照品溶液各杂质峰面积和自身对照溶液主
色谱峰面积，以各杂质峰面积之和与主色谱峰面积比较计算
杂质含量。结果表明，对照品的纯度为99.414％。
3 讨论与小结
东北铁线莲皂苷属于以齐墩果酸为苷元的六糖至九糖五
环三萜皂苷，极性大，各化合物分离难度大。在提取过程中曾
采用正丁醇提取法提取东北铁线莲粗皂苷，但提取率低，大量
皂苷类成分残留于水层中；采用D101大孔吸附树脂和D941脱色
树脂获得高纯度的东北铁线莲粗皂苷，为进一步利用制备
HPLC纯化提供了基础。在制备纯化过程中曾采用乙腈-水作
为流动相，多次调整比例均为单一色谱峰，但含有结构相似的
3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-（1→6）-β-D-吡喃葡萄糖基-（1→
4）-β-D-吡喃葡萄糖基-（1→4）-β-D-吡喃阿洛糖基-（1→
3）-α-L-吡喃鼠李糖基-（1→2）-α-L-吡喃阿拉伯糖基齐墩果
酸 28-O-α-L-吡喃鼠李糖基-（1→4）-β-D-吡喃葡萄糖基-
（1→6）-β-D-吡喃葡萄糖苷杂质。本方法制备的 3-O-α-L-
吡喃鼠李糖基-（1→6）-β-D-吡喃葡萄糖基-（1→4）-β-D-吡
喃葡萄糖基-（1→4）-β-D-吡喃核糖基-（1→3）-α-L-吡喃鼠
李糖基-（1→2）-α-L-吡喃阿拉伯糖基齐墩果酸 28-O-α-L-
吡喃鼠李糖基-（1→4）-β-D-吡喃葡萄糖基-（1→6）-β-D-吡
喃葡萄糖苷经HPLC-ELSD分析为一个主色谱峰，改变色谱柱
和流动相测定均未出现异常峰，HPLC-ELSD面积归一化法和
不加校正因子的主成分自身对照法测定纯度均＞98％，符合
中药化学对照品要求。
参考文献
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（收稿日期：2010-05-09 修回日期：2010-06-28）
0 10 20 30 40 50 60 70 80
t/min
A
0 10 20 30 40 50 60 70 80
t/min
B
0 10 20 30 40 50 60 70 80
t/min
C
图1 高效液相色谱图
A.色谱条件A；B.色谱条件B；C.色谱条件C
Fig 1 HPLC chromatograms
1. chromatographic condition A；2. chromatographic condition B；3. chro-
matographic condition C
0 20 40 60 80 90 min
A
0 20 40 60 80 90 min
B
图2 纯度检查的HPLC图
A.对照品；B.自身对照
Fig 2 HPLC chromatograms of purity test
A. reference substance；B. self-control
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