全 文 ：第 １３卷第 ６期
２０１５年 １１月
生　 物　 加　 工　 过　 程
Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ
Ｖｏｌ􀆰 １３ Ｎｏ􀆰 ６
Ｎｏｖ􀆰 ２０１５
ｄｏｉ：１０􀆰 ３９６９ ／ ｊ􀆰 ｉｓｓｎ􀆰 １６７２－３６７８􀆰 ２０１５􀆰 ０６􀆰 ０１１
收稿日期：２０１５－０３－２４
作者简介：王　 萍（１９８３—），女，江苏泰州人，工程师，硕士，研究方向：食品检测，Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｗｉｎｇｐｉｎｇ０２０９１１１１＠ １２６．ｃｏｍ
猪源性成分检测中 ３种 ＤＮＡ提取方法比较
王　 萍，乔勇升，韩芷玲
（江苏省泰州市食品药品检验所，江苏 泰州 ２２５３００）
摘　 要：为了达到对动物源性成分快速、准确的检定，对提取动物源性基因组 ＤＮＡ 的方法进行了比较分析。 考察
酚 三氯甲烷法、聚乙烯吡咯烷酮法（ＰＶＰ 法）和试剂盒法这 ３种方法对 ＤＮＡ提取的浓度、纯度及实时荧光 ＰＣＲ扩
增效果的影响。 结果表明：酚 三氯甲烷法提取 ＤＮＡ浓度最高，试剂盒法纯度最高且实时荧光 ＰＣＲ扩增效果最好，
但 ＰＶＰ 法操作简单、安全、经济，提取的 ＤＮＡ用于实时荧光 ＰＣＲ扩增检出限可达 １􀆰 ９８ ｐｇ ／ μＬ。 使用 ＰＶＰ 法对市场
上 １０份不同类型的动物性产品进行了检测，检出两份产品中含有猪源性成分。 ＰＶＰ 法应是 ３ 种方法中的首选方
法，本文为实验室选择合适的 ＤＮＡ提取方法提供了依据。
关键词：猪源性；ＤＮＡ提取；酚 三氯甲烷法；ＰＶＰ 法；试剂盒法；实时荧光 ＰＣＲ
中图分类号：ＴＳ２０７􀆰 ３　 　 　 　 文献标志码：Ａ　 　 　 　 文章编号：１６７２－３６７８（２０１５）０６－００６１－０４
Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｔｈｒｅｅ ＤＮＡ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ
ｐｏｒｃｉｎｅ⁃ｄｅｒｉｖｅｄ ｍａｔｅｒｉａｌ
ＷＡＮＧ Ｐｉｎｇ，ＱＩＡＯ Ｙｏｎｇｓｈｅｎｇ，ＨＡＮ Ｚｈｉｌｉｎｇ
（Ｊｉａｎｇｓｕ Ｔａｉｚｈｏｕ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｃｏｎｔｒｏｌ，Ｔａｉｚｈｏｕ ２２５３００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ａｎｉｍａｌ⁃ｄｅｒｉｖｅｄ ｍａｔｅｒｉａｌ ｒａｐｉｄｌｙ ａｎｄ ａｃｃｕｒａｔｅｌｙ，ｗｅ ｃｏｍｐａｒｅｄ ａｎｄ ａｎａｌｙｚｅｄ
ｔｈｅ ＤＮＡ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ａｎｉｍａｌ⁃ｄｅｒｉｖｅｄ ｍａｔｅｒｉａｌ． Ｗｅ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｈｒｅｅ ｍｅｔｈｏｄｓ
（ｐｈｅｎｏｌ⁃ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ ｍｅｔｈｏｄ，ｐｏｌｙｖｉｎｙｌｐｙｒｒｏｌｉｄｏｎｅ ｍｅｔｈｏｄ（ＰＶＰ ｍｅｔｈｏｄ） ａｎｄ ｒｅａｇｅｎｔ ｋｉｔ ｍｅｔｈｏｄ） ｏｎ ｔｈｅ
