全 文 ： 万方数据
·34· 熊物加工过程 第4卷第2期
丁香酚，提出了异丁香酚的生物转化途径，同时合成
高香兰素。
1材料与方法
1．1囊要材料翻仪器
粘质沙雷氏菌(&脱庇瑚懒黜邢)菌株
A890027(中国典型微生物保藏中心)；GF254薄层硅
胶扳(青岛海滚硅胶干燥荆厂)；异丁香酚、香兰素、
阿魏酸等(美国进口)；对羧基苯甲醛、氯仿、乙酸乙
酯、甲簿等为市售分析纯。
瓣S．韶焘僵滚水浴摇臻，鲻一l鼹超声波细骢粉碎
机，Gk20G一Ⅱ型冷冻离心机，uV一8三用紫外分析
仪，日本岛津cs一930双波长薄层层析扫描仪，聊FZ
8∞一D3转紫外，露觅分光光度计，基本隧立u一3∞l紫
外一可见连续扫描分光光度计，美国Perk酶E1mer
PE873型红外光谱仪。
l。2实验方法
1．2．1离体酶的提取
将牯履沙雷氏菌AB90027接种于普通液体培养
基(蛋白胨5g，牛肉膏3g，NaCl5g，蒸馏水l∞0
mL，pH=7．0)中培养一定时间后置于冰浴中超声波
处理3Q畦n使细胞破碎，于5∞O∥棘n转速下低温
离心30m斌取麒上清液，即得离体麟的粗提液，冷
藏备用。
l，2，2异丁香黔的酶催化反应
将O．005mol异丁香酚溶于20溅乙酸乙酯中，
并与100mL酶液构成两相反应体系，于23℃水浴
摇床虑振摇，反应一段时阚怎静置分层，上层为乙酸
乙酯相，下层为水相。
取上层液进行薄层层析(1Lc)，展开剂系统为
y(氯仿)：y(零藩)=95：5，淫橱后取出挥于，分别在
253．7nm和365nm处观察荧光，并计算冗，值。另将
硅胶板上产物的斑点刮下，用乙酸乙酯洗脱，待溶剂
挥干看进行红外(基)分析。
1．2．3酶催化舜丁香酚降解途径的考察
将溶有香兰素或阿魏酸的酶液置于23℃水浴摇
床中，振摇反应籀h。
分别对反应前后的溶液作紫外．可见(uV．ⅥS)全
波长扫描，参比液为蒸馏水。另将反应后的溶液经旋
转蒸发浓缩(<翰℃)至约5越，鳓℃下恒温予燥去
除残留水分，所得固体KBr压片后进行IR分析。
1．2．4香兰素的薄层扫攒定量分析
薄层扫攘《鞋￡s)霜CS．93§型薄层扫描仪予254
㈨处进行线性扫描，内标法定摄黯]，内标物选用对
羟基苯甲醛。香兰素产率蛩计算公式为：，砧眷兰素产品=詈丢詈耄委号晏耄戮×，n香兰索标晶
诈：竺裂塑量×l鼢
。
l}l赫百番翰碌料
m和A分别代表各种物质的摩尔浓度和峰面
积，其中对羟基苯甲醛与香兰索标准晶浓度均为
O。005moI／L，溶剂为乙酸乙酯。
2结果与讨论
2+1反应产物的7眦及IR分析
酶催他异丁香酚反应sh后对其反应液进行薄
层层析，发现有新的斑点产生。通过与标准品比较，
初步判断产物中有香兰素和阿魏酸，其R，值分别为
◇．辑蠢0+23，两原料筹丁香酚霆，篷为0。醚。鋈l孛
的a和b分别为香兰索标准品和产物的IR谱图，由
40 35 30 25 20 15 10 5
玎×lo‰m_
a：AuthernicV觚llin．b：SanlpIe
图l誊兰素的嫩谱图
嚣g．1 l歉spee锄lm蠢v懿蘧趣
图l可以看出，两者的峰形基本一致，其中3200
cm一处为酚羟基特征吸收峰，l674锄。1处尖锐强峰
是C=0特征吸收峰，l5 Oem～、l5孵雠。处的双
峰为苯环特征吸收峰。l270cm一处为苯环上c与
OH中0的C—O吸收峰，l029cm～，l212cm_1处
中等强度谱带为苯繇与。C琢中的c一0一C伴缩振
动，1279cm一处为苯环上OH的C—O吸收。807
蝴～，865懒叫处为苯环弯曲振动峰。图2中的a
和b分别为阿魏酸标准品和产物的IR谱隧，通过院
较发现产物与标准品谱图基本吻合。3439cm一处
是酚羟基{誊缩振动峰，l694em“处为C=O伸缩振
万方数据
万方数据
万方数据