全 文 ：核 农 学 报摇 圆园员源袁圆愿渊愿冤院员源源远 耀 员源缘圆
允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
收稿日期院圆园员猿鄄员园鄄圆愿摇 接受日期院圆园员源鄄园猿鄄员员
基金项目院中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金渊中国水产科学研究院南海水产研究所冤资助项目渊圆园员猿栽杂园员冤袁国家现代农业产业
技术体系渊悦粤砸杂 原 源怨冤
作者简介院陈胜军袁男袁副研究员袁主要从事水产品加工与质量安全控制研究遥 耘鄄皂葬蚤造院糟澡藻灶泽躁怎灶岳 澡燥贼皂葬蚤造援 糟燥皂
通讯作者院李来好袁男袁研究员袁主要从事水产品加工与质量安全研究遥 耘鄄皂葬蚤造院造葬蚤澡葬燥造蚤岳 员远猿援 糟燥皂
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员源冤园愿鄄员源源远鄄园苑
超声波辅助酶解法提取罗非鱼眼透明质酸
工艺条件
陈胜军员 摇 陈摇 辉员袁圆 摇 高瑞昌圆 摇 李来好员 摇 于摇 刚员 摇 胡摇 晓员 摇 马海霞员 摇 邓建朝员
渊员 中国水产科学研究院南海水产研究所袁农业部水产品加工重点实验室袁国家水产品加工
技术研发中心袁广东 广州摇 缘员园猿园园曰 圆江苏大学食品与生物工程学院袁江苏 镇江摇 圆员圆园员猿冤
摘摇 要院本文研究超声波辅助酶解法提取罗非鱼眼玻璃体中透明质酸袁通过单因素实验尧正交实验分析了
超声波功率尧超声处理时间及蛋白酶种类尧酶解时间尧酶解 责匀尧酶量尧酶解温度对透明质酸提取的影响袁
确定了最佳提取工艺条件院超声波功率 圆园园宰尧超声处理时间 员缘皂蚤灶尧酶作用时间 猿 澡尧酶解温度 源园益尧酶
解 责匀值 怨郾 园尧酶用量 远园园园哉窑早 原员袁利用最优条件透明质酸的平均得率为 员员郾 源源豫 遥 采用季铵盐络合法尧
离子交换层析法对透明质酸粗品进行纯化得到高纯度的透明质酸袁其纯度达到 怨苑郾 源苑豫 袁利用粘度法测
量透明质酸相对分子量为 员园园 运阅葬遥 紫外图谱中无蛋白及核酸的吸收峰袁红外光谱图显示其特征吸收
峰和标准品相同遥 本研究为罗非鱼眼的高值化利用提供了技术支撑遥
关键词院罗非鱼眼曰超声波酶解曰透明质酸曰工艺条件
阅韵陨院员园郾 员员愿远怨 辕 躁援 蚤泽泽灶援 员园园鄄愿缘缘员郾 圆园员源郾 园愿援 员源源远
摇 摇 透明质酸渊澡赠葬造怎则燥灶蚤糟 葬糟蚤凿袁匀粤冤是一种糖胺聚糖袁
在人体内广泛分布袁大于 缘园豫的 匀粤 分布在人体的皮
肤尧肺尧肠道中袁在血液尧关节滑液尧脐带中也有分
布咱员暂 遥 其为人体的正常生理活动发挥着重要作用袁如
影响细胞的增殖和分化尧调节蛋白质尧润滑关节尧调节
血管壁的通透性尧创伤修复等咱圆鄄猿暂 遥 由于其特殊的生理