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ＤＮＡ， ｔｈｅ ｐｕｒｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ＤＮＡ ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔ ｏｆ ｔｈｅ ｒｅａｌ⁃ｔｉｍｅ
ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ＰＣＲ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ． Ｔｈｅ ＤＮＡ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｐｈｅｎｏｌ⁃ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ ＤＮＡ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ
ｗａｓ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ，ｔｈｅ ｐｕｒｉｔｙ ｏｆ ｒｅａｇｅｎｔ ｋｉｔ ｗａｓ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ａｎｄ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｈｅ ｒｅａｌ⁃ｔｉｍｅ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ＰＣＲ
ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｗａｓ ｔｈｅ ｂｅｓｔ，ｂｕｔ ｔｈｅ ＰＶＰ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔ，ｓａｆｅ ａｎｄ ｅｃｏｎｏｍｉｃａｌ，ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｌｉｍｉｔ ｏｆ
ｔｈｅ ｒｅａｌ⁃ｔｉｍｅ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ＰＣＲ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｗａｓ １􀆰 ９８ ｐｇ ／ μＬ． Ｔｅｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｙｐｅｓ ｏｆ ａｎｉｍａｌ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｉｎ ｔｈｅ
ｍａｒｋｅｔ ｗｅｒｅ ｔｅｓｔｅｄ ｗｉｔｈ ＰＶＰ ｍｅｔｈｏｄ，ｔｗｏ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｔｏ ｃｏｎｔａｉｎ ｔｈｅ ｐｏｒｃｉｎｅ⁃ｄｅｒｉｖｅｄ ｍａｔｅｒｉａｌ．
Ｔｈｅ ＰＶＰ ｍｅｔｈｏｄ ｓｈｏｕｌｄ ｂｅ ｔｈｅ ｐｒｅｆｅｒｒｅｄ ｏｆ ｔｈｅ ｔｈｒｅｅ ｍｅｔｈｏｄｓ． Ｔｈｅ ａｓｓａｙ ｐｒｏｖｉｄｅｄ ａ ｂａｓｉｓ ｆｏｒ ｔｈｅ
ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｔｏ ｃｈｏｏｓｅ ａ ｓｕｉｔａｂｌｅ ＤＮＡ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ： ｐｏｒｃｉｎｅ⁃ｄｅｒｉｖｅｄ； ＤＮＡ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ； ｐｈｅｎｏｌ⁃ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍ ｍｅｔｈｏｄ； ＰＶＰ ｍｅｔｈｏｄ； ｒｅａｇｅｎｔ ｋｉｔ
ｍｅｔｈｏｄ； ｒｅａｌ⁃ｔｉｍｅ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ＰＣＲ
　 　 食品安全关系着人类身体健康，是全社会关注
的热点问题。 近年来肉制品掺假屡禁不止，肉制品
以次充好，引起人们对食品安全的恐慌，这就要求
食品监管部门能够对动物源性成分进行快速、准确
的检验和鉴定。
用于动物源性成分的鉴定主要有物理、化学、
免疫学和分子生物学等方法。 其中，以检测 ＤＮＡ为
基础的实时荧光定量 ＰＣＲ技术具有特异性强、灵敏
度高、定量准确、自动化程度高等优点，被广泛用于
分子生物学和医学研究等领域［１］。 ＤＮＡ 模板质量
对荧光定量 ＰＣＲ很关键，在提取过程中若是处理不
当，残留的一些有机物以及其他一些杂物就会抑制
ＰＣＲ的进行［２］，从而造成假阴性，影响后续操作的
进行；此外不同实验材料的组分差异，不同方法所
提取的 ＤＮＡ质量也不尽相同，对后续的实验结果也
存在差异［３－４］。 提取基因组 ＤＮＡ 的方法有很多：酚
三氯甲烷法是实验室常用的经典 ＤＮＡ 提取方法，
商业化的基因组 ＤＮＡ 提取试剂盒目前也被实验室
广泛使用，而聚乙烯吡咯烷酮（ＰＶＰ）在提取植物基
因组 ＤＮＡ方面报道的较多［５－８］，在提取动物基因组
ＤＮＡ方面报道的较少。
本文以猪肉为实验材料，考察这 ３种提取动物源
性基因组 ＤＮＡ 方法，以期从中筛选出一种简单、快
速、更适合于实时荧光 ＰＣＲ 扩增检测动物源性基因
组 ＤＮＡ的提取方法，从而为实验室提供方法依据。
１　 材料与方法
１􀆰 １　 材料
猪肉以及 １０ 份不同类型的其他动物性材料
（蜜汁牛肉、牛肉丸 、牛肉切片、牛肉卷、牛柳、羊肉
卷、羊肚、羊肉切片、羊排、羊腿）购自农贸市场或超
市。 所有材料买回后剪碎，装入样品袋，置于－２０ ℃
冰箱中备用。
１􀆰 ２　 主要试剂与仪器
ＴａＫａＲａ ＤＮＡ 提取试剂盒及实时荧光 ＰＣＲ猪源
性 ＤＮＡ检测试剂盒，宝生物工程（大连）有限公司；抽
提缓冲液（ｐＨ８􀆰 ０），Ｔｒｉｓ ０􀆰 ０５ ｍｏｌ ／ Ｌ，Ｎａ２ ＥＤＴＡ ０􀆰 ０５
ｍｏｌ ／ Ｌ，ＳＤＳ ３０ ｇ ／ Ｌ，使用 ＨＣｌ 或 ＫＯＨ 调节 ｐＨ；提取
缓冲液（ｐＨ ８􀆰 ０），Ｔｒｉｓ ０􀆰 ２ ｍｏｌ ／ Ｌ，ＮａＣｌ ０􀆰 ２５ ｍｏｌ ／ Ｌ，
Ｎａ２ＥＤＴＡ ０􀆰 ０２５ ｍｏｌ ／ Ｌ，ＳＤＳ ５０ ｇ ／ Ｌ，使用ＨＣｌ或 ＫＯＨ
调节 ｐＨ。
７５００ 型荧光定量 ＰＣＲ 仪，美国 ＡＢＩ 公司；
Ｌａｍｂｄａ ３５型紫外 可见光分光光度计，美国 ＰＥ 公
司；ＳＯＲＶａｌｌ Ｄ ３７５２０ 型高速冷冻离心机，美国
