全 文 ：核 农 学 报摇 圆园员缘袁圆怨渊愿冤院员源远源 耀 员源苑园
允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
收稿日期院圆园员源鄄园苑鄄园圆摇 接受日期院圆园员缘鄄园源鄄圆愿
基金项目院现代农业产业技术体系渊悦粤砸杂 原 员员 原 月 原 员园冤袁福建省财政专项要福建省农业科学院科技创新团队项目渊悦载栽阅 原 员 原 员猿园员冤袁福建省省
属公益类科研院所基本科研专项渊圆园员源砸员员园员园员园鄄远冤
作者简介院李华伟袁男袁助理研究员袁主要从事植物病毒检测研究遥 耘鄄皂葬蚤造院 澡憎造责燥贼燥岳 员圆远援 糟燥皂
通讯作者院邱思鑫袁男袁研究员袁主要从事甘薯病虫害防控机理研究遥 耘鄄皂葬蚤造院圆缘圆苑猿缘猿员岳 择择援 糟燥皂
余华袁女袁研究员袁主要从事甘薯病虫害防控技术研究遥 耘鄄皂葬蚤造院赠怎澡怎葬岳 枣葬葬泽援 糟灶遥 同为通讯作者遥
文章编号院员园园园鄄愿缘缘员渊圆园员缘冤园愿鄄员源远源鄄园苑
侵染甘薯的 杂孕悦杂灾尧杂孕灾郧尧杂孕云酝灾多重 砸栽鄄孕悦砸
检测方法的建立及应用
李华伟员 摇 许泳清员 摇 邱思鑫员 摇 刘中华员 摇 邱永祥员 摇 汤摇 浩员 摇 余摇 华圆
渊员 福建省农业科学院作物研究所 辕农业部闽台农作物种质资源利用重点开放实验室袁
福建 福州摇 猿缘园园园猿曰圆 福建省农业科学院中心实验室袁 福建 福州摇 猿缘园园园猿冤
摘摇 要院为建立可同时检测甘薯褪绿矮化病毒渊 杂孕悦杂灾冤尧甘薯 郧 病毒渊 杂孕灾郧冤和甘薯羽状斑驳病毒
渊杂孕云酝灾冤多重 砸栽鄄孕悦砸检测方法袁本文根据 杂孕悦杂灾热激蛋白基因渊澡泽责苑园冤及 杂孕灾郧尧杂孕云酝灾 外壳蛋白基
因渊悦孕冤基因核苷酸序列的保守区域设计特异性引物袁通过引物筛选袁优化多重 砸栽鄄孕悦砸 反应条件袁建立
了能同时检测 杂孕悦杂灾尧杂孕灾郧和 杂孕云酝灾 猿 种病毒的多重 砸栽鄄孕悦砸 检测方法遥 该体系能有效扩增出大小
为 猿园源尧源猿猿尧远园员 遭责 猿 个特异性片段遥 测序结果表明 猿 种病毒与参考序列的一致性达 怨源豫 耀 怨怨豫 遥 应
用建立的多重 砸栽鄄孕悦砸检测方法可稳定尧准确尧灵敏地同时检测单一或复合侵染 猿 种甘薯病毒袁为甘薯
脱毒和病毒病诊断奠定基础遥
关键词院甘薯病毒曰褪绿矮化病毒曰郧病毒曰羽状斑驳病毒曰多重 砸栽鄄孕悦砸曰检测方法
阅韵陨院员园郾 员员愿远怨 辕 躁援 蚤泽泽灶援 员园园鄄愿缘缘员郾 圆园员缘郾 园愿援 员源远源
摇 摇 病毒病可导致甘薯渊 陨责燥皂燥藻葬 遭葬贼葬贼葬泽冤品质尧产量降
低和种性退化袁是甘薯生产上最重要的病害之一遥 甘
薯病毒病在世界甘薯产区均有发生袁目前已报道能侵
染甘薯的病毒有 猿园 余种咱员 原 圆暂 遥 在田间病毒常发生复
合侵染袁使病害对作物产量和品质的影响更加复杂袁由
甘薯羽状斑驳病毒渊 泽憎藻藻贼责燥贼葬贼燥 枣藻葬贼澡藻则赠 皂燥贼贼造藻 增蚤则怎泽袁
杂孕云酝灾冤与甘薯褪绿矮化病毒 渊 泽憎藻藻贼责燥贼葬贼燥 糟澡造燥则燥贼蚤糟
泽贼怎灶贼 增蚤则怎泽袁 杂孕悦杂灾冤复合侵染而引起的甘薯病毒病对
甘薯产量影响极大袁严重时可造成 怨园豫以上的产量损
失袁甚至绝收袁是甘薯上毁灭性病害咱猿 原 远暂 遥 据报道我国
甘薯上至少存在 杂孕云酝灾尧杂孕灾郧尧杂孕蕴灾尧杂孕悦云灾尧杂孕悦杂灾尧
悦酝灾尧和 杂孕蕴悦灾等 员员 种病毒袁且田间表现为多种病毒
复合侵染咱苑 原 愿暂 遥 福建省农业科学院作物研究所薯类课
题组于 圆园员圆 年至 圆园员猿 年对福建省甘薯产区及广东湛
江的甘薯病毒病害调查结果表明病株多数为复合感
染袁其中 杂孕悦杂灾尧 杂孕云酝灾 和甘薯 郧 病毒渊 杂憎藻藻贼责燥贼葬贼燥
增蚤则怎泽 郧袁杂孕灾郧冤是侵染甘薯的主要病毒袁占发生病毒的
愿缘豫以上遥 目前袁植物病毒检测大多采用基于抗血清
的酶联免疫吸附技术袁但抗血清不仅价格较高尧一种抗
血清只能检测一种病毒尧检测程序繁琐袁而且还存在一
定程度的假阳性反应尧检测灵敏性相对较低等缺点遥
近年来袁为了提高病毒检测效率袁基于 孕悦砸 技术的病
毒检测技术正在迅速发展袁单重 孕悦砸 检测技术一次
孕悦砸反应中只能检测一种病毒袁若应用于田间多种病
毒复合侵染的甘薯病毒的检测袁则存在耗时尧耗力尧费
用高等问题遥 因此建立一种多种病毒快速检测技术具
有重要意义遥
多重 砸栽鄄孕悦砸 渊皂怎造贼蚤责造藻曾 砸栽鄄孕悦砸袁皂砸栽鄄孕悦砸冤检测
技术已广泛应用于植物病毒的检测咱怨 原 员远暂 袁在甘薯病毒