功能袁近年来透明质酸在医药尧保健品行业得到广泛的
应用遥
早期用来提取 匀粤 的材料主要为脐带袁但由于其
获取困难袁使其生产成本增加袁且近年来陆生生物不断
发生各种疫情袁如禽流感尧疯牛病袁使得利用这些生物
组织为原料提取的 匀粤在应用中存在一定风险遥 因此
研究利用相对安全的水生生物组织作为提取 匀粤的原
料具有较大的实际价值遥 我国是世界上罗非鱼养殖量
最大的国家袁圆园员圆 年我国罗非鱼产量达到 员缘缘郾 猿 万
吨咱源暂 袁占世界罗非鱼总产量的 源员郾 园豫 袁罗非鱼产业在
我国已经形成良好的养殖尧加工生产体系袁但目前罗非
鱼的加工主要以生产鱼片为主咱缘暂 袁而在罗非鱼的加工
过程中产生的大量下脚料并未得到很好的开发利用袁
这不仅造成了资源的浪费也给环境带来了污染遥 研究
表明鱼眼玻璃体中含有大量的透明质酸袁可以作为提
取透明质酸的材料袁但至今尚鲜见罗非鱼眼提取透明
质酸的研究报道遥 超声波是频率高于 圆园 运匀在 的声
波袁方向性好袁穿透能力强袁目前有较多利用超声处理
提高化合物得率的研究袁但应用于透明质酸的提取却
较少咱远鄄愿暂 遥 本文通过超声波辅助酶解法制备透明质酸袁
利用季铵盐络合法尧离子交换层析法纯化得到高纯度
的透明质酸袁并通过粘度法尧红外光谱法尧紫外光谱法
对产品的特性进行分析袁为罗非鱼眼的高值化利用提
供了理论基础和技术支撑遥
员摇 材料与方法
员郾 员摇 材料
罗非鱼眼购于广西南宁百洋食品有限公司曰胰蛋白
酶渊圆缘园哉窑皂早 原员冤尧复合蛋白酶渊员圆缘哉窑皂早 原员冤尧中性蛋白
酶渊远园哉窑皂早 原员冤尧木瓜蛋白酶渊愿园园哉窑皂早 原员冤尧碱性蛋白酶
渊圆园园哉窑皂早 原员冤尧透明质酸标准品渊日本化工有限公司冤曰
远源源员
摇 愿 期 超声波辅助酶解法提取罗非鱼眼透明质酸工艺条件
无水乙醇尧咔唑尧浓硫酸尧氯化钠尧氢氧化钠尧浓盐酸尧三
羟甲基氨基甲烷 渊 栽则蚤泽冤尧十六烷基三甲基溴化铵
渊悦栽粤月冤袁以上试剂均为分析纯曰考马斯亮蓝试剂盒遥
超声波清洗器院阅 原 苑愿圆圆源袁德国 耘造皂葬 超声波清洗
机曰水浴震荡锅院栽匀在 原愿圆袁金坛市精达仪器制造厂曰组
织捣碎机院阅云栽 原 缘园袁温岭市大德中药机械有限公司曰
哉灾猿 紫外分光光度计袁上海美谱达仪器有限公司曰冷
冻离心机院猿运猿园袁德国 杂蚤早皂葬 公司曰真空冷冻干燥机院
粤蕴孕匀粤员 原 源袁德国 杂蚤早皂葬 公司曰真空泵院粤孕 原 怨怨圆缘袁天
津奥特赛恩斯仪器有限公司曰责匀 计院孕耘圆园袁梅特勒托
利多仪器有限公司曰乌氏粘度计渊园郾 缘 耀 园郾 远 皂皂冤袁上海
申立玻璃仪器有限公司曰匀蚤栽则葬责栽酝 阅耘粤耘 云云 离子交换
柱袁 美 国 郧耘 匀藻葬造贼澡糟葬则藻 月蚤燥鄄泽糟蚤藻灶糟藻泽 公 司曰 运栽粤
责怎则蚤枣蚤藻则栽酝员园 多功能蛋白快速纯化液相色谱系统渊配有
