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生物技术通报
BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2012年第8期
尸胺（1， 5-戊二胺）是赖氨酸脱羧的产物，是
合成生物塑料聚酰胺的原料［1］。尸胺可以作为一种
有效治疗痢疾的药物［2］，也是微生物细胞内调节铁
离子浓度的“铁亲和系统”的主要组成成分［3］。
化学合成法生产尸胺需要以石油为原料，环境
污染严重，利用微生物生产尸胺是一种简单、经济、
环保、高效的方法。大肠杆菌可以直接合成尸胺，
在酸性pH值下可诱导CadA将赖氨酸脱羧生成尸胺，
收稿日期 : 2012-02-12
基金项目 : 国家自然科学基金项目（21176910）, 天津市科技支撑计划项目（11ZCKFSY00900）, 天津市应用基础及前沿技术研究计划项目
（11JCYBJC 09600）, 国家“863”项目（2007AA02Z212）
作者简介 : 黄云雁 , 女 , 硕士研究生 , 研究方向 : 微生物与生化药学 ; E-mail: yoyo_keai@126.com
通讯作者 : 黎明 , 男 , 副教授 , 硕士生导师 , 研究方向 : 微生物工程 ; E-mail: kdliming@yahoo.cn
赖氨酸-尸胺反向转运蛋白 cadB基因谷氨酸棒杆菌
表达载体的构建及转化
黄云雁 黎明 刘萌 孙昕 周丽颖 路福平
（天津科技大学生物工程学院 工业发酵微生物教育部重点实验室 工业酶国家工程实验室
天津市工业微生物重点实验室 ，天津 300457）
摘 要： 旨在提高谷氨酸棒杆菌合成尸胺的能力，将 CadB克隆至谷氨酸棒杆菌中，与 LDC共表达，在谷氨酸棒杆菌合成
尸胺的同时，帮助尸胺转运至细胞外，解除尸胺的反馈抑制作用。谷氨酸棒杆菌能够高产赖氨酸脱羧酶的底物 L-赖氨酸，但不含
ldc和 cadB基因，因而不能够直接合成尸胺。从 E. coli K12中克隆出赖氨酸-尸胺反向转运蛋白基因，与绿色荧光蛋白基因 gfp融
合构建成融合表达载体 pXBG，并转化至谷氨酸棒杆菌进行诱导表达，结果表明表达的 CadB蛋白可以正确的定位于谷氨酸棒杆菌
的细胞膜上。将基因 cadB连接到含有赖氨酸脱羧酶基因的 pXMJ19-ldc上，构建成能够共表达赖氨酸脱羧酶和赖氨酸-尸胺反向转
运蛋白的重组质粒 pXLB，并转化到谷氨酸棒杆菌中。
关键词： 尸胺 赖氨酸-尸胺反向转运蛋白 CadB 谷氨酸棒杆菌 赖氨酸脱羧酶 共表达
Construction and Transformation of Corynebacterium glutamicum
Expression Vector of Cadaverine-lysine Antiporter cadB Gene
Huang Yunyan Li Ming Liu Meng Sun Xin Zhou Liying Lu Fuping
（Key Laboratory of Industrial Fermentation Microbiology，Ministry of Education，National Engineering Laboratory for Industrial Enzymes，
Tianjin Key Laboratory of Industrial Microbiology，College of Biotechnology，Tianjin University of Science and Technology，Tianjin 300457）
Abstract: In order to improve the ability of the synthesis of cadaverine by Corynebacterium glutamicum, CadB was cloned into the
bacteria and coexpressed with LDC for transporting cadaverine to extracellular area and reducing the feedback inhibition. C. glutamicum can
produce lysine, but can not be able to synthesize cadaverine directly without lysine decarboxylase gene and cadaverine-lysine antiporter gene.
In our previous job, cadaverine-lysine antiporter gene cadB which was proliferated by polymerase chain reaction by using chromosomal DNA of
E. coli K12 as the template was fused to gfp to construct pXBG. Then the recombinant plasmid pXBG was electrotransferred to C. glutamicum
ATCC13032. The result indicated that CadB can express in C. glutamicum ATCC13032 and it located in the cell membrance. The recombinant
expression vector pXLB containing ldc and cadB gene was constructed and transferred to C. glutamicum ATCC13032. Construction of co-
expression vector pXLB is important for producing cadaverine by Corynebacterium glutamicum.