检测方面袁赵冬兰等咱员苑暂和许泳清等咱员愿暂建立了 员 种甘
薯病毒 杂孕云酝灾的单重 砸栽鄄孕悦砸检测方法袁张业辉等咱猿暂
建立了 杂孕云酝灾尧杂孕灾郧 和 杂孕蕴灾 猿 种病毒的 皂砸栽鄄孕悦砸
检测方法袁王丽等咱员怨暂建立了甘薯羽状斑驳实时荧光定
量 孕悦砸检测方法袁蕴蚤等咱圆园暂建立了 杂孕云酝灾尧杂孕灾郧尧杂孕灾圆
和 杂孕灾悦 源 种病毒一步法 砸栽鄄孕悦砸检测方法袁而对发生
在甘薯上的 杂孕悦杂灾尧杂孕灾郧和 杂孕云酝灾 猿 种主要病毒袁尚
源远源员
摇 愿 期 侵染甘薯的 杂孕悦杂灾尧杂孕灾郧尧杂孕云酝灾多重 砸栽鄄孕悦砸检测方法的建立及应用
未见用 皂砸栽鄄孕悦砸 同时检测的报道袁本研究利用多重
砸栽鄄孕悦砸技术袁探讨了一步 孕悦砸 可同时检测 杂孕悦杂灾尧
杂孕灾郧和 杂孕云酝灾 猿 种病毒的 皂砸栽鄄孕悦砸技术袁为甘薯脱
毒和病毒病诊断奠定基础遥
员摇 材料与方法
员郾 员摇 供试材料
从福建省龙岩市尧泉州市尧南安市尧福州市及广东
湛江市等地区采集带有典型病毒病症状的样品遥 样品
经液氮速冻后置于 原 愿园益冰箱保存袁以无病毒组培苗
和 凿凿匀圆韵作为检测的阴性对照遥
表 员摇 用于多重 砸栽鄄孕悦砸扩增的特异性引物
栽葬遭造藻 员摇 灾蚤则怎泽 泽责藻糟蚤枣蚤糟 责则蚤皂藻则泽 枣燥则 皂怎造贼蚤责造藻曾 砸栽鄄孕悦砸
引物 孕则蚤皂藻则 序列 杂藻择怎藻灶糟藻渊缘忆鄄猿忆冤 登录号 粤糟糟藻泽泽蚤燥灶 灶怎皂遭藻则 产物大小 孕则燥凿怎糟贼 泽蚤扎藻 辕 遭责
杂孕悦杂灾鄄杂员 悦粤栽粤砸粤悦栽粤粤郧粤粤粤栽粤郧栽悦郧粤 运悦愿愿愿怨远猿 尧云允愿园苑苑愿缘尧运悦员源远愿源员尧 猿怨缘
杂孕悦杂灾鄄粤员 粤悦郧粤粤郧砸粤栽再粤栽粤粤粤悦郧粤砸悦悦栽 粤允源圆愿缘缘缘尧匀匝圆怨员圆远
杂孕悦杂灾鄄杂圆 悦郧郧栽悦粤砸粤栽栽郧郧粤粤郧郧栽粤 猿园源
杂孕悦杂灾鄄粤圆 栽栽悦郧悦栽粤栽悦粤粤粤郧粤粤郧栽砸栽悦
杂孕悦杂灾鄄杂猿 粤砸栽栽栽粤栽再悦悦酝粤悦杂栽郧栽栽栽粤 员怨苑
杂孕悦杂灾鄄粤猿 粤栽栽粤悦悦栽栽悦悦粤粤栽再栽郧粤悦悦郧
杂孕灾郧鄄杂员 栽粤悦粤栽悦粤悦粤粤粤栽粤悦悦郧粤郧栽栽 运悦怨远圆圆员愿尧匀匝员苑员怨猿圆尧允匝愿圆源猿苑源尧匀匝愿源源员苑怨 圆怨源
杂孕灾郧鄄粤员 栽粤粤栽悦栽栽悦悦悦栽郧粤悦粤悦悦悦
杂孕灾郧鄄杂圆 粤悦粤郧郧粤粤郧郧郧郧粤粤郧粤郧郧粤 源源愿
杂孕灾郧鄄粤圆 悦粤郧郧郧栽悦粤栽粤郧粤栽栽郧栽悦粤粤郧栽郧
杂孕灾郧鄄杂猿 粤悦粤郧郧粤悦悦粤栽栽粤悦悦粤悦悦粤 源猿猿
杂孕灾郧鄄粤猿 粤粤栽悦栽栽悦悦悦栽郧粤悦粤悦悦悦栽悦
杂孕云酝灾鄄杂员 郧悦粤栽郧郧栽粤栽郧粤砸郧郧粤郧栽再粤粤 耘哉圆圆园苑缘远尧耘哉愿园怨缘园远尧耘哉园圆员园远源尧郧哉源苑愿猿圆尧 源远员
杂孕云酝灾鄄粤员 栽悦栽栽悦栽栽悦栽栽郧悦郧栽郧郧粤郧 运悦员源远愿源猿尧耘哉愿园怨缘园员尧粤月缘园怨源远园尧粤再缘圆猿缘源园
杂孕云酝灾鄄杂圆 栽悦悦粤悦悦粤悦悦悦粤悦粤粤栽粤粤悦 远园员
杂孕云酝灾鄄粤圆 粤悦郧郧栽栽栽悦郧悦粤栽悦栽悦栽粤栽
员郾 圆摇 引物设计
根据 郧藻灶月葬灶噪 中 杂孕悦杂灾 热激蛋白基因 澡泽责苑园
渊 运悦愿愿愿怨远猿尧 云允愿园苑苑愿缘尧 运悦员源远愿源员尧 粤允源圆愿缘缘缘尧
匀匝圆怨员圆远园 冤 及 杂孕灾郧 渊 运悦怨远圆圆员愿尧 匀匝员苑员怨猿圆尧
允匝愿圆源猿苑源尧 匀匝愿源源员苑怨 冤尧 杂孕云酝灾 渊 耘哉圆圆园苑缘远尧
耘哉愿园怨缘园远尧 耘哉园圆员园远源尧 郧哉源苑愿猿圆尧 运悦员源远愿源猿尧
耘哉愿园怨缘园员尧粤月缘园怨源远园尧粤再缘圆猿缘源园冤 病毒的外壳蛋白基
因核苷酸序列的保守区域设计引物袁并应用 糟造怎泽贼葬造曾软
件进行序列比对遥 引物由宝生物渊大连冤有限公司合
成袁引物序列见表 员遥
员郾 猿摇 试剂
植物总 砸晕粤 抽提试剂盒及 阅晕粤 纯化回收试剂
盒袁反 转 录 试 剂 盒 渊 孕则蚤皂藻杂糟则蚤责贼砸员泽贼 杂贼则葬灶凿 糟阅晕粤
杂赠灶贼澡藻泽蚤泽 运蚤贼冤袁克隆载体 责酝阅员愿 原 栽 增藻糟贼燥则均购自宝生
物渊大连冤有限公司渊栽葬运葬砸葬冤遥 砸晕粤 提取和反转录植
物总 砸晕粤提取和反转录按照试剂盒提供的操作方法
进行遥
员郾 源摇 单一 砸栽鄄孕悦砸检测
以反转录产物为模板袁分别利用 杂孕悦杂灾尧杂孕灾郧 和
杂孕云酝灾病毒的特异性引物对样品进行 孕悦砸 扩增遥 单
重 砸栽鄄孕悦砸 反应体系为 圆缘滋蕴院圆郾 园 滋蕴 糟阅晕粤袁员郾 园 滋蕴