可变波长紫外检测器和 哉灶蚤糟燥则灶 缘 色谱工作站冤袁美国
郧耘 匀藻葬造贼澡糟葬则藻 月蚤燥鄄泽糟蚤藻灶糟藻泽 公司曰透析袋 渊截留分子
缘园园园 阅葬 冤袁 美国 酝赠皂 生物技术有限公司 渊 酝赠皂
月蚤燥造燥早蚤糟葬造 悦燥皂责葬灶赠 蕴蚤皂蚤贼藻凿冤遥
员郾 圆摇 方法
员郾 圆郾 员摇 透明质酸提取方法的优化咱愿 原 员园暂 摇 取未解冻的
罗非鱼眼若干袁取出玻璃体袁用丙酮脱脂袁自然风干袁称
取 员园早玻璃体袁加入 园郾 圆 皂燥造窑蕴 原员 晕葬悦造 源园园 皂蕴袁捣碎袁
调节溶液 责匀至 苑袁加入 苑 缘园园哉窑早 原员的复合酶渊胰蛋白
酶和复合蛋白酶按酶活力 员 颐 员混合冤袁超声波处理
员缘皂蚤灶曰然后放入 源园益水浴震荡锅中酶解提取 源 澡曰酶
解反应结束后于 怨缘益 水浴 员园皂蚤灶 灭酶曰在 远 园园园则窑
皂蚤灶 原员离心 员园皂蚤灶袁取上清液超滤浓缩至 员园园 皂蕴袁加入
浓度为 员园园早窑蕴 原员 悦栽粤月 适量袁于 猿园益下络合 园郾 缘澡袁离
心收集沉淀曰将沉淀溶解于 员郾 圆皂燥造窑蕴 原员的氯化钠中解
离 源澡曰向解离液中加入 猿 倍体积的 怨缘豫乙醇于 源益下
沉淀 圆源澡曰离心收集沉淀袁将沉淀再次溶解袁利用离子
交换层析进一步纯化袁经透析后冷冻干燥得成品遥
员郾 圆郾 圆摇 单因素试验摇 选取酶种类尧酶用量尧酶水解时
间尧超声波处理时间和超声波功率进行单因素试验袁各
因素的水平分别为院酶种类有胰蛋白酶尧复合蛋白酶尧
中性蛋白酶尧木瓜蛋白酶尧碱性蛋白酶尧及复合酶曰酶用
量分别 圆 缘园园尧缘 园园园尧苑 缘园园尧员园 园园园 和 员圆 缘园园哉窑早 原员曰酶
水解时间分别为 员尧猿尧缘尧苑 和 怨澡曰超声波处理时间分别
为 缘尧员缘尧圆园尧和 圆缘皂蚤灶曰超声波功率分别为 缘园尧员园园尧员缘园
和 圆园园宰遥
员郾 圆郾 猿摇 正交试验摇 为进一步考察酶解条件对透明质
酸提取效果的影响袁根据单因素实验的结果在固定超
声波的功率及超声处理时间的前提下袁以透明质酸的
得率为参考指标考察酶解温度 渊 粤冤尧时间 渊 月冤尧 责匀
渊悦冤尧酶用量渊阅冤对透明质酸提取的影响袁因素与水平
见表 员遥
表 员摇 因素与水平表
栽葬遭造藻 员摇 云葬糟贼燥则泽 葬灶凿 造藻增藻造泽
水平
蕴藻增藻造
温度渊粤冤
栽藻皂责藻则葬贼怎则藻 辕 益
时间渊月冤
贼蚤皂藻 辕 澡 责匀渊悦冤
酶用量渊阅冤
耘灶扎赠皂藻 凿燥泽葬早藻 辕 哉窑早 原员
员 源园 员 苑 愿 园园园
圆 源缘 猿 愿 远 园园园
猿 缘园 缘 怨 源 园园园
员郾 圆郾 源 摇 透明质酸含量的测定咱员员暂 摇 利用 月蚤贼贼藻则鄄酝怎蚤则
法遥 由于每 员园园 早透明质酸中葡萄糖醛酸的含量约为
源远郾 猿圆早袁通过 月蚤贼贼藻则鄄酝怎蚤则 法测出葡萄糖醛酸的含量即
可得到透明质酸含量遥
