全 文 ：收稿日期:2003-07-31
作者简介:倪　伟 ,女 ,助理实验师 ,研究方向为植物化学.
通讯联系人:陈昌祥 ,男 ,研究员 ,Tel:(0871)5223243.
高效液相色谱法测定蜜桶花颗粒及其原植物来江藤中的麦角甾苷
倪　伟1 , 　周凌云1 , 　袁敏惠1 , 　何韵平2 , 　陈昌祥1
(1.中国科学院昆明植物研究所植物化学与西部植物资源持续利用国家重点实验室 , 云南 昆明 650204;
2.云南黄家医圈制药厂 , 云南 昆明 650000)
摘要:建立了用高效液相色谱法测定蜜桶花颗粒及其原植物来江藤中麦角甾苷含量的方法。实验采用 C18柱 ,以甲
醇-0.5%醋酸水(体积比为 42∶58)为流动相 ,在 334 nm检测波长处检测。结果表明:麦角甾苷的进样量为 0.029 ～
2.038μg时 , 进样量与色谱峰面积有良好的线性关系(r =0.999 8);回收率为 90.2%～ 93.8%;方法的精密度好 , 相
对标准偏差(RSD)为 0.34%(n =5)。方法快速 、简便 、准确 ,所测结果稳定 、重现性好 , 可作为蜜桶花颗粒质量控制
的一个检测方法。
关键词:高效液相色谱法;麦角甾苷;蜜桶花颗粒;来江藤
中图分类号:O658　　　文献标识码:A　　　文章编号:1000-8713(2004)03-0260-03
Determination of Acteoside in Mitonghua Particles and Bran-
disia hancei by High Performance Liquid Chromatography
NI Wei
1 , ZHOU Lingyun1 , YUAN Minhui1 , HE Yunping2 , CHEN Changxiang1
(1 .State Key Laboratory of Phytochemistry and Plant Resources in West China , Kunming Institute
of Botany , The Chinese Academy of Sciences , Kunming 650204 , China;
2 .Yunnan Pharmaceutical Co .Ltd.of Huang s Medical System , Kunming 650000 , China)
Abstract:A high performance liquid chromatographic method was established for the determination
of acteoside in Mitonghua particles and Brandisia hancei .The results showed that acteoside can be
extracted more efficiently with butanol than with water.Therefore , both Mitonghua particles and
Brandisia hancei were extracted with butanol.The extracts were analysed on an RP-18 column us-
ing a mixture of CH3OH-0.5%aqueous HAc(42∶58 , v/v)as the mobile phase with UV detection at
334 nm.A good linear response was observed within the range of 0.029-2.038μg of analytes(r =
0.999 8).The recoveries were 90.2%-93.8%and the relative standard deviation was 0.34%(n =
5).This rapid , simple , accurate , and reproduciblemethod is proposed for the quality control of Mi-
tonghua particles.
Key words:high performance liquid chromatography;acteoside;Mitonghua particles;Brandisia
hancei
　　来江藤(Brandisia hancei Hook.f.)为玄参科
来江藤属植物 ,分布于长江以南地区 ,又称蜜扎扎 、
蜜桶花等 。云南白族 、彝族 、哈尼族民间常将其用于
治疗骨髓炎 、风湿和肝炎等[ 1] 。来江藤的化学成分
已有报道[ 2] , 其中麦角甾苷(acteoside)为该植物的
活性成分之一 ,为此我们选其作为该植物药的一项