Ｔｈｅｒｍｏ ｆｉｓｈｅｒ公司。
１􀆰 ３　 ３种 ＤＮＡ提取方法
采用酚 三氯甲烷法［９］、 ＰＶＰ 法［９］、试剂盒
法［１０］３种方法对试验材料进行 ＤＮＡ 提取。 不同方
法所用样品量均为 ０􀆰 ２５ ｇ，放入经 ２０℃冰箱预冷
２４ ｈ的研钵中，快速用力研磨粉碎后分装于编号的
２ ｍＬ离心管中，每种方法重复 ３次。
１􀆰 ３􀆰 １　 酚 三氯甲烷法
分别称取 ０􀆰 ２５ ｇ 粉碎的猪肉置于编号为 Ｆ１、
Ｆ２、Ｆ３ 的离心管中，具体操作参照文献［９］，其中
ＲＮＡ酶消化这一步省略。
１􀆰 ３􀆰 ２　 ＰＶＰ 法
分别称取 ０􀆰 ２５ ｇ 粉碎的猪肉置于编号为 Ｐ１、
Ｐ２、Ｐ３的离心管中，加入 １ ｍＬ提取缓冲液，６５ ℃搅
拌 １ ｈ，室温下冷却后将 ６０ ｍｇ ＰＶＰ 粉末和 ０􀆰 ５×体
积的乙酸氨（７􀆰 ５ ｍｏｌ ／ Ｌ）溶液与上清液混合，冰浴
３０ ｍｉｎ；１０ ０００ｇ离心 １０ ｍｉｎ，取上清液至另一离心
管中，加入等体积的三氯甲烷和异戊醇（２４ ∶ １）混
匀，１２ ０００ｇ离心 ５ ｍｉｎ，抽提 １ 次；将上清与等体积
的异丙醇混合， － ２０ ℃放置 ３０ ｍｉｎ。 ４ ℃条件下
１０ ０００ ｇ离心 １０ ｍｉｎ，弃上清液，７０％乙醇溶液洗涤
沉淀 ２次，干燥后溶于 １００ μＬ 灭菌双蒸水中，４ ℃
保存备用。
１􀆰 ３􀆰 ３　 试剂盒法
分别称取 ０􀆰 ２５ ｇ粉碎的猪肉置于编号为 ＳＨ１、
ＳＨ２、ＳＨ３的离心管中，具体操作见试剂盒说明书。
１􀆰 ４　 ＤＮＡ质量检测
取 ２０ μＬ ＤＮＡ样品，加 １ ９８０ μＬ 双蒸水稀释，
充分混匀后，以双蒸水做空白对照［１１］，用紫外 分光
光度计分别测定核酸在 ２６０、２８０ 和 ２３０ ｎｍ 处 ＯＤ
值，ＯＤ２６０ ／ ＯＤ２８０代表 ＤＮＡ 的纯度，ＯＤ２６０ ／ ＯＤ２８０比值
在 １􀆰 ８左右，表明 ＤＮＡ 纯度高，低表明有杂蛋白质
及苯酚［１２］，高则表明有 ＲＮＡ；ＯＤ２６０ ／ ＯＤ２３０比值通常
大于 ２，低则可能有核苷酸、氨基酸、盐等小分子物
质残留［８］。 ＤＮＡ浓度计算按照式 ρ ＝ＯＤ２６０×稀释倍
数×５０计算。
１􀆰 ５　 实时荧光 ＰＣＲ扩增检测
３种方法所提 ＤＮＡ稀释至 １０ μｇ ／ ｍＬ作为扩增
模板，使用 ＡＢＩ ７５００荧光定量 ＰＣＲ仪扩增，ＰＣＲ反
应体系为 ２５ μＬ，各成分组成：ｄｄＨ２ Ｏ ９􀆰 ５ μＬ，２ ×
Ｐｒｅｍｉｘ ｆｏｒ Ｐｏｒｃｉｎｅ １２􀆰 ５ μＬ，Ｐｒｉｍｅｒ Ｍｉｘ ｆｏｒ Ｐｏｒｃｉｎｅ １
μＬ，Ｐｒｏｂｅ Ｍｉｘ ｆｏｒ Ｐｏｒｃｉｎｅ １ μＬ，ＤＮＡ模板 １ μＬ；ＰＣＲ
反应程序：９５ ℃，１０ ｓ；９５ ℃ ５ ｓ，６０ ℃ ３４ ｓ，４０个循
环，６０ ℃延伸时收集荧光信号。 检测试剂盒是采用
双标记荧光（ＦＡＭ、ＨＥＸ）在同一反应管内对猪 ＣＯＸ
Ｉ基因及内参照反应同时进行扩增，若 ＦＡＭ 荧光检
２６ 生　 物　 加　 工　 过　 程　 　 第 １３卷　
出，且 Ｃ ｔ 值（每个反应管内的荧光信号达到设定的
阈值时所经历的循环数）≤３５ 则视为检出猪源性成
分，若 Ｃ ｔ 值＞３５，则视为未检出猪源性成分。
１􀆰 ６　 灵敏度检测
提取的 ＤＮＡ 模板用无菌双蒸水 １０ 倍梯度稀
释，进行实时荧光 ＰＣＲ反应，检测所提 ＤＮＡ 的扩增
检测限。
２　 结果与讨论
２􀆰 １　 ３种方法提取的 ＤＮＡ质量比较