透明质酸得率 越透明质酸的含量 辕玻璃体干重 伊
员园园豫
员郾 圆郾 缘摇 透明质酸的相对分子量测定咱员圆 原 员源暂 摇 用 晕葬悦造
溶液配制不同浓度的透明质酸溶液袁利用乌氏粘度计
测量流出时间袁根据式渊员冤和渊圆冤分别计算出相对粘度
浊则尧比粘度 浊泽责袁然后分别以透明质酸浓度 悦蚤尧浊泽责 辕 悦蚤为
横纵坐标作图袁进行线性回归袁直线与 再 轴的交点即
为特性粘度咱浊暂袁根据式渊猿冤求出透明质酸的相对分子
质量遥
浊则 越 贼蚤贼园 渊员冤
浊泽责 越 浊则 原 员 渊圆冤
咱浊暂 越 猿援 远 伊 员园 原源酝则园援 苑愿 渊猿冤
员郾 圆郾 远摇 透明质酸的紫外光谱分析咱员缘暂 摇 配制浓度为
园郾 缘皂早窑皂蕴 原员的样品溶液袁在波长 员怨园 耀 源园园灶皂 进行紫
外扫描遥
员郾 圆郾 苑摇 透明质酸的红外光谱分析咱员远暂 摇 取干燥的透明
质酸样品 源 耀愿皂早袁利用溴化钾压片法制备试样袁用傅里
叶变换红外光谱仪对样品进行扫描袁扫描范围 缘园园 耀
源 园园园糟皂 原员袁仪器分辨率为 园郾 园怨糟皂 原员袁信噪比院缘 园园园颐 员遥
圆摇 结果与分析
圆郾 员摇 超声辅助酶解提取透明质酸的单因素实验
圆郾 员郾 员摇 载酶种类对 匀粤提取的影响摇 由图 员 可见袁酶
种类对 匀粤的提取效果有较大影响袁其中胰蛋白酶尧中
性蛋白酶尧复合蛋白酶提取效果较好袁胰蛋白酶和中性
蛋白酶之间水解效果差异性不显著曰对透明质酸粗品
苑源源员
核摇 农摇 学摇 报 圆愿 卷
的蛋白含量分析可知院复合蛋白酶水解提取的 匀粤 粗
品中蛋白质含量最低袁中性蛋白酶 匀粤 粗品中蛋白质
含量最高袁且中性蛋白酶的溶解性较差袁为充分利用胰
蛋白酶和复合蛋白酶的水解特点袁故选择该两种酶混
合进行酶解提取透明质酸袁即复合酶渊胰蛋白酶和复
合蛋白酶按酶活力 员颐 员混合冤遥 由图 员 可知复合酶的
提取效果最好袁和胰蛋白酶尧复合蛋白酶水解效果差异
性显著袁可能原因是胰蛋白酶尧复合蛋白酶分别对不同
的蛋白进行水解袁从而提高水解效率袁增大 匀粤的提取
量袁综上选择复合酶进行水解提取 匀粤遥
图 员摇 各种蛋白酶对 匀粤得率的影响
葬尧遭尧糟尧凿尧藻表示差异显著性袁孕臆园郾 园缘
云蚤早援 员摇 耘枣枣藻糟贼 燥枣 责则燥贼藻葬泽藻 贼赠责藻泽 燥灶 贼澡藻 赠蚤藻造凿 燥枣 匀粤援
粤造责澡葬遭藻贼泽 渊葬袁 遭袁 糟袁 凿袁 藻冤 皂藻葬灶 泽蚤早灶蚤枣蚤糟葬灶贼
凿蚤枣枣藻则藻灶糟藻 葬贼 孕臆园郾 园缘
圆郾 员郾 圆摇 酶用量对 匀粤得率的影响摇 从图 圆 可知袁随着
酶用量的增加 匀粤 得率逐渐增加袁酶用量达到
苑 缘园园哉窑早 原员时 匀粤的得率增加不明显袁酶用量进一步
增加时 匀粤的得率反而开始下降遥 原因可能是随着酶
用量的增加其对蛋白质的水解作用加强袁使得更多的
匀粤与蛋白质之间的相互作用得到破坏袁从而使 匀粤充
