全 文 ：!"!"!乙酰升麻醇!#!$!!!#!木糖苷对$%&’!
细胞基因表达的影响
田 泽，陈四保!，肖培根
（中国医学科学院 中国协和医科大学药用植物研究所，北京 ()))*+）
摘 要：研究环菠萝蜜烷三萜化合物,-!"!乙酰升麻醇!.!)!!!#!木糖苷对肿瘤细胞$%&’,基因表达的影响，探讨其
细胞毒作用机制。利用人低密度/#0123/4564467研究细胞基因表达的改变，发现*个表达改变基因，8个下调，.
个上调。结论表明,-!"!乙酰升麻醇!.!)!!!#!木糖苷对$%&’,细胞的细胞毒性与91:;等信号传导途径相关。
关键词：环菠萝蜜烷三萜；/#0123/4564467；基因表达
中图分类号：<,*( 文献标识码：1 文章编号：(8=,>.8=?（,))-）)(>))8.>).
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升麻通常以根茎入药，并作为常用中药材载入
中国各版药典，具有清热解毒，发表透疹，升举阳气
等作用，主治风热头痛，齿痛，咽喉肿痛、子宫脱垂等
症［(］。兴安升麻总皂苷能够抑制:$1刺激的淋巴
细胞对.$!@NY的转运，并在体外对猴艾滋病毒
（EAZ）有抑制作用［,］。少见关于,-!"!乙酰升麻醇!
.!)!!!#!木糖苷的活性报道。我们前期研究表明提
取自兴安升麻（!W"#$%&’(#）地上部分的该化合物
对$%&’,细胞具有良好的细胞毒性，并能诱导其凋
亡和’,／9细胞周期阻滞
［.］。本文利用/#0123!
/4564467技术进一步研究该化合物对$%&’,细胞基
因表达的影响，探讨其细胞毒作用机制。
? 材料与方法
(W( 材 料
试剂与药品@43[5O，"O3H5N@&432%4（-))"H／
2\），YI6J%3IP3F3K54，-]M34JKJK46INFLM%4，#@@
（)W(25O／\），EE#Y@，N0@:J，C7!.NR@:6INC7!-
NR@:，均购自3IX3K45H%I。其它常用试剂均为市售
! 收稿日期：,))+!(,!,*
基金项目：国家?8.项目（编号,)).11,B,)-,）
作者简介：田 泽（(*8=!），女，北京人，副研究员，在读博士，研究方向：肿瘤药理。
第.卷第(期
,))-年,月
生 物 加 工 过 程
CP3I%J%^5L4I6O5MS35&45/%JJDIH3I%%43IH
_%FW,))-
·8.·
万方数据
分析纯。!"#$#乙酰升麻醇#%#&#!#’#木糖苷由本所
植化室惠赠。仪器：()*)+,-./01234),56&&，
+--78)9:8;3234),；杂交箱，<;=>8*?>;*?1@8)*48A8@
1=--78)3BC’；1@D*+EED20 F&&&（(38B=,;*8@，
G1+）。
HI! 细胞培养及0J+提取
用0.KLHMF&，H&N胎牛血清常规培养>)-(!
细胞（+C//）。待生长至O&N汇合时，加入%&
",;7／B药物，以相同浓度的’K1$作为对照。药
物作用"P后，以4E8Q;7裂解细胞，按试剂盒方法提
取0J+。溶于0J+保护液，在""#M&R孵育H&
,8*。然后测定!"!M&／!"!O&比值和0J+含量，
并电泳，检测0J+质量。
HI% 0J+的反转录标记反应
取0J+"&"?，加适量$78?;9C-E8,)E和0*D3)
抑制剂。将该混合物（K8S$H）在6&R 孵育H&
,8*，然后在冰上放置H&,8*。配置反转录混合物
（K8S$!）（"TA8E3434ED*9U=A)E，H&T7;V9C
9JC.3，’CC，11%0C）。加5"BK8S$!到H&"B
的K8S（$H）中，然后加H"B的/2#%9GC.或/2#"
9GC.到K8S（$H）中。在F!R 孵育!P。以碱水
解0J+链，然后用酸中和。将/2%和/2"反应液
放在K8@E;@;*WK#%&管中在H!&&&E／,8*离心O
,8*。向K8@E;@;*WK#%&管中加入CX缓冲液，在
H!&&&E／,8*离心5,8*。重复三次。最后一次离
心使滤器中的溶液少于!&"B。将 K8@E;@;*WK#
%&管倒置于一新管中，在H&&&E／,8*离心H,8*，
收集探针溶液。将探针溶液真空浓缩至所需体积。
HIF 杂 交
芯片由香港城市大学惠赠，为人低密度表达谱
基因芯片，包括应激反应基因、癌基因、激酶和磷酸
酶、(#蛋白、凋亡、细胞周期、抑癌基因、生长因子
和受体、转录因子等共FOF个基因。加杂交液于芯
片的点样位置，盖片，然后放入杂交盒中，在M"R杂
交!&P。杂交完毕后，立即洗片、离心，并扫描。
HI" 数据处理
扫描获取图象文件。选择同时满足A7D?大于或
等于&，前景信号大于背景信号，并且杂交点直径大
于H!&，YM%"和Y"%!的荧光值大于!&&的点作为
有效杂交信号。经标准化处理后，处理组／对照组比
值!!或"&I"被视为差异表达。通过文献查阅，
分析有差异表达的基因的生物信息。
! 结 果
用%&",;7／B!"#$#乙酰升麻醇#%#&#!#’#木糖
苷处理>)-(!细胞"P后，收集细胞进行芯片实
验。!"!M&／!"!O&为HIO!，0J+条带清晰，没有
降解和’J+污染，符合芯片质量要求。两次芯片
实验（染料互换）结果重复性较好，取均值作为最终
调节改变数据。结果表明，该化合物使>)-(!细胞
基因表达发生改变，其中M个基因下调（Y3D,-7)／
Y@;*4E;7"&I"），%个基因上调（Y3D,-7)／Y@;*4E;7!