上游 引 物 渊 员园 滋皂燥造窑蕴 原员 冤袁 员郾 园 滋蕴 下 游 引 物
渊员园 滋皂燥造窑蕴 原员冤袁园郾 圆缘 滋蕴 耘曾 栽葬择 渊缘哉窑滋蕴 原员 冤袁圆郾 园 滋蕴
凿晕栽孕 渊圆郾 缘皂皂燥造窑蕴 原员冤袁圆郾 缘 滋蕴 员园 伊 孕悦砸 遭怎枣枣藻则袁凿凿匀圆韵
补足 圆缘 滋蕴遥 反应条件为院怨源益 预变性 缘 皂蚤灶曰怨源益 变
性 猿园 杂袁缘远益 退火 猿园杂袁苑圆益延伸 员皂蚤灶袁循环 猿园 次曰最
后 苑圆益 延伸 员园皂蚤灶袁源益保存遥
员郾 缘摇 多重 砸栽鄄孕悦砸检测体系优化和建立
在单重 砸栽鄄孕悦砸的基础上对 皂砸栽鄄孕悦砸反应体系进
行优化袁设定某一影响因素时袁其它因素不变遥 退火温
度设 缘圆尧缘源尧缘远尧缘愿尧远园和 远圆益 远个处理遥 栽葬择 阅晕粤 聚合
酶浓度分别设 园郾 园圆尧园郾 园猿尧园郾 园源尧园郾 园缘尧园郾 园远尧园郾 园愿尧园郾 员 和
园郾 员圆哉窑滋蕴 原员愿 个处理遥 凿晕栽孕 浓度分别设 园郾 园缘尧园郾 员园尧
缘远源员
核摇 农摇 学摇 报 圆怨 卷
园郾 员缘尧园郾 圆园尧园郾 圆缘尧园郾 猿园尧园郾 猿缘和 园郾 源园 皂皂燥造窑蕴 原员愿个处理遥
引物组合渊表 圆冤进行 皂砸栽鄄孕悦砸 体系优化遥 分利用
杂孕悦杂灾尧杂孕灾郧和 杂孕云酝灾病毒的特异性引物对病毒样品
进行 孕悦砸扩增遥
表 圆摇 多重 砸栽鄄孕悦砸引物浓度组合
栽葬遭造藻 圆摇 悦燥皂遭蚤灶葬贼蚤燥灶泽 燥枣 责则蚤皂藻则 泽藻贼泽 枣燥则 皂怎造贼蚤责造藻曾
砸栽鄄孕悦砸 辕 渊滋皂燥造窑蕴 原员冤
处理组合
悦燥皂遭蚤灶葬贼蚤燥灶
灶怎皂遭藻则
引物浓度
孕则蚤皂藻则 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶
杂孕悦杂灾杂圆 辕 粤圆 杂孕灾郧 杂猿 辕 粤猿 杂孕云酝灾 杂圆 辕 粤圆
员 园郾 员圆 园郾 圆园 园郾 园愿
圆 园郾 员远 园郾 园愿 园郾 园源
猿 园郾 圆园 园郾 圆园 园郾 圆园
源 园郾 员远 园郾 圆园 园郾 圆源
缘 园郾 猿圆 园郾 圆园 园郾 员圆
远 园郾 员远 园郾 员远 园郾 圆源
员郾 远摇 多重 砸栽鄄孕悦砸灵敏度检测
提取 砸晕粤 后测定其浓度袁并对 砸晕粤 进行 员园园尧
员园 原员尧员园 原圆尧员园 原猿尧员园 原源尧员园 原缘倍稀释袁检测其灵敏度遥
员郾 苑摇 孕悦砸产物电泳分析
孕悦砸反应结束后袁用 员郾 园豫琼脂糖凝胶电泳检测扩
增产物遥 上样量为 缘 滋蕴袁员圆园灾稳压电泳 猿园 皂蚤灶袁凝胶成
像仪观察拍照遥
员郾 愿摇 孕悦砸产物的克隆与序列分析
皂砸栽鄄孕悦砸扩增产物用大连宝生物公司 阅晕粤 纯化
试剂盒回收纯化袁纯化后的 孕悦砸 产物与 责酝阅员愿 原 栽
增藻糟贼燥则连接袁连接产物转化大肠杆菌袁经蓝白斑筛选和
孕悦砸鉴定后获得阳性克隆遥 获得的阳性克隆送生工生
物工程 渊上海冤股份有限公司进行测序遥 晕悦月陨 上
月蕴粤杂栽对所测序列进行比较分析遥
圆摇 结果与分析
圆郾 员摇 引物筛选及单重 砸栽鄄孕悦砸检测结果
从设计的 猿对 杂孕悦杂灾引物尧猿对 杂孕灾郧引物和 圆 对
杂孕云酝灾 引物中袁利用软件 阅晕粤酝粤晕检测引物间的互补
性及引物退火温度袁选择退火温度接近袁且扩增的目的
片段大小有明显差异袁易于区分的引物对渊杂孕悦杂灾杂圆 辕
粤圆尧杂孕灾郧杂猿 辕 粤猿尧杂孕云酝灾杂圆 辕 粤圆冤作为单重和多重 砸栽鄄
孕悦砸的引物 渊图 员 泳道 圆尧 远 和 愿 冤袁 杂孕悦杂灾杂圆 辕 粤圆尧
杂孕灾郧杂猿 辕 粤猿尧杂孕云酝灾杂圆 辕 粤圆 以下简称为 杂孕悦杂灾尧杂孕灾郧和
杂孕云酝灾遥
注院酝院 酝葬则噪藻则 阅蕴圆园园园曰员 原愿院引物对 杂孕悦杂灾 杂员 辕 粤员尧杂孕悦杂灾 杂圆 辕 粤圆尧杂孕悦杂灾
杂猿 辕 粤猿尧杂孕灾郧 杂员 辕 粤员尧 杂孕灾郧 杂圆 辕 粤圆尧 杂孕灾郧 杂猿 辕 粤猿尧 杂孕云酝灾 杂员 辕 粤员 和
摇 摇 摇 摇 杂孕云酝灾 杂圆 辕 粤圆曰怨院阴性对照遥
晕燥贼藻院酝院阅蕴圆园园园 阅晕粤 皂葬则噪藻则援 蕴葬灶藻 员鄄愿院 杂孕悦杂灾 杂员 辕 粤员袁 杂孕悦杂灾 杂圆 辕 粤圆袁
杂孕悦杂灾 杂猿 辕 粤猿袁杂孕灾郧 杂员 辕 粤员袁杂孕灾郧 杂圆 辕 粤圆袁杂孕灾郧 杂猿 辕 粤猿袁杂孕云酝灾 杂员 辕 粤员
摇 摇 葬灶凿 杂孕云酝灾 杂圆 辕 砸圆 则藻泽责藻糟贼蚤增藻造赠援 蕴葬灶藻 怨院晕藻早葬贼蚤增藻 糟燥灶贼则燥造援