分溶出袁提高透明质酸的得率曰然而酶用量太大时可能
会引起酶对 匀粤的降解袁使得透明质酸在醇沉尧络合等
纯化的过程中损失增大袁导致得率下降遥 因此选择酶
用量为苑 缘园园 哉窑早 原员遥
圆郾 员郾 猿摇 酶作用时间对 匀粤 得率的影响 摇 从图 猿 可以
看出袁随着酶作用时间的延长 匀粤 的得率呈现先增加
后降低的趋势袁在第 缘 小时达到最大值袁可能原因是随
着酶作用时间的延长酶作用效果增加袁从而使得 匀粤
的得率增加袁但进一步延长酶解时间不仅增加了酶对
匀粤的作用同时会使提取过程有染菌的危险袁使得 匀粤
在高温尧酶尧细菌的作用下的发生降解袁造成 匀粤 得率
下降袁综合考虑选择酶作用时间为 猿 耀 缘 澡遥
圆郾 员郾 源摇 超声波功率对 匀粤得率的影响摇 从图 源 可见袁
图 圆摇 不同酶用量对 匀粤得率的影响
云蚤早援 圆摇 耘枣枣藻糟贼 燥枣 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 责则燥贼藻葬泽藻 凿燥泽葬早藻 燥灶 贼澡藻 赠蚤藻造凿 燥枣 匀粤
图 猿摇 不同酶作用时间对 匀粤得率的影响
云蚤早援 猿摇 耘枣枣藻糟贼 燥枣 凿蚤枣枣藻则藻灶贼 澡赠凿则燥造赠泽蚤泽 贼蚤皂藻 燥灶 贼澡藻 赠蚤藻造凿 燥枣 匀粤
随着超声波功率的增加 匀粤 的得率逐渐增加袁圆园园 宰
时达到最大值袁研究表明超声波对 匀粤 有一定的降解
作用袁频率越大尧功率越大尧作用时间越长降解作用越
强咱员苑 原 员愿暂 遥 为避免超声波对 匀粤 的降解造成产品提取
率的降低和品质的变化故不再提高超声波的功率袁因
此选择 圆园园宰遥
圆郾 员郾 缘摇 超声处理时间对 匀粤 得率的影响 摇 由图 缘 可
知袁随着超声时间的延长 匀粤 得率呈现先增加后降低
的趋势遥 当处理时间 员缘皂蚤灶 内袁随着时间的延长 匀粤
的得率明显提高曰但当超声波处理时间大于 员缘皂蚤灶 时袁
匀粤的得率开始下降袁长时间的超声处理会导致的 匀粤
的降解袁降低酶的活性袁因此时间过度延长反而使得
匀粤的得率下降遥 美国专利报道院单独利用超声波处
愿源源员
摇 愿 期 超声波辅助酶解法提取罗非鱼眼透明质酸工艺条件
图 源摇 超声波功率对 匀粤得率的影响
云蚤早援 源摇 耘枣枣藻糟贼 燥枣 怎造贼则葬泽燥灶蚤糟 责燥憎藻则 燥灶 贼澡藻 赠蚤藻造凿 燥枣 匀粤
图 缘摇 超声处理时间对 匀粤得率的影响
云蚤早援 缘摇 耘枣枣藻糟贼 燥枣 哉造贼则葬泽燥灶蚤糟 贼则藻葬贼皂藻灶贼
贼蚤皂藻 燥灶 贼澡藻 赠蚤藻造凿 燥枣 匀粤
理 匀粤 圆园皂蚤灶左右对其降解较小咱员怨暂 遥 因此综合考虑选
择超声处理 员缘皂蚤灶遥
圆郾 圆摇 超声协助酶解提取透明质酸的正交试验
从表 圆 极差分析可看出酶水解时间对 匀粤得率的
影响最大袁酶解温度次之袁酶用量对 匀粤的提取影响最
