全 文 ：摇 核 农 学 报摇 圆园员圆袁圆远渊猿冤院园源圆园 耀 园源圆远允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
收稿日期院圆园员员鄄园怨鄄园圆摇 接受日期院圆园员员鄄员圆鄄圆圆
基金项目院新疆维吾尔自治区重大专项渊圆园园苑猿员员猿愿鄄猿冤袁新疆农作物生物技术重点实验室开放课题渊载允再杂园猿园圆鄄圆园员员鄄园源冤
作者简介院李晓荣渊员怨苑猿鄄冤袁女袁新疆伊犁人袁博士袁副研究员袁主要从事农作物生物技术研究遥 耘鄄皂葬蚤造院造曾则苑猿枣岳 员远猿援 糟燥皂
通讯作者院王冬梅渊员怨远怨鄄冤袁女袁新疆石河子人袁硕士袁副研究员袁主要从事农作物生物技术研究遥 耘鄄皂葬蚤造院憎凿皂愿苑圆岳 泽蚤灶葬援 糟燥皂
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员圆冤园猿鄄园源圆园鄄园苑
小麦 宰糟燥则苑员怨基因的原核表达及转化烟草和
棉花提高抗冷性研究
李晓荣摇 王冬梅摇 李建平摇 李摇 静摇 张摇 帅摇 陈国华摇 黄乐平
渊新疆农作物生物技术重点实验室 辕新疆农业科学院核技术生物技术研究所袁新疆 乌鲁木齐摇 愿猿园园怨员冤
摘摇 要院为研究 宰糟燥则苑员怨 基因的抗寒功能袁获得具有抗寒性的棉花新种质袁构建小麦冷诱导基因原核表达
载体 宰糟燥则苑员怨 原 责耘栽圆愿葬进行蛋白表达袁杂阅杂 原 孕粤郧耘分析表明其诱导蛋白大小约为 圆源援 园噪阅袁表达量在诱
导 源澡 时达到最大袁且与 陨孕栽郧 诱导浓度无明显相关性遥 同时通过农杆菌介导的叶盘法将构建的
宰糟燥则苑员怨 原 责悦葬皂遭蚤葬员猿园员 植物表达载体转入烟草渊晕蚤糟燥贼蚤葬灶葬 贼葬遭葬糟怎皂冤杂砸 原 员 中袁栽员 代转基因烟草植株经
过抗生素筛选和 孕悦砸检测后进行低温胁迫袁测定抗寒生理指标袁结果显示转基因植株的脯氨酸和可溶
性糖含量均比对照有所提高遥 该基因经过功能验证后用花粉管通道法转入棉花渊郧燥泽泽赠责蚤怎皂 澡蚤则泽怎贼怎皂冤新
陆中 源怨袁栽园 代尧栽员 代经过田间检测及 孕悦砸 检测后研究 栽圆 代转基因棉花低温胁迫下的抗寒性袁结果显
示袁转基因棉花脯氨酸含量和可溶性糖含量均在第 缘 天达到峰值袁且明显高于对照曰而丙二醛含量低于
对照袁 初步证明转基因烟草和棉花的抗寒性均有所提高袁由此表明通过转冷调节基因来提高植物的抗
寒性具有良好的应用前景遥
关键词院宰糟燥则苑员怨 基因曰 蛋白表达曰 转基因烟草曰 转基因棉花曰 抗寒性
孕砸韵运粤砸再韵栽陨悦 耘载孕砸耘杂杂陨韵晕 韵云 宰糟燥则苑员怨 郧耘晕耘 云砸韵酝 宰匀耘粤栽 粤晕阅
云砸耘耘在陨晕郧 栽韵蕴耘砸粤晕悦耘 韵云 栽砸粤晕杂郧耘晕陨悦 栽韵月粤悦悦韵 粤晕阅 栽砸粤晕杂郧耘晕陨悦 悦韵栽栽韵晕
蕴陨 载蚤葬燥鄄则燥灶早摇 宰粤晕郧 阅燥灶早鄄皂藻蚤摇 蕴陨 允蚤葬灶鄄责蚤灶早摇 蕴陨 允蚤灶早摇 在匀粤晕郧 杂澡怎葬蚤摇 悦匀耘晕 郧怎燥鄄澡怎葬摇 匀哉粤晕郧 蕴藻鄄责蚤灶早
渊载蚤灶躁蚤葬灶早 运藻赠 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 燥枣 悦则燥责 月蚤燥贼藻糟澡灶燥造燥早赠 辕 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻 燥枣 晕怎糟造藻葬则 葬灶凿 月蚤燥造燥早蚤糟葬造 栽藻糟澡灶燥造燥早赠袁
载蚤灶躁蚤葬灶早 粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻袁 哉则怎皂择蚤袁 载蚤灶躁蚤葬灶早摇 愿猿园园怨员冤
粤遭泽贼则葬糟贼院粤 责则燥噪葬则赠燥贼蚤糟 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 增藻糟贼燥则 燥枣 宰糟燥则苑员怨鄄责耘栽圆愿葬 枣则燥皂 憎澡藻葬贼 憎葬泽 糟燥灶泽贼则怎糟贼藻凿 贼燥 泽贼怎凿赠 贼澡藻 枣则藻藻扎蚤灶早 贼燥造藻则葬灶糟藻
枣怎灶糟贼蚤燥灶 燥枣 宰糟燥则苑员怨袁 葬灶凿 燥遭贼葬蚤灶 灶藻憎 糟燥贼贼燥灶 早藻则皂责造葬泽皂 贼燥造藻则葬灶贼 贼燥 枣则藻藻扎蚤灶早援 栽澡藻 杂阅杂鄄孕粤郧耘 葬灶葬造赠泽蚤泽 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻
枣怎泽蚤燥灶 责则燥贼藻蚤灶 憎葬泽 圆源援 园噪阅袁葬灶凿 贼澡藻 澡蚤早澡藻泽贼 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 葬皂燥怎灶贼 憎葬泽 蚤灶凿怎糟藻凿 葬贼 源澡袁 皂燥则藻燥增藻则 蚤贼 澡葬凿 灶燥 燥遭增蚤燥怎泽 则藻造藻增葬灶糟藻
