全 文 ：Fbb．2006·70·
生物加工过程ChirleseJo哪alof
Bi叩rocess En舀neering第4卷第1期
2006年2月 响应曲面法优化毛细管区
带电泳分析rhEPO的方法 顾 薇，潘自皓，杨明，屠春燕
(南京工业大学制药与生命科学学院， 京210009)
摘要：为了在采用国内常用的60cm毛细管柱检测的条件下，能够完全分离检测重组人促红细胞生成素(㈣)8
个组分，运用响应面分析法(RSM)对《欧洲药典》中规定的㈣的毛细管区带电泳检测法所用缓冲液组成作细微
调整，以达到pH值操作允许范围略加宽松，易于控制，又保证所有组分清晰分离的目的。数学分析得到的缓冲液
组分为：12鍪藜蠢篓誓≤；i手、_鳢譬g虱翰蠢，l薹雏孽簧A蓁前墨；|。奏霉辜}奏童必潞；囊篓冀羹鋈!z)=冀妻薹雾蚕!j霎一
iji蓁璧南i荔萎篓襄蓐藩量为3L，接种量为5％，
通气量为2．4L／rnin，发酵过程中温度控制在砣．5℃。
1．4分析方法
细胞生长、发酵液中葡萄糖和谷氨酸质量浓度
的测定见参考文献[7]。
7．PGA分子量的测定：凝胶渗透色谱仪，ShodeX
0HpaksB．806MHQ色谱柱，sFDR12000示差折光检
测器 ，7一眦～分子量标准曲线采用窄分布葡聚糖标
准品 (ShowaDenko)。将发酵液适当稀释后过
O．22肚溅膜去除菌体，然后直接进样。流动相为
0．2mol／LNa2S04溶液(醋酸调pH至4．0)，流速
1．0mIJ／min。
7．PGA含量测定：凝胶渗透色谱仪，nenn0Lin．
earuV201紫外检测器，其他色谱条件同上，7一PGA
标准品为自制。
2结果与讨论
2．1 搅拌转速对B．s如￡i凰Nx一2批式生物合成
7．PGA的影响
2．1．1搅拌转速对B．s曲f泷Nx．2细胞生长的影响
在“1．2”和“1．3”的培养条件下，控制不同搅拌
转速 ，分别为300、400、600、800、l00r／rnin，考察发
酵过程中细胞的生长情况。实验结果如图1所示。
较高的搅拌转速有利于发酵液传质以及细胞对
底物的消耗(如图2所示)。7一PGA是在细胞膜上合
成并分泌到胞外，是细胞荚膜的主要成分L8j。由于
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