ＰＣＲ扩增对模板 ＤＮＡ 的质量要求较高，３ 种
ＤＮＡ提取方法在原方法上稍加改进：首先用－２０ ℃
预冷的研钵研磨代替了－１９６ ℃的液氮研磨，操作上
更加安全；酚 三氯甲烷法省去了 ＲＮＡ 酶进行 ＲＮＡ
消化的过程，ＰＶＰ 法通过反复试验发现需要增加 １
次三氯甲烷：异戊醇抽提才能去除蛋白质，可能跟
所选材料动物性制品中脂肪和蛋白质较多有关系。
从表 １中可以看出酚 三氯甲烷法提取的 ＤＮＡ浓度
最高，ＰＶＰ 法提取的次之，试剂盒法提取的最低；但
试剂盒法提取的 ＤＮＡ 纯度最高，酚 三氯甲烷法提
取的 ＤＮＡ中含有一些 ＲＮＡ，ＰＶＰ 法提取的 ＤＮＡ 中
则有一些残留的蛋白质，３ 种方法提取的 ＤＮＡ 中都
有一些盐等小分子物质残留。
２􀆰 ２　 ３ 种方法提取的 ＤＮＡ 实时荧光 ＰＣＲ 扩增
效果
　 　 ３种方法提取的猪源性基因组 ＤＮＡ 在相同质
量浓度（１０ μｇ ／ ｍＬ）和条件下进行实时荧光 ＰＣＲ 扩
增反应，Ｃ ｔ 值见表 ２。 ＨＥＸ和 ＦＡＭ荧光信号均被检
出，且 ＦＡＭ的 Ｃ ｔ 值在 １９􀆰 ０１８ ～ ２０􀆰 ６４８ 之间，说明 ３
种方法提取的 ＤＮＡ 在同浓度及同条件下扩增效果
相差不大，并且都可直接用于实时荧光 ＰＣＲ扩增检
测，都能满足后续分子生物学的需要。 其中试剂盒
法的 ＦＡＭ 荧光信号的 Ｃ ｔ 值最小，扩增效果最好；
酚 三氯甲烷法次之；ＰＶＰ 法的 Ｃ ｔ 值最高。 由此，也
进一步说明了 ＤＮＡ 模板的质量影响着荧光定量
ＰＣＲ反应的进行。
表 １　 ３种方法提取猪源性基因组 ＤＮＡ质量比较
Ｔａｂｌｅ １　 Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｔｈｅ ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ ｐｏｒｃｉｎｅ⁃ｄｅｒｉｖｅｄ ｇｅｎｏｍｅ ＤＮＡ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｔｈｒｅｅ ｍｅｔｈｏｄｓ
项目
酚 三氯甲烷法 ＰＶＰ 法 试剂盒法
Ｆ１组 Ｆ２组 Ｆ３组 Ｐ１组 Ｐ２组 Ｐ３组 ＳＨ１组 ＳＨ２组 ＳＨ３组
ＯＤ２６０ ／ ＯＤ２８０ １􀆰 ９９７ ２􀆰 ０８５ １􀆰 ８３６ １􀆰 ７８１ １􀆰 ７３２ １􀆰 ７９２ １􀆰 ８２１ ５ １􀆰 ８５３ ８ １􀆰 ７５５ ９
ＯＤ２６０ ／ ＯＤ２３０ １􀆰 ９５４ ８ １􀆰 ６１５ ９ ２􀆰 ３３３ ７ １􀆰 ９３２ ２ ２􀆰 ００６ １ １􀆰 ８８５ ７ １􀆰 ８７５ ６ １􀆰 ９３８ ９ １􀆰 ９１７ ２
ρ（ＤＮＡ） ／ （μｇ·ｍＬ－１） ６２３ １ ２８７􀆰 ５ １ １１２ ２８５ １６４􀆰 ５ １９８ １８８􀆰 ５ １２７ １６２
表 ２　 ３种方法提取猪源性基因组 ＤＮＡ用于实时荧光 ＰＣＲ扩增的 Ｃｔ 值
Ｔａｂｌｅ ２　 Ｔｈｅ Ｃｔ ｖａｌｕｅ ｏｆ ｔｈｅ ｒｅａｌ⁃ｔｉｍｅ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ ＰＣＲ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｐｏｒｃｉｎｅ⁃ｄｅｒｉｖｅｄ
ｇｅｎｏｍｅ ＤＮＡ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｔｈｒｅｅ ｍｅｔｈｏｄｓ