憎蚤贼澡 陨孕栽郧 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶援 宰藻 贼则葬灶泽枣藻则则藻凿 贼澡藻 宰糟燥则苑员怨 原 员猿园员 责造葬灶贼 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 增藻糟贼燥则 贼燥 贼燥遭葬糟糟燥渊晕蚤糟燥贼蚤葬灶葬 贼葬遭葬糟怎皂冤 杂砸
原员 遭赠 粤早则燥遭葬糟贼藻则蚤怎皂 原 皂藻凿蚤葬贼藻凿 皂藻贼澡燥凿袁 葬灶凿 贼澡藻灶 怎泽藻 葬灶贼蚤遭蚤燥贼蚤糟 泽藻造藻糟贼蚤燥灶 葬灶凿 孕悦砸 凿藻贼藻糟贼蚤燥灶 贼燥 燥遭贼葬蚤灶 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟
贼燥遭葬糟糟燥援 阅藻贼藻糟贼蚤灶早 燥枣 贼澡藻 栽员 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 贼燥遭葬糟糟燥 造藻葬增藻泽 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻 责则燥造蚤灶藻 糟燥灶贼藻灶贼 葬灶凿 泽燥造怎遭造藻 泽怎早葬则 燥枣 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟贼燥遭葬糟糟燥 憎藻则藻 澡蚤早澡藻则 贼澡葬灶 贼澡燥泽藻 燥枣 憎蚤造凿 贼燥遭葬糟糟燥 葬贼 造燥憎 贼藻皂责藻则葬贼怎则藻 贼则藻葬贼皂藻灶贼援 栽澡藻灶 贼澡藻 宰糟燥则苑员怨 原 圆猿园员 憎葬泽 贼则葬灶泽枣藻则则藻凿
贼燥 糟燥贼贼燥灶渊郧燥泽泽赠责蚤怎皂 澡蚤则泽怎贼怎皂冤 遭赠 贼澡藻 责燥造造藻灶 贼怎遭藻 责葬贼澡憎葬赠袁 葬灶凿 贼澡藻 造燥憎 贼藻皂责藻则葬贼怎则藻 贼燥造藻则葬灶糟藻 燥枣 栽圆 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 糟燥贼贼燥灶 憎葬泽泽贼怎凿蚤藻凿 葬贼 源益 援 栽澡藻 则藻泽怎造贼 泽澡燥憎藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻 责则燥造蚤灶藻 糟燥灶贼藻灶贼 葬灶凿 泽燥造怎遭造藻 泽怎早葬则 糟燥灶贼藻灶贼 燥枣 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 糟燥贼贼燥灶 则藻葬糟澡藻凿 责藻葬噪
增葬造怎藻 葬贼 贼澡藻 缘贼澡 凿葬赠泽 葬枣贼藻则 贼则藻葬贼皂藻灶贼袁 憎澡蚤糟澡 憎葬泽 澡蚤早澡藻则 贼澡葬灶 贼澡燥泽藻 燥枣 灶燥灶鄄贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 糟燥贼贼燥灶援 匀燥憎藻增藻则袁 贼澡藻 酝阅粤 糟燥灶贼藻灶贼
燥枣 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 糟燥贼贼燥灶 憎葬泽 造藻泽泽 贼澡葬灶 贼澡葬贼 燥枣 灶燥灶鄄贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 糟燥贼贼燥灶袁 憎澡蚤糟澡 责则燥增藻凿 贼澡葬贼 贼澡藻 枣则藻藻扎蚤灶早 贼燥造藻则葬灶糟藻 蚤灶 贼澡藻 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟
园圆源
摇 猿 期 小麦 宰糟燥则苑员怨 基因的原核表达及转化烟草和棉花提高抗冷性研究
责造葬灶贼泽 澡葬凿 遭藻藻灶 蚤灶糟则藻葬泽藻凿援 陨贼 蚤泽 蚤灶凿蚤糟葬贼藻凿 贼澡葬贼 蚤贼 憎葬泽 葬 早燥燥凿 皂藻贼澡燥凿 贼燥 蚤灶糟则藻葬泽藻 贼澡藻 枣则藻藻扎蚤灶早 贼燥造藻则葬灶糟藻 遭赠 贼则葬灶泽枣藻则则蚤灶早
悦韵砸 早藻灶藻泽援
运藻赠 憎燥则凿泽院宰糟燥则苑员怨 早藻灶藻曰 责则燥贼藻蚤灶 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶曰 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 贼燥遭葬糟糟燥曰 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 糟燥贼贼燥灶曰 枣则藻藻扎蚤灶早 贼燥造藻则葬灶糟藻
摇 摇 低温寒害是农林业生产中一种严重的自然灾害袁
全球每年因低温寒害造成的农作物损失高达数千亿
元遥 新疆棉花产量和品质受低温寒害的影响首当其
冲遥 植物基因工程的发展为培育抗寒品种提供了一条
崭新的途径咱员暂 袁从抗寒性强的植物克隆冷诱导基因转
移到冷敏感植物中袁成为提高冷敏感植物抗寒力的一
种手段咱圆暂 遥
悦韵砸渊悦燥造凿鄄则藻早怎造葬贼藻凿冤基因是诱导合成低温诱导蛋
白的一种诱发基因袁只有在特定条件渊主要是低温和
短日照冤下启动抗寒基因的表达袁进而表现抗寒能力
