全 文 ：摇 核 农 学 报摇 圆园员员袁圆缘渊缘冤院园愿怨圆 耀 园愿怨苑允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员员冤园缘鄄园愿怨圆鄄园远
植酸酶根特异表达载体的构建及大豆转化
李桂兰员 摇 乔亚科员 摇 李明刚圆 摇 崔姗姗员 摇 乔摇 潇猿 摇 乔坤艳圆
渊员郾 河北科技师范学院生命科技学院袁河北 昌黎摇 园远远远园园曰圆郾 南开大学 生命科学学院袁天津摇 猿园园园苑员曰
猿郾 上海大学袁材料科学与工程学院袁上海摇 圆园园园苑圆冤
摘摇 要院应用 孕悦砸方法分别从胡萝卜基因组中扩增出 怨远遭责 的外展蛋白信号肽编码序列片段袁从拟南芥
基因组中扩增出 员源缘源遭责的 责赠噪员园 启动子片段袁用 砸栽鄄孕悦砸方法从无花果曲霉渊粤泽责藻则早蚤造造怎泽 枣蚤糟怎怎皂猿郾 源猿圆圆冤
中扩增出 责澡赠粤基因袁长 员猿源苑遭责遥 然后袁分别克隆到 责酝阅员愿鄄栽载体遥 应用已设计的限制酶切位点袁通过 缘
个中间载体将 猿 段 阅晕粤片段连接构成 圆郾 怨噪遭的表达单元 孕责赠噪员园鄄杂鄄责澡允粤渊运杂粤冤袁将 运杂粤片段插入初始
载体 责悦鄄郧耘晕耘砸粤蕴袁构建成植酸酶根特异表达载体 责孕悦鄄运杂粤遥 利用农杆菌介导法将无花果曲霉植酸酶
基因 责澡赠粤转入到栽培大豆品种吉林 猿缘 中袁在大豆转基因植株中正确表达袁产生有活性的植酸酶袁且能
分泌到根外遥 栽猿 代植株根系分泌植酸酶活性比未转化植株提高了 圆 耀 源 倍遥
关键词院外展蛋白信号肽曰责赠噪员园 启动子曰责澡赠粤基因曰大豆曰转基因曰植酸酶曰根特异表达
悦韵晕杂栽砸哉悦栽陨韵晕 韵云 栽匀耘 灾耘悦栽韵砸 韵云 孕匀再栽粤杂耘 郧耘晕耘 杂孕耘悦陨云陨悦
耘载孕砸耘杂杂陨韵晕 陨晕 砸韵韵栽杂 粤晕阅 栽砸粤晕杂云韵砸酝粤栽陨韵晕 韵云 杂韵再月耘粤晕
蕴陨 郧怎蚤鄄造葬灶员 摇 匝陨粤韵 再葬鄄噪藻员 摇 蕴陨 酝蚤灶早鄄早葬灶早圆 摇 悦哉陨 杂澡葬灶鄄泽澡葬灶员 摇 匝陨粤韵 载蚤葬燥猿 摇 匝陨粤韵 运怎灶鄄赠葬灶圆
渊员郾 悦燥造造藻早藻 燥枣 造蚤枣藻驭 栽藻糟澡灶燥造燥早赠袁 匀藻遭藻蚤 晕燥则皂葬造 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠 燥枣 杂糟蚤藻灶糟藻 驭 栽藻糟澡灶燥造燥早赠袁 悦澡葬灶早造蚤袁 匀藻遭藻蚤摇 园远远远园园曰 圆郾 悦燥造造藻早藻 燥枣 造蚤枣藻 泽糟蚤藻灶糟藻袁
晕葬灶噪葬蚤 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠袁栽蚤葬灶躁蚤灶摇 猿园园园苑员曰 猿郾 杂糟澡燥燥造 燥枣 皂葬贼藻则蚤葬造泽 泽糟蚤藻灶糟藻 葬灶凿 藻灶早蚤灶藻藻则蚤灶早袁 杂澡葬灶早澡葬蚤 哉灶蚤憎藻则泽蚤贼赠袁 杂澡葬灶早澡葬蚤摇 圆园园园苑圆冤
粤遭泽贼则葬糟贼院粤 怨远遭责 泽藻择怎藻灶糟藻 藻灶糟燥凿蚤灶早 贼澡藻 藻曾贼藻灶泽蚤燥灶 泽蚤早灶葬造 责藻责贼蚤凿藻 憎葬泽 糟造燥灶藻凿 遭赠 孕悦砸 枣则燥皂 糟葬则则燥贼渊阅葬怎糟怎泽尧糟葬则燥贼葬 蕴 增葬则援
