全 文 ：·技术与方法·
生物技术通报
BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2015, 31(12):91-96
大豆富含蛋白质和油脂，是我国极重要的粮食
作物和经济作物［1］。通过基因工程改良大豆育种是
现在的研究热点。第一例转基因植物就是采用的就
是农杆菌介导法，通过这一方法已获得的转基因植
物占转基因植物总数 4/5，已成为植物基因转化首选
方法［2］。虽然农杆菌介导的大豆遗传转化技术日趋
成熟，但有很多瓶颈问题急需优化改良，转化效率低，
重复性差，转化周期很长等，目前提高转化效率和
相对稳定性依然是现在转基因研究的重点［3-5］。转
基因技术改变人们生活的同时，转基因植物生物安
全性受到社会各界关注，其中最主要的问题是选择
标记，目前切除选择性标记的方法包括共转化系统、
同源重组、转座子系统和位点特异性重组系统等［6-8］。
Cre/loxp 标记去除（位点特异性重组系统）具有较高
的可控性，是目前转基因研究中应用广泛较理想的
标记去除方法。
收稿日期 ：2015-03-28
基金项目 ：转基因重大专项（2014ZX0800404B）
作者简介 ：杨晓倩，女，硕士研究生，研究方向 ：作物遗传育种 ；E-mail ：18330381190@163.com
通讯作者 ：乔亚科，男，硕士，教授，研究方向 ：大豆遗传资源 ；E-mail ：qiaoyake@126.com
农杆菌介导大豆子叶节影响因素的研究
杨晓倩  李桂兰  刘晨光  董秋平  张锴  乔亚科
（河北科技师范学院 生命科技学院，昌黎 066600）
摘 要 ： 为提高大豆遗传转化效率，采用农杆菌介导遗传转化的方法，以大豆子叶节为外植体，研究共培养阶段浸染液浓
度及外界培养条件（共培养温度和天数）和培养基添加物对转化效率和芽诱导率的影响。结果显示，浸染液 OD600=0.5 的诱导率
最高，共培养温度为 24℃，共培养天数为 10 d 具有较高转化效率，共培养基中加入一定浓度的单壁碳纳米管（Single-wall carbon
nanotube，NM）对诱导卡那霉素抗性不定芽有促进作用。PCR 检测表明 PHR1 基因已整合到 T1 代大豆基因组中，初步证明可在大
豆基因组中稳定遗传。
关键词 ： 农杆菌介导 ；大豆子叶节 ；共培养 ；单壁碳纳米管
DOI ：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2015.12.013
The Factors Affecting Genetic Transformation of Soybean Cotyledon
Node Mediated by Agrobacterium tumefacions
Yang Xiaoqian Li Guilan Liu Chenguang Dong Qiuping Zhang Kai Qiao Yake
（Life Science and Technology Institute，Hebei Normal University of Technology，Changli 066600）
Abstract: It was to improve the efficiency of soybean genetic transformation, we used the soybean cotyledon node as explants via
Agrobactium-mediated transformation method, and investigated the effect of bacterial concentration, co-culture temperature and time on the
transformation efficiency and the rate of bud induction. The results showed that under the OD600 = 0.5 of infection solution concentration, and
induction rate was the highest. The conversion efficiency was higher under the environment of co-culture temperature being 24℃ for 10 days. The
single-wall carbon nanotubes added to culture medium improved the induction of the adventitious bud with kanamycin-resistance. Moreover, the
PCR results indicated that PHR1 gene was integrated into T1 genome generation, preliminarily proving that the heredity of gene in the soybean
genome was stable.