小袁这与张丽媛等咱圆园暂的研究差异较大袁在其研究中酶
用量对 匀粤的提取影响最大袁推测原因为本研究中超
声波显著地增强酶的作用效率袁使得酶用量不再是影
响 匀粤得率的主要因素袁综上得出最优组合为院酶水解
时间 猿澡尧酶解温度 源园益尧责匀值 怨尧酶用量 远 园园园哉窑早 原员袁
通过验证性试验可知利用最佳组合提取透明质酸的平
均得率为 员员郾 源源豫 遥
圆郾 猿摇 离子交换层析法对透明质酸粗品的纯化
在线性洗脱的基础上选择浓度为 园郾 圆源皂燥造窑蕴 原员袁
园郾 源缘皂燥造窑蕴 原员和 员郾 缘 皂燥造窑蕴 原员氯化钠进行分步梯度洗
脱袁结果如图 远遥
表 圆摇 正交试验方案和结果
栽葬遭造藻 圆摇 韵则贼澡燥早燥灶葬造 贼藻泽贼 泽糟澡藻皂藻 葬灶凿 则藻泽怎造贼泽
实验号
栽藻泽贼 灶怎皂遭藻则 粤 月 悦 阅
匀粤得率
再蚤藻造凿 燥枣 匀粤 辕 豫
员 员 员 员 员 苑郾 员园园
圆 员 圆 圆 圆 员园郾 圆缘园
猿 员 猿 猿 猿 苑郾 圆园园
源 圆 员 圆 猿 愿郾 圆缘园
缘 圆 圆 猿 员 员园郾 员缘园
远 圆 猿 员 圆 缘郾 源缘园
苑 猿 员 猿 圆 愿郾 苑缘园
愿 猿 圆 员 猿 源郾 圆缘园
怨 猿 猿 圆 员 员郾 圆园园
軃噪员 愿郾 员愿猿 愿郾 园猿猿 缘郾 远园园 远郾 员缘园
軃噪圆 苑郾 怨缘园 愿郾 圆员苑 远郾 缘远苑 愿郾 员缘园
軃噪猿 源郾 苑猿猿 源郾 远员苑 愿郾 苑园园 远郾 缘远苑
砸 猿郾 源缘园 猿郾 远园园 猿郾 员园园 圆郾 园园园
主次因素
孕则蚤皂葬则赠鄄泽藻糟燥灶凿葬则赠
枣葬糟贼燥则泽
月 跃 粤 跃 悦 跃 阅
最优组合
韵责贼蚤皂葬造 糟燥皂遭蚤灶葬贼蚤燥灶
粤员月圆悦猿阅圆
摇 摇 由图 远 可知袁透明质酸得到很好的分离袁经梯度洗
脱后在 圆员园灶皂处有 猿 个对称的洗脱峰袁依次命名为峰
葬尧峰 遭尧峰 糟袁其中峰 葬面积较大远远大于峰 遭尧糟袁这与
卢佳芳等咱圆员暂人的研究相似袁其利用类似方法得到两种
分子量大小不同的 匀粤 组分曰峰 葬尧峰 糟 处无蛋白的吸
收峰袁峰 遭处的物质在 圆远园尧圆愿园灶皂 仍有微量的紫外吸
收袁此部分物质可能是糖蛋白袁因有化学键的作用使得
其无法分开遥 因此袁离子交换层析法对透明质酸的纯
化效果较好袁收集峰 葬可得到高纯度的透明质酸袁回收
率为 怨圆郾 缘圆豫 袁产品的纯度为 怨苑郾 源苑豫 遥
圆郾 源摇 透明质酸的相对分子量及光谱分析
圆郾 源郾 员摇 透明质酸的相对分子量摇 用 园郾 员皂燥造窑蕴 原员 晕葬悦造
配制浓度分别为 园郾 缘尧员尧圆尧猿早窑蕴 原员透明质酸溶液袁利用
乌氏粘度计测量流出时间渊测量 猿 次求平均值冤袁按方
法 员郾 圆郾 缘 处理得到以下线性关系遥
由图 苑 可知袁透明质酸的特性粘度为 猿郾 园园远皂蕴窑