泽葬贼蚤增怎泽 匀 燥枣枣皂冤 早藻灶燥皂蚤糟 阅晕粤援 陨贼 憎葬泽 蚤凿藻灶贼蚤糟葬造 贼燥 贼澡藻 泽藻择怎藻灶糟藻 则藻责燥则贼藻凿 渊 郧藻灶月葬灶噪 葬糟糟藻泽泽蚤燥灶 晕燥院 载韵圆愿苑猿冤援 粤
责则燥皂燥贼藻则 枣则葬早皂藻灶贼 燥枣 员源缘源遭责 造燥灶早 燥枣 孕赠噪员园 早藻灶藻 憎葬泽 糟造燥灶藻凿 遭赠 孕悦砸 枣则燥皂 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽 贼澡葬造蚤葬灶葬 早藻灶燥皂蚤糟 阅晕粤援 粤 糟阅晕粤
燥枣 责澡赠粤 早藻灶藻 憎葬泽 糟造燥灶藻凿 枣则燥皂 粤泽责藻则早蚤造造怎泽 枣蚤糟怎怎皂 猿郾 源猿圆圆 遭赠 砸栽鄄孕悦砸袁 憎澡蚤糟澡 糟燥皂责则蚤泽藻凿 燥枣 员猿源苑遭责 憎蚤贼澡燥怎贼 泽蚤早灶葬造 责藻责贼蚤凿藻
糟燥凿蚤灶早 泽藻择怎藻灶糟藻援 粤灶 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 糟葬泽泽藻贼贼藻 孕责赠噪员园鄄泽鄄责澡赠粤 渊运杂粤冤袁 糟燥皂责则蚤泽蚤灶早 燥枣 贼澡藻 责赠噪员园 责则燥皂燥贼藻则 枣则葬早皂藻灶贼袁 贼澡藻 糟葬则则燥贼
藻曾贼藻灶泽蚤燥灶 泽蚤早灶葬造 责藻责贼蚤凿藻 糟燥凿蚤灶早 泽藻择怎藻灶糟藻 葬灶凿 贼澡藻 糟阅晕粤 燥枣 责澡赠粤 早藻灶藻袁 憎葬泽 泽怎糟糟藻泽泽枣怎造造赠 糟燥灶泽贼则怎糟贼藻凿 贼澡则燥怎早澡 枣蚤增藻
贼则葬灶泽蚤贼蚤燥灶葬造 责造葬泽皂蚤凿泽援 栽澡藻 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 责造葬泽皂蚤凿 燥枣 责孕悦鄄运杂粤 憎葬泽 糟燥灶泽贼则怎糟贼藻凿 枣蚤灶葬造造赠 遭赠 蚤灶泽藻则贼蚤灶早 运杂粤 枣则葬早皂藻灶贼 蚤灶贼燥 燥则蚤早蚤灶葬造
增藻糟贼燥则 责悦鄄郧耘晕耘砸粤蕴援 栽澡藻 责澡赠粤 早藻灶藻 枣则燥皂 粤泽责藻则早蚤造造怎泽 枣蚤糟怎怎皂 憎葬泽 泽怎糟糟藻泽泽枣怎造造赠 贼则葬灶泽枣藻则皂藻凿 蚤灶贼燥 泽燥赠遭藻葬灶 渊郧造赠糟蚤灶藻 皂葬曾 蕴援
酝藻则则援 糟援 增援 允蚤造蚤灶 猿缘冤 增蚤葬 粤早则燥遭葬糟贼藻则蚤怎皂 贼怎皂藻枣葬糟蚤藻灶泽鄄皂藻凿蚤葬贼藻凿 皂藻贼澡燥凿袁 憎澡蚤糟澡 憎葬泽 葬遭造藻 贼燥 遭藻 藻曾责则藻泽泽藻凿 蚤灶 贼澡藻 则藻糟蚤责蚤藻灶贼
泽燥赠遭藻葬灶 糟怎造贼蚤增葬则援 栽澡藻 蚤灶贼则燥凿怎糟贼蚤燥灶 燥枣 枣怎灶早葬造 责澡赠贼葬泽藻 枣则燥皂 粤泽责藻则早蚤造造怎泽 枣蚤糟怎怎皂 则藻泽怎造贼藻凿 蚤灶 葬遭燥怎贼 圆 耀 源鄄枣燥造凿 蚤灶糟则藻葬泽藻 燥枣
责澡赠贼葬泽藻 葬糟贼蚤增蚤贼赠 泽藻糟则藻贼藻凿 枣则燥皂 则燥燥贼泽 蚤灶 贼澡藻 栽猿早藻灶藻则葬贼蚤燥灶 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 责造葬灶贼泽 糟燥皂责葬则藻凿 贼燥 贼澡藻 灶燥灶鄄贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 糟燥灶贼则燥造援