Key words: Agrobactium-mediated ；soybean cotyledon node ；co-culture ；single-wall carbon nanotube
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2015,Vol.31,No.1292
本研究以 4 个栽培品种豫豆 22、冀豆 16、中黄
13、吉林 35 为转化受体材料，探究共培养天数、共
培养温度、单壁碳纳米管（NM）对诱导率和转化效
率的影响，以期为根癌农杆菌介导的大豆子叶节转
化体系的优化提供参考，获得的 AtPHR1 转化植株，
以期为耐低磷大豆培育提供基础材料。
1 材料与方法
1.1 供试材料
1.1.1 大豆品种 豫豆 22、冀豆 16、中黄 13、吉
林 35。
1.1.2 菌株和质粒 根癌农杆菌菌株为 LBA4404，
质粒为 PX6-PHR1（图 1），含 AtPHR1 基因（南开
大学李明刚教授提供）。
1.1.3 主要培养基，见表 1。
1.2 方法
1.2.1 转化体系优化
1.2.1.1 菌液制备 从 4℃保存的平板上挑取单菌落
接种到 LB 液体培养基中，28℃培养 OD600=0.6-0.8
时取 1 mL 菌液转入新鲜 LB 培养基中二次活化，培
养至 OD600=0.6-0.8，5 000 r/min，离心 10 min，去上
G10-90
Loxp
P1/P2
LB XVE NPTII CRE PHR1
Loxp
P3/P4
3A-T RB
表 1 农杆菌介导转化过程中的主要培养基
主要培养基 培养基成分
共培养培养基 1/10B5+1.7 mg/L 6-BA+200 μmol/L AS+400 mg/L L-cys+1 mmol/L DTT+1 mmol/L Na2S2O3+3％蔗糖 +0.6％琼脂（pH5.8）
芽诱导培养基 B5+1.7 mg/L 6-BA+100 mg/L Km+250 mg/L Carb+250 mg/L Cef+3％蔗糖 +0.8％琼脂（pH5.8）
生根培养基 1/2MS+1.5 mg/L IBA+0.2 mg/L NAA+250 mg/L Carb+250 mg/LCef+2％蔗糖 +0.8％琼脂（pH5.8）
图 1 质粒的 T-DNA 区
清液，菌体重悬于共培养液体中调整 OD600=0.3-0.5。
1.2.1.2 共培养 将无菌苗制备的子叶节放入上述
制备好的菌体悬浮液中，侵染 30-60 min 后近轴面
朝下接种到共培养基上培养。本研究在共培养阶段
设置了以豫豆 22 无菌苗的子叶节为转化外植体的 3
个单因素试验。（1）共培养温度试验 ：培养温度分
别设置为 19、22、24 和 25℃ ；（2）共培养天数 ：设
置了共培养时间分别为 7、10 和 13 d 的单因素试验，
每个处理接种 200 个外植体 ；（3）单壁碳纳米管分
散液（NM）对外植体芽诱导率的影响 ：选取 3 个
大豆品种（豫豆 22、中黄 13、吉林 35）的子叶节
为外植体放入含 0 和 40 mg/L NM 的不含 km、carb、
cef 的芽诱导培养基中，选出芽诱导率最高的品种 ；
（4）含 40 mg/L NM 浸染液对诱导率的影响 ：以豫豆
22 子叶节为试验材料，OD600=0.5 的菌液离心后重悬
于含40 mg/L NM的共培养液体培养基中作为浸染液，
以无任何添加物的浸染液做对照，比较两种浸染液
对芽诱导率的影响 ；（5）含不同浓度 NM 对外植体
芽诱导率的影响 ：以豫豆 22 子叶节为试验材料，在
共培养固体培养基中加入单壁碳纳米管，设置 4 各
处理，浓度分别为 0、20、40 和 60 mg/L，每个处理
接种 150 个外植体 ；（6）以豫豆 22 子叶节为试验材
料，在共培养液体培养基中加入 40 mg/L NM，同时
在固体培养基中加入 20 mg/L NM，以无添加的培养
基为对照，统计两种试验条件下芽诱导率和转化效
率的差异。
1.2.1.3 植株再生 共培养后的子叶节用无菌水冲
洗后接种于芽诱导培养基，每 15 d 继代一次。经过
两次继代后将长出的抗性芽转入芽伸长培养基中，
待抗性芽生长至 2-4 cm 后转入生根培养基中，根系