图 员摇 猿种病毒单重 砸栽鄄孕悦砸检测
云蚤早援 员摇 杂蚤灶早造藻 砸栽鄄孕悦砸 凿藻贼藻糟贼蚤燥灶 燥枣 贼澡则藻藻 泽憎藻藻贼责燥贼葬贼燥 增蚤则怎泽藻泽
圆郾 圆摇 多重 砸栽鄄孕悦砸检测体系的建立
对影响 皂砸栽鄄孕悦砸检测的引物浓度进行多重扩增
渊表 圆 冤袁当 猿 对引物反应浓度为 园郾 员圆尧 园郾 圆园 和
园郾 园愿滋皂燥造窑蕴 原员时袁结果显示只扩增出 杂孕灾郧 片段遥 提
高 杂孕云酝灾引物浓度 园郾 圆源滋皂燥造窑蕴 原员袁杂孕云酝灾 条带逐渐
变亮遥 当 猿 种引物浓度同为 园郾 圆园滋皂燥造窑蕴 原员时袁结果显
示 杂孕悦杂灾 条带较弱遥 当 杂孕悦杂灾 引物浓度为 园郾 猿圆
滋皂燥造窑蕴 原员袁杂孕灾郧 引物浓度为 园郾 圆园滋皂燥造窑蕴 原员袁杂孕云酝灾
引物浓度为 园郾 员圆滋皂燥造窑蕴 原员袁猿 对引物浓度比为 圆郾 远院
员郾 远院员 时袁结果显示扩增出 杂孕悦杂灾尧杂孕灾郧 和 杂孕云酝灾 的
条带较为清晰渊图 圆 原 粤冤遥
栽葬择 阅晕粤 聚合酶浓度分别设 园郾 园源尧园郾 园远尧园郾 园愿尧
园郾 员园尧园郾 员圆尧园郾 员源尧园郾 员远 和 园郾 员愿 哉窑滋蕴 原员愿 个处理袁凿晕栽孕
浓度分别设 园郾 园缘尧园郾 员园尧园郾 员缘尧园郾 圆园尧园郾 圆缘尧园郾 猿园尧园郾 猿缘
和 园郾 源园 皂皂燥造窑蕴 原员愿 个处理均能扩增出目的条带袁片段
大小分别为 猿园源尧源猿猿尧远园员遭责遥 酶浓度为 园郾 园源 耀 园郾 园愿
哉窑滋蕴 原员时袁扩增条带较为模糊袁随着酶浓度的提高袁扩
增条带逐渐清晰袁酶浓度为 园郾 员园袁园郾 员圆袁园郾 员源袁园郾 员远
哉窑滋蕴 原员时扩增条带差别不大袁为节约试验成本袁选择
耘曾 栽葬择 阅晕粤 聚合酶浓度为 园郾 员圆 哉窑滋蕴 原员 渊图 圆 原 月冤袁
凿晕栽孕浓度为 园郾 员缘 皂皂燥造窑蕴 原员渊图 圆 原 悦冤遥
退火温度是影响多重 砸栽鄄孕悦砸扩增效果的重要因
素袁不同退火温度扩增结果显示袁当退火温度为 缘圆尧
缘源尧缘远益时扩增条带不清晰袁退火温度在 缘愿 耀 远圆益时
扩增效果无明显差异袁综合考虑退火温度选择 缘愿益
渊图 圆 原 阅冤遥
综上袁建立了 猿 重 砸栽鄄孕悦砸 反应体系为 圆缘滋蕴院圆郾 园
远远源员
摇 愿 期 侵染甘薯的 杂孕悦杂灾尧杂孕灾郧尧杂孕云酝灾多重 砸栽鄄孕悦砸检测方法的建立及应用
注院酝院酝葬则噪藻则 阅蕴圆园园园曰粤院多重 砸栽鄄孕悦砸引物浓度优化袁泳道 员 原 远院表 圆 中的处理组合 员 原 远曰月院多重 砸栽鄄孕悦砸 耘曾 栽葬择酶浓度浓度优化袁泳道 员
原 愿院酶浓度分别为 园援 园源袁园援 园远袁园援 园愿袁园援 员园袁园援 员圆袁园援 员源袁园援 员远 和 园援 员愿 哉窑滋蕴 原员 曰悦院多重 砸栽鄄孕悦砸 凿晕栽孕浓度优化袁泳道 员 原 愿院凿晕栽孕浓度分别
为 园援 园缘袁 园援 员园袁 园援 员缘袁 园援 圆园袁 园援 圆缘袁 园援 猿园袁 园援 猿缘 和 园援 源园 皂皂燥造窑蕴 原员 曰阅院多重 砸栽鄄孕悦砸退火温度优化袁泳道 员 原 远院退火温度分别为 缘圆袁缘源袁缘远袁
摇 摇 缘愿袁远园 和 远圆益遥
晕燥贼藻院酝院酝葬则噪藻则 阅蕴圆园园园曰粤院韵责贼蚤皂蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 责则蚤皂藻则 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶 燥枣 贼澡藻 皂怎造贼蚤责造藻曾 砸栽鄄孕悦砸袁蕴葬灶藻 员 贼燥 远院糟燥则则藻泽责燥灶凿蚤灶早 贼燥 贼澡藻 糟燥皂遭蚤灶葬贼蚤燥灶泽 燥枣 责则蚤皂藻则
泽藻贼泽 蚤灶 贼葬遭造藻 圆曰月院韵责贼蚤皂蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 栽葬择 阅晕粤 责燥造赠皂藻则葬泽藻 燥枣 贼澡藻 皂怎造贼蚤责造藻曾 砸栽鄄孕悦砸袁蕴葬灶藻 员 贼燥 愿院栽葬择 阅晕粤 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶 园援 园源袁园援 园远袁园援 园愿袁园援 员园袁园援 员圆袁