运藻赠 憎燥则凿泽院糟葬则则燥贼 藻曾贼藻灶泽蚤燥灶 泽蚤早灶葬造 责藻责贼蚤凿藻 糟燥凿蚤灶早 泽藻择怎藻灶糟藻曰 孕赠噪员园责则燥皂燥贼藻则曰 责澡赠粤曰 郧造赠糟蚤灶藻 皂葬曾 蕴援 酝藻则则曰 贼则葬灶泽早藻灶藻曰
责澡赠贼葬泽藻曰 泽责藻糟蚤枣蚤糟 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 蚤灶 则燥燥贼
收稿日期院圆园员园鄄员圆鄄圆圆摇 接受日期院圆园员员鄄园源鄄圆源
基金项目院国家科技部转基因生物新品种培育重大科技专项渊圆园园怨在载园愿园园源鄄园园源月袁 圆园园怨在载园愿园园源鄄园园员月冤袁 河北省自然科学基金 渊悦圆园园怨园园园愿远愿冤
作者简介院李桂兰渊员怨远猿鄄冤袁女袁河北肃亭人袁博士袁教授袁研究方向为植物基因工程遥 耘鄄皂葬蚤造院造早造远猿岳 员圆远援 糟燥皂
圆怨愿
摇 缘 期 植酸酶根特异表达载体的构建及大豆转化
摇 摇 植酸盐渊孕澡赠贼蚤灶冤是一种肌醇六磷酸的复合盐袁是
磷和各种金属离子的重要贮藏形态袁大量存在于植物
种子及花粉粒中咱员袁圆暂 遥 植酸酶是催化植酸及其盐水解
成低磷酸化的肌醇衍生物和磷酸渊或磷酸盐冤的一类
酶的总称袁已发现植物尧多种微生物包括酵母尧曲霉尧细
菌等都能产生植酸酶咱猿暂 遥 责澡赠粤 编码的植酸酶分解植
酸盐形成的终产物均是单磷酸肌醇和无机正磷酸遥
不同土壤中含 圆园豫 耀 圆缘豫的有机磷袁多以植酸盐
的形式存在袁植酸态磷约占土壤中有机磷总量的 猿园豫
耀愿园豫 咱源暂 袁并能够通过生物小循环不断补充遥 但是植
酸盐类大多不溶于水袁不能被植物利用袁只有被植酸酶
水解为无机磷之后才能为作物吸收利用咱缘暂 遥
研究表明袁植物无论在砂培还是水培条件下袁都能
稳定利用植酸态磷咱远暂 遥 一些植物在缺磷胁迫条件下
可通过分泌大量酸性磷酸酶和植酸酶等途径高效利用
土壤有机磷咱苑袁愿暂 遥 将外源植酸酶基因转入植物袁植酸
酶基因能稳定表达咱怨暂 袁在信号肽的引导下植酸酶分泌
到根外分解植酸态磷供植物利用咱员园暂 遥 外源基因组织
特异表达可以更经济有效地发挥目的基因的作用遥
孕赠噪员园 是从拟南芥中分离的一个黑芥子酶基因袁在拟
南芥的根和下胚轴中特异性表达咱员员暂 遥 孕赠噪员园 启动子
是迄今唯一在成熟植株中仅在根部表达的启动子咱员圆暂 遥
因此采取转基因策略袁将植酸酶基因转至农作物袁使其
在根系中特异表达袁增加根际植酸酶的分泌袁提高作物
自身利用土壤有机磷的能力袁将为农作物有效利用土
壤有机磷资源开辟一条经济有效的途径袁对维持农业
生态系统的良性循环袁以及农业可持续发展有重要意
义遥
本课 题 组 从 无 花 果 曲 霉 渊 粤泽责藻则早蚤造造怎泽 枣蚤糟怎怎皂
猿郾 源猿圆圆冤中用 砸栽鄄孕悦砸获得不含信号肽的 责澡赠粤 基因的
糟阅晕粤袁并在酵母中表达袁产生了有活性的植酸酶咱员猿暂 遥
另外袁从拟南芥中克隆了 责赠噪员园 启动子片段咱员源暂 遥 本研