健壮，炼苗 3-5 d 后移栽到草炭土∶蛭石 =3∶1 的
营养土中。
2015,31(12) 93杨晓倩等：农杆菌介导大豆子叶节影响因素的研究
1.2.2 转 PHR1 基因植株的检测 选用 SDS 法提取
卡那霉素抗性植株叶片的基因组 DNA，进行目的基
因的扩增和琼脂糖凝胶电泳的检测。扩增设计的引
物 为 ：P1 ：5-CCATCTCCACTGACGTAAGGGAT-3 ；
P2 ：5-CTCGTCAATTCCAAGGGCATCGGT-3。P3 ：
5-CTGGACACAGTGCCCGTGTCGGA-3 ；P4 ：5-AC-
AGCCTCAACAAAAGCCTCGTG-3。PHR1 ：5-CCTC-
ACACGCACTTCTTCAA-3 ；PHR2 ：5-GCTCTTTCA-
CTACCGCCAAG-3 其 中 P1/P2 为 载 体 扩 增 引 物，P1
在 G10-90 处，P2 在 第 一 个 Loxp site 下 游， 片 段
长 度 是 653 bp ；P3 设 计 在 Cre 上 游，P4 在 第 二 个
Loxp site 下游的基因内部，P3/P4 片段长度为 1.3 kb。
PHR1/PHR2 为 ATPHR1 基因内部特异性引物，扩增
片段长度为 710 bp。
1.2.3 数据统计
芽 诱 导 率（%）= 出 芽 外 植 体 数 / 总 外 植 体
数 ×100%。
阳 性 率（%）=PCR 阳 性 株 数 / 总 外 植 体
数 ×100%。
2 结果
2.1 转AtPHR1植株的获得
采用农杆菌介导子叶节的遗传转化方法，将
AtPHR1 基因分别转入豫豆 22、冀豆 16 和中黄 35
中， 设 计 P1/P2、P3/P4 和 PHR1/PHR2 引 物（1.2.2 方
法）PCR 检测转基因植株。P1/P2 扩增结果（图 2）
如预期大小，目的片段长度约为 650 bp，P3/P4 扩增
（图 3）片段长度为 1.3 kb，符合预期大小。PHR1/
PHR2 扩增结果（图 4）符合预期大小，片段长度约
为 710 bp。
M
700
bp
500
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
M ：DL2000 Marker ；1 ：野生型对照 ；1-19 ：转化 AtpHR1 基因的大豆植株 ；
20 ：质粒 ；6、11、13、15、18、19 ：阳性转化植株
图 2 部分转基因植株以 P1/P2 引物的 PCR 扩增结果
1 2 3 4 5 M
1.5
kb
1.3
kb
1
M ：DL1500 Marker ；1 ：野生型对照 ；2-4 ：阳性转化植株 ；5 ：质粒
图 3 部分 T1 转基因植株以 P3/P4 引物的 PCR 扩增结果
1 2 3 4 5 6 7 8 9 M
1000
bp
500
M ：DL5000 Marker ；1-7 ：阳性转化植株 ；8 ：野生型对照 ；9 ：质粒
图 4 部分 T1 转基因植株以 PHR1/PHR2 引物的 PCR 扩
增结果
植体分别浸染在不同的菌液浓度中，研究不同浸染
菌液浓度对转化效率的影响。结果（表 2）显示，
随菌液和侵染液浓度的增加，转化阳性率的变化
较大，当浸染液 OD600=0.5 时，转化效率达到最高，
达 10.4%。故本研究其他后续实验均采用菌液浓度
OD600=0.5，侵染液浓度 OD600=0.5 的组合进行处理。
表 2 不同菌液浓度和侵染液浓度对阳性率的影响
菌液浓度 /OD600 浸染液浓度 /OD600 阳性率 /%
0.2 0.2 2.5±0.2
0.3 0.3 4.6±0.1
0.4 0.4 2.7±0.1
0.5 0.5 10.4±0.5
0.6 0.6 4.8±0.1
2.3 遗传转化共培养阶段影响因素
2.3.1 适宜的共培养时间 不同共培养时间培养后
的阳性转化率，以共培养 10 d 的转化率是最高的，
达 8.06%，共培养 7 d 和 13 d 的转化效率则分别是
3.01% 和 3.39%（图 5），表明适宜的共培养时间为
10 d。
2.3.2 适宜的共培养温度 当共培养温度为 19℃和
22℃时的转化效率偏低，仅为 1.45% 和 1.73%，而
2.2 不同浸染液浓度对转化效率的影响