提高咱猿暂 遥 目前分离鉴定的低温诱导基因有院拟南芥的
造贼蚤员源园尧造贼蚤苑愿尧造贼蚤远愿尧则葬遭员愿尧则糟蚤员源葬尧则凿圆愿尧则凿圆怨 和 糟燥则员缘葬袁苜
蓿的 糟葬泽员愿尧糟葬泽员缘 和 皂泽葬糟蚤袁大麦的 澡增葬员尧遭造贼造圆 和 遭造贼员源袁
小麦的 憎糟泽员怨尧 憎糟泽员圆园尧 憎糟泽圆园园 尧 宰糟燥则猿怨尧 宰糟燥则源员园 和
宰糟燥则苑员怨袁以及水稻的 造蚤责员缘 等近 员园园 个咱圆暂 遥 运葬则择蚤燥贼蚤凿燥怎
提出棉花受低温胁迫时 云粤阅圆 基因表达量增加以调节
细胞膜透性咱源暂 曰拟南芥受低温干旱或 粤月粤处理时能诱
导 悦燥砸员缘葬蛋白基因表达产生多肽咱缘暂 遥 粤则贼怎泽 研究结
果显示袁与野生型相比袁转基因植物分别提高了叶绿体
和原生质体的寒冷耐受性袁减轻了寒冻造成的损
伤咱远暂 曰杂澡蚤皂葬皂怎则葬 等将 宰糟燥则员缘 基因转入烟草中袁结果
显示转基因植株叶绿体中 宰悦韵砸员缘 蛋白大量积累袁植
株抗寒性提高咱苑暂 遥
宰糟燥则苑员怨 是一个与抗渗透胁迫相关的基因袁其
韵砸云有 源圆愿 个核苷酸袁编码 员源圆 个氨基酸袁晕燥则贼澡藻则灶 杂
交显示低温时耐寒小麦品种 宰悦韵砸苑员怨 蛋白积累快速
上调袁而在 源益处理时袁低温敏感的水稻尧玉米等品种
中未检测到该蛋白的存在咱愿暂 遥
宰糟燥则苑员怨 基因首次转入新疆棉花品种中袁经过蛋
白诱导及烟草转化验证功能后通过花粉管通道法转入
棉花袁并对得到的转基因植株进行抗寒性研究袁这对于
提高新疆棉花的抗寒能力尧培育抗寒新种质具有重要
意义遥
员摇 材料与方法
员援 员摇 材料
菌株 月蕴圆员袁原核表达载体 责耘栽圆愿葬渊 垣 冤袁植物表达
载体 责悦葬皂遭蚤葬员猿园员尧 责悦葬皂遭蚤葬圆猿园员袁根癌农杆菌菌株
蕴月粤源源园源 及植物材料烟草 杂砸 原员尧新陆中 源怨 由本实验
室保存遥
员援 圆摇 方法
员援 圆援 员 摇 宰糟燥则苑员怨 原核表达载体的构建摇 根据小麦低
温诱导基因 宰糟燥则苑员怨 的 糟阅晕粤 序列渊哉缘愿圆苑愿冤袁合成特
异 引 物 渊 宰糟燥则苑员怨鄄孕鄄云院 缘忆鄄悦郧郧粤粤栽栽悦粤栽鄄
郧郧悦郧粤粤悦栽悦栽郧栽悦栽悦悦鄄猿忆袁 宰糟燥则苑员怨鄄孕鄄砸院 缘忆鄄
悦悦悦粤粤郧悦栽栽栽栽粤郧郧栽郧郧栽郧栽粤郧栽悦悦栽栽鄄猿忆冤袁在引物两
端分别加 耘糟燥砸 陨和 匀蚤灶凿 陨陨陨的酶切位点袁经扩增渊怨源益
猿皂蚤灶曰 怨缘益 猿园泽袁 远猿益 猿园泽袁苑圆益 员皂蚤灶袁猿缘 个循环曰苑圆益
员园皂蚤灶冤尧测序渊北京六合华大基因科技股份有限公
司冤尧转化 渊热激法转化大肠杆菌 阅匀缘琢冤尧鉴定
渊宰糟燥则苑员怨鄄孕鄄云 辕 宰糟燥则苑员怨鄄孕鄄砸 的 孕悦砸 及 耘糟燥砸 陨 辕 匀蚤灶凿
陨陨陨 双酶切鉴定冤 等步骤后获得重组子 宰糟燥则苑员怨鄄
责耘栽圆愿葬用于后续试验遥
员援 圆援 圆 摇 宰糟燥则苑员怨 的蛋白表达摇 将构建好的 宰糟燥则苑员怨鄄
责耘栽圆愿葬 重组子转入大肠杆菌 月蕴圆员渊阅耘猿冤袁挑取单克
隆袁置于 猿皂造 蕴月 渊含 运葬灶葬 缘园皂早 辕 蕴冤液体培养基中袁
猿苑益尧圆猿园则 辕 皂蚤灶震荡过夜遥 按 员颐 圆园 转接于新的刻度离
心管中袁猿苑益尧圆猿园则 辕 皂蚤灶 继续培养 员 耀 圆澡袁至 韵阅远园园 园郾 远
左右袁首先使用 陨孕栽郧 常规浓度 园郾 圆皂皂燥造 辕 蕴 进行最佳
诱导时间的筛选袁在菌液中加入 陨孕栽郧 后 猿苑益继续培
养 园尧员尧圆尧猿尧源尧缘尧远 和 苑澡后袁愿园园园则 辕 皂蚤灶袁缘皂蚤灶离心后弃
上清袁用 缘园滋造 凿凿匀圆韵 悬浮沉淀袁沸水煮 缘皂蚤灶袁分别取
上清和沉淀 猿滋造 上样袁进行 杂阅杂鄄孕粤郧耘 电泳渊浓缩胶
缘豫 袁分离胶 员圆豫 冤袁分析蛋白表达最佳诱导时间遥
其次参照上述最佳诱导时间袁按上述步骤分别加
入 陨孕栽郧至终浓度 园尧园援 圆尧园援 源尧园援 远尧园援 愿尧员援 园尧员援 圆 和
员郾 源皂皂燥造 辕 蕴袁猿苑益诱导后进行 杂阅杂鄄孕粤郧耘 分析袁根据蛋
白表达结果确定 陨孕栽郧最佳诱导浓度遥
员援 圆援 猿 摇 宰糟燥则苑员怨 正义植物表达载体转化烟草摇 根据
宰糟燥则苑员怨 基因的序列袁合成两端添加 孕泽贼 陨 和 载遭葬 陨 酶
切位点的特异引物 渊宰糟燥则苑员怨鄄云院缘忆鄄郧悦栽悦栽粤郧粤悦粤栽鄄
悦粤粤悦粤粤栽郧郧悦郧粤粤悦栽鄄猿忆袁 宰糟燥则苑员怨鄄砸院缘忆鄄栽粤悦栽郧悦粤郧鄄
郧栽粤悦郧郧郧粤栽郧郧粤栽栽粤郧悦鄄猿忆冤袁 砸栽鄄孕悦砸 渊 怨源益 猿皂蚤灶曰
怨源益 猿园泽袁 远园益 猿园泽袁苑圆益 缘园泽袁猿缘 个循环曰苑圆益 员园皂蚤灶冤
扩增出目的片段袁测序后构建到植物表达载体 责悦葬皂鄄
遭蚤葬员猿园员 中袁构建成功的表达载体命名为 宰糟燥则苑员怨鄄
员猿园员袁将其转入农杆菌菌株 蕴月粤源源园源袁利用农杆菌介导
的叶盘法转化烟草袁方法参照文献咱怨暂遥 通过潮霉素
生根培养基筛选后用 悦栽粤月法分别提取烟草对照植株