究用克隆的胡萝卜外展蛋白信号肽编码序列尧责赠噪员园
启动子片段和无花果曲霉 责澡赠粤 基因 糟阅晕粤 连接构成
一个表达单元袁构建植酸酶根特异表达载体袁并转化大
豆袁以期为培育高效利用土壤有机磷的大豆品种打下
基础遥
员摇 材料和方法
员郾 员摇 材料
员郾 员郾 员 摇 菌种和质粒载体 摇 无花果曲霉 渊 粤泽责藻则早蚤造造怎泽
枣蚤糟怎怎皂猿郾 源猿圆圆冤 购自中科院微生物研究所袁责酝阅员愿鄄栽购
自 栽葬噪葬砸葬 月蚤燥贼藻糟澡灶燥造燥早赠 渊阅葬造蚤葬灶冤 悦燥援 袁蕴贼凿曰载体 孕悦鄄
郧耘晕耘砸粤蕴 由中国科学院遗传与发育生物研究所朱桢
研究员赠送遥
员郾 员郾 圆摇 植物材料 摇 胡萝卜渊阅葬怎糟怎泽援 糟葬则燥贼葬 蕴援 增葬则援
泽葬贼蚤增怎泽 匀燥枣枣皂冤为本实验室种植袁拟南芥 渊 粤则葬遭蚤凿燥责泽蚤泽
贼澡葬造蚤葬灶葬冤 悦燥造怎皂遭蚤葬生态型袁由南开大学生命科学学院
王宁宁教授赠送遥
员郾 圆摇 方法
员郾 圆郾 员摇 植物总 阅晕粤的制备摇 胡萝卜总 阅晕粤的制备院
取胡萝卜直根袁液氮研磨后用 悦栽粤月法提取遥
拟南芥总 阅晕粤的制备院取拟南芥的叶片袁液氮研
磨后用 杂阅杂法提取咱员缘暂 遥
员郾 圆郾 圆摇 孕悦砸 扩增及测序 摇 胡萝卜外展蛋白渊 糟葬则则燥贼
藻曾贼藻灶泽蚤灶冤基因信号肽编码序列扩增院按文献咱员远暂发表
的序列渊郧藻灶月葬灶噪 注册号院载韵圆愿苑猿冤设计一对引物袁上
游引入 杂皂葬 陨袁下游引入 载遭葬 陨限制酶切位点遥
上游引物院缘忆鄄早糟早 糟糟糟 早早早 葬贼早 早早葬 葬早葬 葬贼贼 早糟贼 葬早鄄猿忆
下游引物院缘忆鄄糟早糟 贼糟贼 葬早葬 葬早糟 贼早贼 早早贼 贼贼糟 早早葬 葬早糟鄄猿忆
孕悦砸 反应体系 渊 缘园滋造 冤院胡萝卜 阅晕粤 圆滋造 渊约
员园园灶早冤袁 凿晕栽孕 圆园园滋皂燥造 辕 蕴袁上游尧下游引物终浓度
员滋皂燥造 辕 蕴袁责枣怎 阅晕粤聚合酶 猿哉遥 反应参数院怨源益预变性
缘皂蚤灶曰怨源益变性 员皂蚤灶袁缘源益退火 员皂蚤灶 袁苑圆益延伸 源园泽袁
猿园 个循环曰苑圆益最后延伸 员园皂蚤灶遥
拟南芥 责赠噪员园 基因启动子片段的扩增按文献咱员源暂
方法进行遥
植酸酶 责澡赠粤基因的克隆则参照文献咱员猿暂方法进
行遥
员郾 圆郾 猿摇 测序摇 阳性克隆菌株质粒 阅晕粤由上海生物工
程技术服务有限公司测序遥
员郾 圆郾 源摇 大豆遗传转化和抗性植株的再生 摇 按文献
咱员苑暂方法进行遥
员郾 圆郾 缘摇 转基因植株的分子检测摇 孕悦砸检测院取卡那霉
素抗性再生植株的叶片袁 杂阅杂 法提取大豆基因组
阅晕粤袁扩增 责澡赠粤基因遥
杂燥怎贼澡藻则灶印迹杂交院猿圆 孕 标记 责澡赠粤 基因片段做探
针袁方法按博大生物公司随机引物探针标记试剂盒进
行遥 提取大豆 栽员 植株的基因组 阅晕粤袁用 耘糟燥砸陨进行酶
切过夜袁电泳尧转膜尧杂交参考文献咱员缘暂遥
员郾 圆郾 远摇 转化植株根系分泌植酸酶测定摇 根系分泌植
酸酶的制备院将转基因植株种子渊栽猿 冤和对照植株的种
子播种于灭菌的蛭石中渊含水量 苑园豫 冤袁出苗后袁视蛭