本实验以豫豆 22 为材料，设计浸染菌液浓度
分别为 OD600=0.2、0.3、0.4、0.5、0.6，将子叶节外
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2015,Vol.31,No.1294
共培养温度为 24℃时培养的外植体有最高转化效
率，为 4.12%，当温度继续升高至 26℃时转化效率
又有降低趋势（图 6），结果表明共培养 24℃时更有
利于提高转化效率。
相比对照的芽诱导率高 337.3%，实验表明共培养液
体培养基添加 40 mg/L NM 对芽诱导率有促进作用。
2.4.3 共培养固体培养基添加 NM 对芽诱导率的影
响 在共培养阶段加入不同浓度的 NM 对卡那霉素
抗性不定芽的诱导（图 5），加入 20 mg/L NM 后芽
诱导率（14.18%）比对照高 81.8%，NM 浓度升高至
40 mg/L 后，芽诱导率降到 6.19% 低于对照，NM 加
至 60 mg/L 后，芽诱导率为 9.20% 与对照相近，。说
明加入 20 mg/L NM 后的共培养基有利于抗性不定芽
的诱导分化。
2.4.4 共培养基与浸染液中分别添加适宜浓度 NM
对转化效率的影响 以豫豆 22 子叶节为试验材料，
在共培养液体培养基中加入 40 mg/L NM，同时在固
体培养基中加入 20 mg/L NM，以无添加的培养基为
对照，统计两种实验条件下芽诱导率和转化效率的
差异。结果（表 4）显示，加入适宜浓度的 NM 处
理后的芽诱导率与对照相差不多，但阳性率比对照
低，说明在固体和液体培养基中都加 NM 对遗传转
化无促进作用。
表 4 共培养基中加入 NM 对芽诱导率的影响
处理 芽诱导率 /%
固体 0 mg/L+ 液体 40 mg/L 18.8±0.2
固体 0 mg/L + 液体 0 mg/L 4.4±0.1
固体 20 mg/L + 液体 40 mg/L 5.0±0.1
3 讨论
本研究在参考前人对农杆菌介导大豆子叶节转
化的优化改良经验基础上，进一步探究了重要影响
因素浸染液浓度、共培养天数、共培养温度和单壁
碳纳米管液对芽诱导率的影响。
农杆菌侵染效率是影响植物转化效率的重要因
10
8
6
4䱣ᙗ⦷/%
2
0
7 ޡษޫཙᮠ/d10 13
图 5 共培养天数对阳性率的影响
2.4 NM对芽诱导率的影响
2.4.1 单壁碳纳米管分散液对不同品种的出芽率的
影响 以中黄 13、吉林 35、豫豆 22 为实验材料，
在芽诱导培养基中加入 40 mg/L 的 NM，结果见表 1，
吉林 35 子叶节外植体的 40 mg/L NM 处理的芽诱导
率比对照低 24.9%，而其他两个品种的芽诱导率都
高于对照，其中豫豆 22 芽诱导率比对照高 124.5%，
效果最明显，试验表明在豫豆 22 中添加 40 mg/L 的
NM 明显促进子叶节分化，后续 NM 探究实验均使用
豫豆 22 为实验材料。
2.4.2 浸染液添加 NM 对芽诱导率的影响 以豫豆
22 子叶节为实验材料，OD600=0.5 的菌液离心后重悬
于含40 mg/L NM的共培养液体培养基中作为浸染液，
以无任何添加物的浸染液做对照，统计两种浸染
液对芽诱导率的影响。结果（表 4）显示，加入 40
mg/L NM 的浸染液芽诱导率为 18.8%，对照为 4.4%，
5
4
3䱣ᙗ⦷/% 2
1
0
19 ޡษޫ⑙ᓖ/ć22 24 25
图 6 不同共培养温度对转化效率的影响
表 3 40 mg/L 的 NM 对不同品种出芽率的影响
品种
NM 浓度 /
（mg·L-1）
总外植
体数 / 个
出芽外植
体数 / 个
芽诱导
率 /%
中黄 13 0 100 39 39.0 ±1.2
40 255 170 66.7 ±1.9
吉林 35 0 105 83 79.0 ±1.5
40 135 80 59.3 ±0.7
豫豆 22 0 140 51 36.4 ±1.3
40 115 94 81.7 ±1.5
2015,31(12) 95杨晓倩等：农杆菌介导大豆子叶节影响因素的研究
素，主要与菌株种类、菌液浓度、侵染液浓度和侵
染时间有关［9］。其中，农杆菌菌液浓度代表着菌液
生长时期，而处于对数生长期的菌液被认为是侵染
能力最强、侵染效率最高的状态。侵染液浓度代表
