全 文 ：　第 24卷 第 4期
2006年 11月 　　　　　　　
贵州师范大学学报(自然科学版)
Journa l o f Guizhou Norm al University (Na tural Sciences)　　　　　　　　
Vo.l 24. No. 4
Nov. 2006
文章编号:1004— 5570(2006)04 -0009 - 02
外源生长物质对金线兰增殖培养的影响*
李　光 1, 2 ,龚　宁 1, 2 ,周伟香1, 2 ,郑继军 1, 2
(1. 贵州省山地环境信息系统与生态环境重点实验室 , 贵州 贵阳　550001;
2.贵州师范大学 生物技术与工程学院 ,贵州 贵阳　550001)
摘要:利用正交设计 L9(33)考察 3种植物生长物质对金线兰(Anoectoch ilus roxburgh ii(wa ll. ) L indl. )增殖培养的
影响 , 得到金线兰茎段增殖培养的最佳培养条件为:MS +BA3mg /L +KT0. 5mg /L+NAA0. 2mg /L+蔗糖 30g /L,
3种植物生长物质作用强弱依次是:KT>BA>NAA。
关 键 词:金线兰;生长物质;增殖
中图分类号:Q945. 52　　文献标识码:A
E ffects of the hormones on promoting the protocorm smultip lication
ofAnoectochilus roxburghii(wall. )Lindl.
LIGuang
1, 2 , GONG N ing1, 2 , ZHOUW ei-xiang1, 2 , ZHENG Ji-jun1, 2
(1. Gu izhou P rov inc ia l Laboratory fo rM oun ta in Environm en t, Gu iyang, Guizhou 550001, China;2. Schoo l o f B io log ica l
Technology and Eng ineering , Guizhou Norm a lUniversity, Guiyang, Gu izhou 550001, Ch ina)
Abstract:E ffects of three ho rmones on rapid propagation o f Anoectoch ilus roxburghii(wa ll. ) Lindl.
were studied by the w ay o f L9(33)orthogonal design. The best medium fo r stem cu lture w asM S +
BA3mg /L +KT0. 5mg /L +NAA0. 2mg /L +sugar 30g /L. The e ffec t order of three hormonesw as KT >
BA>NAA.
Key words:Anoectochilus roxburghii(wall. ) Lind l. ;hormones;p ropagation culture
　 　金线 兰 (Anoectoch ilus roxburgh ii (wall. )
Lindl. )又名花叶开唇兰 [ 1] ,为兰科开唇兰属植物 ,
全草入药 ,是福建 、台湾等省和东南亚地区的珍稀
名贵药材[ 2] ;同时也是一种观赏价值较高的室内
观叶植物 ,具有广阔的开发利用前景 。然而 、由于
近年来的大量采集 ,导致金线兰野生资源日趋枯
竭 。这就产生了一个矛盾问题:一方面 、人们要利
用它的药效来治病救人 ,另一方面 、由于人们的大
量采挖 ,野生资源遭到破坏 ,人们又要加大保护这
种植物的力度。
组织培养是保护濒危植物的有效技术手段 ,可
在极短的时间里繁殖出大量新生植株。增殖培养
是组织培养中的关键步骤 ,它可以把初代培养出的
幼芽以丛生芽的形式扩大几倍 、甚至十几倍 ,为以
后的生根 、移栽提供材料 。本实验应用正交试验法
考察外源生长物质对金线兰增殖培养的影响 ,对解
决金线兰自然资源的保护和合理利用之间的矛盾
具有一定的指导意义 。
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* 收稿日期:2006 - 07 - 28
基金项目:贵州师范大学 2005年重点学生课题(GNU - SP - 2005 - SJXY -A04);贵州省高校发展专项资金自然科学类重
点项目(黔教科 2004110)
作者简介:李　光(1980 -), 男 ,在读硕士研究生 , 研究方向:植物生理生态。
DOI牶牨牥牣牨牰牰牨牬牤j牣cnki牣issn牨牥牥牬牠牭牭牱牥牣牪牥牥牰牣牥牬牣牥牥牫
1　材料与方法
1. 1　材料
本实验室于 2004. 9 ～ 2005. 12期间 ,利用野生
金线兰茎段诱导出的腋芽
1. 2　实验方法
以 MS为基本培养基 ,光照 12h,光强 2 000 lux,
蔗糖 30g /L,在超净工作台上 ,用解剖刀将无菌腋
芽切下 ,接种采取茎段直立插入培养基的方式 。采
用 L9(33)正交表进行正交试验 ,考察 3种植物生
长物质及其浓度对金线兰茎段培养的影响 (见表
1)。
表 1　因素与水平
Tab. 1　Fac to r and leve ls
水平 因素(m g /L)
BA KT NAA
1 2 0 0. 1
2 3 0. 25 0. 2
3 4 0. 5 0. 3
2　结果与分析
2. 1. 1　BA 、KT、NAA对金线兰茎段增殖培养的
结果
接种 40d后 ,统计增殖倍率 (见表 2)。
表 2　L9(33)正交试验方案与试验结果
Tab. 2　L9(33)orthogonal de sign test plan and result
代号 因素 /(mg /L)
BA KT NAA
接种外
植体数量
诱导
芽数
增殖
倍率
1 2 0 0. 1 20 44 2. 2
2 2 0. 25 0. 2 20 40 2
3 2 0. 5 0. 3 15 60 4
4 3 0 0. 2 21 102 4. 857
5 3 0. 25 0. 3 21 51 2. 429
6 3 0. 5 0. 1 20 100 5
7 4 0 0. 3 18 36 2
8 4 0. 25 0. 1 18 50 2. 778
9 4 0. 5 0. 2 20 64 3. 2
2. 1. 2　BA、KT、NAA对金线兰茎段增殖培养结果
的统计分析
对金线兰茎段组培的结果进行分析 ,得到极差
分析表 (表 3)和方差分析表(表 4)
表 3　极差分析表
Tab. 3　The table of the ana ly sis of range
K ij
腋芽增殖倍率
BA KT NAA
K 1 2. 733 3. 019 3. 326
K 2 4. 095 2. 402 3. 352
K 3 2. 659 4. 067 2. 810
R 1. 436 1. 665 0. 542
图 1　3种植物生长物质对金线兰增殖培养的影响
F ig. 1　E ffec ts of Three horm one s on prom oting
the pro to co rm sm ultiplica tion o f
Anoectochilus roxburghii(wall. ) Lind l.