员圆源
核摇 农摇 学摇 报 圆远 卷
及转化抗性植株叶片的总 阅晕粤遥 以总 阅晕粤 为模板袁
根据 猿缘杂及 宰糟燥则苑员怨 序列设计的 猿缘杂鄄云渊缘忆鄄郧悦栽悦悦栽粤鄄
悦粤粤粤栽郧悦悦粤栽悦粤栽栽郧悦鄄猿忆冤 辕 宰糟燥则苑员怨鄄则 渊 缘忆鄄
栽郧粤粤郧粤粤郧粤栽悦栽栽郧悦栽悦悦郧悦鄄猿忆冤特异引物进行 孕悦砸
扩增遥
员援 圆援 源摇 转基因烟草抗寒生理指标测定摇 转化植株 栽员
代经分子检测后进行低温胁迫袁放入 源益培养箱中袁分
别于 园尧员尧猿尧缘 和 苑凿采样袁测定不同时间可溶性糖含量
及脯氨酸含量袁每处理重复 猿 次遥
可溶性糖含量测定院准确称取不同处理时间的转
基因及野生型烟草叶片各 园援 猿早袁利用蒽酮要硫酸显色
法测定可溶性糖含量袁方法参照文献咱员园暂遥
脯氨酸含量测定院准确称取不同处理时间的转基
因及野生型烟草叶片各 园援 猿早袁利用茚三酮显色法测定
脯氨酸含量袁方法参照文献咱员园暂遥
员援 圆援 缘 摇 宰悦韵砸苑员怨 正义植物表达载体转化棉花 摇 将
宰糟燥则苑员怨 原 员猿园员 植物表达载体中包含启动子尧目的基
因及终止子的片段切下后重组于 责悦葬皂遭蚤葬圆猿园员 中袁得
到 宰糟燥则苑员怨 原 圆猿园员 重组子袁经鉴定后提取质粒袁利用花
粉管通道法转化棉花新陆中 源怨 号 员缘园园 朵花袁栽园 及 栽员
代经过田间 员豫卡那霉素筛选和以 猿缘杂鄄云 辕 宰糟燥则苑员怨鄄则
为引物的 孕悦砸检测袁选择 栽员 代 孕悦砸 检测阳性植株提
取 砸晕粤袁经 砸栽鄄孕悦砸检测阳性后获得转基因植株遥
员援 圆援 远摇 转基因棉花抗寒生理指标测定摇 将对照与 栽员
代经 砸栽鄄孕悦砸检测阳性的转基因棉花收获种子后种植
于室内袁栽圆 代棉苗经 孕悦砸及 砸栽鄄孕悦砸 检测确定为转基
因植株后与对照同时进行 源益低温胁迫袁测定不同时
间渊园尧员尧猿尧缘尧苑凿冤叶片的可溶性糖含量尧脯氨酸含量及
丙二醛渊酝阅粤冤含量遥
可溶性糖及脯氨酸含量测定同上遥
丙二醛含量测定院准确称取不同处理时间的转基
因及对照棉花叶片 园援 猿早袁利用硫代巴比妥酸法测定
酝阅粤含量袁方法参照文献咱员园暂遥
圆摇 结果与分析
圆援 员摇 原核表达载体的构建及鉴定
以 宰糟燥则苑员怨鄄孕鄄云 辕 宰糟燥则苑员怨鄄孕鄄砸 为引物进行 孕悦砸
扩增后经电泳鉴定袁在 源圆园遭责附近出现扩增带袁与预期
大小符合遥 将其连接于原核表达载体 责耘栽圆愿葬渊 垣 冤袁经
菌落 孕悦砸鉴定及重组子质粒双酶切鉴定袁条带大小与
预期相符袁且该片段测序后无碱基突变袁确定获得
宰糟燥则苑员怨鄄责耘栽圆愿葬原核表达载体遥
圆援 圆摇 宰糟燥则苑员怨 的蛋白表达分析
将重组子 宰糟燥则苑员怨鄄责耘栽圆愿葬 转化大肠杆菌 月蕴圆员
渊阅耘猿冤袁于 猿苑益经 陨孕栽郧 诱导表达 园尧员尧圆尧猿尧源尧缘尧远 和
苑澡后袁收集菌体袁经 杂阅杂鄄孕粤郧耘鉴定表达产物遥 从图 员
渊箭头所示冤可以看出袁含重组质粒 宰糟燥则苑员怨鄄责耘栽圆愿葬
的大肠杆菌在诱导初始渊陨孕栽郧诱导时间为 园冤袁并无明
显特异诱导蛋白条带出现袁只有在经过 陨孕栽郧 诱导后
才会有 宰悦韵砸苑员怨 特异诱导蛋白条带出现袁其表达量
在 源澡达到最大袁其后表达量逐渐降低袁其蛋白大小约
为 圆源援 园噪阅遥 含有重组质粒 宰糟燥则苑员怨鄄责耘栽圆愿葬 的大肠杆
菌对照渊图 圆袁陨孕栽郧袁园冤无明显 宰悦韵砸苑员怨 特异诱导蛋
白条带出现袁分别经 陨孕栽郧 苑 个浓度渊园援 圆 耀 员援 源皂皂燥造 辕
蕴冤诱导后袁宰悦韵砸苑员怨 诱导蛋白的表达量无显著差异
渊如图 圆 箭头所示冤遥
图 员摇 宰糟燥则苑员怨 原 责耘栽圆愿葬不同诱导时间的蛋白表达
云蚤早援 员摇 耘曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 宰糟燥则苑员怨 原 责耘栽圆愿葬
蚤灶凿怎糟藻凿 遭赠 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 贼蚤皂藻
酝院 蛋白质标准分子量曰 园 耀 苑院 陨孕栽郧诱导时间渊澡冤遥
箭头表示目标条带遥
酝院 责则燥贼藻蚤灶 皂葬则噪藻则曰 园 耀 苑院 陨孕栽郧 蚤灶凿怎糟藻凿 贼蚤皂藻渊澡冤 援
粤则则燥憎 蚤灶凿蚤糟葬贼藻凿 贼澡藻 贼葬则早藻贼 遭葬灶凿援
圆援 猿摇 宰糟燥则苑员怨 正义植物表达载体转化烟草及检测
以 猿缘杂鄄云 辕 宰糟燥则苑员怨鄄则 为特异引物进行 孕悦砸 扩增
后获得阳性植株 圆怨 株渊图 猿 为部分转化植株的 孕悦砸
扩增电泳图冤袁收获阳性植株 栽园 代种子后播种于含潮
霉素的培养皿中袁选取生长一致的抗性植株移栽袁经
孕悦砸检测后进行后续的抗寒生理鉴定遥
圆援 源摇 转基因烟草抗寒生理研究
圆援 源援 员摇 低温胁迫对转基因烟草可溶性糖含量的影响
摇 栽员 代转基因烟草和野生型烟草在 源益下处理袁测定
可溶性糖含量遥 根据可溶性糖标准曲线公式院 赠 越