石的湿度补充不含磷的 匀燥早造葬灶凿营养液遥 培养 圆园凿袁取
出植株收集根系分泌的酶液袁方法参考 蕴蚤 和 韵泽葬噪蚤
渊员怨怨苑冤 咱愿暂 袁测量透析袋内酶液的体积后袁进行植酸酶
活性测定袁并测量根系干重袁每个株系重复 猿 次袁每次
猿怨愿
核摇 农摇 学摇 报 圆缘 卷
重复测定 猿 株遥
植酸酶活性测定院植酸酶活性以底物植酸钠被水
解时释放的无机磷酸的量来表征遥 一个酶活力单位
渊哉冤定义为在 猿苑益尧责匀 缘郾 园 条件下袁每分钟释放 员灶皂燥造
无机磷酸所需要的酶蛋白量遥 测定方法参考 粤皂藻泽
渊员怨怨远冤 咱员愿暂 遥
大豆根系分泌植酸酶活力以单位根干重分泌的植
酸活性单位渊哉 辕 早冤表示遥
大豆根系分泌植酸酶活力渊哉 辕 早冤 越收集酶液体
积渊皂造冤 伊测得酶液的酶活性渊哉 辕 皂造冤 辕根干重 渊早冤遥
圆摇 结果
圆郾 员摇 基因序列片段克隆
应用所设计引物袁以胡萝卜总 阅晕粤为模板扩增出
了约 员园园遭责的片段袁并将此片段克隆到 责酝阅员愿鄄栽 载体
中袁构建重组质粒 责酝阅员愿鄄杂遥 对阳性转化子进行 孕悦砸
鉴定袁并测序遥 结果表明袁该片段长 怨远遭责袁与已发表的
外展蛋白信号肽编码序列完全相同遥 从拟南芥基因组
中扩增出 员源缘源遭责 的 责赠噪员园 启动子片段袁序列分析表
明袁该片段与已发表序列同源性达到 怨愿豫 咱员源暂 遥 用 砸栽鄄
孕悦砸方法从无花果曲霉中扩增出一条约 员郾 源噪遭的特异
性条带袁阅晕粤序列测定表明袁目的片段为不含信号肽
的植酸酶编码序列袁全长 员猿源苑遭责袁编码 源源愿 个氨基酸遥
该基 因 序 列 已 在 郧藻灶月葬灶噪 注 册 渊 注 册 号 为院
粤云缘猿苑猿源源冤遥
圆郾 圆摇 植物表达载体的构建
首先将 责澡赠粤 基因从质粒 责酝阅员愿鄄责澡赠粤 中以 载遭葬 陨
和 运责灶 陨切出袁将 责澡赠粤片段克隆到 责酝阅员愿鄄杂 质粒胡萝
卜外展蛋白信号肽编码序列 阅晕粤 片段之后袁构建成
责酝阅员愿鄄杂粤 中间载体遥 然后用 匀蚤灶凿 芋和 杂皂葬玉将
责赠噪员园 启动子片段从质粒 责酝阅员愿鄄责赠噪 切出袁插入到
责酝阅员愿鄄杂粤中胡萝卜外展蛋白信号肽编码序列 阅晕粤
片段之前袁构建 责酝阅员愿鄄运杂粤中间载体遥 经过此 猿 个中
间载体最终将 责赠噪员园 启动子片段尧胡萝卜外展蛋白信
号肽编码序列及植酸酶基因 猿 个片段连接渊图 员冤袁构
成长 圆郾 怨噪遭的 孕责赠噪员园鄄杂 鄄责澡赠粤渊简称 运杂粤冤表达单元遥
酶切尧孕悦砸鉴定和测序结果均证明了 猿 个片段已按正
确方向连接遥
用 匀蚤灶凿 芋和 运责灶 陨将已连接的 猿 个片段整体切下
插入载体 孕悦鄄郧耘晕耘砸粤蕴的 匀蚤灶凿 芋和 运责灶 陨位点之间袁
构建出最终的植物表达载体 责孕悦鄄运杂粤 渊图 员冤遥 孕悦砸
鉴定结果表明 运杂粤已正确插入 孕悦鄄郧耘晕耘砸粤蕴 的 匀蚤灶凿
陨陨陨 辕 运责灶 陨位点渊图 圆冤遥
圆郾 猿摇 大豆转基因植株的获得
将表达载体 责孕悦鄄运杂粤 转入农杆菌 蕴月粤源源园源 获得
工程菌袁用于大豆转化遥 以栽培大豆品种吉林 猿缘 的子
叶节为外植体进行农杆菌转化袁经卡那霉素抗性筛选袁