质量指标 。云南黄家医圈制药厂采用云南民间药用
植物来江藤全株精制成蜜桶花颗粒用于治疗肝炎 。
本文采用高效液相色谱法(HPLC)测定蜜桶花颗粒
及其原材料来江藤中麦角甾苷的含量[ 3] ,具有分离
效能高 、灵敏 、准确等优点 ,且重现性较好。
1　实验部分
1.1　仪器和试剂
　　仪器:HP Series 1100高效液相色谱仪 ,包括 HP
色谱工作站 、HP 自动进样器 、紫外二极管阵列检测
器 。
　　试剂:样品预处理所需溶剂均为分析纯试剂 ,高
效液相色谱分析所需甲醇为色谱纯试剂 ,水为重蒸
纯净水 。
　　对照品:麦角甾苷为中国药品生物制品检定所
提供(1530-200101),在确定的色谱条件下分离后采
2004年 5月
May 2004
色 谱
Chinese Journal of Chromatography
Vol.22 No.3
260 ～ 262
用面积百分比法计算对照品纯度为 98.64%, 以下
均按该含量计算 。
　　蜜桶花颗粒及其原材料来江藤由云南黄家医圈
制药厂提供。
1.2　色谱条件
　　色谱柱:Zorbax SB-C18 ,4.6 mm i.d.×250 mm ,
5 μm;流动相:甲醇-0.5%醋酸水(体积比为 42∶58),
流速:1.0 mL/min;柱温:30 ℃;检测波长:334 nm;
外标法定量。
1.3　样品处理
　　对照品溶液的制备:将麦角甾苷对照品用五氧
化二磷真空干燥24 h ,精密称取2.952 mg ,用甲醇定
容于 10 mL 容量瓶中 ,稀释至刻度 ,摇匀 ,得麦角甾
苷对照品溶液的质量浓度为0.291 1 g/L。
　　供试品溶液的制备:①将蜜桶花颗粒用五氧化
二磷真空干燥 24 h ,精密称取样品约 1 g ,取 10 mL
蒸馏水溶解 ,用水饱和的正丁醇萃取 4次 ,每次 10
mL。合并正丁醇萃取液 ,回收至干 ,再精密吸取甲
醇5 mL溶解之 ,过滤 ,即得蜜桶花颗粒供试品溶液 。
②将植物原料粉碎 ,过 40目筛 ,经五氧化二磷真空
干燥 24 h。精密称取样品约 1 g ,用氯仿超声提取除
去植物原料中低极性杂质 ,提取 2次 ,每次用 50 mL
溶剂 ,提取 10 min。弃去氯仿提取液 ,用水饱和正丁
醇超声提取 3次 ,每次用 50 mL 溶剂 ,提取 20 min。
合并正丁醇液 ,回收至干 ,精密吸取 5 mL 甲醇溶解 ,
过滤 ,即得蜜桶花颗粒原料供试品溶液 。
2　结果与讨论
2.1　样品提取方法的选择
　　选择甲醇超声提取和水溶解后再用正丁醇萃取
两种提取方法。结果表明:用水作为溶剂溶解 ,再用
正丁醇萃取3次 ,麦角甾苷提取更完全 ,且样品在水
溶液中溶解度也较好 ,故选择此方法较为理想 。
图 1　蜜桶花颗粒样品的色谱图
Fig.1　Chromatogram of Mitonghua particle sample
1.acteoside.
2.2　色谱流动相的选择
　　选择乙腈-甲醇-1%醋酸水(体积比分别为 15∶
10∶75 ,5∶20∶75 , 10∶10∶80)、甲醇-水(体积比分别为
40∶60 ,50∶50)、甲醇-0.5%醋酸水(体积比分别为 36
∶64 ,40∶60 ,42∶58)三个系统的不同比例溶剂作为流
动相进行实验。结果发现 ,用乙腈-甲醇-1%醋酸水
系统作为流动相 ,样品峰前伸 ,即使改变流动相中各
成分的比例 ,样品峰亦得不到改善;用甲醇-水系统 ,
样品峰形较好 ,但样品分离不理想;用甲醇-0.5%醋
酸水(体积比为 42∶58)系统作流动相时 ,麦角甾苷
对照品的色谱峰形较好 ,出峰时间在 5 min左右(图
略),样品色谱图(图 1)表明麦角甾苷峰与杂质峰分
离较好 ,能满足分析要求 。
2.3　色谱条件的专属性
　　我们用二极管阵列检测器对蜜桶花颗粒及其原
料药中 HPLC分离后的麦角甾苷的峰纯度进行检
测 ,结果与对照品的检测结果完全一致 ,说明该色谱
条件的专属性较强 。
2.4　线性范围的考察
　　用自动进样器分别精密量取对照品液 0.1 ,0.5 ,
1 ,3 ,5 ,7 μL 注入高效液相色谱仪 ,记录色谱图 ,测定
其峰面积值 ,并以峰面积值 A 对进样量C(μg)进行
回归 ,得标准曲线方程为 A =18 284.79C -2.24 , r
=0.999 8。试验结果表明:在进样量为 0.029 ～
2.038 μg时 ,麦角甾苷的峰面积与进样量有良好的
线性关系。
2.5　回收率试验
　　准确称量6 个已知含量的样品 ,分别定量加入
对照品溶液 ,按“1.3”节样品处理法制备样品液 ,用
HPLC分析 ,测得 6次平均加标回收率为 92.6%,相
对标准偏差(RSD)为 2.61%,结果见表 1。
表 1　回收率试验结果
Table 1　Results of recovery
Sample
No.