缘郾 远愿源远曾 垣 园郾 园猿员渊砸圆 越 园郾 怨怨源愿冤袁计算可溶性糖含量遥
从图 源 可以看出袁源益低温处理 员凿时袁转基因烟草和野
生型烟草的可溶性糖含量均逐渐上升袁但差异不大袁猿凿
圆圆源
摇 猿 期 小麦 宰糟燥则苑员怨 基因的原核表达及转化烟草和棉花提高抗冷性研究
图 圆摇 宰糟燥则苑员怨 原 责耘栽圆愿葬不同浓度 陨孕栽郧诱导的蛋白表达
云蚤早援 圆摇 耘曾责则藻泽泽蚤燥灶 燥枣 宰糟燥则苑员怨 原 责耘栽圆愿葬
蚤灶凿怎糟藻凿 遭赠 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 陨孕栽郧 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶
酝院 蛋白质标准分子量曰 园 耀 员援 源院 陨孕栽郧诱导浓度渊皂皂燥造 辕 蕴冤遥
箭头表示目标条带遥
酝院 责则燥贼藻蚤灶 皂葬则噪藻则曰 园 原 员援 源院 陨孕栽郧 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶渊皂皂燥造 辕 蕴冤 援
粤则则燥憎 蚤灶凿蚤糟葬贼藻凿 贼澡藻 贼葬则早藻贼 遭葬灶凿援
图 猿摇 猿缘杂院院 宰糟燥则苑员怨 转基因烟草 孕悦砸检测
云蚤早援 猿摇 孕悦砸 凿藻贼藻糟贼蚤燥灶 燥枣 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 贼燥遭葬糟糟燥
酝院 酝葬则噪藻则 渊员园园遭责 造葬凿凿藻则冤曰 员 耀 员圆院 转基因烟草 孕悦砸产物曰
月蕴院 空白曰 原 院 阴性对照曰 垣 院 阳性对照
酝院 酝葬则噪藻则 渊员园园遭责 造葬凿凿藻则冤曰 员 耀 员圆院 孕悦砸 责则燥凿怎糟贼泽 燥枣
贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 贼燥遭葬糟糟燥曰 月院 遭造葬灶噪曰
原 院 灶藻早葬贼蚤增藻 糟燥灶贼则燥造曰 垣 院 责燥泽蚤贼蚤增藻 悦燥灶贼则燥造
后转基因烟草可溶性糖含量上升加快袁第 缘 天时达到
峰值袁为 园援 员缘源皂早 辕 早袁比对照的可溶性糖含量高 猿园援
愿苑豫 遥 苑凿时快速下降袁比野生型烟草略高遥
圆援 源援 圆摇 低温胁迫对转基因烟草脯氨酸含量的影响摇
将 栽员 代烟草在低温下于 员尧猿尧缘 和 苑凿 采样袁测定脯氨
酸含量遥 根据脯氨酸标准曲线公式院赠 越 园援 园源怨缘曾 垣
园援 园源愿渊砸圆 越 园援 怨怨圆缘冤袁计算脯氨酸含量遥 如图 缘袁转基
因烟草和野生型烟草在 员凿 时袁脯氨酸含量变化不大袁
转基因烟草稍低于对照袁随后均快速上升袁第 猿 天时两
者差异不大袁第 缘 天时袁转基因烟草的脯氨酸含量为
缘怨援 怨愿滋早 辕 早袁超过对照 圆远援 怨愿豫 袁随后转基因烟草与野
生型烟草脯氨酸含量均下降袁第 苑 天时袁分别为 源远郾 猿缘
和 源园援 员圆滋早 辕 早袁转化植株超过对照 员缘援 缘猿豫
圆援 缘摇 宰糟燥则员怨 正义植物表达载体转化棉花及检测
栽园 代转化植株经 员豫卡那霉素抗性筛选后袁获得
图 源摇 低温下不同处理时间转基
因烟草可溶性糖含量的变化
云蚤早援 源摇 悦澡葬灶早藻 燥枣 泽燥造怎遭造藻 泽怎早葬则 糟燥灶贼藻灶贼 燥枣
贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 贼燥遭葬糟糟燥 贼则藻葬贼藻凿 遭赠 造燥憎
贼藻皂责藻则葬贼怎则藻 燥枣 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 贼蚤皂藻
图 缘摇 低温下不同处理时间转
基因烟草脯氨酸含量的变化
云蚤早援 缘摇 悦澡葬灶早藻 燥枣 责则燥造蚤灶藻 糟燥灶贼藻灶贼 燥枣
贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 贼燥遭葬糟糟燥 贼则藻葬贼藻凿 遭赠 造燥憎
贼藻皂责藻则葬贼怎则藻 燥枣 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 贼蚤皂藻
抗性植株 圆猿 株袁提取叶片总 阅晕粤袁经 猿缘杂鄄云 辕 宰糟燥则苑员怨鄄
则为特异引物的 孕悦砸 检测后袁获得阳性植株 怨 株遥 栽员
代再次经卡那霉素及 孕悦砸 检测渊图 远 为部分转化植
株冤所得的阳性植株再经 砸栽鄄孕悦砸 检测最终确定为转
基因植株渊图 苑 为部分转化植株冤遥
图 远摇 猿缘杂院院 宰糟燥则苑员怨 转基因棉花 孕悦砸检测
云蚤早援 远摇 孕悦砸 凿藻贼藻糟贼蚤燥灶 燥枣 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 糟燥贼贼燥灶
酝院 酝葬则噪藻则 渊员园园遭责 造葬凿凿藻则冤曰 员 耀 缘院 转基因棉花 孕悦砸产物曰