表 4　方差分析表
Tab. 4　The tab le of the ana ly sis of va riance
因素 偏差平方和 自由度 F比 F临界值 显著性
A(BA) 3. 923 2 2. 535 2. 50 Δ
B(KT) 4. 248 2 2. 745 2. 50 Δ
C(NAA) 0. 562 2 0. 365 2. 50
误差 3. 10 4
　　注:Δ表示在 α=0. 20水平有显著性
由表 3和表 4可知:因子 BA和 KT对茎断增
殖培养有一定的影响 , 3种植物生长物质作用强弱
依次是:KT >BA>NAA , 3种植物生长物质对金线
兰增殖培养的影响 (见图 1),它们的最佳浓度为
A2B3C2 ,故金线兰腋芽增殖培养的最佳培养条件
为:MS+BA 3mg /L +KT0. 5mg /L+NAA0. 2mg /L +
蔗糖 30g /L。
3　讨论
正交实验设计与数据分析方法对于我们选择
最佳实验方案 ,是十分有效的工具 ,其优越性在于
能大量减少实验次数 。本研究若进行全部实验 ,必
须采用 33 =27种配方 ,而利用正交试验法只需做 9
组 ,节省了 3倍工作量 。本实验按照正交设计进行
了 9组实验 , 通过对结果的分析我们得出结论 , 发
(下转第 108页 )
10
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2. 5　样品测定
按上述的含量测定方法 ,分别测定了 10余个
批号的药材中槲皮的素含量 ,结果列于表 3。
表 3　样品测定结果
Tab. 3　The re su lts o f the samp le analysis %
药材批号 平均含量 RSD
20010824 0. 093 1. 8
20010903 0. 112 1. 3
20010923 0. 138 0. 9
2. 6　讨论
四季红药材中的槲皮素主要以槲皮苷的形式
存在 ,糖为鼠李糖 ,苷元为槲皮素 。在提取和水解
过程中 ,以 1, 2, 3, 4, 8h进行对比研究 ,结果表明 ,
以甲醇 /浓盐酸 /水 =70∶10∶20的提取 -水解溶
液 、在 70℃水浴中加热 、可使槲皮苷的提取和水解
同时进行 , 2h可达到最高提取率 。
通过对 10余批样品的测定 ,表明本法可行 ,回
收率好 ,精密度和准确性高 ,方法简便 ,检测快速等
优点 ,可适用于四季红药材的质量控制。
参考文献:
[ 1] 包骏 ,冉懋雄. 贵州苗族医药研究与开发 [ M ] . 贵州:
贵州科技出版社出版 , 1999.
(上接第 10页 )
现 3种植物生长物质对金线兰腋芽增殖培养作用
差异较大 ,其中 、KT作用最为强烈 , BA次之 , NAA
作用最弱。我们得到的金线兰茎段增殖培养的最
佳培养基为:MS +BA3mg /L +KT0. 5mg /L +
NAA0. 2mg /L +蔗糖 30g /L。此前 、金线兰增殖培
养的报道较多 ,但应用正交设计进行试验的的较
少 ,王雅英 [ 3]应用正交实验对金线兰的增殖培养
进行了研究 , 他们得的最佳配方为:MS +BA3. 5
mg /L +KT1. 5mg /L +NAA 0. 6mg /L,比我们所用
浓度高 ,而他们的最高增殖倍率为 3. 50,比我们的
低 ,这些差异可能是由于所用材料的来源不同造
成的。
由于在正交试验中误差自由度经常比较小 , F
检验只有当误差自由度较大时检验的灵敏度才较
高 ,因此在正交试验中 ,如果误差自由度小于 5,通
常增加一级 ,即计算的 F值介于表上 F0. 10和 F0. 20
之间的 ,表明该因素对指标有一定的影响 , 标以
“Δ”[ 4] 。本试验由于误差自由度小于 5,故增加一
级 , α取 0. 20。同时 、由于 C(NAA)的 F比小于 1,
我们将 F值小于 1的变异项的平方和和自由度与
误差项的平方和和自由度合并 ,作为试验误差平方
和的估计值 [ 5] ,以提高统计的灵敏度 。
致谢:在本实验过程中 ,得到了贵州师范大学
生物技术与工程学院的乙引教授和陈庆富教授在
外植体培养和实验场地给予的帮助 。
参考文献:
[ 1] 中国科学院中国植物志编委会. 中国植物志 [M ] . 第
17卷. 北京:科学出版社 , 2000.
[ 2] 毛碧增. 金线莲的快速繁殖 [ J] .浙江大学学报(农业
与生命科学版), 1999, 25(5):527-528.
[ 3] 王雅英.金线莲快速繁殖及促根壮苗试验 [ J] . 亚热带
植物科学 , 2005, 34(3):40-42.
[ 4] 中国科学院数学研究所统计组. 方差分析 [ M ] . 北京:
科学出版社 , 1977.
[ 5] 李春喜. 生物统计学 (第二版)[ M ] . 北京:科学出版
社 , 2001.
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