项目
酚 三氯甲烷法 ＰＶＰ 法 试剂盒法
Ｆ１组 Ｆ２组 Ｆ３组 Ｐ１组 Ｐ２组 Ｐ３组 ＳＨ１组 ＳＨ２组 ＳＨ３组
Ｃｔ 值 １９􀆰 １８５ １９􀆰 ６９１ １９􀆰 ５８７ ２０􀆰 ６３２ ２０􀆰 ６４８ １９􀆰 ９４１ １９􀆰 ０１８ １９􀆰 １８９ １９􀆰 ０８２
２􀆰 ３　 以 ＰＶＰ法提取的 ＤＮＡ为模板的检出限试验
将 ＰＶＰ 法提取的质量浓度为 １９８ μｇ ／ ｍＬ 的
ＤＮＡ作为模板，１０ 倍梯度稀释后实时荧光 ＰＣＲ 扩
增检测，各梯度反应体系中的模板量分别为 １９􀆰 ８、
１􀆰 ９８、０􀆰 １９８、０􀆰 ０１９ ８和０􀆰 ００１ ９８ ｎｇ ／ μＬ，扩增曲线见
图 １。 由图 １ 可知，实时荧光 ＰＣＲ 可检出 １􀆰 ９８
ｐｇ ／ μＬ的 ＤＮＡ样品。 这说明 ＰＶＰ 法提取的 ＤＮＡ用
于实时荧光 ＰＣＲ检测灵敏度可达到皮克级。
２􀆰 ４　 市售动物性产品的猪源性成分检测
随机选取市场上 １０份不同类型的动物性制品作
为样品，用 ＰＶＰ 法提取 ＤＮＡ进行实时荧光 ＰＣＲ扩增
检测猪源性成分，其中蜜汁牛肉和牛肉卷 ２份样品检
出为阳性，Ｃｔ 值分别为 １７􀆰 ２２２和 ２０􀆰 ４０１（均＜３５），扩
增曲线见图 ２。 由图 ２可见，这 ２份样品都掺入了猪
肉欺骗消费者，２份阳性样品的检出也说明了 ＰＶＰ 方
法也适合于其他动物性样品的基因组 ＤＮＡ提取。
３６　 第 ６期 王　 萍等：猪源性成分检测中 ３种 ＤＮＡ提取方法比较
图 １　 ＰＶＰ法提取的 ＤＮＡ为模板的检出限试验
Ｆｉｇ􀆰 １　 Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｌｉｍｉｔ ｔｅｓｔ ｕｓｉｎｇ ＤＮＡ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ
ｗｉｔｈ ＰＶＰ ｍｅｔｈｏｄ ａｓ ｔｅｍｐｌａｔｅ
图 ２　 ＰＶＰ法检测市售动物性产品的猪源性成分
Ｆｉｇ􀆰 ２　 Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐｏｒｃｉｎｅ⁃ｄｅｒｉｖｅｄ ｍａｔｅｒｉａｌ ｉｎ ａｎｉｍａｌ
ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｍａｒｋｅｔ ｗｉｔｈ ＰＶＰ ｍｅｔｈｏｄ
３　 结论
３种方法所提 ＤＮＡ都可直接用于实时荧光 ＰＣＲ
扩增，其中酚 三氯甲烷法所提 ＤＮＡ 浓度较高，但是
该方法在操作上比较繁琐，提取时间长，有机溶剂抽
提次数多，对人体有一定的伤害；试剂盒法所提 ＤＮＡ
纯度较高，提取时间最短，但是所得 ＤＮＡ 量较少，且
　 　 　 　 　 　
试剂盒本身价格也较昂贵；ＰＶＰ 法操作过程相对简
单，有机溶剂用得少，虽然实时荧光 ＰＣＲ扩增检测 Ｃｔ
值是最高的，但是其 ＤＮＡ模板经过稀释，灵敏度可达
到皮克级，完全满足分子生物学的需求。
综上所述，ＰＶＰ 方法操作简单、安全、经济、实
时，荧光 ＰＣＲ扩增效果好，可以检出市售动物性肉
制品中的猪源性成分，是 ３种方法中的首选方法。
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（责任编辑　 荀志金）
４６ 生　 物　 加　 工　 过　 程　 　 第 １３卷