园援 员源袁园援 员远 葬灶凿 园援 员愿 哉窑滋蕴 原员 曰悦院韵责贼蚤皂蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 凿晕栽孕 燥枣 贼澡藻 皂怎造贼蚤责造藻曾 砸栽鄄孕悦砸袁蕴葬灶藻 员 贼燥 愿院凿晕栽孕 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶 园援 园缘袁 园援 员园袁 园援 员缘袁 园援 圆园袁 园援
圆缘袁 园援 猿园袁 园援 猿缘 葬灶凿 园援 源园 皂皂燥造窑蕴 原员 曰阅院韵责贼蚤皂蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 葬灶灶藻葬造蚤灶早 贼藻皂责藻则葬贼怎则藻 燥枣 贼澡藻 皂怎造贼蚤责造藻曾 砸栽鄄孕悦砸袁蕴葬灶藻 员 贼燥 远院葬灶灶藻葬造蚤灶早 贼藻皂责藻则葬贼怎则藻 缘圆袁
摇 摇 缘源袁缘远袁缘愿袁远园 葬灶凿 远圆益 援
图 圆摇 多重 砸栽鄄孕悦砸检测体系优化
云蚤早援 圆摇 耘枣枣藻糟贼泽 燥枣 贼澡藻 糟燥灶糟藻灶贼则葬贼蚤燥灶 燥枣 糟燥皂责燥灶藻灶贼泽 葬灶凿 则藻葬糟贼蚤燥灶 糟燥灶凿蚤贼蚤燥灶泽 燥灶 皂怎造贼蚤责造藻曾 砸栽鄄孕悦砸
滋蕴 糟阅晕粤袁园郾 愿 滋蕴 杂孕悦杂灾 引物袁园郾 缘 滋蕴 杂孕灾郧 引物袁
园郾 猿 滋蕴 杂孕悦杂灾 引物袁园郾 猿园 滋蕴 耘曾 栽葬择 渊缘哉窑滋蕴 原员冤袁员郾 缘
滋蕴 凿晕栽孕 渊圆郾 缘皂皂燥造窑蕴 原员 冤袁圆郾 缘 滋蕴 员园 伊 孕悦砸 遭怎枣枣藻则袁
凿凿匀圆韵补足 圆缘 滋蕴遥 反应条件为院怨源益 预变性 缘 皂蚤灶曰怨源益 变性 猿园 杂袁缘愿益 退火 猿园杂袁苑圆益延伸 员皂蚤灶袁循环
猿园 次曰最后 苑圆益 延伸 造园皂蚤灶袁源益保存遥
以 杂孕悦杂灾尧杂孕灾郧 和 杂孕云酝灾 猿 种病毒的反转录产
物作为 孕悦砸 反应的模板袁经单一和多重 砸栽鄄孕悦砸 扩增
分别得到大小为 猿园源尧源猿猿 和 远园员遭责 的 猿 条特异条带袁
单一与多重 砸栽鄄孕悦砸扩增结果一致渊图 猿冤遥
圆郾 猿摇 多重 砸栽鄄孕悦砸检测灵敏度分析
利用美国 栽澡藻则皂燥晕葬灶燥阅则燥责 圆园园园悦 微量紫外 辕可见
分光光度计对提取的携带 猿 种甘薯病毒组织总 砸晕粤
进行浓度测定袁测定浓度为 远员远郾 愿灶早窑滋蕴 原员袁总 砸晕粤 进
行 员园园尧员园 原 员尧员园 原圆尧员园 原猿尧员园 原 源和 员园 原缘倍浓度稀释袁经
注院酝院酝葬则噪藻则 阅蕴圆 园园园曰员院杂孕悦杂灾尧杂孕灾郧和 杂孕云酝灾曰圆院杂孕云酝灾曰
猿院杂孕灾郧曰源院杂孕悦杂灾曰缘院阴性对照遥
晕燥贼藻院酝院酝葬则噪藻则 阅蕴圆 园园园援 蕴葬灶藻 员院杂孕悦杂灾 垣 杂孕灾郧 垣 杂孕云酝灾援 蕴葬灶藻 圆院
杂孕云酝灾援 蕴葬灶藻 猿院杂孕灾郧援 蕴葬灶藻 源院杂孕悦杂灾援 蕴葬灶藻 缘院晕藻早葬贼蚤增藻 糟燥灶贼则燥造援
图 猿摇 单重 砸栽鄄孕悦砸和多重 砸栽鄄孕悦砸检测结果
云蚤早援 猿摇 哉灶蚤责造藻曾 葬灶凿 皂怎造贼蚤责造藻曾 孕悦砸 葬泽泽葬赠泽 枣燥则 凿藻贼藻糟贼蚤燥灶
燥枣 贼澡则藻藻 泽憎藻藻贼责燥贼葬贼燥 增蚤则怎泽藻泽
苑远源员
核摇 农摇 学摇 报 圆怨 卷
皂砸栽鄄孕悦砸检测袁携带 杂孕悦杂灾尧杂孕灾郧 和 杂孕云酝灾 病毒样
品组织总 砸晕粤浓度为 员圆郾 猿源 灶早窑滋蕴 原员时能够扩增出特
异性条带袁携带 杂孕云酝灾和 杂孕灾郧病毒样品组织总 砸晕粤
浓度为 员郾 圆猿 灶早窑滋蕴 原员和 园郾 员圆 灶早窑滋蕴 原员时仍能扩增出
特异性条带袁杂孕悦杂灾 未能扩增出特异性条带遥 综合 猿
种病毒 皂砸栽鄄孕悦砸检测灵敏度为 员圆郾 猿源 灶早窑滋蕴 原员遥
注院酝院酝葬则噪藻则 阅蕴圆 园园园曰员院稀释 员园园倍曰圆院稀释 员园 原员倍曰猿院稀
释 员园 原 圆倍曰源院稀释 员园 原 猿倍曰缘院稀释 员园 原 源倍曰远院稀释 员园 原 缘倍遥
晕燥贼藻院酝院 酝葬则噪藻则 阅蕴圆 园园园援 蕴葬灶藻 员院 员园园 凿蚤造怎贼蚤燥灶援 蕴葬灶藻 圆院 员园 原员
凿蚤造怎贼蚤燥灶援 蕴葬灶藻 猿院员园 原圆 凿蚤造怎贼蚤燥灶援 蕴葬灶藻 源院员园 原 猿 凿蚤造怎贼蚤燥灶援 蕴葬灶藻 缘院
摇 摇 摇 员园 原 源 凿蚤造怎贼蚤燥灶援 蕴葬灶藻 远院员园 原缘 凿蚤造怎贼蚤燥灶援
图 源摇 多重 砸栽鄄孕悦砸灵敏度检测
云蚤早援 源摇 阅藻贼藻糟贼蚤燥灶 泽藻灶泽蚤贼蚤增蚤贼赠 燥枣 皂怎造贼蚤责造藻曾 砸栽鄄孕悦砸
注院酝院酝葬则噪藻则 阅蕴圆 园园园曰员 原员园院福建采集叶片样品曰员员 原员圆院广东采集叶片样品曰员源 原员愿院部分组培苗曰圆园 原圆猿院甘薯薯块样品曰员猿尧员怨院阴性对照遥