原 院 阴性对照曰 垣 院 阳性对照
酝院 酝葬则噪藻则 渊员园园遭责 造葬凿凿藻则冤曰 员 耀 缘院 孕悦砸 责则燥凿怎糟贼泽 燥枣
贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 糟燥贼贼燥灶曰 原 院 灶藻早葬贼蚤增藻 糟燥灶贼则燥造曰 垣 院 责燥泽蚤贼蚤增藻 糟燥灶贼则燥造
圆援 远摇 转基因棉花抗寒生理研究
圆援 远援 员摇 可溶性糖含量的变化分析摇 栽圆 代转基因棉花
猿圆源
核摇 农摇 学摇 报 圆远 卷
图 苑摇 猿缘杂院院 宰糟燥则苑员怨 转基因棉花 砸栽鄄孕悦砸检测
云蚤早援 苑摇 砸栽鄄孕悦砸 凿藻贼藻糟贼蚤燥灶 燥枣 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 糟燥贼贼燥灶
酝院 酝葬则噪藻则 渊员园园遭责 造葬凿凿藻则冤曰 员 耀 怨院 转基因棉花 砸栽鄄孕悦砸产物曰
原 院阴性对照曰 垣 院阳性对照
酝院 酝葬则噪藻则 渊员园园遭责 造葬凿凿藻则冤曰 员 耀 怨院 砸栽鄄孕悦砸 责则燥凿怎糟贼泽 燥枣
贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 糟燥贼贼燥灶曰 原 院 灶藻早葬贼蚤增藻 糟燥灶贼则燥造曰 垣 院 责燥泽蚤贼蚤增藻 糟燥灶贼则燥造
和对照在 源益低温下处理袁测定可溶性糖含量遥 根据
可溶性糖标准曲线公式院赠 越缘援 远怨源猿曾 垣园援 园园怨愿渊砸圆 越 园援
怨怨怨猿冤袁计算可溶性糖含量遥 从图 愿 可以看出袁在 源益
低温处理 员凿时袁转基因棉花和对照的可溶性糖含量变
化不大袁但 猿凿后袁转基因棉花的可溶性糖含量快速上
升袁第 缘 天时达到峰值袁为 园郾 圆远皂早 辕 早袁超过对照
源员郾 怨园豫 袁 苑凿时下降袁转基因棉花为 园援 圆员缘皂早 辕 早袁比对
照高 愿苑援 缘园豫 遥
圆援 远援 圆摇 脯氨酸含量的变化分析 摇 栽圆 代棉花在低温
下袁分别于 员尧猿尧缘 和 苑凿 采样袁测定脯氨酸含量遥 根据
脯氨酸标准曲线公式院赠 越 园援 园源怨缘曾 垣 园援 园源愿渊砸圆 越 园援
怨怨圆缘冤袁计算脯氨酸含量遥 如图 怨 所示袁转基因棉花和
对照在前 猿凿脯氨酸含量变化不大袁但处理 缘凿时袁转基
因棉花的脯氨酸含量快速上升袁为 远员援 苑远滋早 辕 早袁超过对
照 员园怨援 猿远豫 袁随后开始下降袁第 苑 天时袁转基因植株脯
氨酸含量为 源猿援 园源滋早 辕 早袁此对照植株的 员远援 怨园滋早 辕 早 高
员缘源援 远苑豫 遥
图 愿摇 低温下不同处理时间转
基因棉花可溶性糖含量的变化
云蚤早援 愿摇 悦澡葬灶早藻 燥枣 泽燥造怎遭造藻 泽怎早葬则 糟燥灶贼藻灶贼 燥枣
贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 贼燥遭葬糟糟燥 贼则藻葬贼藻凿 遭赠 造燥憎
贼藻皂责藻则葬贼怎则藻 燥枣 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 贼蚤皂藻
圆援 远援 猿摇 丙二醛含量的变化分析摇 利用双组分分光光
度计法建立方程组袁根据植物组织的重量计算测定样
图 怨摇 低温下不同处理时间转
基因棉花脯氨酸含量的变化
云蚤早援 怨摇 悦澡葬灶早藻 燥枣 责则燥造蚤灶藻 糟燥灶贼藻灶贼 燥枣
贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 贼燥遭葬糟糟燥 贼则藻葬贼藻凿 遭赠 造燥憎
贼藻皂责藻则葬贼怎则藻 燥枣 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 贼蚤皂藻
品中 酝阅粤的含量遥 由图 员园 可以看出袁转基因棉花与
对照的丙二醛含量随低温处理时间的变化呈现先下降
后上升的趋势袁第 缘 天时达到低峰遥 低温处理初始袁两
者 酝阅粤含量接近袁转基因棉花稍低于对照渊比对照低
猿援 源远豫 冤袁随后转基因棉花下降趋势明显袁第 猿 天时两
者差 异 达 到 最 大袁 转 基 因 棉 花 酝阅粤 含 量 为
园郾 园圆愿滋皂燥造 辕 早袁比对照低 猿圆援 猿缘豫 袁第 缘 天和第 苑 天时袁
分别比对照低 猿园援 远愿豫和 员怨援 源源豫 遥
图 员园摇 低温下不同处理时间转
基因棉花丙二醛含量的变化
云蚤早援 员园摇 悦澡葬灶早藻 燥枣 酝阅粤 糟燥灶贼藻灶贼 燥枣 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟
贼燥遭葬糟糟燥 贼则藻葬贼藻凿 遭赠 造燥憎 贼藻皂责藻则葬贼怎则藻 燥枣 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 贼蚤皂藻
猿摇 讨论
在植物抗寒分子机制研究中袁人们一直试图将已