Background/
μg
Added/
μg
Found/
μg
Recovery/
%
1 0.174 0.116 0.281 92.2
2 0.162 0.116 0.268 91.2
3 0.165 0.144 0.298 92.4
4 0.167 0.144 0.302 93.8
5 0.166 0.173 0.326 92.4
6 0.156 0.173 0.314 90.2
2.6　精密度测定
　　用所建立的检测方法测定同一样品 ,根据测定
结果计算 ,麦角甾苷色谱峰面积的平均值为 569.74
mAU·s ,RSD为 0.79%(n =5);其保留时间的平均
值为5.110 min , RSD为 0.34%(n =5)。结果表明
·261·　第 3期 倪　伟等:高效液相色谱法测定蜜桶花颗粒及其原植物来江藤中的麦角甾苷
该检测方法重现性较好 ,仪器精密度良好。
2.7　稳定性试验
　　取一供试品溶液于 0 , 4 ,8 h分别进样 ,麦角甾
苷色谱峰面积的平均值为 577.39 mAU·s , RSD 为
0.99%,表明样品供试溶液在 8 h 内稳定性良好。但
随着时间的推移麦角甾苷容易转变 。试验结果与文
献[ 3]的报道结果一致 。
2.8　蜜桶花颗粒的测定
　　分别对 6个批号的蜜桶花颗粒按“1.3”节样品
处理方法处理 ,在选定的色谱条件下测定麦角甾苷
峰面积 ,按外标法计算其含量 ,结果见表 2。
表 2　样品中麦角甾苷含量的测定结果(n=3)
Table 2　Acteoside contents in Mitonghua
particle samples(n=3)
Sample No. Found/(mg/ g) RSD/ %
020617 0.288 1.18
020320 0.256 1.57
001105 0.257 1.65
001102 0.290 0.86
000803 0.291 1.58
000802 0.252 0.82
2.9　药材的测定
　　分别对 3个批号的来江藤按“1.3”节样品处理
方法处理 ,在选定的色谱条件下测定麦角甾苷峰面
积 ,按外标法计算麦角甾苷的含量 ,结果见表 3。
表 3　药材中麦角甾苷含量的测定结果(n=3)
Table 3　Acteoside contents in Brandisia
hancei samples(n=3)
Sample No. Found/(mg/ g) RSD/ %
20010601 4.310 1.17
20010701 4.103 2.09
20010702 4.275 1.45
参考文献:
[ 1] 　Ministry of Health , Ministry of Logistry, Kunming Military Area.
Edition of Selected Yunnan Traditional Chinese Medicines.Bei-
jing:Science Press(昆明军区后勤部卫生部编.云南中草药
选.北京:科学出版社), 1970.659
[ 2] 　He Zhendan , Wang Dezu , Yang Chongren.Acta Botanica Yun-
nanica(贺震旦 , 王德祖 , 杨崇仁.云南植物研究), 1990, 12
(4):439
[ 3] 　Zhang Siju , Chen Miaohua, Liu Li.Chinese Pharmaceutical
Journal(张思巨, 陈妙华 , 刘　丽.中国药学杂志), 1996, 31
(6):335
河北省津杨滤材厂
　　河北省津杨滤材厂已有二十多年的历史 ,是我国最早生产
固相萃取柱的专业厂家 ,主要产品 PT-系列固相萃取柱已在多
项研究工作中应用(在上千篇论文中被报道)。我厂目前可生
产十多种不同规格和类型的萃取柱及微孔滤膜 、固相萃取仪等
产品 。上述产品已广泛应用于公安 、防疫 、农业和科研等领域。
为满足广大客户的要求 ,最近我厂又开发了“瘦肉精” 、“毒鼠
强” 、“农药残留” 、“磺胺类药物”等检测专用柱。
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能应客户要求定制各种规格 、类型的固相柱及滤膜 、萃取仪等 ,同时提供各种萃取填料(键合相 、高聚
物 、硅胶 、氧化铝 、树脂 、活性炭等)。
　　我厂一贯奉行“视客户为上帝”的宗旨 ,坚持优质低价的经营方针 ,产品价格仅为进口产品的 1/3
～ 1/5 ,产品具有很高的性能价格比。
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垂询电话:(0317)7296716　　　　　手机:13582704855　　　　　　联系人:张洪军
·262· 色 谱 第 22卷