Key words: Cadaverine Cadaverine-lysine antiporter CadB Corynebacterium glutamicum Lysine decarboxylase Co-expression
2012年第8期 95黄云雁等 ：赖氨酸-尸胺反向转运蛋白 cadB 基因谷氨酸棒杆菌表达载体的构建及转化
但菌体耐尸胺浓度低，尸胺合成调控复杂，尸胺产
量极低［4］。谷氨酸棒杆菌可以大量合成尸胺的底物
赖氨酸，但不含 ldc 和 cadB 基因，因而既不能直接
合成尸胺，也不能转运尸胺。将赖氨酸脱羧酶基因
ldc 克隆至谷氨酸棒杆菌中并诱导其表达，将赖氨酸
的合成途径延长至尸胺，在谷氨酸棒杆菌中能够生
物合成尸胺［5］。由于没有赖氨酸 -尸胺反向转运蛋
白 CadB 将合成的尸胺转运至细胞外，致使一部分尸
胺在菌体内积累，抑制了赖氨酸脱羧酶的活性，导
致尸胺产量较低［5］。高浓度的尸胺不仅具有反馈抑
制作用，还可导致细胞膜孔蛋白的关闭，影响细菌
的正常生长［6］。赖氨酸 -尸胺反向转运蛋白 CadB 能
够将细胞外的赖氨酸转运至细胞内，为尸胺提供合
成底物，同时将合成的尸胺转运至细胞外，CadB 对
尸胺的合成和转运具有重要意义［7］。为了提高谷氨
酸棒杆菌合成尸胺的能力，需要将 CadB 蛋白克隆
至谷氨酸棒杆菌中，与赖氨酸脱羧酶共表达，在谷
氨酸棒杆菌合成尸胺的同时，帮助尸胺迅速转运至
细胞外，解除尸胺的反馈抑制作用。
绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）
已广泛应用于报告蛋白、融合标记、生物传感器、
蛋白间相互作用、胞内各器官蛋白的传递等领域［8］。
本研究通过从大肠杆菌中克隆 cadB 基因、并将绿
色荧光蛋白 gfp 基因融合到 cadB 基因的 C-末端来鉴
定 CadB 蛋白在谷氨酸棒杆菌中的表达及定位情况，
然后将 cadB 基因克隆至含有赖氨酸脱羧酶基因的
pXMJ19-ldc 上，构建含有赖氨酸脱羧酶 ldc 基因和
赖氨酸-尸胺反向转运蛋白 cadB 基因的共表达载体
pXLB，并转化至谷氨酸棒杆菌中进行表达。通过在
谷氨酸棒杆菌中构建尸胺的生物合成途径，旨在为
谷氨酸棒杆菌的发酵合成尸胺奠定基础，同时丰富
物质跨膜转运的理论和方法。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 菌种和质粒 Escherichia coli K12，Escherichia