抗性芽经过生根尧移栽得到 栽园 代 孕悦砸 和 杂燥怎贼澡藻则灶 凿燥贼遭造燥贼阳性植株 愿 株袁最终 远 株获得 栽员 代种子遥 继续对栽员 植株进行 孕悦砸 检测和 杂燥怎贼澡藻则灶 杂交检测袁结果显
示袁其中 圆 株为阳性植株渊图 猿冤遥
圆郾 源摇 转化植株根系分泌植酸酶能力分析
选择 缘 个 栽猿 代株系中的 孕悦砸 阳性植株渊 允员袁允缘袁允远袁允员苑和 允员愿冤进行根系分泌植酸酶活性的测定袁其中袁允员
和 允缘 来自于同一个 栽员 植株袁允远尧允员苑和 允员愿来自于同一个栽员 植株遥 结果表明袁栽猿 代转基因植株根系分泌植酸酶
的能力显著高于阴性对照植株袁为对照的 圆 耀 源 倍袁以
株系 允远 最高袁为对照的 源 倍渊表 员冤遥 不同 栽员 植株的后
代之间根系分泌植酸酶能力差异显著袁可能是由于植
酸酶基因在转基因植株的插入位点不同引起的遥 来自
于同一 栽员 植株的 允远 和 允员苑尧允员愿之间根系分泌植酸能力
的差异达到显著水平袁可能是由于 栽猿 代尚不纯合所
致遥
表 员摇 栽猿 代转化植株根系分泌植酸酶能力分析
栽葬遭造藻 员摇 杂藻糟则藻贼葬则赠 责澡赠贼葬泽藻 葬糟贼蚤增蚤贼蚤藻泽 枣则燥皂 栽猿 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 泽燥赠遭藻葬灶 责造葬灶贼 则燥燥贼泽
材料
皂葬贼藻则蚤葬造
根干重
则燥燥贼 凿则赠 憎藻蚤早澡贼
渊早冤
收集酶液
泽藻糟则藻贼藻凿 责澡赠贼葬泽藻
泽燥造怎贼蚤燥灶 枣则燥皂 则燥燥贼泽 渊皂造冤
无机磷含量
糟燥灶贼藻灶贼泽 燥枣 孕蚤
渊灶皂燥造 辕 蕴冤
酶液植酸酶活性
责澡赠贼葬泽藻 葬糟贼蚤增蚤贼蚤藻泽 燥枣
责澡赠贼葬泽藻 泽燥造怎贼蚤燥灶渊哉 辕 皂造冤
根系分泌植酸酶活力鄢
责澡赠贼葬泽藻 葬糟贼蚤增蚤贼蚤藻泽
燥枣 则燥燥贼泽渊哉 辕 早冤
对照倍数
枣燥蚤凿燥枣 悦运
允员 园郾 员园圆 苑郾 远缘 愿员苑郾 远愿 员猿郾 远猿 员园圆圆郾 圆缘 月 猿郾 园缘允缘 园郾 员员怨 怨郾 猿 愿源愿郾 源圆 员源郾 员源 员员园缘郾 园远 月 猿郾 猿允远 园郾 员猿愿 怨郾 猿愿 员圆园愿郾 愿员 圆园郾 员缘 员猿远怨郾 远圆 粤 源郾 园怨允员苑 园郾 员园远 怨郾 源怨 缘愿源郾 愿员 怨郾 苑缘 愿苑圆郾 怨园 悦 圆郾 远员允员愿 园郾 员园员 愿郾 圆苑 缘远怨郾 猿远 怨郾 源怨 愿源怨郾 圆猿 悦 圆郾 缘源
悦运 园郾 员园圆 愿郾 远 圆猿愿郾 员 猿郾 怨苑 猿猿源郾 苑猿 阅 原
摇 摇 注院鄢 单位根干重分泌的植酸活性单位渊哉 辕 早冤遥
晕燥贼藻院鄢 孕澡赠贼葬泽藻 葬糟贼蚤增蚤贼赠 燥枣 则燥燥贼泽 渊哉 辕 早冤 蚤灶凿蚤糟葬贼藻泽 责澡赠贼葬泽藻 葬糟贼蚤增蚤贼赠 责藻则 则燥燥贼 凿则赠 憎藻蚤早澡贼援
源怨愿
摇 缘 期 植酸酶根特异表达载体的构建及大豆转化
图 员摇 植酸酶根特异表达载体 责孕悦鄄运杂粤的构建
