全 文 ：　 核 农 学 报　 ２０１４，２８（１２）：２１６７ ～ ２１７４
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｕｃｌｅａｒ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
收稿日期：２０１４⁃０５⁃０４　 接受日期：２０１４⁃０９⁃１７
基金项目：浙江省自然科学基金资助项目（ＬＹ１２Ｃ１４００３）
作者简介：夏更寿，男，副教授，主要从事应用生物技术及植物抗性生理研究。 Ｅ⁃ｍａｉｌ：ｌｓｘｙｘｇｓ＠ １６３． ｃｏｍ
通讯作者：张燕，女，讲师，主要从事分子植物病理学及抗逆性研究。 Ｅ⁃ｍａｉｌ： ｚｈａｎｇｙａｎ２２１３０＠ ｈｏｔｍａｉｌ． ｃｏｍ
文章编号：１０００⁃８５５１（２０１４）１２⁃２１６７⁃０８
ＪＸＯＶ菌株 ２ 个 ａｖｒＢｓ３ ／ ｐｔｈＡ家族基因克隆分析
夏更寿　 张　 燕
（丽水学院 生态学院，浙江 丽水　 ３２３０００）
摘　 要：本研究克隆了水稻白叶枯病病原（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｏｒｙｚａｅ ｐｖ． ｏｒｙｚａｅ，Ｘｏｏ）菌株 ＪＸＯＶ的 ２ 个 ａｖｒＢｓ３ ／
ｐｔｈＡ家族成员基因，分别命名为 ｊｖａ１ 和 ｊｖａ２。 通过氨基酸序列分析和系统发育分析、原核表达载体构建
及在水稻品种叶片接种试验，探讨其基因功能和毒性。 结果表明，Ｊｖａ１ 和 Ｊｖａ２ 的氨基酸序列具有
ＡｖｒＢｓ３ ／ ｐｔｈＡ家族成员典型序列模式特征；ＢＬ２１（ＤＥ３）原核表达的 Ｊｖａ１ 和 Ｊｖａ２ 蛋白在 ＳＤＳ⁃ＰＡＧＥ 胶上
呈现出推测的 １００ＫＤ单体蛋白大小，没有出现不依赖于植物蛋白的 ＡｖｒＢｓ３ 类似的二聚体化； ｊｖａ１ 和
ｊｖａ２ 没有增强 ＰＸＯ９９Ａ在携带不同抗性基因的 １５ 个水稻品种上的毒性。 ｊｖａ１ 和 ｊｖａ２ 的基因功能有待于
进一步研究。 本研究结果为诠释水稻白叶枯病原的致病机理及相关基因家族成员的功能分化提供了重
要参考。
关键词：Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｏｒｙｚａｅ ｐｖ． ｏｒｙｚａｅ；ａｖｒＢｓ３ ／ ｐｔｈＡ；克隆；分析
ＤＯＩ：１０􀆰 １１８６９ ／ ｊ． ｉｓｓｎ． １００⁃８５５１􀆰 ２０１４􀆰 １２． ２１６７
　 　 水稻（Ｏｒｙｚａ ｓａｔｉｖａ）是世界性重要的粮食作物［１］，
也是谷类生物学的模式植物［２ － ３］。 水稻白叶枯病
（Ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｂｌｉｇｈｔ ｏｆ ｒｉｃｅ）是水稻 ３ 大病害之一，其病原
物为水稻黄单胞菌 （ Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｏｒｙｚａｅ ｐｖ． ｏｒｙｚａｅ，
Ｘｏｏ）。 Ｘｏｏ有很多不同的小种，已经报导的 Ｘｏｏ 小种
有 ３０ 多个［４］。
与其它黄单胞属的细菌一样，水稻白叶枯病菌
Ｘｏｏ含有致病性所必须的 Ш 型泌出系统（Ｔ３Ｓ），Ｔ３Ｓ
跨过细菌双层膜，很可能直接穿过植物细胞壁［５ － ６］。
细菌的效应分子蛋白通过 Ｔ３Ｓ 泌出并且进入植物细
胞［７］，这些效应分子作用于不同的植物生理过程，抑
制植物防卫反应，调节植物转录过程，增强细菌毒
性［８ － ９］。 ＡｖｒＢｓ３ ／ ｐｔｈＡ是最大的 Ｔ３Ｓ 泌出的效应分子
家族， 在植物细胞内 以 类 植 物 基 因 转 录 因 子
（ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ⁃ｌｉｋｅ ｅｆｆｅｃｔｏｒ， ＴＡＬＥ）的方式起作
用［１０ － １４］。
ＡｖｒＢｓ３ ／ ｐｔｈＡ 家族成员具有 ５ 个典型的结构特
征，存在于 ３ 个区域内。 首先，Ｎ端与 Ｔ３Ｓ泌出有关的
序列；其次，中间部分是负责与 ＤＮＡ 特异性结合的区
域，含有随机重复单元，重复单元由 ３０ ～ ４２ 个氨基酸
残基组成，重复数在 １􀆰 ５ ～ ３３􀆰 ５ 之间［１５］。 ＡｖｒＢｓ３ 中间
重复单元由 １０２ ｂｐ 编码的 ３４ 个氨基酸残基组成，已
经克隆一些含有 ３４ 个氨基酸残基重复单元的 ＡｖｒＢｓ３
类似的成员，其重复数是 ５􀆰 ５ ～ ２５􀆰 ５ 个［１６ － ２０］。 重复单
元的氨基酸序列高度保守，只有 １２ 和 １３ 位氨基酸残
基有变化，１２ 和 １３ 位氨基酸残基称为重复可变双残
基（ ｒｅｐｅａｔ ｖａｒｉａｂｌｅ ｄｉ⁃ｒｅｓｉｄｕｅ， ＲＶＤ）。 ＲＶＤ 的序列决
定了与重复单元相结合的 ＤＮＡ序列特异性，即重复单
元中这些氨基酸残基对 ＲＶＤ与靶标 ＤＮＡ序列之间确
定了结合法则［２１ － ２２］。 最后，另外 ３ 个特征是 Ｃ端的亮
氨酸拉链（ ｌｅｕｃｉｎｅ ｚｉｐｐｅｒ，ＬＺ）结构、３ 个核定位信号
（ｎｕｃｌｅａｒ ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ ｓｉｇｎａｌ，ＮＬＳ）和酸性转录激活区
（ａｃｉｄｉｃ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｄｏｍａｉｎ，ＡＡＤ） ［２３ － ２５］。
自 １９８３ 年第 １ 个 ａｖｒＢｓ３ ／ ｐｔｈＡ 家族成员基因
ａｖｒＢｓ３ 被克隆以来［２６］，多个 Ｘｏｏ菌株的家族成员得到
克隆，如 ａｖｒＸａ７、ａｖｒＸａ１０、ａｖｒＸａ５、ａＢ３􀆰 ５、ａＢ３􀆰 ６、ａＢ４􀆰 ３
和 ａＢ４􀆰 ５ （ ＰＸＯ８６ ） ［２７ － ２８］， ｐｔｈＸｏ１ （ ＰＸＯ９９Ａ ）、 ｐｔｈＸｏ２
（ＪＸＯＩＡ）、 ｐｔｈＸｏ３ （ ＰＸＯ６１）、 ｐｔｈＸｏ１ － ２ 及 ｐｔｈＸｏ２ － ２
（ ＰＸＯ７１ ）、 ａｖｒＸａ７ － ２ （ ＫＸＯ８５Ａ ） ［２９］， ａｖｒＸａ３
（ＪＸＯШ） ［３０］等。 尤其随着当今测序技术的飞速发展，
７６１２
核　 农　 学　 报 ２８ 卷
以及全基因组序列的获得和分析，对该家族成员在不
同菌株中的组成及特征，了解的更多更全面。 然而，不
同的 Ｘｏｏ菌株中该家族成员的组成、特征及功能存在
差异，因此，仍然有很多 Ｘｏｏ 菌株的 ａｖｒＢｓ３ ／ ｐｔｈＡ 家族
成员序列组成及功能有待阐明。 本研究克隆了 Ｘｏｏ日
本小种 ＪＸＯＶ 菌株中 ２ 个 ａｖｒＢｓ３ ／ ｐｔｈＡ 家族成员基因，
分别命名为 ｊｖａ１ 和 ｊｖａ２ （ ＪＸＯＶ 菌株 ａｖｒＢｓ３ ／ ｐｔｈＡ 成
员），并测试了这 ２ 个基因在原核中表达及对 Ｘｏｏ 菌
株致病性的影响。
１　 材料与方法
１􀆰 １　 细菌菌株、质粒和培养条件
本研究中使用的细菌菌株和质粒列在表 １ 中。
Ｅ． ｃｏｌｉ 的培养基为 Ｌｕｒｉａ ｂｒｏｔｈ （ＬＢ）， 培养温度 ３７℃；
Ｘｏｏ培养基为 Ｎｕｔｒｉｅｎｔ Ｂｒｏｔｈ， 培养温度 ２８℃。 培养基
中加入不同终浓度的抗生素分别为：氨苄青霉素
（Ａｍｐ）１００μｇ·ｍＬ － １；利副平（Ｒｉｆ）５０μｇ·ｍＬ － １；卡那
霉素（Ｋｍ）２５ μｇ·ｍＬ － １；壮观霉素（Ｓｐ）５０μｇ·ｍＬ － １。
表 １　 本研究所用菌株、质粒
Ｔａｂｌｅ １　 Ｓｔｒａｉｎｓ ａｎｄ ｐｌａｓｍｉｄｓ ｕｓｅｄ ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ
菌株 ／质粒
Ｓｔｒａｉｎｓ ／ Ｃｏｓｍｉｄ
相关的特性
Ｒｅｌｅｖａｎｔ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ
参考文献或来源
Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｏｒ ｓｏｕｒｃｅｓ
Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｏｒｙｚａｅ ｐｖ． ｏｒｙｚａｅ
ＪＸＯＶ
ＰＸＯ９９Ａ
Ｒｉｆｒ，ｗｉｌｄ ｔｙｐｅ Ｐｈｉｌｉｐｐｉｎｅ ｒａｃｅ ６， Ｒｉｆｒ， Ｓｐｒ， Ｋｍｒ， Ｃｍｒ 本实验室 Ｔｈｉｓ ｌａｂ Ｈｏｐｋｉｎｓ ｅｔ ａｌ． （１９９２） ［２７］
Ｅ． ｃｏｌｉ
ＤＨ５α
ＢＬ２１
Ｓ１７ － １
Ｆ′ｒｅｃＡ，Φ８０ ｄ ｌａｃＺ， ΔＭ１５
ＤＥ３