晕燥贼藻院酝院酝葬则噪藻则 阅蕴圆 园园园援 蕴葬灶藻 员贼燥 员园院杂葬皂责造藻 燥枣 云怎躁蚤葬灶 泽憎藻藻贼责燥贼葬贼燥 造藻葬增藻泽援 蕴葬灶藻 员员 贼燥 员圆院杂葬皂责造藻 燥枣 郧怎葬灶早凿燥灶早 泽憎藻藻贼责燥贼葬贼燥 造藻葬增藻泽援 蕴葬灶藻 员源 贼燥 员愿院
杂葬皂责造藻 孕葬则贼泽 燥枣 泽憎藻藻贼责燥贼葬贼燥 责造葬灶贼造藻贼泽援 蕴葬灶藻 圆园 贼燥 圆猿院 杂葬皂责造藻 燥枣 云怎躁蚤葬灶 泽憎藻藻贼责燥贼葬贼燥 贼怎遭藻则泽援 蕴葬灶藻 员猿 葬灶凿 员怨院晕藻早葬贼蚤增藻 糟燥灶贼则燥造援
图 缘摇 样品多重 砸栽鄄孕悦砸检测结果
云蚤早援 缘摇 阅藻贼藻糟贼蚤燥灶 燥枣 贼澡则藻藻 泽憎藻藻贼责燥贼葬贼燥 增蚤则怎泽藻泽 蚤灶 泽憎藻藻贼责燥贼葬贼燥 造藻葬增藻泽袁 责造葬灶贼造藻贼泽 葬灶凿 贼怎遭藻则泽 遭赠 皂怎造贼蚤责造藻曾 砸栽鄄孕悦砸
圆郾 源摇 多重 砸栽鄄孕悦砸产物序列分析
多重 砸栽鄄孕悦砸扩增产物割胶回收后袁产物经回收纯
化后与 责酝阅员愿 原 栽 增藻糟贼燥则 连接袁连接后挑取阳性克隆质
粒并进行测序遥 测序结果表明袁杂孕悦杂灾尧杂孕灾郧和 杂孕云酝灾
扩增产物分别由 猿园源尧源猿猿尧远园员 个核苷酸组成袁与预期的
孕悦砸产物大小相同袁是 杂孕悦杂灾 热激蛋白基因渊澡泽责苑园冤尧
杂孕灾郧和 杂孕云酝灾 的 悦孕 基因的部分序列遥 所得序列与
郧藻灶月葬灶噪中其他分离的核苷酸序列同源性达到 怨源豫 耀
怨怨豫袁证明了多重 砸栽鄄孕悦砸检测结果的可靠性遥
圆郾 缘摇 多重 砸栽鄄孕悦砸检测方法的应用
圆园员圆 年 原圆园员猿 年对福建甘薯产区和广东湛江甘
薯产区进行采样调查袁样品检测结果显示袁 杂孕悦杂灾尧
杂孕灾郧和 杂孕云酝灾均有发生袁且多为复合侵染遥 用本试
验建立的多重 砸栽鄄孕悦砸检测方法袁分别对采自福建渊员园
份冤和广东湛江渊圆 份冤的 员圆 份大田甘薯病毒叶片样
品袁员园 株甘薯组培苗渊福建省农业科学院作物研究所
薯类实验室提供冤和 源 份甘薯薯块样品渊福建南安采
样冤进行了检测袁结果表明袁员圆 份大田叶片样品中有 缘
份样品检测出 杂孕悦杂灾尧杂孕灾郧 和 杂孕云酝灾 猿 种病毒袁缘 份
样品检测出 杂孕悦杂灾尧杂孕灾郧和 杂孕云酝灾 猿 种病毒之中的 圆
种袁圆 份样品检测出 员 种病毒遥 员园 株甘薯组培苗中袁员
株检测出 杂孕云酝灾袁员 株检测出 杂孕灾郧袁员 株中这 圆 种病
毒均检测出遥 对采集的 源 份薯块样品检测均为 圆 种或
者 猿 种病毒复合感染遥 对样品进行多重 砸栽鄄孕悦砸 检测
的同时袁运用单一 砸栽鄄孕悦砸 进行验证袁单一和多重 砸栽鄄
孕悦砸检测结果一致袁证明了本试验建立的 皂砸栽鄄孕悦砸
方法适用于甘薯叶片尧脱毒苗和薯块中的病毒检测
渊图 缘 耀图 远冤遥
猿摇 讨论
甘薯为无性繁殖作物袁在生产过程中极易造成病
毒继代传染及传播扩散遥 甘薯受病毒侵染后袁正常的
生理机能受到干扰和破坏袁种性退化袁产量和品质降
低袁可造成甘薯产量损失 缘园豫以上袁严重时产量损失
达 怨园豫以上遥 杂孕悦杂灾尧杂孕灾郧 和 杂孕云酝灾 是甘薯上最重
要的病毒病袁且常常混合侵染遥 培育脱毒苗是目前最
愿远源员
摇 愿 期 侵染甘薯的 杂孕悦杂灾尧杂孕灾郧尧杂孕云酝灾多重 砸栽鄄孕悦砸检测方法的建立及应用
为有效的防治甘薯病毒病的方法袁在脱毒苗培育过程
中需要对脱毒进行快速和准确的检测袁因此袁建立能快
速尧准确地同时检测多种病毒的 孕悦砸方法具有重要的
意义遥
多重 砸栽鄄孕悦砸检测即为在同一个反应中加入 圆 种
或 圆 种以上的特异性引物袁能同时检测多种病毒的检
测方法袁具有耗时少尧灵敏度高尧特异性强等优点袁目前
已广泛应用于草莓尧小麦尧香蕉尧西瓜尧烟草和马铃薯等
植物病毒检测咱猿 原 员远暂 遥 本研究依据 郧藻灶月葬灶噪 公布的
杂孕悦杂灾热激蛋白基因 澡泽责苑园尧杂孕灾郧和 杂孕云酝灾 悦孕 基因
的核苷酸序列的保守序列设计特异性引物袁通过引物
筛选袁多重 砸栽鄄孕悦砸 反应体系的优化袁建立了同时高
效尧快速地检测 杂孕悦杂灾尧杂孕灾郧和 杂孕云酝灾 猿 种病毒的多
重 砸栽鄄孕悦砸检测方法袁该检测方法具有特异性强尧灵敏
度高袁比 耘蕴陨杂粤 和单重 砸栽鄄孕悦砸 耗时少袁成本低等优
点袁可实现直接检测大田甘薯叶片和薯块样品的检测袁
应用前景广阔遥
引物设计和退火温度是影响多重 砸栽鄄孕悦砸 扩增的