云蚤早援 员悦燥灶泽贼则怎糟贼蚤燥灶 燥枣 责造葬灶贼 则燥燥贼 责澡赠葬贼葬泽藻 泽责藻糟蚤枣蚤糟 藻曾责则藻泽泽蚤燥灶 责造葬泽皂蚤凿 渊责孕悦鄄运杂粤冤
猿摇 讨论
本研究所用植酸酶基因是从无花果曲霉中克隆的
责澡赠粤基因的 糟阅晕粤袁已能在酿酒酵母中正确转录尧表达
和加工袁在胞内合成有活性的植酸酶袁并且被其自身的
信号肽引导分泌至酵母胞外咱员猿暂 遥 已有报道黑曲霉植
酸酶基因能在烟草尧拟南芥尧苜蓿尧马铃薯尧小麦以及油
菜中稳定表达袁产生有活性的植酸酶咱怨袁员园袁员怨 耀 圆员袁圆猿暂 遥 本
研究结果也说明真菌植酸酶基因能在大豆中表达袁这
一结果为农作物有效利用土壤植酸态磷袁解决磷资源
匮乏展示了一条有效的途径遥
已有研究表明异源信号肽能正确引导蛋白向胞外
分泌袁促进表达产物的糖基化遥 孕藻凿藻则泽藻灶 等分别构建
了含有大麦 葬鄄淀粉酶信号肽序列和无信号肽序列的
责澡赠粤转入小麦袁有信号肽序列的转基因植株种子中植
缘怨愿
核摇 农摇 学摇 报 圆缘 卷
图 圆摇 责孕悦鄄运杂粤重组子的 孕悦砸鉴定
云蚤早援 圆摇 陨凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 运杂粤 蚤灶 责孕悦鄄运杂粤 遭赠 孕悦砸
员院责孕悦鄄运杂粤质粒的 运杂粤 孕悦砸产物曰圆院责孕悦鄄运杂粤质粒的 责澡赠粤 糟阅晕粤
孕悦砸产物曰猿院 责孕悦鄄运杂粤质粒的 责赠噪员园 启动子 孕悦砸 产物曰源院 姿阅晕粤
耘糟燥砸 陨 辕 匀蚤灶凿 睾标准分子量
蕴葬灶藻 员院 孕悦砸 责则燥凿怎糟贼 燥枣 运杂粤 蚤灶 责孕悦鄄运杂粤曰 造葬灶藻 圆院 孕悦砸 责则燥凿怎糟贼 燥枣
责澡赠粤 糟阅晕粤 蚤灶 责孕悦鄄运杂粤曰 造葬灶藻 猿院 孕悦砸 责则燥凿怎糟贼 燥枣 责赠噪员园 责则燥皂燥贼藻则
枣则葬早皂藻灶贼 蚤灶 责孕悦鄄运杂粤曰 造葬灶藻 源院 姿阅晕粤 耘糟燥砸 陨 辕 匀蚤灶凿 睾 皂葬则噪藻则
图 猿摇 栽员 代植株 杂燥怎贼澡藻则灶杂交检测结果
云蚤早援 猿摇 杂燥怎贼澡藻则灶 遭造燥贼贼蚤灶早 责则燥枣蚤造藻
燥枣 栽员 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 责造葬灶贼泽
员 耀 缘院吉林 猿缘 的 栽员 代转基因植株曰远院未转基因吉林 猿缘渊对照冤曰苑院
责孕悦鄄运杂粤质粒曰愿院阅晕粤标准分子量
蕴葬灶藻泽 员 耀 缘院 栽员 贼则葬灶泽早藻灶蚤糟 责造葬灶贼泽 燥枣 允蚤造蚤灶猿缘曰 造葬灶藻 远院 灶燥灶鄄贼则葬灶泽早藻灶蚤糟
糟燥灶贼则燥造 燥枣 允蚤造蚤灶猿缘曰 造葬灶藻 苑院 责燥泽蚤贼蚤增藻 糟燥灶贼则燥造 渊 责造葬泽皂蚤凿 燥枣 责孕悦鄄运杂粤冤曰
造葬灶藻 愿院 姿阅晕粤 耘糟燥砸陨 辕 匀蚤灶凿睾 皂葬则噪藻则
酸酶的活性是无信号肽序列的转基因植株种子的 猿郾 员
倍遥 研究表明袁大麦 琢鄄淀粉酶信号肽促进了表达产物
的糖基化袁有利于酶蛋白向胞外分泌并运输到种子中
进行积累咱圆员暂 遥 孕藻灶等用烟草的 孕砸鄄杂 蛋白信号肽序列
取代了黑曲霉 粤援 灶蚤早藻则的植酸酶基因 责澡赠粤的天然信号
肽序列袁将该基因置于 猿缘杂 启动子的下游袁并转化烟