着一定体积内菌体的含量，浓度过低则没有足够的
外源 DNA 进入外植体，侵染效果差，而侵染液浓度
过高，则会使多余的菌体附着在外植体伤口周围，
导致后期农杆菌生长旺盛、难以抑制，对植物细胞
造成毒害。本研究结果发现，以菌液和浸染液的
OD600=0.5 的抗性芽诱导率最高，处理效果最佳，武
小霞等［10］研究显示浸染液的 OD600=0.5 的芽诱导率
最高，与本研究结果一致。
共培养阶段是建立高效转化体系的重要参数，
在此阶段是子叶节和农杆菌共生时期，所涉及到的
因素都是影响转化效率的关键。合适的共培养温度
能使农杆菌和外植体均处于遗传转化的最佳状态，
共培养温度过低或过高都直接影响了外植体的转化
效果，关于这方面的研究仍然不断进行，但结果不
尽相同［11］。本研究显示共培养温度为 24℃，转化
效率最好，是农杆菌与外植体均处于适宜的转化状
态的温度，使二者都能达到较理想的转化状态。共
培养天数同样是共培养阶段极重要的转化效率影响
因子，理论上讲随共培养时间增长，农杆菌繁殖越
多，转化就越容易完成，但是农杆菌的过量繁殖反
而会对子叶节造成毒害，降低转化效率［12］。目前普
遍认为以大豆子叶节遗传转化的最佳共培养天数为
3-5 d［12-14］，本研究就共培养时间对转化率的影响
进行探究，结果显示共培养 10 d 的阳性率更高，7 d
和 13 d 的转化效果不及 10 d，可能是由于共培养时
间较短时，影响了 T-DNA 转移到植物细胞的几率，
而共培养时间过长时农杆菌的过量繁殖对子叶节外
植体造成影响，子叶节受到毒害，使转化效率降低，
而且共培养后期农杆菌抑制困难，本研究中取得最
优转化效率的共培养天数为 10 d。
纳米材料尺寸为 1-100 nm，在电子机械、农业
化工、生物医药等方面都应用广泛，人工纳米材料
伴随科技发展引起人们高度关注［15］。目前纳米材料
对植物生长发育或促进或抑制或无影响的作用都有
报道［16］，但都尚在起步阶段。关于人工纳米材料可
以促进大豆萌发［17］，提高光合反应效率［18］，增加
某些胁迫相关基因的表达［19］，制成纳米增效肥料等
时有报道，综合发现纳米材料对植物生长的影响与
纳米材料的种类、浓度、形态以及植物的类型有关。
纳米材料最主要的特点是尺寸小，处于单个原子或
分子与宏观粒子交界的过渡区域，纳米材料有小尺
寸效应，粒子无周边边界，使其产生的磁场与植物
本身的磁场具有宏观量子隧道的主动靶向性，将会
携带大量的养分离子进入植物体内，因此相应地提
高了植物吸收养分和水分的能力。本研究将单壁碳
纳米管分散液加入共培养基中，探究其对大豆子叶
节不定芽诱导率的影响。结果表明不同品种的子叶
节外植体在中添加 40 mg/L NM［20］诱导培养基诱导
分化的效果不同，本研究中豫豆 22 和中黄 13 的诱
导率比对照高，吉林 35 低于对照 ；在浸染液中添加
40 mg/L NM 和固体培养基中加入的 20 mg/L NM 可提
高芽诱导率，可能原因是 NM 的小尺寸效应。
本研究应用的载体具有 Cre/loxp 系统，可删除
除卡那抗性标记。PHR1 基因是耐低磷相关的正向
调控转录因子基因，是高等植物中的磷信号调控体
系核心转录因子，参与植物磷素运输和再利用［21，22］
P1/P2、P3/P4 和 PHR1 /PHR2 引物扩增结果说明启动子
G10-90、Cre/loxp 系统及 AtPHR1 基因完整的整合进
大豆基因组中，为进一步获得删除卡那抗性标记的
转 PHR1 基因大豆奠定材料基础。
4 结论
本研究探讨的农杆菌介导子叶节影响因素结果
显示菌液和浸染液 OD600=0.5，共培养温度为 24℃，
共培养 10 d 的转化效率最高，诱导培养基和共培养
基中加入 NM 可提高芽诱导率。
20
15
10㣭䈡ሬ⦷/% 5
0
0 অ໱⏢⎃ᓖ/mg·L-120 6040
图 7 不同 NM 浓度对抗性芽诱导率的影响
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2015,Vol.31,No.1296
参 考 文 献
［1］余永亮 , 梁慧珍 , 王树峰 , 等 . 中国转基因大豆的研究进展及其
产业化［J］. 大豆科学 , 2010, 29（1）：143-150.