关键因素遥 其中引物设计是多重 砸栽鄄孕悦砸 最重要的一
环袁月藻则贼燥造蚤灶蚤等咱圆员暂研究认为在 皂砸栽鄄孕悦砸 反应体系中袁
每对引物浓度是影响多重 砸栽鄄孕悦砸 的一个重要因素袁
增加引物对的浓度可以得到理想的扩增效果袁胡小燕
等咱圆圆暂研究发现提高长片段引物的浓度尧增加延伸时间
有利于多重 孕悦砸扩增遥 同时本研究还对影响多重 砸栽鄄
孕悦砸的 栽葬择 阅晕粤聚合酶浓度和退火温度进行了优化袁
最终建立了同时检测 猿 种甘薯病毒的多重 砸栽鄄孕悦砸 体
系遥 本研究根据 猿 种病毒保守区序列设计了 愿 对引
物袁选择退火温度接近袁且扩增的目的片段大小有明显
差异袁易于区分的引物对作为单重和多重 砸栽鄄孕悦砸 的
引物袁保证了引物具有较高特异性遥 本研究对影响多
重 砸栽鄄孕悦砸的引物浓度配比及退火温度进行了优化袁
最终建立了同时检测 猿 种甘薯病毒的多重 砸栽鄄孕悦砸 体
系遥
由 杂孕悦杂灾和 杂孕云酝灾协生共侵染甘薯引起的病害
为甘薯病毒病害 渊 泽憎藻藻贼责燥贼葬贼燥 增蚤则怎泽 凿蚤泽藻葬泽藻泽袁 杂孕灾阅冤袁
杂孕灾阅 是甘薯上的毁灭性病害袁已成为影响甘薯的最
重要病毒病之一遥 张振臣等咱圆猿暂 圆园员圆 年首次发现并报
道了 杂孕灾阅在我国有发生袁目前主要分布在广东尧江
苏尧四川尧安徽和福建等地咱圆源 原 圆苑暂 遥 杂孕悦杂灾 目前分为 圆
个株系渊耘粤和 宰粤冤袁杂孕云酝灾 分为 猿 个株系渊韵尧砸悦 和
耘粤冤 咱源暂 袁杂孕灾郧和 杂孕云酝灾属于马铃薯 再病毒属袁杂孕灾郧
单独侵染时往往不产生明显的症状袁在田间其常与其
他病毒发生复合侵染袁给甘薯生产造成严重的损
失咱圆愿暂 遥 同时检测 杂孕悦杂灾尧杂孕灾郧 和 杂孕云酝灾 猿 种病毒检
测方法在国内还未见报道袁本研究建立的 皂砸栽鄄孕悦砸
检测方法袁为大田样品检测提供了技术支持袁可对 猿 种
病毒的复合侵染同步检测袁为甘薯脱毒苗检测和抗病
育种奠定基础遥
源摇 结论
本研究通过设计特异性病毒引物尧引物筛选尧优化
孕悦砸体系尧灵敏度检测等建立了可同时检测 杂孕悦杂灾尧
杂孕灾郧和 杂孕云酝灾 猿 种甘薯病毒的多重 砸栽鄄孕悦砸 检测方
法遥 该方法稳定尧准确尧灵敏袁能够对大田样品和组培
苗中 杂孕灾悦杂灾尧杂孕灾郧 和 杂孕云酝灾 单独或混合侵染进行
快速尧准确地检测遥 该方法具有节省时间尧成本低尧效
率高等优点袁应用前景广阔袁为甘薯脱毒和病毒病诊断
奠定基础遥
参考文献院
咱 员 暂摇 蕴怎葬灶 再 杂袁 在澡葬灶早 允袁 蕴蚤怎 阅 酝袁 蕴蚤 宰 蕴援 酝燥造藻糟怎造葬则 糟澡葬则葬糟贼藻则蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣
泽憎藻藻贼责燥贼葬贼燥 造藻葬枣 糟怎则造 增蚤则怎泽 蚤泽燥造葬贼藻 枣则燥皂 悦澡蚤灶葬 渊杂孕蕴悦灾鄄悦晕冤 葬灶凿 蚤贼泽
责澡赠造燥早藻灶藻贼蚤糟 则藻造葬贼蚤燥灶泽澡蚤责 憎蚤贼澡 燥贼澡藻则 皂藻皂遭藻则泽 燥枣 贼澡藻 郧藻皂蚤灶蚤增蚤则蚤凿葬藻
咱允暂 援 灾蚤则怎泽 郧藻灶藻泽袁圆园园苑袁猿缘渊圆冤院猿苑怨 原 猿愿缘
咱 圆 暂摇 悦造葬则噪 悦 粤袁 阅葬增蚤泽 允 粤袁 粤遭葬凿 允 粤袁 悦怎藻造造葬则 宰 允袁 云怎藻灶贼藻泽 杂袁 运则藻怎扎藻
允 云袁 郧蚤遭泽燥灶 砸 宰袁 酝怎噪葬泽葬 杂袁 栽怎早怎皂藻 粤 运袁 栽葬蚤则燥 云袁 灾葬造噪燥灶藻灶 允 孕
栽援 杂憎藻藻贼责燥贼葬贼燥 增蚤则怎泽藻泽院 员缘 赠藻葬则泽 燥枣 责则燥早则藻泽泽 燥灶 怎灶凿藻则泽贼葬灶凿蚤灶早 葬灶凿
皂葬灶葬早蚤灶早 糟燥皂责造藻曾 凿蚤泽藻葬泽藻泽咱 允暂 援 孕造葬灶贼 阅蚤泽藻葬泽藻袁 圆园员圆袁怨远渊圆冤院 员远愿
原 员愿缘
咱 猿 暂摇 张业辉袁 张振臣袁 蒋士君袁 秦艳红袁张德胜袁乔奇袁王永江援 猿 种
甘薯病毒多重 砸栽鄄孕悦砸 检测方法的建立咱 允暂 援 植物病理学报袁
圆园员园袁 源园渊员冤院 怨缘 原 怨愿
咱 源 暂摇 张盼袁兰新芝袁乔奇袁张德胜袁秦艳红袁田雨婷袁王爽袁张振臣援 甘
薯病毒病害渊杂孕灾阅冤的多重 砸栽鄄孕悦砸 检测方法及其应用咱 允暂 援 植
物保护袁圆园员猿袁 猿怨渊圆冤院 愿远 原 怨园
咱 缘 暂摇 郧蚤遭泽燥灶 砸 宰袁 酝责藻皂遭藻 陨袁 粤造蚤糟葬蚤 栽袁 悦葬则藻赠 耘 耘袁 酝憎葬灶早葬 砸 韵 酝袁
杂藻葬造 杂 耘袁 灾藻贼贼藻灶 匀 允援 杂赠皂责贼燥皂泽袁 葬藻贼蚤燥造燥早赠 葬灶凿 泽藻则燥造燥早蚤糟葬造 葬灶葬造赠泽蚤泽