coli DH5α，Escherichia coli JM110，Corynebacterium
glutamicum ATCC13032，大肠杆菌 / 谷氨酸棒杆菌穿
梭 质 粒 pXMJ19、pXMJ19-ldc、pMUTIN-GFP+ 均 为
天津科技大学生物工程学院天津市工业微生物重点
实验室保藏。pMD18-T Vector、pUCm-T Vector 购自
上海生工生物工程技术服务有限公司。
1.1.2 酶和试剂 DNA Marker、Taq DNA 聚合酶、
PCR其它试剂、限制性核酸内切酶、SolutionⅠ、 X-gal、
IPTG 均购自 TaKaRa 公司（大连）。氯霉素（Cm）、
氨苄青霉素（Amp）购自上海生工生物工程技术服
务有限公司。DNA 引物合成与测序由上海生工公司
完成。其它试剂为国产或进口的分析纯产品。
1.1.3 培养基和培养条件 大肠杆菌在 LB 培养基
（胰蛋白胨 10 g/L，酵母提取物 5 g/L，氯化钠 10 g/L，
固体培养基琼脂糖含量 15 g/L）于 37℃ 培养，谷氨
酸棒杆菌使用 LBG 培养基（胰蛋白胨 10 g/L，酵母
提取物 5 g/L，氯化钠 10 g/L，葡萄糖 5 g/L，固体培
养基琼脂糖含量 15 g/L），30℃培养。氨苄青霉素终
浓度为 100 μg/mL。氯霉素在大肠杆菌中的终浓度为
20 μg/mL，在谷氨酸棒杆菌中的终浓度为 10 μg/mL。
1.1.4 DNA 的提取及操作 大肠杆菌质粒 DNA 的
提取、DNA 片段胶回收、产物纯化采用北京庄盟国
际生物基因科技有限公司试剂盒。E. coli K12 基因
组 DNA 的提取、大肠杆菌感受态的制备及转化按分
子克隆［9］所述方法进行。谷氨酸棒杆菌质粒的提取
参照 Eikmanns 的方法［10］。
1.2 方法
1.2.1 PCR 引物设计 本试验所用引物，如表 1
所示。
表 1 本试验所用引物
引物 序列（5-3） 酶切位点
cadBF CCAAGCTTAAAGGAGGACACGCATGAGTTCTGCCAAGAAGATCGG Hind Ⅲ
cadBR CGGGATCCTCATTAATGTGCGTTAGACGCGGTG BamH I
gfpF TTGGTACCATGAGTAAAGGAGAAGAACTT Kpn I
gfpR CGGAATTCTTATTTGTATAGTTCATCCATGC EcoR I
terminatorsF CGTCTAGAGGCTGTTTTGGCGGATGA Xba I
terminatorsR GGGGATCCAGCGGATACATATTTGAATGTA BamH I
tac-cadBF GGGGATCCTGAGCTGTTGACAATTAATCATCGG BamH I
tac-cadBR CCCCGGGTTAATGTGCGTTAGACGCGG Sma I
1.2.2 pXMJ19-cadB 和 pXBG 的 构 建 根 据 Gen-
Bank 中 E. coli K12 赖氨酸 -尸胺反向转运蛋白 cadB
基因（Gene ID ：948654）序列，设计引物 cadBF、
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2012年第8期96
cadBR。扩增体系 50 μL ：ddH2O 34.5 μL，10×buffer
5 μL，dNTPs 4 μL，上游引物 2 μL，下游引物 2 μL，
DNA 模板 2 μL，Taq DNA 聚合酶 0.5 μL。反应程
序 ：94℃，3 min ；94℃ 1 min，55℃ 1 min，72℃ 1
min 30 s，30 个循环 ；72℃，10 min。扩增产物在
0.8% 琼脂糖凝胶上电泳检测，切胶纯化目的条带。
与载体 pMD18-T Vector 进行连接，构建重组质粒
pMD18-T-cadB。具体方法按照该载体试剂盒说明书
进行。然后将重组质粒转化至 E. coli DH5α 宿主菌
中。在含 Amp（终浓度 100 μg/mL）、X-gal（终浓度
20 μg/mL）、IPTG（终浓度 24 μg/mL）的 LB 琼脂平
板上 37℃培养 16 h。利用蓝白斑筛选，随机挑取白
色菌落提取质粒进行双酶切验证，将验证结果正确
的重组质粒送往上海生工进行测序。
对质粒 pMD18-T-cadB 进行 Hind Ⅲ和 BamH Ⅰ
双酶切，获得 cadB ；对 pXMJ19 载体进行 Hind Ⅲ和