分离的抗寒基因转入植物中袁期望能够提高植物的抗
寒能力遥 本文的试验结果表明袁将小麦的抗寒基因
宰糟燥则苑员怨 转入烟草及棉花中可提高其抗寒水平遥
基因的功能是通过其表达产物蛋白质来实现的袁
源圆源
摇 猿 期 小麦 宰糟燥则苑员怨 基因的原核表达及转化烟草和棉花提高抗冷性研究
通过蛋白修饰等作用袁同一个基因可以形成多种不同
功能的蛋白袁所以蛋白质的研究对解析生命现象具有
更为重要的意义咱员员暂 遥 目前袁实验室应用最广泛的表达
系统为 责耘栽 大肠杆菌表达系统袁该系统具有操作方
便尧需时较短尧表达量大等优点袁而且能与 栽葬早 连接进
行融合蛋白表达袁目的蛋白易于纯化咱员圆暂 袁因此本试验
选用 责耘栽鄄圆愿葬表达载体表达小麦 宰悦韵砸苑员怨 蛋白遥 构
建了 宰糟燥则苑员怨 的原核表达载体袁分析了 陨孕栽郧的诱导浓
度和诱导时间对重组蛋白表达的影响袁发现 园郾 圆皂皂燥造 辕
蕴 陨孕栽郧 对 宰糟燥则苑员怨鄄责耘栽圆愿葬 融合蛋白诱导表达 源澡 效
果最好袁研究发现在最适的诱导条件下袁重组蛋白形成
包涵体咱员猿暂 袁其诱导蛋白大小约为 圆源援 园噪阅袁分析其原因
可能是由于原核表达宿主的蛋白折叠及修饰作用与真
核生物差异较大袁使其表达产物不能形成正确的空间
结构咱员猿暂 袁最终导致蛋白表达产物大于理论值遥 本试验
可为深入研究该基因表达特征及其编码蛋白在植物低
温胁迫下的抗寒功能提供理论依据袁并可为进一步研
究蛋白的酶学活性奠定基础遥
植物抗寒性是其长期适应低温逆境而形成的一种
生理特征袁这是由其代谢活动所决定的咱员源暂 遥 植物在抵
抗寒冻所导致的渗透胁迫过程中袁体内积累了大量的
糖类和脯氨酸等渗透调节物质袁并伴随有多种冷诱导
蛋白的表达遥 低温诱导蛋白是植物在低温作用下袁由
于基因表达的改变而诱发合成的蛋白质遥 一些转基因
研究证明袁导入冷诱导基因确实具有提高植物抗寒性
的功能咱员缘暂 袁水稻转基因株系的细胞膜在低温胁迫下能
保持比对照更强的稳定性咱员远暂 遥 同时低分子量的渗透
调节物质渊糖醇尧特殊氨基酸尧甘氨酸甜菜碱及脯氨酸
等冤的积累袁被认为是增强植物对渗透胁迫适应和耐
受的主要机制咱员苑暂 袁其中可溶性糖尧脯氨酸尧丙二醛含量
等可以作为检测植物抗寒性强弱的生理生化指标遥
脯氨酸作为植物渗透作用中最为有效的物质袁无
论是干旱尧冰冻尧高温尧低温和盐渍袁还是其他的逆境因
素都可造成植物体内脯氨酸的大量积累咱员愿暂 袁番茄积累
脯氨酸的体细胞突变体中袁脯氨酸积累与其抗寒性提
高一致咱员怨暂 袁源益驯化野生型拟南芥植株袁脯氨酸增加
员园 倍咱圆园暂 袁源益低温下袁马铃薯试管苗脯氨酸含量急剧
上升咱圆员暂 袁脯氨酸含量与植物抗寒性呈正相关遥 在本试
验的低温处理过程中袁烟草及棉花叶片的脯氨酸含量
逐渐增加袁这有利于叶片细胞内渗透势和水势降低袁增
大细胞的渗透调节能力袁有利于增强抗寒适应性遥
可溶性糖是植物体内最重要的渗透调节物质和能
量物质袁可溶性糖能够提高细胞液的浓度袁增加细胞持
水组织中的非结冰水袁从而降低细胞质的冰点袁保护细
胞质胶体不至于遇冷凝固咱圆圆暂 遥 研究表明袁低温胁迫
下袁游离脯氨酸和可溶性糖绝对含量的增加有利于提
高扁蓿豆抗寒性咱圆猿暂 遥
丙二醛渊酝阅粤冤是具有细胞毒性的物质袁酝阅粤 不
仅能与蛋白结合引起生物膜中结构蛋白和酶的聚合并
使它们的结构功能和催化功能发生改变袁还可降低膜
中不饱和脂肪酸的含量袁从而降低膜流动性咱圆源暂 袁对质
膜有毒害作用袁主要破坏细胞膜系统遥 植物在遇逆境
伤害时 酝阅粤 含量显著增加袁因此丙二醛是衡量低温
伤害比较直接的鉴定指标咱圆缘暂 遥 多数学者认为袁丙二醛
含量与抗寒性呈负相关遥 枣树抗寒性强的品种袁丙二
醛含量低袁抗寒性差的品种丙二醛含量高咱圆源 耀 圆愿暂 袁本试
验研究结果与之吻合遥 但司剑华认为低温胁迫下袁盐
地柽柳的丙二醛含量高于其他品种袁其抗寒性最强袁丙
二醛含量与抗寒性呈正相关咱圆怨暂 遥
本文利用脯氨酸尧可溶性糖尧丙二醛等生理指标来
研究转 宰糟燥则苑员怨 抗寒基因烟草及棉花的抗寒性袁生理
生化指标的结果表明野生型烟草及棉花对照经过低温
锻炼后袁脯氨酸含量尧可溶性糖含量尧丙二醛含量均有
不同程度的变化袁转基因烟草和棉花的脯氨酸含量和
可溶性糖含量都比对照高袁转基因棉花的丙二醛含量
低于对照袁且都在处理后的第 缘 天达到峰值袁说明外源
基因提高了转基因植株抗寒性物质的积累能力袁从而
提高了转基因植株的抗寒性遥 这也是对低温适应性的
一种反应遥
宰糟燥则苑员怨 转基因烟草 栽员 代及转基因棉花 栽圆 代的
低温胁迫试验结果显示袁宰糟燥则苑员怨 基因能稳定遗传给
下一代袁可以在后代中正常表达袁并提高植株的抗寒
性遥 随后我们将对转基因棉花的抗寒机理做更深入的
研究袁包括其外源基因低温胁迫下的表达谱及细胞超
微结构的变化袁为今后培育遗传稳定尧效果明确的转基
因产品奠定坚实基础遥 将外源抗寒基因渊如冷调节基
因冤引入不耐寒植物中以提高其种性产生抗寒性等为