早 原员袁根据式渊猿冤计算得透明质酸的分子量约为 员园园
运阅葬袁分子量略大于孙智华等人利用泥鳅粘液制备得
到的透明质酸咱圆圆暂 遥
怨源源员
核摇 农摇 学摇 报 圆愿 卷
图 远摇 匀粤离子交换层析洗脱曲线
云蚤早援 远摇 耘造怎贼蚤燥灶 责则燥枣蚤造藻 燥枣 匀粤 遭赠 陨燥灶 藻曾糟澡葬灶早藻 糟澡则燥皂葬贼燥早则葬责澡赠
图 苑摇 透明质酸的比浓粘度和溶液
浓度之间的关系
云蚤早援 苑摇 栽澡藻 则藻造葬贼蚤燥灶泽澡蚤责 遭藻贼憎藻藻灶 泽燥造怎贼蚤燥灶
糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶 葬灶凿 则藻凿怎糟藻凿 增蚤泽糟燥泽蚤贼赠 燥枣 匀粤
圆郾 源郾 圆摇 透明质酸的紫外光谱摇 利用分光光度计对透
明质酸进行紫外扫描袁得到紫外光谱袁从图 愿 可看出袁
样品在 圆愿园 灶皂处基本无紫外吸收袁在 圆远园 灶皂 有微弱
的吸收峰袁由于本研究透明质酸的提取方法为蛋白酶
酶解袁因此推测此峰为多肽的吸收峰袁即产品中可能含
有少量的多肽曰样品在 圆员园 灶皂 处有最大光吸收袁为透
明质酸的吸收峰遥
圆郾 源郾 猿摇 透明质酸的红外光谱摇 如图 怨 所示袁样品的红
外吸收光谱在 猿员怨源郾 远苑糟皂 原员处有较明显的吸收峰袁此
波数为羟基伸缩振动的特征吸收峰袁说明样品具有多
羟基结构曰在波数 员远源远郾 怨猿糟皂 原员尧员缘缘远郾 圆怨糟皂 原员处有要悦
韵尧要悦要晕的伸缩振动和 晕鄄匀弯曲震动的特征吸收
峰袁说 明 样 品 中 含 有 乙 酰 氨 基 结 构曰 在 波 数
图 愿摇 匀粤紫外扫描图
云蚤早援 愿摇 哉灾 泽责藻糟贼则葬 燥枣 匀粤
员源园源郾 园愿糟皂 原员尧员猿园猿郾 员猿糟皂 原员处有 韵 悦要韵 的伸缩振
动以及羟基的弯曲震动的吸收峰袁说明样品具有糖醛
酸结构曰在波数 圆怨圆园郾 猿愿糟皂 原员处有 原 悦匀猿 的伸缩振动
吸收峰袁表明具有甲基结构遥 采用本研究工艺提取的
透明质酸和透明质酸标准品的红外吸收基本一致袁在
图谱的特征区和指纹区均具有类似的吸收波数和吸收
强度遥
猿摇 讨论
本研究采用超声波辅助酶解法进行提取袁同单纯
的酶解提取相比 匀粤的得率有很大的提高遥 原因在于
以下几点院超声波具有机械效应袁可以加速物质的扩
散袁因而促进了酶和糖蛋白的结合袁提高了酶促反应速
率及酶解效果袁使得酶促反应更加充分曰适宜功率的超
声波可以使得酶的活力有所提高袁从而增加酶促反应
园缘源员
摇 愿 期 超声波辅助酶解法提取罗非鱼眼透明质酸工艺条件
图 怨摇 匀粤的红外光谱图
云蚤早援 怨摇 云栽鄄陨砸 泽责藻糟贼则葬 燥枣 匀粤
效率袁朱少娟等咱圆猿暂人研究表明在超声波的功率 员愿园宰
和 圆圆缘 宰的条件下袁超声处理 员园皂蚤灶 胰蛋白酶 运皂 值
减小袁灾皂增大袁酶和底物的亲和力增加曰同时超声波