２９４ｒｅｃＡ， ｃｈｏｍｏｓｏｍａｌｌｙ ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ，ＲＰ４ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ， Ｔｐｒ， Ｓｐｒ
Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ
本实验室 Ｔｈｉｓ ｌａｂ
Ｓｉｍｏｎ等［３７］
Ｐｌａｓｍｉｄｓ
ｐＭＤ１８⁃Ｔ
ｐＭｊｖａ１
ｐＭｊｖａ２
ｐＥＴ３０ａ（ ＋ ）
ｐＥｊｖａ１
ｐＥｊｖａ２
ｐＵＦＲ０３４
ＡＰＲ ｃｌｏｎｇｉｎｇ ｖｅｃｔｏｒ
Ｐｌａｓｍｉｄ ｐＭＤ１８⁃Ｔ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ３００９ｂｐ ｊｖａ１ ｆｒａｇｍｅｎｔ
Ｐｌａｓｍｉｄ ｐＭＤ１８⁃Ｔ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ３１１１ｂｐ ｊｖａ２ ｆｒａｇｍｅｎｔ
Ｔ７ ｐｒｏｍｏｔｅｒ， ｌａｃＩ， Ｋｍｒ， ｈｓＢＬｙＳ ？
Ｐｌａｓｍｉｄ ｐＥＴ３０ａ（ ＋ ） ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ３００９ｂｐ ｊｖａ１ ｆｒａｇｍｅｎｔ
Ｐｌａｓｍｉｄ ｐＥＴ３０ａ（ ＋ ） ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ３１１１ｂｐ ｊｖａ２ ｆｒａｇｍｅｎｔ
ＩｎｃＷ， Ｎｍｒ， Ｋｍｒ， Ｍｏｂ ＋ ， Ｍｏｂ（Ｐ） ＬａｃＺα ＋ ，ｃｏｓ Ｓｐｒ， Ｋｍｒ
ＴａＫａＲａ
本研究 Ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ
本研究 Ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ
本实验室 Ｔｈｉｓ ｌａｂ
本研究 Ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ
本研究 Ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ
ＤｅＦｅｙｔｅｒ等［３８］
ｐＵｊｖａ１
ｐＵｊｖａ２
Ｐｌａｓｍｉｄ ｐＵＦＲ０３４ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ３００９ｂｐ ｊｖａ１ ｆｒａｇｍｅｎｔ
ｐｌａｓｍｉｄ ｐＵＦＲ０３４ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ３１１１ｂｐ ｊｖａ２ ｆｒａｇｍｅｎｔ
本研究 Ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ
本研究 Ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ
１􀆰 ２　 ｊｖａ１ 和 ｊｖａ２ 基因的克隆和测序
根据已知的 Ｘｏｏ 菌株 ＰＸＯ８６ 的 ａｖｒＢｓ３ ／ ｐｔｈＡ 家族
成员 ａｖｒＸａ１０ 的 ＤＮＡ 序列，设计引物如下：上游引物
５′ＧＧＧＧＴＡＣＣ（ＫｐｎＩ）ＡＴＧＧＡＴＣＣＣＡＴＴＣＧＴＴＣ ３′；下游
引物 ５′ ＧＧＡＡＴＴＣ （ ＥｃｏＲＩ ） ＣＧＣＣＣＣＴＣＡＧＡＴＣＧＴＣＣ
３′。 以 Ｘｏｏ菌株 ＪＸＯＶ基因组 ＤＮＡ 为模板，ＰＣＲ 扩增
得到产物， 命名为 ｊｖａ１ 和 ｊｖａ２，经琼脂糖凝胶电泳检
测，割胶回收。 将 ＰＣＲ 产物酶切纯化，连接到载体
ｐＭＤ１８⁃Ｔ，分别得到 ｐＭｊｖａ１ 和 ｐＭｊｖａ２。 测序验证正确
后，应用 ＤＮＡＳｔａｒ进行核苷酸和氨基酸序列分析，并通
过 ＢＬＡＳＴ检索到 ＧｅｎＢａｎｋ 中 ａｖｒＢｓ３ 其它基因成员的
氨基酸，利用 Ｃｌｕｓｔａｌ Ｘ进行排列比对，构建进化树。
１􀆰 ３　 原核表达载体的构建和诱导表达
将 ｊｖａ１ 和 ｊｖａ２ 连接到表达载体 ｐＥＴ３０ａ（ ＋ ），得
到 ｐＥｊｖａ１ 和 ｐＥｊｖａ１，转化感受态细胞 ＤＨ５α 转化到大
肠杆菌 ＢＬ２１（ＤＥ３）中诱导表达。 挑取单菌落接种于
２０ｍＬ液体 ＬＢ ＋ Ｋｍ２５ 中，３７℃下振荡培养 １２ｈ左右作
为母液，再按照 １∶ １００ 比例接种于相同液体培养基中，
继续 ３７℃下振荡培养至 ＯＤ６００ ＝ ０􀆰 ５；加入 ＩＰＴＧ 至终
浓度为 １􀆰 ０ ｍｍｏｌ·Ｌ － １， ２８℃ 下振荡培养 ３ｈ；离心
（８ ０００ｒ·ｍｉｎ － １，１０ｍｉｎ）收集菌体；加入适量去离子水
悬浮菌体，离心（８ ０００ ｒ·ｍｉｎ － １，１０ｍｉｎ）收集菌体；加入
５ｍＬ ＴＥ悬浮菌体，并加入 ５０μＬ １０ｍＭ 的 ＰＭＳＦ；菌悬
液置冰中，超声波破碎菌体；离心（１０ ０００ ｒ·ｍｉｎ － １，
１０ｍｉｎ）收集上清。 粗提蛋白上清和 ２ × ＳＤＳ⁃ＰＡＧＥ 加
样缓冲液在 １０％ Ｔｒｉｓ －甘氨酸 ＳＤＳ 聚丙烯酰胺凝胶
分离 胶 （ ＳＤＳ⁃ＰＡＧＥ ） 上 电 泳 （ Ｂｉｏ⁃ｒａｄ， ｐｏｗｅｒｐａｃ
ｂａｓｉｃ），检测目的蛋白表达情况。
８６１２
　 １２ 期 ＪＸＯＶ菌株 ２ 个 ａｖｒＢｓ３ ／ ｐｔｈＡ家族基因克隆分析
１􀆰 ４　 ＰＸＯ９９Ａ结合子的获得及剪叶接种试验
将基因 ｊｖａ１ 和 ｊｖａ２ 连接在 ｐＵＦＲ０３４ 载体上，得到
ｐＵｊｖａ１ 和 ｐＵｊｖａ２ 载体，将其转化到宿主菌 Ｓ１７ － １，得
到 ２ 个结合子 Ｓ１７⁃１ ／ ｐＵｊｖａ１ 和 Ｓ１７⁃１ ／ ｐＵｊｖａ２。 双亲交
配的方法得到结合子 ＰＸＯ９９Ａ ／ ｐＵｊｖａ１ 和 ＰＸＯ９９Ａ ／
ｐＵｊｖａ２。
将野生型 ＰＸＯ９９Ａ和结合子 ＰＸＯ９９Ａ ／ ｐＵｊｖａ１ 和
ＰＸＯ９９Ａ ／ ｐＵｊｖａ２ 培养到浓度为 １０８ ＣＦＵ·ｍＬ － １， 剪叶
法将上述菌株分别接种到 １５ 个含不同抗性基因的成
株期水稻品种（表 ２）叶片中。 １５ｄ 后测量病斑长度，
取 ５ 张叶片病斑平均值，试验重复 ３ 次［３１］。
表 ２　 本研究使用的水稻
Ｔａｂｌｅ ２　 Ｒｉｃｅ ｃｕｌｔｉｖａｒｓ ｕｓｅｄ ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ
水稻品种
Ｒｉｃｅ ｃｕｌｔｉｖａｒｓ
携带抗性基因
Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｇｅｎｅｓ
ＩＲＢＢ１ Ｘａ１，Ｘａ２
ＩＲＢＢ２ Ｘａ２
ＩＲＢＢ３ Ｘａ３
ＩＲＢＢ４ Ｘａ４
ＩＲＢＢ５ ｘａ５
ＩＲＢＢ７ Ｘａ７
ＩＲＢＢ８ ｘａ８
ＩＲＢＢ１０ Ｘａ１０
ＩＲＢＢ１３ ｘａ１３
ＩＲＢＢ２１ Ｘａ２１
ＩＲ２４ Ｘａ１６，Ｘａ１８
ＩＲ２６ Ｘａ４
ＢＪ１ ｘａ５，ｘａ１３
Ａｓｏｍｉｎｏｒｉ Ｘａ１７
Ｗａｓｅ Ａｉｋｏｋｕ３ Ｘａ３
２　 结果与分析
２􀆰 １　 ｊｖａ１ 和 ｊｖａ２ 基因及推测的氨基酸序列
如图 １ 所示，成功扩增得到了 ２ 个片段，分别命名
为 ｊｖａ１ 和 ｊｖａ２。 ｊｖａ１ 全长 ３ ００９ｂｐ，编码 １ ００２ 个氨基
酸残基，而 ｊｖａ２ 基因全长 ３ １１１ｂｐ，编码 １ ０３６ 个氨基
酸残基。 推测的 Ｊｖａ１ 和 Ｊｖａ２ 氨基酸序列，都具有
ＡｖｒＢｓ３ ／ ｐｔｈＡ家族成员的 ５ 个典型的结构特征，即 Ｎ
端与 Ｔ３Ｓ泌出有关的序列，中间 ３４ 个氨基酸残基重复
单元序列，Ｃ端 ＬＺ，ＮＬＳ及 ＡＡＤ序列（图 ２）。
比较这 ２ 个基因的氨基酸序列，同源性高达
注： Ｍ，ＤＮＡ ｍａｒｋｅｒ； １， ＰＣＲ产物。
Ｎｏｔｅ： Ｍ，ＤＮＡ ｍａｒｋｅｒ； １， ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔ．
图 １　 ｊｖａ１ 和 ｊｖａ２ 两个基因的 ＰＣＲ产物电泳图
Ｆｉｇ． １　 Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ｏｆ ｔｗｏ ｇｅｎｅｓ ｊｖａ１
ａｎｄ ｊｖａ２ ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔｓ
９９􀆰 ４％ ，其差异体现在：（１） Ｊｖａ１ 中间区域含 １２􀆰 ５ 个
３４ 个氨基酸残基的重复单元，而 Ｊｖａ２ 则含有 １３􀆰 ５ 个，