BamH Ⅰ双酶切 ；连接 pXMJ19 酶切大片段和 cadB ；
连接产物转化 E. coli JM110 ；涂布于 LB 氯霉素抗性
平板 37℃过夜培养 ；提取大肠杆菌转化子中质粒，
并对质粒进行 Hind Ⅲ和 BamH Ⅰ双酶切鉴定和 PCR
验证。阳性转化子所含质粒命名为 pXMJ19-cadB。
以质粒 pMUTIN-GFP+ 为模板扩增绿色荧光蛋
白基因 gfp，切胶纯化回收 PCR 产物，与 pUCm-T
Vector 连接，构建重组质粒 pUCm-T-gfp。选取 cadB
基因上的 KpnⅠ酶切位点，用 KpnⅠ和 EcoR Ⅰ
双酶切 pXMJ19-cadB ；用 KpnⅠ和 EcoR Ⅰ双酶切
pUCm-T-gfp，获得 gfp ；连接 pXMJ19-cadB 酶切大片
段和 gfp ；连接产物转化 E. coli JM110 ；涂布于 LB
氯霉素抗性平板 37℃过夜培养 ；提取大肠杆菌转化
子中质粒，并对质粒进行 KpnⅠ和 EcoR Ⅰ双酶切鉴
定和 PCR 验证。阳性转化子所含质粒命名为 pXBG。
1.2.3 CadB 在 C. glutamicum ATCC13032 中的表达
C. glutamicum ATCC13032 感受态细胞制备和电击
转化参照 van der Rest 等［11］的方法。将构建好的重
组质粒 pXBG 电转入 C. glutamicum ATCC13032，并
涂布到 LBG 氯霉素抗性平板上，30℃培养 36 h，挑
取转化子接种于含氯霉素的 5 mL 液体培养基中，
30℃，180 r/min 过夜培养。从菌液中提取质粒，并
做双酶切及 PCR 验证。将分析结果正确的转化子命
名为 C. glutamicum ATCC13032/pXBG。
挑 取 C. glutamicum ATCC13032/pXBG 单 菌 落
至 5 mL 含氯霉素的 LBG 培养基中，30℃ 180 r/min
过夜培养，次日以 1% 的接种量加入 50 mL 含氯霉
素的 LBG 培养基中，在对数初期加入终浓度为 1
mmol/L 的 IPTG，继续培养 12 h 后 4 000 r/min 离心
10 min，收集菌体，用无菌磷酸缓冲盐溶液（Phosp-
hate Buffered Saline，PBS）洗涤 2 次后悬浮菌体，然
后用 Olympus BH2 荧光显微镜在 365 nm 波长下进行
荧光检测［12］。
1.2.4 pXLB 的构建和鉴定 以质粒 pXMJ19 为模
板，用引物 terminatorsF、terminatorsR 扩增目的基
因 terminators。纯化扩增的目的片段，使用 XbaⅠ
和 BamH Ⅰ分步单酶切获得 terminators 基因，将其
连接以用相同限制性内切酶作用的 pXMJ19 载体 ；
连接产物转化 E. coli JM110 ；涂布于 LB 氯霉素抗
性平板 37℃过夜培养 ；提取大肠杆菌转化子中质
粒，并对质粒进行 XbaⅠ和 BamH Ⅰ分步单酶切验
证，同时以 terminators 的 PCR 产物作对照。阳性转
化子所含质粒命名为 pXMJ19-terminators。目的基因
terminators PCR 反应程序 ：94℃ 5 min ；94℃ 40 s，
52℃ 35 s，72℃ 1 min，30 个循环 ；72℃ 10 min。
以质粒 pXMJ19-cadB 为模板，用引物 tac-cad-
BF、tac-cadBR扩增目的基因 tac-cadB。纯化扩增的目
的片段，用 BamH Ⅰ和 SmaⅠ双酶切获得 tac-cadB，
将其连接以用相同限制性内切酶作用的 pXMJ19-
terminators 载体 ；连接产物转化 E. coli JM110 ；涂布
于 LB 氯霉素抗性平板 37℃过夜培养 ；提取大肠杆
菌转化子中质粒，并对质粒进行 BamH Ⅰ和 SmaⅠ
双酶切鉴定和 PCR 验证。阳性转化子所含质粒命名
为 pXTTB。目的基因 tac-cadB PCR 反应程序 ：94℃
5 min ；94℃ 40 s，58℃ 45 s，72℃ 1 min 30 s，30 个
循环 ；72℃ 10 min。
选择限制性内切酶 XbaⅠ和 SmaⅠ对重组质
粒 pXTTB 进行双酶切，切胶回收大小约为 1.8 kb 的
目的片段，将其连接以用相同限制性内切酶作用的
pXMJ19-ldc 载体；连接产物转化 E. coli JM110；涂布