的作用也促进了 匀粤 的溶解袁从而使得透明质酸的提
取效果进一步增加遥
在超声波的作用下使得提取 匀粤的时间及酶的用
量大大降低了袁这样不仅降低了提取的成本同时也减
少了提取过程中对 匀粤的损害遥 本研究透明质酸的得
率为 员员郾 源源豫 袁略高于张丽媛等咱圆园暂人利用乌贼眼提取
匀粤 时的得率渊员园郾 苑园豫 冤袁明显高于赵玉红等咱圆源暂 尧沙
坤咱 圆缘暂分别利用鸡蛋壳和林蛙皮提取 匀粤 的得率
渊员郾 猿猿豫 袁员郾 圆豫 冤遥 造成这些差距的原因可能是院长时
间的处理会使得酶解液易受到细菌的污染袁这样就会
造成细菌对 匀粤的降解袁从而使得 匀粤 分子量下降袁低
分子量的 匀粤在纯化过程中容易损失袁造成得率下降袁
如赵玉红等咱圆源暂提取酶水解时间为 苑澡尧温度为 缘园益袁本
研究的酶水解时间为 猿澡尧温度为 源缘益袁因试验因素引
起的降解比前者小遥 酶用量的大小以及酶种类也会对
匀粤 得率有较大影响袁张丽媛等咱圆园暂 的酶用量为
愿 圆园园哉窑早 原员袁赵玉红等咱圆源暂的酶用量为愿 园园园哉窑早 原员袁卢
佳芳等咱圆员暂酶的用量为 源豫 袁酶用量均比本研究大袁但
提取效果却小于本研究遥
综上可知袁利用超声波辅助酶解法提取 匀粤 不仅
使得产品的得率升高袁而且能降低提取剂的用量袁在透
明质酸的提取生产方面有较大的应用价值遥
源摇 结论
本研究通过单因素试验尧正交试验得到从罗非鱼
眼中提取透明质酸的最佳工艺条件为院在酶解温度
源园益尧责匀值 怨尧酶用量 远 园园园 哉窑早 原员的条件下袁先利用
圆园园宰和 猿缘运匀扎的超声波处理 员缘皂蚤灶袁然后水浴震荡酶
解提取 猿澡袁通过该工艺透明质酸的得率为 员员郾 源源豫 遥
采用季铵盐络合法尧离子交换层析法对透明质酸粗品
进行纯化得到高纯度的透明质酸袁其纯度达到
怨苑郾 源苑豫 袁利用粘度法测量透明质酸相对分子量为
员园园噪阅葬遥 通过紫外光谱尧红外光谱对其进行分析表明
采用该工艺提取纯化的产品纯度高袁无蛋白尧核酸等杂
质曰产品和标准品的红外光谱基本一致袁证实所提取到
的成分为透明质酸产品遥
参考文献院
咱 员 暂摇 耘怎灶 允 韵袁 运蚤贼葬藻 孕袁 运蚤 杂 运袁 允蚤泽藻燥噪 运袁 允藻燥灶早 粤 再葬灶早袁 允蚤 匀 运袁 酝蚤灶
再 蕴袁 粤造造葬灶 杂 匀袁 杂藻蚤 运 匀援 栽葬则早藻贼 泽责藻糟蚤枣蚤糟 葬灶凿 造燥灶早鄄葬糟贼蚤灶早 凿藻造蚤增藻则赠 燥枣
责则燥贼藻蚤灶袁 责藻责贼蚤凿藻袁 葬灶凿 灶怎糟造藻燥贼蚤凿藻 贼澡藻则葬责藻怎贼蚤糟泽 怎泽蚤灶早 澡赠葬造怎则燥灶蚤糟 葬糟蚤凿
凿藻则蚤增葬贼蚤增藻泽咱允暂 援 允燥怎则灶葬造 燥枣 悦燥灶贼则燥造造藻凿 砸藻造藻葬泽藻袁 圆园员园袁 员源员渊员冤院 圆 原
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