全 文 ：健物杖术通报
· 研究报告 · 刀了口百付口乙口 了’ 年增刊
微卫星标记与灵昆鸡体重 、体尺性状的相关分析
袁青妍 , 虞德兵 吴春琴, 沈军达 , 陶争荣‘ 王德前 ,
李国勤‘ 田 勇‘ 原爱平 , 宋显章, 刘素珍 , 卢立志‘
’ 浙江省农业科学院畜牧兽医所 , 杭州 南京农业大学动物科学
技术学院 , 南京 温州市农业科学院动物研究所 , 温州 拓
摘 要 对 只灵昆鸡采用 个微卫星标记进行 了遗传多样性检测 , 并采用最小二乘法拟合线性模型和
方差分析法 , 分析了其与体重 、体料长 、胸宽 、胸深 、龙骨长 、骨盆宽、胫长和胫围等性状的相关性 。 结 果表明 灵昆
鸡的体重与体斜长 、胸宽 、胸深 、龙骨长 、胫长差异极显著尸 体抖长与胸宽、胸深 、龙骨长 、胫长差异极显
著尸 , 与胫围差异显著 胸宽与龙骨长 、胫长差异极显著 尸 , 与胸深 、胫 围差异显著尸
胸深与龙骨长 、胫长 、胫围差异极显著尸 龙骨长与胫长 、胫围差异极显著 尸 胫长与胫
围差异极显著尸 骨盆宽除 了与胫围显著相关 外 , 与其余性状均无显著相关 。 方差
分析结果表明 在所测定的 个微卫星座位中 , 只有 座位的不同基因型时 个性状差异均不显著尸
其余座位的不同基因型对一个或多个性状差异均显著或极显著。 经 多重比较发现 , 每个性状受到多个基因
座的影响 。
关键词 微卫星标记 灵昆鸡 体重 体尺 相关
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1罗ifi eantly dife rentfro m ehest depth and shan k eirc ulllfe renee (P < 0 .05 ).The ehest depth w as m ost signifieantly
dife re nt fro m keellengt h , s h a n k l e n gt h , s h a n k e i rc u l n fe re n e e ( P < 0 . 0 1 ) . T h e k e e l l e n gt h w as m o s t 5 1 , ifi eant ly di fe re nt
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基金项目:浙江省重大科技攻关项目“ 特色家禽(蛋鸭 、 肉鸡)优良遗传资源开发利用研究” ( 编号 : Zo 5C1 20 5习l)
作者简介:袁青妍 (19 71 一 ) , 女 , 博士 , 研究方向: 家禽育种
通讯作者:卢立志 ( 19 65 一 ) , 男 , 研究员 , 研究方向: 家禽育种 , E 一 m ail : l uli zh i b ox @ 16 3 . co m
卫)8 年增刊 袁青妍等:微卫星标记与灵昆鸡体重 、体尺性状的相关分析 283
with other tra its (p > 0.05 ). A m ong 12 m ierosatellite loei, o n l y t h e M C W 0 1 6 5 l o e i h a d n o s i g n i fi e a n t e fe e t s o n t h e s e e i gh t
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ed by several investigated loei.