于 LB 氯霉素抗性平板 37℃过夜培养 ；提取大肠杆
菌转化子中质粒，并对质粒进行 XbaⅠ和 SmaⅠ双
酶切鉴定，命名验证结果正确的重组质粒为 pXLB。
1.2.5 C. glutamicum ATCC13032/pXLB 工程菌的构
2012年第8期 97黄云雁等 ：赖氨酸-尸胺反向转运蛋白 cadB 基因谷氨酸棒杆菌表达载体的构建及转化
建 构建好的重组质粒pXLB电击转化C. glutamicum
ATCC13032，将转化后的谷氨酸棒杆菌涂布于 LBG
氯霉素抗性平板上，30℃培养 36 h。挑取转化子菌
落接种于 5 mL 含氯霉素的 LBG 培养基中，30℃振
荡培养过夜。从菌液中提取质粒，分别用 XbaⅠ和
SmaⅠ双酶切并进行电泳检测。
2 结果
2.1 重组质粒pXMJ19-cadB的构建和鉴定
以 E. coli K12 基 因 组 DNA 为 模 板，cadBF、
cadBR 为引物，扩增出一个约 1.35 kb 特异性条带，
将该条带克隆至pMD18-T Vector 构建成载体pMD18-
T-cadB 并测序，结果与报道的大肠杆菌 cadB 基因序
列一致。将测序正确的 cadB 基因连接至 pXMJ19 上，
构建成重组质粒 pXMJ19-cadB。该质粒的双酶切和
PCR 验证结果如图 1 所示，双酶切大小约为 1.3 kb
（两端带有引物的 cadB）和 6.6 kb（线性 pXMJ19）
的两条片段。酶切结果与理论预期结果相符，表明
重组质粒 pXMJ19-cadB 构建成功。
大小约为 0.7 kb 和 7.8 kb 的两条片段。酶切结果与
理论预期结果相符，说明外源基因 gfp 已经融合到
cadB 基因的 C-末端，重组质粒 pXBG 构建成功。
M. 1 kb DNA Marker; 1, 2. pXBG KpnⅠ/EcoRⅠ双酶切 ; 3, 4. PCR 验证
图 2 重组质粒 pXBG双酶切和 PCR验证
图 1 重组质粒 pXMJ19-cadB双酶切和 PCR验证
M. 1 kb DNA Marker; 1, 2. pXMJ19-cadB Hind Ⅲ/
BamHⅠ双酶切 ; 3 , 4. PCR 验证
2.2 重组质粒pXBG的构建和鉴定
将 质 粒 pMUTIN-GFP+ 中 的 gfp 基 因 克 隆 至
pUCm-T Vector 构建成 pUCm-T-gfp 并测序，结果与
报道的 gfp 基因序列一致。将 pUCm-T-gfp 上的 gfp
基因连接至重组质粒 pXMJ19-cadB 上构建成融合表
达载体 pXBG，转化至 E. coli JM110 中，并对质粒
进行双酶切和 PCR 验证。如图 2 所示，双酶切为
2.3 CadB在C. glutamicum ATCC13032中的表达
检测
重组质粒 pXBG 经电击转化 C. glutamicum ATC-
C13032 后，在 LBG 氯霉素抗性平板上培养 36 h。
挑取单克隆进行菌落 PCR，同时提取转化子质粒，
用 KpnⅠ和 EcoRⅠ双酶切验证。电泳结果与图 2
一致，表明重组质粒 pXBG 电转化 C. glutamicum
ATCC13032 成功。
平板划线 C. glutamicum ATCC13032/pXBG，对
其进行 IPTG 诱导。在荧光显微镜下观察洗涤悬浮后
的菌体，发现 C. glutamicum ATCC13032/pXBG 在细
胞膜处有较明亮的绿色荧光，表明 cadB 基因在谷氨
酸棒杆菌中已经表达，且表达的 CadB 蛋白定位于
谷氨酸棒杆菌的细胞膜上。
2.4 pXLB的构建
将 PCR 扩增的目的基因 terminators（0.46 kb）
经酶切后插入到经同样内切酶作用的 pXMJ19 中，
构 建 成 重 组 质 粒 pXMJ19-terminators。 重 组 质 粒
用 XbaⅠ和 BamHⅠ进行分步单酶切验证，同时以
terminators 基因的 PCR 产物作对照，如图 3 所示，
双酶切为大小约为 0.46 kb 和 6.6 kb 的两条片段，验
证结果与理论预期结果相符。
PCR 扩增的目的基因 tac-cadB（1.4 kb），经
BamHⅠ和 SmaⅠ双酶切后，插入到同样内切酶作用
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2012年第8期98
的 pXMJ19-terminators 中，构建了重组质粒 pXTTB，