!）（表H）。
表H !"#$#乙酰升麻醇#%#&#!#’#木糖苷对>)-(!细胞基因表达的影响
CDU7)H B834;A98A)E)*48D72)S-E)33)9?)*)38*>)-(!@)734E)D4)9V84P!"#$#D@)427@8,8?)*;7#%#&#!#’#S27;-2E;389)
()*)*D,) Y;79@PD*?)3 Y=*@48;*
+-;-4;3838*P8U84;E! &I"&"%5
凋亡抑制剂，与CJY受体相关因子H和!（C0+YHD*9C0+Y!）形成杂合体，并随后与CJY受体!
（CJY0!）相结合
K84;?)*#D@48ZD4)9
-E;4)8*[8*D3)M
&I%%M6H
属于丝／苏氨酸蛋白激酶家族，与丝裂原激活的蛋白激酶（K+.[8*D3)3）关系最为密切。K+.[8*D3)3
又是细胞外信号调节激酶（X0<3），通过蛋白磷酸化级联来激活，并且作为多种生化信号的整合点
/2@78*#9)-)*9)*4[8*D3)5
（/’/!#E)7D4)9[8*D3)）
&I%&!H6
细胞周期素和细胞周期依赖性激酶复合物（/’<5／/W/BLJC）成员，也称为正转录因子:（.#CXY:），
被认为通过磷酸化0J+聚合酶LL（0J+.LL）最大的亚基/C’来促进从终止到延伸的转化
K84;?)*#D@48ZD4)9-E;4)8*
[8*D3)[8*D3)H
&IM&5HF
催化K+.[8*D3)3中丝／苏氨酸残基的4PE#?7=#42E氨基酸序列的磷酸化，激活X0
.’(YD33;@8D4)9-E;4)8* &I%%F"M
被酪蛋白激酶LL磷酸化，并与.’(Y以较低的亲和力结合，提高成纤维细胞中.’(Y+刺激的细胞生
长
K84;?)*#D@48ZD4)9
-E;4)8*[8*D3)H&
&I!H5" 结合于@#\=*或D4A!的氨基末段激活结构域并且磷酸化它们的调节位点。也可磷酸化XB
4ED*3A)ED3)+F
!I!6O5H 催化硫嘌呤类药物如M#,)E@D-4;-=E8*)的1的甲基化
>)D43P;@[H&"[’ FI%MMFF 属于热休克蛋白6&家族。在细胞生长和老化过程中可能有一定作用。是一个伴侣蛋白
BLK9;,D8*#@;*4D8*8*?
-E)A)EE)94ED*37;@D48;*
-DE4*)E8*78-;,D
5IMHHOH BLK结构域包含脂肪瘤中的首选的置换伙伴，功能未知
·MF· 生物加工过程 第%卷第H期
万方数据
!"#$%&下调最多，为对照的&’(倍；!"#$)和
!"#$$%也分别下调了&’*和&’)倍。凋亡抑制
剂(，细胞周期素依赖的蛋白激酶+，血小板衍生的
生长因子相关蛋白分别下调&’,、&’*和&’*倍。另
有谷胱甘肽-转移酶".，热休克蛋白%&,和一个未
知功能基因分别上调(’*、.’.和+’)倍。这些基因
的综合作用最终导致了该化合物对/012(细胞的
细胞毒性。
! 讨 论
我们前期研究表明(,343乙酰升麻醇3*3&3!353
木糖苷通过诱导/012(细胞凋亡和2(／!细胞周
期阻滞来发挥其细胞毒作用。芯片结果表明凋亡抑
制基因6171879:9:;<:=:87>(发生下调；/0689<7?@
%&,@5发生上调，新近研究证实，/91%&,"在小鼠
0A=>B7;6CD+细胞中的过度表达可以增加应激诱导
的凋亡而不是坏死［.，,］。因此，这些基因表达的改
变可能是该化合物诱导凋亡的机制之一。EB?C:;3
F010;F0;8@:;690+是E5E(3>0C680F@:;690，而E5E(
是2(／!细胞关卡的重要调节元素［)］，通过磷酸化
GH"17CBA0>690II大亚基的EJ5结构域来促进转
录；!"#$-是真核细胞特有的重要的细胞信号转
导酶，与细胞生长、分化和细胞凋亡等密切相关［K］，
并且在某些体细胞，阻滞!"#$-的活性可以延缓
2(／!进程
［L］。因此这些基因的下调是2(／!细胞
周期阻滞的一个主要原因。正是这些基因的综合作
用使该化合物诱导/012(细胞凋亡和2(／!周期
阻滞，并最终导致细胞死亡。
参考文献：
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工业出版社，%++,，,+’
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［K］ E<6;QY，$6>:;!’!6AA6C:6;!"#$:;6909:Q;6C:;Q?69?6F09
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［L］ G7=0>89R，-<61:>7#，H6<>0:;:J，086C’5:98:;?8E0CEB?C0J:A:;Q
G0ZV:>0A0;89S7>RT8>6?0CVC6>-:Q;6C3G0QVC680F$:;6906;F#<793
1<7:;79:8:F0*3$:;690-:Q;6C:;Q#68<[6B9:;-7A68:?E0C!:879:
［N］’!7CE0CW:7C，(&&(，((：K(()3K(.%’
(&&,年(月 田 泽等：(,343乙酰升麻醇3*3&3!353木糖苷对/012(细胞基因表达的影响 ·),·
万方数据