K e y w o rd s : M iero sate llite m ar k er Linku n eh iekens B ody w eight B ody size A ssoeiat ion
灵昆鸡的体躯呈长方形 , 属于蛋 、 肉兼用型品 术 ,探讨相应微卫星位点与各体尺指标的相关性 , 找
种 , 因原产于浙江省温州市永强区的灵昆岛而得名 。 出一些与体尺性状相关的标记 , 从而为这些性状的
温州市郊区以及乐清 、永嘉 、瑞安等市 、县亦有分布。 Q TL 定位及分子标记辅助育种打下基础 。
灵昆鸡的形成 ,大概是在20 多年前 , 来自福建的移 1 材料和方法
民将带来的莆田鸡与本地土种鸡杂交 , 灵昆鸡才初 1.1 实验材料
具雏形 , 1 9 83 年当地船民又从上海引人部分浦东鸡 实验用鸡取 自灵昆鸡 , 随机抽取 巧 只公鸡和
进行杂交 , 经过长期选育 , 逐渐形成一个以 “ 三黄” 巧 只母鸡 , 自翅静脉采集血样 , 肝素钠抗凝 , 低温保
(咏 、胫 、羽毛黄色)为特征的体型大 、成熟早 、产蛋 存带回实验室 , 一 20 ℃保存。 每只采集血样的个体 ,
多 、肉质好和抗病力 、适应性均强的蛋肉兼用品种 。 同时测量其体重 、体斜长 、胸宽 、胸深 、龙骨长 、骨盆
成年公鸡体重平均 2 33鲍 ,成年母鸡 1 9859。 宽、胫长和胫围等体尺指标 。
微卫星 D N A 是以 1 一 6 个核昔酸为核心序列 , 1 . 2 实验方法
呈串联重复状散布于整个基因组 。 它具有高度的保 1.2.1 基因组 DN A 的提取川 按常规酚/氯仿法
守性 、多态性 , 呈共显性遗传 , 且广泛 、随机 、均匀地 提取 。
分布于整个基因组 , 是 目前定位 QTLs 最为理想的 1.2.2 微卫星引物[, 一 6 〕 使用的 12 对微卫星引物
分子标记 , 被广泛应用于畜禽品种遗传结构 的研 由上海生物工程技术有限公司合成 , 其相关参数见
究【‘〕和数量性状基因座的连锁和相关分析 。 旨在 表 1。
通过对灵昆鸡体尺性状的测定 , 结合微卫星标记技
表 l 灵昆鸡 12 对微卫星引物的信息
序号 染色体 座位 引物序列 C M 薛 + (~ OF L) 退火温度( ℃ ) 扩增片段大小 (b p)4 2 A D】」〕19 0 2 18 ~ 2 6450678564
6 3 M C W 0 22 4 3 5 0 ~ 3 9 8
7 4 M C W( )12 2 2 7 4 ~ 3 3 2
11 5 M C W 0 0 2 9 15 4 ~ 3 20
1 2 6 M C W 0 17 6
1 3 7 M C W 0 12 0 2 5 8 一 3 2 0
1 5 9 M C W 0 1 3 4
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性物技术通推 召勿te chn oldgy 2008 年增刊
1.2 .3 P C R 反应体系与程序 反应体系(10 闪):
50 ng/ 林1 D N A 0 . 8 林l , 上下游引物各为0.2 卜m oF L ,
一0 m m o厂L dN T p 混合物 0.2 林l , I o x 缓冲液 l 林1 ,
rT aq 酶0.08 闪。 反应程序:95 ℃预变性 smi n ;94 ℃
变性 305 , 50 一 60 ℃ (具体温度依引物而定)复性
305, 7 2 ℃ 延伸 30 5 , 3 0 个循环 ;最后 72℃ 延伸 5
1.2.4 PCR 产物的检测及电泳分型 先用 1.5 %
琼脂糖凝胶(含 E B) 电泳抽检微卫星扩增产物是否
在所需的长度范围内 , 以及是否有扩增产物 。 8 %
变性聚丙烯酞胺凝胶电泳分离微卫星基因座各基因
型 , 银染法检测电泳结果 。 D N A M ar ke r 标准对照物
为 pBR3 2 /M sP 1 D NA (华美公司 ) 。 显影后用凝
胶成像系统 Gen e G en is 对图片进行分析 , 根据 DNA
M ar ker 标准物判定等位基因扩增片段的大小 ;用
Gen ot yP er 软件进行等位基因分型 , 判断个体基 因
型 。 扩增条带为 1 条的为纯合子 , 扩增条带为 2 条
的为杂合子 , 用 Exc el 对实验数据进行汇总处理 。
1
.
2
.
5 统计分析 本研究所用鸡群的 日龄和饲料
等其它试验条件一致 , 只考虑性别和遗传标记两个
因素 , 因此采用二因素交叉分组的试验设计 , 其固定
模型为: Y IJ二 U + a i + p J + e iJ 。 其中u 为总体平均
值 , Y IJ 为个体表型记录 , a i 为性别效应 , p 」 为标记
效应 , e i。为随机误差 。 根据各微卫星标记基因型分
析结果和各体尺性状测定结果 , 运用 SPS fo r win -
dows 统计软件(version13.0) 中G LM 程序对数据进
行非均衡资料的方差分析 , 对不同标记基因型间体
尺性状指标进行差异显著性检验并进行多重比较
(LS D ) , 进而分析等位基因的效应 。
2 结果与分析
2.1 体尺性状 间的表型相关分析表2 列出了灵昆
鸡 8 个主要体尺性状间的表型相关 , 结果表明 , 灵昆
鸡的体重与体斜长 、胸宽 、胸深 、龙骨长 、胫长差异极
显著(尸< 0 . 01 ) ; 体斜长与胸宽 、胸深 、龙骨长 、胫
长差异极显著(尸 < 0 , 01 ) , 与胫围差异显著(尸 <
0 . 0 5 ) ;胸宽与龙骨长 、胫长差异极显著(尸 < 0 . 01 ) ,
与胸深 、胫围差异显著(尸 < 0 . 05 ) ;胸深与龙骨长 、
胫长 、胫围差异极显著(尸 < 0 . 01 ) ;龙骨长与胫长 、
胫围差异极显著(尸 < 0 . 01 ) ;胫长与胫围差异极显
著(尸< 0 . 01 ) ;骨盆宽除了与胫围显著相关 (尸 <
0 . 05 )外 , 与其余性状均无显著相关(尸 > 0 .05 ) 。
体重 体斜长
表 2 体尺性状之间的相关系数
胸宽 胸深 龙骨长 骨盆宽 胫长
体斜长 Q.756 ’ .