未来提供了极好的研究课题遥
参考文献院
咱 员 暂摇 金万梅袁董 静袁尹淑萍援 悦月云员 转化草莓及其抗寒性鉴定咱允暂 援 西
北植物学报袁圆园园苑袁圆苑渊圆冤院园圆圆猿 原 园圆圆苑
咱 圆 暂摇 李新国袁张建霞袁孙中海援 植物抗寒基因工程研究进展咱 允暂 援 亚
热带植物科学袁圆园园源袁猿猿渊源冤院远怨 原 苑猿
咱 猿 暂摇 简令成援 植物抗寒机理研究进展咱允暂 援 植物学通报袁员怨怨圆袁怨渊员冤院
员苑 原 圆圆
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原 猿圆苑
咱 怨 暂 摇 李晓荣援 东方百合木质素合成相关基因的克隆及功能分析
咱阅暂援 南京院南京林业大学袁圆园园怨院缘缘 原 缘远
咱员园暂摇 邹摇 琦援 植物生理学实验指导咱酝暂援 北京院中国农业出版社袁
圆园园猿院员远员 原 员远圆
咱员员暂摇 周善跃袁李宝笃援水稻 韵泽砸云孕 员 基因的原核表达与蛋白纯化咱允暂 援
青岛农业大学学报袁圆园员园袁圆苑渊猿冤院员怨员 原 员怨源
咱员圆暂摇 单黎然袁杨 振袁安摇 宁援 泛索样小蛋白 源渊杂哉酝园源冤的克隆尧原核
表达尧纯化及鉴定咱允暂 援 西北农林科技大学学报袁圆园园愿袁猿远渊怨冤院员员
原 员远
咱员猿暂摇 倪志勇袁王摇 娟袁吕摇 萌援 棉花 源 一香豆酸辅酶 粤连接酶基因克
隆及原核表达咱允暂 援 西北植物学报袁 圆园员园袁 猿园渊猿冤院 园源圆怨 原 园源猿远
咱员源暂摇 甄摇 伟袁陈摇 溪袁孙思洋援 冷诱导基因的转录因子 悦月云员 转化油
菜和烟草及抗寒性鉴定咱 允暂 援 自然科学进展袁圆园园园袁 员园 渊员圆冤院
员员园源 原 员员园愿
咱员缘暂摇 王摇 华袁杨建峰援 植物抗寒基因工程研究进展咱允暂 援 现代农业科
技袁 圆园园苑渊圆猿冤院员员苑 原 员圆园
咱员远暂摇 吴关庭袁郎春秀袁胡张华袁陈笑芸袁王伏林袁金 卫袁陈锦清援 转
悦月云员 基因增强水稻的耐逆性咱允暂 援 核农学报袁 圆园园远袁圆园渊猿冤院员远怨
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咱员苑暂摇 郧则藻藻灶憎葬赠 匀袁 酝怎灶灶泽 砸援 酝藻糟澡葬灶蚤泽皂 燥枣 贼燥造藻则葬灶糟藻 蚤灶 灶燥灶澡葬造燥责澡赠贼藻
咱允暂 援 粤灶灶怎 砸藻增 孕造葬灶贼 孕澡赠泽蚤燥袁 员怨愿园渊员猿员冤院员源怨 原 员怨园
咱员愿暂摇 池春玉袁 赵摇 岩袁 连永权援 紫羊茅内源脯氯酸和可溶性糖含量
季节变化的研究咱允暂 援 北方园艺袁 圆园园怨袁渊员园冤院 圆园愿 原 圆园怨
咱员怨暂摇 阅藻造葬怎灶藻赠 粤 允袁灾藻则皂葬 阅 孕 杂援 孕则燥造蚤灶藻 遭蚤燥泽赠灶贼澡藻泽蚤泽 葬灶凿 燥泽皂燥则藻早怎造葬贼蚤燥灶
蚤灶 责造葬灶贼泽咱允暂 援 孕造葬灶贼 允燥怎则灶葬造 袁 员怨怨猿袁 源院 圆员缘 原 圆圆源
咱圆园暂摇 宰葬灶灶藻则 蕴 粤袁 允怎灶贼贼蚤造葬 韵援 悦燥造凿鄄蚤灶凿怎糟藻凿 枣则藻藻扎蚤灶早 贼燥造藻则葬灶糟藻 蚤灶
粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽咱允暂 援 孕造葬灶贼 孕澡赠泽蚤燥造燥早赠袁 员怨怨怨袁员圆园院 猿怨员 原 源园园
咱圆员暂摇 吴雁斌袁王一航袁张摇 武袁马荷花援 孕耘郧 与 杂晕孕 对低温下马铃薯
试管苗相关生理指标的影响咱 允暂 援 核农学报袁 圆园员园袁 圆源渊猿冤院远源缘
原 远源怨
咱圆圆暂摇 潘瑞炽援 植物生理学咱酝暂援 北京院高等教育出版社袁 圆园园员院圆苑怨 原
圆愿愿
咱圆猿暂摇 李小安援 低温胁迫对不同扁蓿豆种 缘 原内游离脯氨酸和可溶性
糖含量的影响咱允暂 援 青海科技袁圆园员员袁渊圆冤院源园 原 源圆
咱圆源暂摇 陈禹兴袁付连双袁王晓楠援 低温胁迫对冬小麦恢复生长后植株细
胞膜透性和丙二醛含量的影响咱 允暂 援 东北农业大学学报袁圆园员园袁
源员渊员园冤院员园 原 员远
咱圆缘暂摇 张保青袁杨丽涛袁李杨瑞援 自然条件下甘蔗品种抗寒生理生化特
性的比较咱允暂 援 作物学报袁圆园员员袁猿苑渊猿冤院源怨远 原 缘园缘
咱圆远暂摇 高京草袁王慧霞袁李西选援 可溶性蛋白袁 丙二醛含量与枣树枝条
抗寒性的关系研究咱允暂 援 北方园艺袁 圆园员园袁圆猿院 员愿 原 圆园
咱圆苑暂摇 王摇 瑞袁马凤鸣袁李彩凤援 低温胁迫对玉米幼苗脯氨酸尧丙二醛
含量及电导率的影响咱 允暂 援 东北农业大学学报袁圆园园愿袁猿怨渊缘冤院圆园
原 圆猿
咱圆愿暂摇 陶摇 雅袁孙启忠援 不同紫花苜蓿品种可溶性糖袁 全氮袁丙二醛含
量动态变化及其与抗寒性关系研究咱 允暂 援 中国农业科技导报袁
圆园园愿袁员园渊杂员冤院 缘远 原 远园
咱圆怨暂摇 司剑华袁卢素锦援 低温胁迫对 缘 种柽柳抗寒性生理指标的影响
咱允暂 援中南林业科技大学学报袁圆园员园袁猿园渊愿冤院苑愿 原 愿员
渊责任编辑摇 王媛媛冤
远圆源