草袁在转基因的种子中检测到了植酸酶的活性袁其表达
量为种子可溶性蛋白的 员豫 袁该酶分子量约为 远苑噪阅葬袁
比天然黑曲霉植酸酶的分子量 愿缘噪阅葬 小袁可能是由于
糖基化的程度不同引起的咱圆圆暂 遥 粤造葬灶 耘 砸蚤糟澡葬则凿泽燥灶 等
将带 胡 萝 卜 伸 展 蛋 白 信 号 肽 序 列 的 黑 曲 霉
渊晕砸砸蕴猿员猿缘冤植酸酶基因 责澡赠粤 转入拟南芥袁转基因植
株根中植酸酶活性比野生型植株提高 圆园 耀 圆缘 倍袁转基
因植株能有效分解利用培养基中的植酸袁在仅含有植
酸态磷的培养基中生长良好咱员园暂 遥 本研究结果表明袁本
文构建的 运杂粤表达单元中袁胡萝卜伸展蛋白信号肽序
列引导无花果曲霉渊粤泽责藻则早蚤造造怎泽 枣蚤糟怎怎皂猿郾 源猿圆圆冤 责澡赠粤 基
因在大豆中表达的植酸酶分泌至根系细胞胞外遥
责赠噪员园 是一个在拟南芥根和下胚轴中特异表达的
黑芥子酶基因袁责赠噪员园 启动子具有高强度根特异表达
特性咱员员袁员圆暂 遥 本研究结果证明袁拟南芥 责赠噪员园 启动子在
大豆中能有效启动外源基因的表达袁并且本研究室用
责赠噪员园 启动子驱动 早怎泽 基因在番茄实现了根特异性表
达渊研究结果将另文发表冤袁为今后 责赠噪员园 启动子在植
物抗根部病虫害尧改善根的质量及提高营养利用基因
工程中的应用提供了依据遥
根据本研究的结果袁不同后代株系间植酸酶基因
的表达存在差异袁这可能由于不同转化子之间插入位
点不同所造成遥 而来自于同一 栽员 的后代株系 允远尧允员苑尧允员愿之间的差异显著袁可能由于 栽猿 代大豆转基因植株尚
未达到纯合袁孕悦砸阳性株中仍存在着转基因的杂合株
与纯合株袁对植酸酶基因的表达量造成一定的影响遥
孕燥灶泽贼藻蚤燥等对油菜转 责澡赠粤 基因的后代进行研究袁发现
在 栽员 代转基因株的籽粒中植酸酶活力受基因拷贝数
的影响袁其中含单拷贝基因植株的植酸酶活力表现偏
低袁对转基因植株 猿 耀 源 代的酶活性进一步检测发现袁
植酸酶的表达量与 责澡赠粤 的剂量 渊拷贝数冤密切相
关咱圆猿暂 遥 由于本研究测定的株系相对较少袁对不同大豆
转基因后代植酸酶基因的表达效应还有待作进一步分
析袁以为转基因后代的选择及利用提供依据遥
参考文献院
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黑介子酶基因根特特异性表达启动子的克隆咱 允暂 援 河北农业大
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咱员缘暂摇 王冠林袁方宏筠援植物基因工程原理与技术咱酝暂援 北京院科学出
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咱员苑暂摇 李桂兰袁乔亚科袁杨少辉袁靳朝霞袁李明刚援 农杆菌介导大豆子叶
节遗传转化的研究咱允暂 援作物学报袁圆园园缘袁猿员渊圆冤院员苑园 原 员苑远
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渊责任编辑摇 王媛媛冤
苑怨愿