胸宽 0.650 . ’ 0 . 5 5 9 ’ ‘
胸深 0 .769 . ‘ 0 . 7 5 3 中 ’ 0 . 4 5 1 .
龙骨长 0.795 中 ’ 0 . 8 06 “ 0 658 ’ 申
骨盆宽 0.234 0.143 一 0 . 0 9
胫长 0.906 ” 0 .789 ” 0 .657 二
胫围 0.497 0 .548 ’ 0 . 3 8 2 ’
* : 表示差异显著(尸 < 0 .0 5 ) , * * : 表示差异极显著(尸< 0 .0 1)
0 .6 7 1 . 中
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* 中
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7 5 7 二 0 .237
0.669 二 0 .595 * . 0 .027 由 0 . 5 9 2 二
2 . 2 微卫星位点与体尺性状的相关分析
由于一些位点中某些基因型的出现频率太低 ,
缺少分析价值 , 在实际统计分析中每种基因型至少
有 3 个观察值才被考虑〔’] 。 由于测定项目很多 , 表
3 中只列出各基因型对其有显著效应的性状 。
表 3 中 , 不同标记基因型对灵昆鸡 8 个体尺性
状的方差分析结果表明:在所测定的 12 个微卫星座
位中 , 只有 M CW 0165 座位的不同基因型对 8 个性
状差异均不显著(尸 > 0 . 05 ) ;其余座位的不同基因
型对一个或多个性状差异均显著或极显著 。 经多重
比较 发现 , 每个 性状受 到多个基 因座 的影 响 。
A D 功190 、 M C W 0 2 2 4 、 M C W 0 1 7 6 、 M C W O 1 3 4 、
M C W (X) 3 5
、
M C W O O 9 7
、
M C W 0 3 3 0 和 M CW 02 17 等 8
年增刊 袁青妍等:微卫星标记与灵昆鸡体重 、体尺性状的相关分析 285
个基因座上的不同基因型对体重性状的差异显著
(P < 0. 05 ); M CW 0 176 、 M C W 0 1 2 0 、 M C W 0 0 3 5 和
M cw 0330 等4个基因座上的不同基因型对体斜长
性状 的 差 异 显 著 (P < 0. 05 ) ; M CW 0035 和
M CW0 3 O 基因座上的不同基因型对胸宽性状的差
异显 著 (p < 0. 05 ); M C W o 29 、 M C 仙330 和
M cw0 217 基因座上的不同基因型对胸深性状的差
异显著(P < 0 .05 ) ;M CW 0176 、 M C W O 1 2 O 、 M C W 0 0 3 5
和 M cw0 3 0 等4个基因座上的不同基因型对龙骨
长性 状 的差 异 显 著 (尸 < 0 . 05 ) ; M c w0 2 24 和M CW 0217 基因座上的不同基因型对骨盆宽性状的
差 异 显 著 (p < 0 . 05 ) ; A D功190 、 M e w o 2 2 4 、
M C W 0 1 2 2
、
M C W 0 1 7 6
、
M C W 0 0 3 5
、
M C W 0 9 7
、
M C W 0 3 O 和 M CW 021 7 等 8 个基因座上的不同基
因型对胫长性状的差异显著(尸 < 0 .05 ) ;M c w0 0 29 、
M C W 0 1 7 6
、
M C W 0 1 2 0
、
M C W 0 1 3 4
、
M C W O 0 9 7 和
M CW 03 30 等6 个基因座上的不同基因型对胫围性
状的差异显著(尸< 0 .05 ) 。
表 3 不同标记基因型对灵昆鸡 8 个体尺性状的多重比较
基因座 基因型 样本数 髓Kg 体斜长 胸宽 龙骨长 骨盆宽 胫长 胫围
04A D I 2刀19 0 1. 7 5 A B a 7 . 15
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2 2
4
气了
生物杖 术通报 B io te ch n oto盯 2008 年增刊
基因座 基因型 样本数 体重 体斜长 胸宽 胸深 龙骨长 骨盆宽 胫长 胫围Kg em em em em em em em
E B 10 l.68 Ba 20 .15 A Bb 7 .16 A Ba 9 .95 10 .92 A B 6 .2 1 9 .4 lA Bb 4 .42
F D 6 1.76B b 20 .62B b 7.62B b 10. 17 11.52B 6 , 3 7 9 . 2 6 B e 4 3 9
M C W ( X ) 9 7 C A 7 1
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.