比 Ｊｖａ１ 多 １ 个重复单元，即在 Ｊｖａ２ 中，第 ７ 和第 ８ 位
３４ 个氨基酸残基的重复单元完全相同，这个相同的重
复单元位于 Ｊｖａ１ 的第 ７ 位（图 ２）；（２）ｊｖａ２ 在 Ｃ －端含
有 ６ 个与 ｊｖａ１ 不同的氨基酸残基，但都不包含在 ＬＺ、
ＮＬＳ和 ＡＡＤ 特征序列中。 Ｊｖａ１ 和 Ｊｖａ２ 与其它 ７ 个
ＡｖｒＢｓ３ 成员的聚类分析显示，这两个基因与来自 ＪＸＯ
Ⅲ的 ＡｖｒＸａ３ 和来自 ＰＸＯ８６ 的 Ａｖｒｘａ５ 同源性高，与同
样来自 ＰＸＯ８６ 的 ＡｖｒＸａ１０ 同源性次之（图 ３）。
Ｊｖａ１ 第 ６ 个到第 １２􀆰 ５ 个重复单元的 １２、１３ 位氨
基酸含有一个 ＨＤ到 ＮＧ的 ８ 个重复序列的模式特征：
ＮＩ ＮＮ ＮＩ ＨＧ ＨＧ ＨＤ ＮＧ ＨＤ ＨＧ ＨＤ ＨＤ ＨＤ ＮＧ，与对
水稻起毒性作用的成员 ＰｔｈＸｏ１、ＰｔｈＸｏ２、 ＰｔｈＸｏ３ 以及
ＡｖｒＸａ７ 一致（图 ４） ［２９］。
２􀆰 ２　 Ｊｖａ１ 和 Ｊｖａ２ Ｎ 端可能涉及 Ｔ３Ｓ 泌出的结构特
征
Ｊｖａ１ 和 Ｊｖａ２ Ｎ －端前 ２５ 个氨基酸残基中丝氨酸
的含 量 为 ８％ 。 比 较 Ｊｖａ１、 Ｊｖａ２、 ＡｖｒＢｓ１ （ ＹＰ ＿
３６１６６３􀆰 １ ）、 ＡｖｒＢｓ２ （ ＹＰ ＿ ３６１７８３􀆰 １ ）、 ＡｖｒＢｓ３
（ Ｐ１４７２７􀆰 ２ ）、 ＡｖｒＢｓ４ （ ＣＡＡ４８６８０􀆰 １ ） 以 及 ＡｖｒＢｓＴ
（ＥＧＤ０８０３０􀆰 １） Ｎ －端氨基酸序列，Ｊｖａ１ 和 Ｊｖａ２ 同样
含有一个基本氨基酸包围的脯氨酸残基， 并且涉及这
一序列特征的 １２ 个氨基酸残基与 ＡｖｒＢｓ３ 和 ＡｖｒＢｓ４
中的 １２ 个氨基酸残基序列完全一致（图 ５） ［３２］。
２􀆰 ３　 Ｊｖａ１ 和 Ｊｖａ２ 原核蛋白表达载体构建
片段 Ｊｖａ１ 和 Ｊｖａ２ 连接到表达载体 ｐＥＴ３０（ ａ ＋ ）
（简称 ｐＥＴ３０），得到 ｐＥｊｖａ１ 和 ｐＥｊｖａ２，转入宿主菌
ＢＬ２１（ＤＥ３）， 培养并诱导表达。 提取转化子 ＢＬ２１ ／
９６１２
核　 农　 学　 报 ２８ 卷
注：Ｎ端序列与 Ｔ３Ｓ泌出有关；中间 ３４ 氨基酸重复单元与 ＤＮＡ结合特异性有关；Ｃ端具有 ＬＺ、ＮＬＳ和 ＡＡＤ序列特征。 ｊｖａ１
　 　 中第 ７ 个重复单元与 ｊｖａ２ 中第 ７、第 ８ 个重复单元序列完全一致。
Ｎｏｔｅ： Ｎ⁃ｔｅｒｍｉｎｕｓ ｉｓ ｒｅｌｅｖａｎｔ ｔｏ Ｔ３Ｓ ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ． Ｃｅｎｔｒａｌ ｐａｒｔ ｏｆ ３４ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ ｒｅｐｅａｔｓ ａｒｅ ｒｅｓｐｏｎｓｉｂｌｅ ｆｏｒ ＤＮＡ ｂｉｎｄｉｎｇ
ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ． Ｃ⁃ｔｅｒｍｉｎｕｓ ｃｏｎｔａｉｎｓ ＬＺ， ＮＬＳ ａｎｄ ＡＡＤ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ． Ｔｈｅ ｓｅｖｅｎｔｈ ｒｅｐｅａｔ ｕｎｉｔ ｉｎ ｊｖａ１ ｓｈａｒｅｓ ｔｏｔａｌ ｉｄｅｎｔｉｔｙ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｓｅｖｅｎｔｈ
　 　 ａｎｄ ｅｉｇｈｔｈ ｒｅｐｅａｔ ｕｎｉｔ ｉｎ ｊｖａ２．
图 ２　 推测的 Ｊｖａ１ 和 Ｊｖａ２ 氨基酸序列具有的 ＡｖｒＢｓ３ ／ ｐｔｈＡ家族成员 ５ 个特征
Ｆｉｇ． ２　 Ｆｉｖｅ ｔｙｐｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ＡｖｒＢｓ３ ／ ｐｔｈＡ ｆａｍｉｌｙ ｍｅｍｂｅｒｓ ｉｎ ｄｅｄｕｃｅｄ ｊｖａ１ ａｎｄ ｊｖａ２
注：图下刻度尺为同源序列等位氨基酸残基替换（ × １００）。
Ｎｏｔｅ： Ｔｈｅ ｄｉｖｉｄｉｎｇ ｒｕｌｅ ｕｎｄｅｒ ｔｈｅ ｆｒｅｅ ｉｎｄｉｃａｔｅｓ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ｓｕｂｓｔｉｔｎｔｉｏｎｓ ｉｎ ｈｏｍｏｌｏｇｓ（ × １００） ．
图 ３　 Ｊｖａ１ 和 Ｊｖａ２ 与其它 ７ 个 ａｖｒＢｓ３ ／ ｐｔｈＡ家族成员的进化树
Ｆｉｇ． ３　 Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ｔｒｅｅ ｏｆ Ｊｖａ１， Ｊｖａ２ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ７ ｍｅｍｂｅｒｓ ｏｆ ＡｖｒＢｓ３ ／ ｐｔｈＡ ｆａｍｉｌｙ
ｐＥＴ３０、ＢＬ２１ ／ ｐＥｊｖａ１ 以及 ＢＬ２１ ／ ｐＥｊｖａ２ 总蛋白，ＳＤＳ⁃
ＰＡＧＥ 胶显示， ＢＬ２１ ／ ｐＥｊｖａ１ 和 ＢＬ２１ ／ ｐＥｊｖａ２ 比
ＢＬ２１ ／ ｐＥＴ３０ 明显多出 １ 条比较粗的条带，位于
１００ＫＤ略上方，并且 ＢＬ２１ ／ ｐＥｊｖａ２ 中的条带比 ＢＬ２１ ／
ｐＥｊｖａ１ 中的条带稍大些（图 ６）。
２􀆰 ４　 ｊｖａ１ 和 ｊｖａ２ 对 ＰＸＯ９９Ａ菌株致病性影响
如图 ７ 所示，野生型 ＰＸＯ９９Ａ及结合子 ＰＸＯ９９Ａ ／
ｐＵｊｖａ１ 和 ＰＸＯ９９Ａ ／ ｐＵｊｖａ２ ３ 个菌株接种后的 １５ 个不
同抗性基因的水稻品种分别表现出了不同水平的感染
或抗性，但这 ３ 个菌株对同一品种叶片的病斑长度没
有产生显著差异，表明这 １５ 个水稻品种携带的抗性基
因（表 ２）均未与 ｊｖａ１ 和 ｊｖａ２ 产生对应互作的关系，此
外，ｊｖａ１ 与 ｊｖａ２ 也没有增加 ＰＸＯ９９Ａ菌株致病性。
３　 讨论
同源基因通常被分为直系同源基因（ｏｒｔｈｏｌｏｇ）、旁
系同源基因（ｐａｒａｌｏｇ）以及异源同源基因。 进化树分
析进化关系（图 ３）显示，同一个 Ｘｏｏ 菌株中的 ａｖｒＢｓ３ ／
ｐｔｈＡ家族成员起源于同一祖先，各自成为一个亚枝，互
为旁系同源基因关系，由近期基因复制形成（ ｓｐｒｉｖａｔｅ
ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ）。 典型的 ｐａｒａｌｏｇｓ 之间的功能是相同
０７１２
　 １２ 期 ＪＸＯＶ菌株 ２ 个 ａｖｒＢｓ３ ／ ｐｔｈＡ家族基因克隆分析
注：ＰｔｈＸｏ１⁃３ 以及 ＡｖｒＸａ７ 都是水稻毒性因子。 数字表示的是相对于第一个重复单元的位置。
Ｎｏｔｅ： ＰｔｈＸｏ１⁃３ ａｎｄ ＡｖｒＸａ７ ａｒｅ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｆａｃｔｏｒｓ ｏｎ ｒｉｃｅ． Ｎｕｍｂｅｒｓ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｏｎｓ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｔｏ ｔｈｅ ｆｉｒｓｔ ｒｅｐｅａｔ ｕｎｉｔ．
图 ４　 ｊｖａ１ 含有的中间重复单元第 １２ 和 １３ 位可变氨基酸残基组成 ＨＤ到 ＮＧ ８ 个重复模式
Ｆｉｇ． ４　 Ｔｈｅ ｅｉｇｈｔ ｒｅｐｅａｔ ｐａｔｔｅｒｎ ＨＤ ｔｏ ＮＧ ｏｆ ｔｗｅｌｆｔｈ ａｎｄ ｔｈｉｒｔｅｅｎｔｈ ｖａｒｉａｂｌｅ ｄｉ⁃ｒｅｓｉｄｕｅ ｉｎ ｊｖａ１ ｃｅｎｔｒａｌ ｐａｒｔ ｒｅｐｅａｔ ｕｎｉｔｓ
注：比较分析 ｊｖａ１、ｊｖａ２ 与 ＡｖｒＢｓ１⁃４ 以及 ＡｖｒＢｓＴ的 Ｎ －端序列，方框内强调的是保守的脯氨酸残基，脯氨酸残基两边
　 　 　 推测的相同序列单独列出。 图中数字表示的是相对于整个蛋白第一个氨基酸残基的位置。
Ｎｏｔｅ： Ｔｈｅ Ｎ⁃ｔｅｒｍｉｎｕｓ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｊｖａ１ ａｎｄ ｊｖａ２ ａｒｅ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｏｓｅ ｏｆ ＡｖｒＢｓ１ － ４ ａｎｄ ＡｖｒＢｓＴ， ａｎｄ ｔｈｅ
ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ｐｒｏｌｉｎｅ ｉｓ ｅｍｐｈａｓｉｚｅｄ ｂｙ ｐａｎｅ． Ｔｈｅ ｐｒｅｓｕｍｅｄ ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｒｏｕｎｄ ｔｈｅ ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ｐｒｏｌｉｎｅ ｉｓ ｓｈｏｗｎ．
　 　 　 Ｎｕｍｂｅｒｓ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｏｎｓ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｔｏ ｔｈｅ ｆｉｒｓｔ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｒｅｓｉｄｕｅ ｏｆ ｔｈｅ ｗｈｏｌｅ ｐｒｏｔｅｉｎ．
图 ５　 ｊｖａ１ 和 ｊｖａ２ Ｎ －端保守基序分析
Ｆｉｇ． ５　 Ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｍｏｔｉｆ ｉｎ ｔｈｅ Ｎ⁃ｔｅｒｍｉｎｕｓ ｏｆ ｊｖａ１ ａｎｄ ｊｖａ２
或相似的，但有时是不同的，在缺乏原来的选择压力的
情况下，复制基因通过突变获得新的功能。 Ｙａｎｇ
等［３３］发现 Ｘｏｏ的 ａｖｒＢｓ３ ／ ｐｔｈＡ家族成员 ａｖｒＸａ７ 在培养
条件下突变失去依赖 Ｘａ７ 的无毒活性功能而保持毒
性功能。 本研究从小种 ＪＸＯＶ 中克隆到的 ２ 个
ａｖｒＢｓ３ ／ ｐｔｈＡ家族成员， ｊｖａ１ 与 ｊｖａ２ 其同源性高，重复
单元编码的 ３４ 个氨基酸序列完全一致，但重复次数不
一样（图 ２）。 可以肯定 ｊｖａ１ 和 ｊｖａ２ 其中之一是通过最
新的复制产生的，但目前无法确定哪个更为原始，有待
在其它小种中进行克隆进行进化分析，并研究重复单
元的数目对基因功能的影响。
Ｎｉｎｏ⁃ｌｉｕ等［４］在研究水稻白叶枯病菌 Ｘｏｏ 和水稻
细条斑病菌 Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｏｒｙｚａｅ ｐｖ． ｏｒｙｚｉｃｏｌａ （Ｘｏｏｃ）
ａｖｒＢｓ３ ／ ｐｔｈＡ基因成员之间的进化关系时，以每个成员
的中间 １０２ ｂｐ 片段做进化树分析，发现 Ｘｏｏ 和 Ｘｏｏｃ
的成员成簇时存在交叉现象，由此推测这 ２ 个致病变
种的 ａｖｒＢｓ３ ／ ｐｔｈＡ 成员之间也是 ｐａｒａｌｏｇ 的关系。 已有
研究表明，来自 Ｘｏｏｃ的该家族的基因的功能不同于来
自 Ｘｏｏ的该家族的基因的功能很不同。 迄今为止鲜有
在水稻上尚未克隆到和 Ｘｏｏｃ 的 ａｖｒＢｓ３ ／ ｐｔｈＡ 家族基因
对应的抗病基因的报道。 然而，有研究表明 Ｘｏｏｃ 的
ａｖｒＢｓ３ ／ ｐｔｈＡ成员 ａｖｒＲｘｏ１ 能激发携带 Ｒｘｏ１ 抗性基因
的玉米的过敏反应，并且 Ｒｘｏ１ 基因能转入水稻抗
Ｘｏｏｃ［３４ － ３５］。
ａｖｒＢｓ３ 基因表达产物已经被证明在植物细胞质内
二聚体化，通过真核生物的核运输机器，可能通过
ｉｍｐｏｒｔｉｎ α的介导运输到植物细胞核，并且 ＡｖｒＢｓ３ －
ａｖｒＢｓ３这种互作依赖于重复区域，不依赖植物蛋白［３６］。
１７１２
核　 农　 学　 报 ２８ 卷
注：Ｍ，蛋白 ｍａｒｋｅｒ；泳道 １， ＢＬ２１ ／ ｐＥＴ３０；
泳道 ２， ＢＬ２１ ／ ｐＥｊｖａ２；泳道 ３，ＢＬ２１ ／ ｐＥｊｖａ１。
Ｎｏｔｅ： Ｍ，ｐｒｏｔｅｉｎ ｍａｒｋｅｒ；Ｌａｎｅ１，ＢＬ２１ ／ ｐＥＴ３０；
Ｌａｎｅ ２， ＢＬ２１ ／ ｐＥｊｖａ２；Ｌａｎｅ ３，ＢＬ２１ ／ ｐＥｊｖａ１．
图 ６　 ＢＬ２１ ／ ｐＥＴ３０、ＢＬ２１ ／ ｐＥｊｖａ１ 以及 ＢＬ２１ ／
ｐＥｊｖａ２ 粗提总蛋白的 ＳＤＳ⁃ＰＡＧＥ电泳
Ｆｉｇ． ６　 ＳＤＳ⁃ＰＡＧＥ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ｏｆ ｔｏｔａｌ
ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｆｒｏｍ ＢＬ２１ ／ ｐＥＴ３０，ＢＬ２１ ／ ｐＥｊｖａ１
ａｎｄ ＢＬ２１ ／ ｐＥｊｖａ２
本研究在 ＢＬ２１ 原核中表达的 ＪＸＯＶ 菌株的 ａｖｒＢｓ３ ／
ｐｔｈＡ 家族的 ２ 个基因，在 ＳＤＳ⁃ＰＡＧＥ 胶上出现在
１００ＫＤ稍上方，和推测的单体大小 １００ＫＤ 左右相当。
依赖于 ＡｖｒＢｓ３ ／ ｐｔｈＡ中间重复区域而非植物蛋白的二
聚体化过程在原核细胞中没有发生的原因有待于进一
步的研究。
Ｎｏｔｅ： １，ＰＸＯ９９Ａ； ２，ＰＸＯ９９Ａ ／ ｐＵｊｖａ１； ３， ＰＸＯ９９Ａ ／ ｐＵｊｖａ２； ＷＡ３， ＷａｓｅＡｉｋｏｋｕｓ３．
图 ７　 ３ 个菌株 ＰＸＯ９９Ａ、ＰＸＯ９９Ａ ／ ｐＵｊｖａ１ 及 ＰＸＯ９９Ａ ／ ｐＵｊｖａ２ 接种 １５ 个水稻品种
Ｆｉｇ． ７　 Ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｒｅｅ ｓｔｒａｉｎｓ ＰＸＯ９９Ａ，ＰＸＯ９９Ａ ／ ｐＵｊｖａ１ ａｎｄ ＰＸＯ９９Ａ ／ ｐＵｊｖａ２ ｏｎ １５ ｒｉｃｅ ｃｕｌｔｉｖａｒｓ
本研究克隆的 ＪＸＯＶ 的 ａｖｒＢｓ３ ／ ｐｔｈＡ 成员 Ｊｖａ１ 的
中间重复区域含有 ＨＤ 到 ＮＧ ８ 个重复序列的模式特
征，与水稻起毒性作用的其它成员一致（图 ４），且 Ｊｖａ１
中间区域 ３４ 个氨基酸重复单元数是 １２􀆰 ５，远大于诱
导靶标基因表达要求的最小单元数 ６􀆰 ５［２１］，表明 Ｊｖａ１
应该具有相似且更强的毒性作用［２９］。 然而，接种携带
ｊｖａ１ 或 ｊｖａ２ 的 ＰＸＯ９９Ａ菌株，都没有对水稻产生明显的
增强毒性功能，可能由于 ＰＸＯ９９Ａ对供试水稻品种本
身是致病性比较强的菌株。 今后，将 ｊｖａ１ 和 ｊｖａ２ 导入
对供试水稻品种致病性比较弱的菌株中，进行研究和
观察，有助于进一步判断其基因功能和对水稻的毒性。
此外，接种试验也未发现供试水稻携带的抗性基因与
ｊｖａ１ 或 ｊｖａ２ 存在对抗作用，但目前尚不能不排除水稻
中存在其它与之对抗的抗性基因。
在 Ｘｏｏ 与水稻互作长期进化过程中，无论是 Ｘｏｏ
致病效应分子还是水稻抗性基因都发生着序列和功能
的变化，ＡｖｒＢｓ３ ／ ｐｔｈＡ 家族作为黄单胞属最大的 Ｔ３Ｓ
泌出蛋白，对 Ｘｏｏ菌株致病性起关键性的作用。 因此，
研究 ＡｖｒＢｓ３ ／ ｐｔｈＡ家族成员，了解这些成员的序列、进
化关系以及结构特征，并探索其蛋白表达、作用机制，
对进一步理解 Ｘｏｏ致病机理，从而指导水稻生产具有
重要的意义。 通过新的分子技术（ｍｏｄｕｌａｒ ｃｌｏｎｉｎｇ ｏｒ
ｇｏｌｄｅｎ ｇａｔｅ ｃｌｏｎｉｎｇ）可以组装出含有不同 ３４ 个氨基酸
中间重复单元组成的 ａｖｒＢｓ３ ／ ｐｔｈＡ 基因［３９ － ４０］，通过这
种技术可以进一步对本研究中尚未明确的基因功能和
毒性作用进行深入的研究。
４　 结论
本研究克隆了 ２ 个新的 ａｖｒＢｓ３ ／ ｐｔｈＡ 家族基因，提
供了明确清晰的该家族成员基因进化的例子，探索了
这 ２ 个基因对 Ｘｏｏ 在水稻上致病性的影响，促进对
Ｘｏｏ致病机理的研究，为进一步指导生产实践中水稻
２７１２
　 １２ 期 ＪＸＯＶ菌株 ２ 个 ａｖｒＢｓ３ ／ ｐｔｈＡ家族基因克隆分析
白叶枯病的防治做准备。
参考文献：
［ １ ］　 Ｂｅｎｎｅｔｚｅｎ Ｊ Ｌ，Ｍａ Ｊ． Ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｃｏｌｉｎｅａｒｉｔｙ ｏｆ ｒｉｃｅ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｃｅｒｅａｌｓ
ｏｎ ｔｈｅ ｂａｓｉｓ ｏｆ ｇｅｎｏｍｉｃ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ［ Ｊ］ ． Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ
Ｐｌａｎｔ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２００３， ６（２）：１２８ － １３３．
［ ２ ］ 　 Ｒｏｎａｌｄ Ｐ，Ｌｅｕｎｇ Ｈ． Ｔｈｅ ｍｏｓｔ ｐｒｅｃｉｏｕｓ ｔｈｉｎｇｓ ａｒｅ ｎｏｔ ｊａｄｅ ｐｅａｒｌｓ ａｎｄ