［2］任海祥 , 南海洋 , 曹东 , 等 . 大豆转基因技术研究进展［J］. 东
北农业大学学报 , 2012, 43（7）：6-12.
［3］Somers DA, Samac DA, Olhoft PM. Recent advances in legume
transformation［J］. Plant Physiology, 2003, 131 ：892-899.
［4］刘圣君 , 黄健秋 , 卫志明 . 影响农杆菌介导的大豆子叶节遗传
转化的因素［J］. 分子细胞生物学报 , 2007, 40（5）：286-292.
［5］刘翠 , 李喜焕 , 常文锁 , 等 . 农杆菌介导大豆不同外植体遗传转
化研究］J］. 华北农学报 , 2012, 27（3）：35-40.
［6］Bertolla F, Kay E, Simonet P. Potential dissemination of antibiotic
restistace genes from transgenic plants to microorganisms［J］.
Infect Control Hosp Epidemiol, 2000, 21（6）：390-393.
［7］Losey JE, Rayor LS, Carter ME. Transgenic pollen harms monarch
larvae［J］. Nature, 1999, 399 ：214-215.
［8］祁永斌 , 刘庆龙 , 陆艳婷 , 等 . 转基因植物中删除选择标记基因
的研究进展［J］. 浙江农业学报 , 2014, 26（5）：1387-1393.
［9］周思军 , 李希臣 , 刘昭军 , 等 . 大豆农杆菌介导转化系统的优化
研究［J］. 大豆科学 , 2001, 32（4）：313-319.
［10］武小霞 , 李静 , 刘伟婷 , 等 . 大豆农杆菌子叶节转化菌株适宜
生长时期及浸染浓度的研究［J］. 东北农业大学学报 , 2010,
41（1）：1-6.
［11］刘海坤 卫志明 . 利用农杆菌介导转化大豆成熟种子胚尖获得
转基因植株［J［. 植物生理与分子生物学学报 , 2004, 30（6）：
631-636.
［12］段莹莹 , 赵琳 , 陈李淼 , 等 . 农杆菌介导的大豆子叶节和下
胚轴转化方法的比较及优化［J］. 大豆科学 , 2010, 29（4）：
590-593.
［13］Meurer CA, Dinkins RD, Collins GB. Factors affecting soybean
cotyledonary node transformation［J］. Plant Cell Rap, 1988, 18 ：
180-186
［14］应珊 , 何晓薇 , 王秀荣 , 寿惠霞 . 影响农杆菌介导的大豆转化
效率的因素研究［J］. 分子植物育种 , 2008, 6（1）：32-40.
［15］Masciangioli T, Zhang WX. Environmental technologies at the
nanoscale［J］. Environ Sci Technol, 2003, 37 ：102a-108a.
［16］吕继涛 , 张淑贞 . 人工纳米材料与植物的相互作用：植物毒性、
吸收与传输［J］. 化学进展 , 2013, 25（1）：156-163.
［17］陆长梅 , 张超英 , 温俊强 , 等 . 纳米材料促进大豆萌发 , 生长
的影响及其机理研究［J］. 大豆科学 , 2002, 21 ：168-172.
［18］Ma LL, Liu C, Qu CX, et al. Rubisco activase mRNA expression in
spinach ：Modulation by nanoanatase treatment［J］. Biological
Trace Element Research, 2008, 122（2）：168-178.
［19］Khodakovskaya M, Dervishi E, Mahmood M, et al. Carbon
nanotubes are able to penetrate plant seed coat and dramatically
affect seed germination and plant growth［J］. American Chemical
Society Nano, 2009, 10 ：3221-3227.
［20］王晓红 . 单壁碳纳米管对大豆子叶节外植体分化与再生影响
的研究［D］. 北京 ：中国农业科学院 , 2013.
［21］杨致荣 , 王兴春 , 李西明 . 高等植物转录因子的研究进展［J］.
遗传 , 2004, 26（3）：403-408.
［22］张彩英 , 李喜焕 , 常文锁 , 等 . 大豆 GmPHR1 基因及其编码的
蛋白和应用 ：中国 , ZL 201010528355.X［P］.2012-09-05.
（责任编辑 狄艳红）