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.
1 6 1 1
.
0 7 6
.
1 2 9
,
2 4
.
4 6
注 :同一基因座性状组合中不含相同小写字母上标的两值间差异显著(P < 0. 05 );不含相同大写字母上标的两值间差异极显著(尸 < 0 .
0 1 )
3 讨论
灵昆鸡的体重与体斜长 、胸宽 、胸深 、龙骨长 、胫
长差异极显著(尸< 0 . 0 1 ) 。 而体尺性状间的相关关
系 , 除了骨盆宽只与胫围一个体尺性状显著相关外
(尸< 0 .05 )外 , 其他的体尺性状都与两个以上的体
尺性状相关 。 体尺性状间的这些相关关系可为灵昆
鸡的育种提供参考 。 在实际的育种工作中 , 需在灵
昆鸡的不同生长日龄 , 进行称重及体尺的测量 , 费时
又费力。 若有这些体尺性状间的相关关系及体尺与
体重的相关关系 , 就可在适 当的阶段 , 根据育种 目
标 ,进行体尺测量 , 然后根据这些测量数据及体尺性
状间的相关关系 , 选择需留种的灵昆鸡群 。 这样既
可减少工作量 , 同时也可增加育种的准确性 。
分子标记辅助选择与常规选择方法相比 , 不受
年龄 、环境等因素的影响 , 具有快速 、准确等优点 , 可
在个体生命的早期 , 通过检测与数量性状连锁的遗
传标记 , 对某些性状进行选择 , 而不必等到个体的生
产性能完全表现出来[8〕。 利用分子遗传标记对鸡
的数量性状进行选择之前 , 首先须寻找与某一生产
性能存在显著相关的遗传标记 。
se w ale
m 等〔’]利用 101 个微卫星标记对肉鸡父
系与蛋鸡(白来航)杂交产生的 50 只 F2 代个体在
3 、6 和 9 周龄体重进行 Q TLS 分析 , 在排除 QTLs 与
性别和家系之间的互作效应之后 , 发现位于 1 、 2 、4 、
7
、
8 和 13 号染色体的 QTLs显著影响 3 、6 和 9 周龄
体重 。 白文林等[’“〕利用 5 个微卫星标记对 97 只边
鸡的研究结果表明 , 位于 2 号染色体上的 A D印14 6
和 A D功176 位点对边鸡的部分生长性状有显著的
影响 , A D ID 1 4 6 位 点 的基 因型 149bp/ 149 bp 及
A D ID 176 位点的基 因 型 186 bp/ 18 6 bp 和 186 bp/
192 bP 有望作为体重 、龙骨长 、胫长 、 胸宽和骨盆宽
等性状上有效的辅助选择标记 。
包文斌等 〔川利用 29 个微卫星标记的多态性分
析仙居鸡 12 周龄体重与微卫星标记的相关性 , 其研
(下转第290 页)
生物技术通报 B io te chnoto gy 2008 年增刊
总之 , 对于象罗氏沼虾一样具有抱卵孵化特性
的动物来说 , 精荚微注射技术是一经济、简便的转基
因方法 , 而且效果也很好 。 对于一些不具有专业设
备 、资金比较有限的实验室从事这类甲壳动物的基
因表达 、调控和功能的活体研究提供了一个理想的
途径 , 也为进一步开展抱卵孵化的甲壳动物的育种
工作研究奠定了基础 。
参 考 文 献
1 朱作言 , 许克圣 , 谢岳峰 , 等. 中国科学(B 辑) , 1 9 89 , 2 考147 -
155 .