ｐｅａｒｌｓ ［Ｊ］ ． Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００２，２９６（５５６５）：５８ － ５９．
［ ３ ］ 　 Ｓｈｉｍａｍｏｔｏ Ｋ，Ｋｙｏｚｕｋａ Ｊ． Ｒｉｃｅ ａｓ ａ ｍｏｄｅｌ ｆｏｒ ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ｇｅｎｏｍｉｃｓ
ｏｆ ｐｌａｎｔｓ ［Ｊ］ ． Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２００２，５３（１）：３９９ －
４１９．
［ ４ ］ 　 Ｎｉñｏ⁃Ｌｉｕ Ｄ Ｏ，Ｒｏｎａｌｄ Ｐ Ｃ，Ｂｏｇｄａｎｏｖｅ Ａ Ｊ． Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｏｒｙｚａｅ
ｐａｔｈｏｖａｒｓ： ｍｏｄｅｌ ｐａｔｈｏｇｅｎｓ ｏｆ ａ ｍｏｄｅｌ ｃｒｏｐ ［ Ｊ］ ． Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｌａｎｔ
Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２００６，７（５）：３０３ － ３２４．
［ ５ ］ 　 Ｂ üｔｔｎｅｒ Ｄ， Ｂｏｎａｓ Ｕ． Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｅｃｔｅｔｉｏｎ ｏｆ Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ
ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｆａｃｔｏｒｓ ［ Ｊ］ ． ＦＥＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ，２００９，３４ （２）：
０７ － ３３．
［ ６ ］ 　 Ｗｅｂｅｒ Ｅ， Ｏｊａｎｅｎ⁃Ｒｅｕｈｓ Ｔ， Ｈｕｇｕｅｔ Ｅ， Ｈｕｇｕｅｔ Ｅ， Ｈａｕｓｅ Ｇ，
Ｒｏｍａｎｔｓｃｈｕｋ Ｍ， Ｋｏｒｈｏｎｅｎ Ｔ Ｋ， Ｂｏｎａｓ Ｕ， Ｋｏｅｂｎｉｋ Ｒ． Ｔｈｅ ｔｙｐｅ Ⅲ
－ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｈｒｐ ｐｉｌｕｓ ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ
Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ｐｖ． ｖｅｓｉｃａｔｏｒｉａ ｗｉｔｈ ｐｅｐｐｅｒ ｈｏｓｔ ｐｌａｎｔｓ ［Ｊ］ ．
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，２００５，１８７（７）：２４５８ － ２４６８．
［ ７ ］ 　 Ｂüｔｔｎｅｒ Ｄ，Ｂｏｎａｓ Ｕ． Ｐｏｒｔ ｏｆ ｅｎｔｒｙ： ｔｈｅ ｔｙｐｅ Ⅲ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｔｒａｎｓｌｏｃｏｎ
［Ｊ］ ． Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２００２，１０（４）：１８６ － １９２．
［ ８ ］ 　 Ｂｏｃｈ Ｊ． Ｐｌａｎｔ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ： Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ａｎｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂｉｏｌｏｇｙ
［Ｍ］． Ｎｏｒｆｏｌｋ，ＵＫ： Ｃａｉｓｔｅｒ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，２００９： ２４１ － １７１．
［ ９ ］ 　 Ｈｏｇｅｎｈｏｕｔ Ｓ Ａ， Ｖａｎ ｄｅｒＨｏｏｒｎ Ｒ Ａ， Ｔｅｒａｕｃｈｉ Ｒ， Ｋａｍｏｕｎ Ｓ．
Ｅｍｅｒｇｉｎｇ ｃｏｎｃｅｐｔｓ ｉｎ ｅｆｆｅｃｔｏｒ ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｐｌａｎｔ⁃ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｏｒｇａｎｉｓｍｓ
［Ｊ］ ． Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｌａｎｔ⁃Ｍｉｃｒｏｂｅ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ，２００９，２２（２）：１１５ － １２２．
［１０］ 　 Ｋａｙ Ｓ，Ｂｏｎａｓ Ｕ． Ｈｏｗ Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｔｙｐｅ Ⅲ ｅｆｆｅｃｔｏｒｓ ｍａｎｉｐｕｌａｔｅ ｔｈｅ
ｈｏｓｔ ｐｌａｎｔ ［Ｊ］ ． Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｇｙ，２００９，１２（１）：３７ －
４３．
［１１］ 　 Ｓｃｈｏｒｎａｃｋ Ｓ，Ｍｅｙｅｒ Ａ，Ｒöｍｅｒ Ｐ， Ｊｏｒｄａｎ Ｔ， Ｌａｈａｙｅ Ｔ． Ｇｅｎｅ⁃ｆｏｒ⁃
ｇｅｎｅ⁃ｍｅｄｉａｔｅｄ ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｏｆ ｎｕｃｌｅａｒ⁃ｔａｒｇｅｔｅｄ ＡｖｒＢｓ３ － ｌｉｋｅ ｂａｃｔｅｒｉａｌ
ｅｆｆｅｃｔｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ［ Ｊ］ ． Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，２００６，１６３ （３）：
２５６ － ２７２．
［１２］ 　 Ｗｈｉｔｅ Ｆ Ｆ，Ｐｏｔｎｉｓ Ｎ，Ｊｏｎｅｓ Ｊ Ｂ， Ｋｏｅｂｎｉｋ Ｒ． Ｔｈｅ ｔｙｐｅ Ⅲ ｅｆｆｅｃｔｏｒｓ ｏｆ
Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ［Ｊ］ ． Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｌａｎｔ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２００９，１０（６）：７４９ －
７６６．
［１３］ 　 Ｗｈｉｔｅ Ｆ Ｆ，Ｙａｎｇ Ｂ． Ｈｏｓｔ ａｎｄ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｆａｃｔｏｒｓ ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ ｔｈｅ ｒｉｃｅ⁃
Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｏｒｙｚａｅ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ［ Ｊ］ ． Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，２００９，１５０
（４）：１６７７ － １６８６．
［１４］ 　 Ｗｈｉｔｅ Ｆ Ｆ， Ｙａｎｇ Ｂ， Ｊｏｈｎｓｏｎ Ｌ Ｂ． Ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ ｆｏｒ ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ
ａｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｇｅｎｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ［ Ｊ］ ． Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｐｌａｎｔ Ｂｉｏｌｏｇｙ，
２０００，３（４）：２９１ － ２９８．