并对其进行双酶切和 PCR 验证。如图 4 所示，双酶
M. 1 kb DNA Marker；1, 2. pXTTB BamHⅠ/ SmaⅠ双酶切；
3, 4. PCR 验证
图 3 重组质粒 pXMJ19-terminators酶切验证
M. 1kb DNA Marker ；1, 2. pXMJ19-terminators Xba I / BamH I
分步单酶切 ；3, 4. terminators PCR 产物
图 4 重组质粒 pXTTB双酶切和 PCR验证
选择 XbaⅠ和 SmaⅠ对重组质粒 pXTTB 进行双
酶切，切胶回收大小约为 1.9 kb 的目的片段，将其
插入到以用相同内切酶作用的 pXMJ19-ldc 中，构建
了重组质粒 pXLB。再用 XbaⅠ和 SmaⅠ对所获得的
质粒进行双酶切鉴定。结果如图 5，双酶切为大小
约为 1.9 kb 和 8.8 kb 的两条片段，验证结果与理论
预期结果相符，表明重组质粒 pXLB 构建成功。该
重组质粒构建流程图如图 6 所示。
2.5 重组质粒pXLB电转化谷氨酸棒杆菌
通过氯霉素抗性平板筛选转化子，挑取单克隆
进行菌落 PCR，同时提取转化子质粒，用 XbaⅠ和
SmaⅠ进行双酶切验证，电泳结果如图 7 所示，表
明表达载体 pXLB 已经成功电转化到 C. glutamicum
ATCC13032 中。
3 讨论
外源质粒 DNA 转化 C. glutamicum的方法较繁
琐，再加上大多数棒杆菌菌株中存在限制修饰系统。
由于这限制修饰壁垒的存在，严重地影响了外源
DNA 对棒杆菌受体的转化效率，来自 dam-和dcm-
E. coli的 DNA 能更高效地转化到限制性很强的 C.
glutamicum中［13］，为了绕过棒杆菌的限制壁垒，所
以选用 E. coli JM110 来构建表达载体。
谷氨酸棒杆菌是合成赖氨酸的生产菌株，能高
图 5 重组质粒 pXLB双酶切验证
M. 1 kb DNA Marker ；1, 2. pXLB Xba I / Sma I 双酶切
效合成赖氨酸，但不能直接合成尸胺。赖氨酸是合
成尸胺的底物，在赖氨酸脱羧酶（LDC）的作用下
将赖氨酸转变成尸胺。将 ldc 基因克隆至谷氨酸棒
杆菌中并诱导表达，结果表明谷氨酸棒杆菌可以将
赖氨酸进一步代谢成尸胺［5］。但由于谷氨酸棒杆
菌没有 CadB 蛋白，所以合成的尸胺不能有效地排
到细胞外，抑制了 LDC 的活性，影响尸胺的合成。
CadB 蛋白是一个膜蛋白，它能否在谷氨酸帮杆菌中
表达并正确定位于它的细胞膜上是执行尸胺转运功
能的关键。gfp 基因是一个广泛应用的报告基因，将
其融合到 cadB 基因的 C-末端构建成含 cadB-gfp 基
切为大小约为 1.4 kb 和 8.0 kb 的两条片段，验证结
果与理论预期结果相符。
2012年第8期 99黄云雁等 ：赖氨酸-尸胺反向转运蛋白 cadB 基因谷氨酸棒杆菌表达载体的构建及转化
图 6 重组质粒 pXLB构建流程图
生物技术通报 Biotechnology Bulletin 2012年第8期100
因的融合表达载体 pXBG 并转化至谷氨酸棒杆菌中
并诱导表达。根据 gfp 基因的表达情况确定 CadB
蛋白在谷氨酸棒杆菌中是否表达及其在细胞中的定
位。通过荧光检测表明，CadB 能够在 C. glutamicum
ATCC13032 中表达，且定位于细胞膜中。CadB 在谷
氨酸棒杆菌中的表达和在细胞膜中的定位，为解决
尸胺在谷氨酸棒杆菌中的转运奠定了基础。
4 结论
从而大肠杆菌中克隆了 cadB 基因，构建成含有
cadB 基因的谷氨酸棒杆菌表达质粒 pXMJ19-cadB ；
将绿色荧光蛋白基因 gfp 基因融合到重组质粒
pXMJ19-cadB 的 cadB 基因的 C-末端，构建了融合
表达载体 pXBG 并转化至谷氨酸棒杆菌中诱导表达。
结果表明大肠杆菌的 CadB 蛋白能够正确定位于谷
氨酸棒杆菌的细胞膜中。在此基础上进一步构建了
含有赖氨酸脱羧酶 ldc 基因和赖氨酸-尸胺反向转运
蛋白 cadB 基因的共表达载体 pXLB，并转化至谷氨
酸棒杆菌中进行表达。
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（责任编辑 李楠）
M. 1 kb DNA Marker ；1, 2. pXLB Xba I / Sma I 双酶切
图 7 谷氨酸棒杆菌中 pXLB双酶切验证