2 Tseng FS , T s a i H J , L i a o I C , e t al . Th e ri o g e n o l o 群 , 2 《洲〕, 5 4 ( 9 ) :
1 4 2 1
一 1 4 3 2
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C e le b i C , G u i l l au d e u x T
,
A
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, e t al
.
B i
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p耐. , 2 (X) 3 , 6 8
(
5
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:
1 4 7 7
一 1 4 8 3
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刘萍 , 孔杰 , 李健 , 等. 中国水产科学 , 1 9 % , 3 ( 1 ) : 7 一 1住
刘志毅 , 相建海 , 周国瑛 , 等.科学通报 , 2 加0 , 45 ( 23 ) : 25 39 -
2 5 4 4
.
B
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A q
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文〕.武汉 :华中师范大学 , 2 0 4 .
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M
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,
2 0( 旧 , 5 6
(
2
)
:
1 4 9
一 1 5 4
.
( 上接第286 页)
究结 果 表 明 , 位 于 3 号 染 色 体 和 连 锁 群
E27C36W 25W 26 上 的 2 个微卫星标记 M CW 222 、
M c w l6 5 与仙居鸡 12 周龄体重显著相关 。 本实验
的研究结 果表明 , 所选 的 12 个微卫星标记 , 除
M cw0 165 座位的不同基因型对 8 个性状差异均不
显著外 , 其余 1 个标记与体重 、体斜长等 8 个性状
均存在不同程度的显著相关 , 同一个标记可以与多
个性状显著相关 。 本研究中 M CW0 12 基因座只与
胫长一个性状呈显著相关 , 其它 ro 个标记与两个或
两个以上性状显著相关 。 另外 , 在所测量的 8 个性
状中 , 每个性状均与多个微卫星标记座位呈显著相
关 , 可能是不同染色体存在多个控制某一性状的
QTLS 。 对这些微卫星标记间的连锁关系进行分析 ,
以及更加精确地进行 Q TL 定位 , 还需要进一步扩大
试验鸡种范围并需进行深人研究 。 如果一个群体的
个体之间性状差异显著 , 或两个群体之间的性状差
异很大 , 就可以通过标记与性状的相关分析 , 找出性
状与一个或多个标记的遗传相关 , 一旦发现显著相
关 , 即可认为存在一个数量性状位点控制该性状 , 从
而可实现从表型到基因型育种的转变。 为进一步寻
找有关灵昆鸡生长性状的 Q TLs 及其定位提供一定
的理论依据 , 同时也可在灵昆鸡的选育中予以适当
考虑 , 以加快遗传进展 。
参 考 文 献
1 吴信生 , 陈国宏 , 等. 遗传学报 , 2 创〕4 , 31 ( 1 ) : 43 ~ 5 住
2 S am b ro k J , R u s se l l D W , S a m b ro k J
.
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. N ew Y ork : C o ld S p ri n g H a rl〕o r l刁b o ra to砂 ,
2 0 0 1
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3 叶朗惠 , 苗永旺 , 等.动物学杂志 , 2 (X) 6 , 41 ( 2) : 37 ~ 42 .
4 叶朗惠 , 霍金龙 , 等.动物学杂志 , 2 0( 巧 , 27 ( 1 ) : 68 ~ 74 .
5 陈涛 , 苗永旺 , 等. 云南农业大学学报 , 2 0 7 , 2 ( 4 ) : 5 43 -
5 4 6
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6 霍海龙 , 霍金龙 , 等. 动物学杂志 , 2 0 7 , 4 2 ( 5 ) : 1 31 一 1 35 .
7 赵玉民 , 杨国忠 , 等. 吉林农业科学 , 2 0 5 , 30 ( 1 ) : 40 ~ 45 .
8 B
u t t e 刚erth A , e t al
.
PO
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l t 砂 Se i , 2
(X)
1
,
8 0
:
1 3 3 9
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.
9 S e w al e m A , e t al
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,
2
(X)
2
,
8 1
:
1 7 7 5
一 17 8 1
.
1 0 白文林 , 等.安徽农业科学 , 2 0 5 , 3 ( 3 ) : 45 3 一 45 4 .
1 1 包文斌 , 等.安徽农业科学 , 2 0 5 , 3 3 ( 4 ) : 6 5 2 一 6 5 3 .