［１５］ 　 Ｂｏｃｈ Ｊ， Ｂｏｎａｓ Ｕ． Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ＡｖｒＢｓ３ ｆａｍｉｌｙ⁃Ｔｙｐｅ ＩＩＩ ｅｆｆｅｃｔｏｒｓ：
ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ［ Ｊ］ ． Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，
２０１０，４８（１）：４１９ － ４３６．
［１６］ 　 Ｂａｌｌｖｏｒａ Ａ，Ｐｉｅｒｒｅ Ｍ，Ｖａｎ ｄｅｎ Ａｃｋｅｒｖｅｋｅｎ Ｇ， Ｓｃｈｏｒｎａｃｋ Ｓ， Ｒｏｓｓｉｅｒ
Ｏ， Ｇａｎａｌ Ｍ， Ｌａｈａｙｅ Ｔ， Ｂｏｎａｓ Ｕ． Ｇｅｎｅｔｉｃ ｍａｐｐｉｎｇ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ
ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｔｏｍａｔｏ Ｂｓ４ ｌｏｃｕｓ， ｇｏｖｅｒｎｉｎｇ ｒｅｃｏｎｇｎｉｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ
Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ｐｖ． ｖｅｓｉｃａｔｏｒｉａ ＡｖｒＢｓ４ ｐｒｏｔｅｉｎ ［ Ｊ ］ ．
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｌａｎｔ⁃Ｍｉｃｒｏｂｅ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ，２００１，１４（５）：６２９ － ６３８．
［１７］ 　 Ｇｕ Ｋ Ｙ，Ｙａｎｇ Ｂ，Ｔｉａｎ Ｄ Ｓ， Ｗｕ Ｌ Ｆ， Ｗａｎｇ Ｄ Ｊ， Ｓｒｅｅｋａｌａ Ｃ， Ｙａｎｇ
Ｆ， Ｃｈｕ Ｚ Ｑ， Ｗａｎｇ Ｇ Ｌ， Ｗｈｉｔｅ Ｆ Ｆ， Ｙｉｎ Ｚ Ｃ． Ｒ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ａ ｔｙｐｅ － Ш ｅｆｆｅｃｔｏｒ ｔｒｉｇｇｅｒｓ ｄｉｓｅａｓｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｉｎ ｒｉｃｅ
［Ｊ］ ． Ｎａｔｕｒｅ，２００５，４３５（７０４５）：１１２２ － １１２５．
［１８］ 　 Ｈｅｒｂｅｒｓ Ｋ， Ｃｏｎｒａｄｓ⁃Ｓｔｒａｕｃｈ Ｊ， Ｂｏｎａｓ Ｕ． Ｒａｃｅ⁃ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ ｐｌａｎｔ
ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｓｐｏｔ ｄｉｓｅａｓｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ｒｅｐｅｔｉｔｉｖｅ ｍｏｔｉｆｓ ｉｎ
ａ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ａｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ［ Ｊ］ ． Ｎａｔｕｒｅ，１９９２，３５ （６）：１７２ －
１７４．
［１９］ 　 Ｙａｎｇ Ｂ， Ｚｈｕ Ｗ， Ｊｏｈｎｓｏｎ Ｌ Ｂ， Ｗｈｉｔｅ Ｆ Ｆ． Ｔｈｅ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｆａｃｔｏｒ
ＡｖｒＸａ７ ｏｆ Ｘａｎｔｈｏｎｏｎａｓ ｏｒｙｚａｅ ｐｖ． ｏｒｙｚａｅ ｉｓ ａ ｔｙｐｅ ＩＩＩ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ
ｐａｔｈｗａｙ⁃ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ，ｎｕｃｌｅａｒ⁃ｌｏｃａｌｉｚｅｄ，ｄｏｕｂｌｅ⁃ｓｔｒａｎｄｅｄ ＤＮＡ ｂｉｎｄｉｎｇ
ｐｒｏｔｅｉｎ ［Ｊ］ ． ＰＮＡＳ，２０００，９７（１７）：９８０７ － ９８１２．
［２０］ 　 Ｚｈｕ Ｗ Ｇ，Ｙａｎｇ Ｂ，Ｃｈｉｔｔｏｏｒ Ｊ Ｍ， Ｊｏｈｎｓｏｎ Ｌ Ｂ， Ｗｈｉｔｅ Ｆ Ｆ． ＡｖｒＸａ１０
ｃｏｎｔａｉｎｓ ａｎ ａｃｉｄｉｃ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｄｏｍａｉｎ ｉｎ ｔｈｅ
ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｌｙ ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ Ｃ ｔｅｒｍｉｎｕｓ ［ Ｊ］ ． Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｌａｎｔ⁃Ｍｉｃｒｏｂｅ
Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ，１９９８，１１（８）：８２４ － ８３２．
［２１］ 　 Ｂｏｃｈ Ｊ， Ｓｃｈｏｌｚｅ Ｈ， Ｓｃｈｏｒｎａｃｋ Ｓ， Ｌａｎｄｇｒａｆ Ａ， Ｈａｈｎ Ｓ， Ｋａｙ Ｓ，
Ｌａｈａｙｅ Ｔ， Ｎｉｃｋｓｔａｄｔ Ａ， Ｂｏｎａｓ Ｕ． Ｂｒｅａｋｉｎｇ ｔｈｅ ｃｏｄｅ ｏｆ ＤＮＡ
ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｏｆ ＴＡＬ⁃ Ｔｙｐｅ ＩＩＩ ｅｆｆｅｃｔｏｒｓ ［ Ｊ］ ． Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００９，
３２６（５９５９）：１５０９ － １５１２．
［２２］ 　 Ｍｏｓｃｏｕ Ｍ Ｊ， Ｂｏｇｄａｎｏｖｅ Ａ Ｊ． Ａ ｓｉｍｐｌｅ ｃｉｐｈｅｒ ｇｏｖｅｒｎｓ ＤＮＡ
ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｂｙ ＴＡＬ ｅｆｆｅｃｔｏｒｓ ［Ｊ］ ． Ｓｃｉｅｎｃｅ，３２６（５９５９），１５０１．
［２３］ 　 Ｙａｎｇ Ｙ，Ｇａｂｒｉｅｌ Ｄ Ｗ． Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ａｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ／ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｇｅｎｅ
ｆａｍｉｌｙ ｅｎｃｏｄｅｓ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｐｌａｎｔ ｎｕｃｌｅａｒ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｓｉｇｎａｌｓ ［ Ｊ ］ ．
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｌａｎｔ⁃Ｍｉｃｒｏｂｅ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ，１９９５，８（４）：６２７ － ６３１．
［２４］ 　 Ｇａｂｒｉｅｌ Ｄ Ｗ． Ｐｌａｎｔ ｍｉｃｒｏｂｅ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ［Ｍ］． Ｓａｉｎｔ Ｐａｕｌ Ｍｉｎｎｅｓｏｔ：
ＡＰＳ Ｐｒｅｓｓ， １９９９： ３９ － ５５．
［２５］ 　 Ｖａｎ ｄｅｎ Ａｃｋｅｒｖｅｋｅｎ Ｇ， Ｍａｒｏｉｓ Ｅ， Ｂｏｎａｓ Ｕ． Ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ
ｂａｃｔｅｒｉａｌ ａｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ＡｖｒＢｓ３ ｏｃｃｕｒｓ ｉｎｓｉｄｅ ｔｈｅ ｈｏｓｔ ｐｌａｎｔ ｃｅｌｌ
［Ｊ］ ． Ｃｅｌｌ，１９９６， ８７（７）： １３０７ － １３１６．
［２６］ 　 Ｍａｒｃｏ Ｇ Ｍ，Ｓｔａｌｌ Ｒ Ｅ． Ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｓｐｏｔ ｏｆ ｐｅｐｐｅｒ ｉｎｉｔｉａｔｅｄ ｂｙ
ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ ｐｖ． ｖｅｓｉｃａｔｏｒｉａ ｔｈａｔ ｄｉｆｆｅｒ ｉｎ
ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｔｏ ｃｏｐｐｅｒ ［Ｊ］ ． Ｐｌａｎｔ Ｄｉｓｅａｓｅ，１９８３，６７（７）：７７９ － ７８１．
［２７］ 　 Ｈｏｐｋｉｎｓ Ｃ Ｍ， Ｗｈｉｔｅ Ｆ Ｆ， Ｃｈｏｉ Ｓ⁃Ｈ， Ｇｕｏ Ａ， Ｊｅａｃｈ Ｊ Ｅ．
Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｆａｍｉｌｙ ｏｆ ａｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｇｅｎｅｓ ｆｒｏｍ Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ
ｏｒｙｚａｅ ｐｖ． ｏｒｙｚａｅ［Ｊ］ ． Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｌａｎｔ⁃Ｍｉｃｒｏｂｅ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ， １９９２， ５
（６）：４５１ － ４５９．
［２８］ 　 Ｂａｉ Ｊ，Ｃｈｏｉ Ｓ Ｈ，Ｐｏｎｃｉａｎｏ Ｇ， Ｌｅｕｎｇ Ｈ， Ｌｅａｃｈ Ｊ Ｅ． Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ
ｏｒｙｚａｅ ｐｖ． ｏｒｙｚａｅ ａｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｇｅｎｅｓ ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｌｙ ａｎｄ
ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｔｏ ｐａｔｈｏｇｅｎ ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅｎｅｓｓ ［Ｊ］ ． Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｌａｎｔ⁃Ｍｉｃｒｏｂｅ
Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ，２０００， １３（１２）：１３２２ － １３２９．
［２９］ 　 Ｙａｎｇ Ｂ，Ｗｈｉｔｅ Ｆ Ｆ． Ｄｉｖｅｒｓｅ ｍｅｍｂｅｒｓ ｏｆ ｔｈｅ ＡｖｒＢｓＳ ／ ＰｔｈＡ ｆａｍｉｌｙ ｏｆ
ｔｙｐｅ ＩＩＩ ｅｆｆｅｃｔｏｒｓ ａｒｅ ｍａｊｏｒ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｓ ｉｎ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｂｌｉｇｈｔ
ｄｉｓｅａｓｅ ｏｆ ｒｉｃｅ［ Ｊ］ ． Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｌａｎｔ⁃Ｍｉｃｒｏｂｅ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ，２００４， １７
（１１）： １１９２ － １２００．
［３０］ 　 李平，龙菊英，黄迎春，张燕，王金生． 从水稻白叶枯病菌分离的
ａｖｒＢｓ３ 家族新成员 ａｖｒＸａ３ 是具双重功能的无毒基因［ Ｊ］ ． 自然
科学进展， ２００４，１４（７）：７６７ － ７７２．
［３１］ 　 方中达． 植病研究方法［Ｍ］． 北京： 中国农业出版社，１９９６􀆰 ３８５
－ ３８６
［３２］ 　 Ｅｓｃｏｌａｒ Ｌ，Ｖａｎ ｄｅｎ Ａｃｋｅｒｖｅｋｅｎ Ｇ，Ｐｉｅｐｌｏｗ Ｓ， Ｒｏｓｓｉｅｒ Ｏ， Ｂｏｎａｓ Ｕ．
３７１２
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｕｃｌｅａｒ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
２０１４，２８（１２）：２１６７ ～ ２１７４
Ｔｙｐｅ ＩＩＩ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎ ｐｌａｎｔａ ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ
ａｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ＡｖｒＢｓ１ ａｎｄ ＡｖｒＢｓＴ ［ Ｊ ］ ． Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｌａｎｔ
Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２００１， ２（５）： ２８７ － ２９６．
［３３］ 　 Ｙａｎｇ Ｂ， Ｓｕｇｉｏ Ａ， Ｗｈｉｔｅ Ｆ Ｆ． Ａｖｏｉｄａｎｃｅ ｏｆ ｈｏｓｔ ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｂｙ
ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｔｈｅ ｒｅｐｅｔｉｔｉｖｅ ａｎｄ Ｃ⁃ｔｅｒｍｉｎａｌ ｒｅｇｉｏｎｓ ｏｆ ＡｖｒＸａ７， ａ ｔｙｐｅ
ＩＩＩ ｅｆｆｅｃｔｏｒ ｏｆ Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｏｒｙｚａｅ ｐｖ． ｏｒｙｚａｅ ［ Ｊ］ ． Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｌａｎｔ
Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２００５， １８（２）： １４２ － １４９．
［３４］ 　 Ｚｈａｏ Ｂ Ｙ，Ａｒｄａｌｅｓ Ｅ Ｙ，Ｒａｙｍｕｎｄｏ Ａ， Ｂａｉ Ｊ Ｆ， Ｔｒｉｃｋ Ｈ Ｎ， Ｌｅａｃｈ Ｊ
Ｅ， Ｈｕｌｂｅｒｔ Ｓ Ｈ． Ｔｈｅ ａｖｒＲｘｏ１ ｇｅｎｅ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｒｉｃｅ ｐａｔｈｏｇｅｎ
Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｏｒｙｚａｅ ｐｖ． ｏｒｙｚｉｃｏｌａ ｃｏｎｆｅｒｓ ａ ｎｏｎｈｏｓｔ ｄｅｆｅｎｓｅ ｒｅａｃｔｉｏｎ
ｏｎ ｍａｉｚｅ ｗｉｔｈ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｇｅｎｅ Ｒｘｏ１ ［ Ｊ］ ． Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｌａｎｔ⁃Ｍｉｃｒｏｂｅ
Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ，２００４，１７（７）： ７７１ － ７７９．
［３５］ 　 Ｚｈａｏ Ｂ Ｙ，Ｌｉｎ Ｘ Ｈ，Ｐｏｌａｎｄ Ｊ， Ｔｒｉｃｋ Ｈ， Ｌｅａｃｈ Ｊ Ｅ， Ｈｕｌｂｅｒｔ Ｓ． Ａ
ｍａｉｚｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｇｅｎｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ａｇａｉｎｓｔ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｓｔｒｅａｋ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎ
ｒｉｃｅ ［Ｊ］ ． ＰＮＡＳ，２００５，１０２（４３）：１５３８３ － １５３８８．
［３６］ 　 Ｇüｒｌｅｂｅｃｋ Ｄ， Ｓｚｕｒｅｋ Ｂ， Ｂｏｎａｓ Ｕ． Ｄｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｂａｃｔｅｒｉａｌ
ｅｆｆｅｃｔｏｒ ｐｒｏｔｅｉｎ ＡｖｒＢｓ３ ｉｎ ｔｈｅ ｐｌａｎｔ ｃｅｌｌ ｃｙｔｏｐｌａｓｍ ｐｒｉｏｒ ｔｏ ｎｕｃｌｅａｒ
ｉｍｐｏｒｔ ［Ｊ］ ． Ｔｈｅ Ｐｌａｎｔ Ｊｏｕｒｎａｌ，２００５，４２（２）： １７５ － １８７．
［３７］ 　 Ｓｉｍｏｎ Ｒ， Ｐｒｉｅｆｅｒ Ｕ， Ｐüｈｌｅｒ Ａ． Ａ ｂｒｏａｄ ｈｏｓｔ ｒａｎｇｅ ｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ
ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ ｉｎ ｖｉｖｏ ｇｅｎｅｔｉｃ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ： ｔｒａｎｓｐｏｓｏｎ ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ ｉｎ
ｇｒａｍ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｂａｃｔｅｒｉａ［Ｊ］ ． Ｂｉｏ ／ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９８３，１（９）： ７８４ －
７９１．
［３８］ 　 ＤｅＦｅｙｔｅｒ Ｒ， Ｋａｄｏ Ｃ Ｉ， Ｇａｂｒｉｅｌ Ｄ Ｗ． Ｓｍａｌｌ， ｓｔａｂｌｅ ｓｈｕｔｔｌｅ ｖｅｃｔｏｒｓ
ｆｏｒ ｕｓｅ ｉｎ Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ［Ｊ］ ． Ｇｅｎｅ， １９９０， ８８（１）： ６５ － ７２．
［３９］ 　 Ｍｏｒｂｉｔｚｅｒ Ｒ， Ｅｌｓａｅｓｓｅｒ Ｊ， Ｈａｕｓｎｅｒ Ｊ， Ｌａｈａｙｅ Ｔ． Ａｓｓｅｍｂｌｙ ｏｆ ｃｕｓｔｏｍ
ＴＡＬＥ⁃ｔｙｐｅ ＤＮＡ ｂｉｎｄｉｎｇ ｄｏｍａｉｎｓ ｂｙ ｍｏｄｕｌａｒ ｃｌｏｎｉｎｇ ［Ｊ］ ． Ｎｕｃｌｅｉｃ
Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０１１，３９（１３）：５７９０ － ５７９９．
［４０］ 　 Ｗｅｂｅｒ Ｅ， Ｇｒｕｅｔｚｎｅｒ Ｒ， Ｗｅｒｎｅｒ Ｓ， Ｅｎｇｌｅｒ Ｃ， Ｍａｒｉｌｌｏｎｎｅｔ Ｓ．
Ａｓｓｅｍｂｌｙ ｏｆ ｄｅｓｉｇｎｅｒ ＴＡＬ ｅｆｆｅｃｔｏｒｓ ｂｙ ｇｏｌｄｅｎ ｇａｔｅ ｃｌｏｎｉｎｇ ［ Ｊ］ ．
ＰＬｏＳ ＯＮＥ，２０１１，６（５）： ｅ１９７２２
Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｔｗｏ ａｖｒＢｓ３ ／ ｐｔｈＡ Ｆａｍｉｌｙ Ｇｅｎｅｓ ｆｒｏｍ
ＪＸＯＶ Ｓｔｒａｉｎ
ＸＩＡ Ｇｅｎｇ⁃ｓｈｏｕ　 ＺＨＡＮＧ Ｙａｎ
（Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｅｃｏｌｏｇｙ， Ｌｉｓｈｕｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｌｉｓｈｕｉ， Ｚｈｅｊｉａｎｇ　 ３２３０００）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｗｏ ｍｅｍｂｅｒｓ ｏｆ ａｖｒＢｓ３ ／ ｐｔｈＡ ｆａｍｉｌｙ ｗｅｒｅ ｃｌｏｎｅｄ ｆｒｏｍ Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｏｒｙｚａｅ ｐｖ． ｏｒｙｚａｅ（Ｘｏｏ）ｒａｃｅ ＪＸＯＶ ｓｔｒａｉｎ，
ａｎｄ ｎａｍｅｄ ａｓ ｊｖａ１ ａｎｄ ｊｖａ２， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｗｅ ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ ｔｈｅ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎａｌｙｓｅｓ ａｎｄ ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ ａｎａｌｙｓｅｓ
ａｎｄ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ ｔｈｅ ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｖｅｃｔｏｒｓ ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｇｅｎｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｏｆ ｊｖａ１ ａｎｄ ｊｖａ２． Ｔｈｅ
ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｄｅｄｕｃｅｄ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｊｖａ１ ａｎｄ Ｊｖａ２ ｓｈａｒｅｄ ｔｙｐｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｗｉｔｈ ｏｔｈｅｒ ｇｅｎｅ
ｍｅｍｂｅｒｓ ｏｆ ＡｖｒＢｓ３ ／ ｐｔｈＡ ｆａｍｉｌｙ． Ｔｈｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｍａｓｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｊｖａ１ ａｎｄ ｊｖａ２ ｆｒｏｍ ＢＬ２１（ＤＥ３） ｉｓ ａｂｏｕｔ １００ ＫＤ ｏｎ
ＳＤＳ⁃ＰＡＧＥ ｗｈｉｃｈ ｉｓ ｓｉｍｉｌａｒ ｔｏ ｐｒｅｓｕｍｅｄ ｍｏｎｏｍｅｒ ｐｒｏｔｅｉｎ． Ｄｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｊｖａ１ ｏｒ ｊｖａ２ ｄｉｄ ｎｏｔ ｏｃｃｕｒ ｉｎ ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃ ｃｅｌｌ
ＢＬ２１， ａｌｔｈｏｕｇｈ ｔｈｅ ｄｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ＡｖｒＢｓ３ ｗａｓ ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｏｆ ｐｌａｎｔ ｐｒｏｔｅｉｎｓ； Ｎｅｉｔｈｅｒ ｊｖａ１ ｎｏｒ ｊｖａ２ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｔｈｅ
ＰＸＯ９９Ａｓｔｒａｉｎ ｖｉｒｕｌｅｎｃｅ ｏｎ ｆｉｆｔｅｅｎ ｒｉｃｅ ｃｕｌｔｉｖａｒｓ ｈｏｌｄｉｎｇ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｇｅｎｅｓ， Ｔｈｅ ｇｅｎｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｊｖａ１ ａｎｄ ｊｖａ２
ｎｅｅｄ ｆｕｒｔｈｅｒ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ． Ｔｈｅｓｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｐｒｏｖｉｄｅｄ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｂａｓｉｓ ｆｏｒ ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｏｆ Ｘｏｏ
ｏｎ ｒｉｃｅ ａｎｄ ｇｅｎｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｒｙ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ｍｅｍｂｅｒｓ ｏｆ ｒｅｌａｔｅｄ ｇｅｎｅ ｆａｍｉｌｙ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ ｏｒｙｚａｅ ｐｖ． ｏｒｙｚａｅ；ａｖｒＢｓ３ ／ ｐｔｈＡ；Ｃｌｏｎｉｎｇ；Ａｎａｌｙｓｉｓ
４７１２