燥枣 泽憎藻藻贼责燥贼葬贼燥 增蚤则怎泽 凿蚤泽藻葬泽藻 蚤灶 哉早葬灶凿葬咱 允暂 援 孕造葬灶贼 孕葬贼澡燥造燥早赠袁 员怨怨愿袁
源苑渊员冤院 怨缘 原 员园圆
咱 远 暂摇 郧怎贼蚤藻则则藻扎 阅 蕴袁 云怎藻灶贼藻泽 杂袁 杂葬造葬扎葬则 蕴 云援 杂憎藻藻贼责燥贼葬贼燥 增蚤则怎泽 凿蚤泽藻葬泽藻
渊杂孕灾阅冤院凿蚤泽贼则蚤遭怎贼蚤燥灶袁蚤灶糟蚤凿藻灶糟藻袁 葬灶凿 藻枣枣藻糟贼 燥灶 泽憎藻藻贼责燥贼葬贼燥 赠蚤藻造凿 蚤灶
孕藻则怎咱允暂 援 孕造葬灶贼 阅蚤泽藻葬泽藻袁圆园园猿袁 愿苑渊猿冤院 圆怨苑 原 猿园圆
咱 苑 暂摇 宰葬灶早 匝 酝袁 在澡葬灶早 蕴 酝袁 宰葬灶早 月袁 再蚤灶 在 云袁 云藻灶早 悦 匀袁 宰葬灶早 匝 悦援
杂憎藻藻贼责燥贼葬贼燥 增蚤则怎泽藻泽 蚤灶 悦澡蚤灶葬咱 允暂 援 悦则燥责 孕则燥贼藻糟贼蚤燥灶袁 圆园员园袁 圆怨渊圆冤院
员员园 原 员员源
咱 愿 暂摇 载蚤藻 再 孕袁 载蚤灶早 允 再袁 蕴蚤 载 再袁 宰葬灶早 载袁 杂怎灶 匀 允袁 在澡葬燥 再 匝袁 在澡葬灶早
悦 蕴袁 酝葬 阅 云援 杂怎则增藻赠 燥枣 泽憎藻藻贼责燥贼葬贼燥 增蚤则怎泽藻泽 蚤灶 糟澡蚤灶葬 咱 允暂 援 粤糟贼葬
灾蚤则燥造燥早蚤糟葬袁 圆园员猿袁 缘苑渊员冤院 愿员 原 愿源
咱 怨 暂摇 王冲袁 陈集双袁 洪健袁 杜志游袁张华荣袁陈绍宁援 以 员愿杂 则砸晕粤 为
内参照的多重 砸栽鄄孕悦砸检测 猿 种百合病毒咱 允暂 援 植物病理学报袁
圆园园远袁 猿远渊猿冤院 圆园源 原 圆员员
咱员园暂摇 岳红妮袁 吴云锋袁 李毅然袁 魏婷袁候伟袁武科科援 小麦 猿 种病毒病
月杂酝灾尧月再阅灾鄄孕粤灾尧宰再酝灾 及 宰月阅 植原体病害的多重 孕悦砸 同
步检测咱允暂 援中国农业科学袁 圆园园愿袁 源员渊怨冤院 圆远远猿 原 圆远远怨
咱员员暂摇 彭军袁 王国芬袁黄俊生袁代鹏袁谢玉萍袁李伟东援 香蕉两种主要病
怨远源员
允燥怎则灶葬造 燥枣 晕怎糟造藻葬则 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽
圆园员缘袁圆怨渊愿冤院员源远源 耀 员源苑园
毒多重 孕悦砸检测方法的建立咱 允暂 援 园艺学报袁圆园园远袁 猿猿渊源冤院 愿源缘
原 愿源愿
咱员圆暂摇 张志宏袁 杨洪一袁代红艳袁李贺袁肖敏援 应用多重 砸栽鄄孕悦砸检测草
莓斑驳病毒和草莓轻型黄边病毒咱允暂 援 园艺学报袁 圆园园远袁 猿猿渊猿冤院
缘园苑 原 缘员园
咱员猿暂摇 王威麟袁 张昊袁 于祥泉袁 吴云锋袁张文波袁张春平援 侵染西瓜的 缘
种病毒 在再酝灾尧宰酝灾尧栽酝灾尧杂择酝灾 和 悦酝灾 的多重 砸栽鄄孕悦砸 检测
体系的建立与检测应用咱允暂 援植物病理学报袁 圆园员园袁 源园渊员冤院 圆苑 原
猿圆
咱员源暂摇 朱海生袁 花秀凤袁 陈敏氡袁 温庆放援 四种草莓病毒 杂皂燥灾尧杂灾月灾尧
杂悦灾尧杂酝再耘灾 多重 砸栽鄄孕悦砸检测咱允暂 援核农学报袁 圆园员猿袁 圆苑渊员员冤院
员远猿园 原 员远猿缘
咱员缘暂摇 孙崇波袁蒋桂华袁施季森袁张慧琴袁吴延军袁郭方其袁谢鸣援 不同外
植体对草莓病毒脱除效果及病毒的多重 砸栽鄄孕悦砸 检测咱 允暂 援核农
学报袁圆园园愿袁圆圆渊源冤院源源苑 原 源缘园
咱员远暂摇 裴光前袁 董雅凤袁 张尊平袁 范旭东袁 李丽丽援 源 种葡萄卷叶伴随
病毒多重 砸栽鄄孕悦砸检测咱允暂 援植物病理学报袁圆园员园袁源园渊员冤院圆员 原 圆远
咱员苑暂摇 赵冬兰袁 唐君袁 张允刚袁史新敏袁周志林援 甘薯羽状斑驳病毒 砸栽鄄
孕悦砸检测咱允暂 援西北农业学报袁 圆园园苑袁 员远渊远冤院 员怨怨 原 圆园圆
咱员愿暂 摇 许泳清袁 李华伟袁 刘中华袁邱永祥袁罗文彬袁纪荣昌袁汤浩袁邱思
鑫袁余华援 甘薯羽状斑驳病毒 杂孕云酝灾 耘蕴陨杂粤 鉴定及 砸栽鄄孕悦砸 检
测方法的建立咱允暂 援福建农业学报袁 圆园员猿袁 圆愿渊员圆冤院员圆远苑 原 员圆苑圆
咱员怨暂摇 王丽袁 王振东袁 乔奇袁 秦艳红袁张德胜袁田雨婷袁王爽袁张立军袁张
振臣援 甘薯羽状斑驳病毒实时荧光定量 孕悦砸 检测方法的建立
咱允暂 援沈阳农业大学学报袁 圆园员猿袁源源渊圆冤院员圆怨 原 员猿缘
咱圆园暂摇 蕴蚤 云袁 在怎燥 砸 允袁 粤遭葬凿 允袁 载怎 阅 蕴袁 月葬燥 郧 蕴袁 蕴蚤 砸 匀援 杂蚤皂怎造贼葬灶藻燥怎泽
凿藻贼藻糟贼蚤燥灶 葬灶凿 凿蚤枣枣藻则藻灶贼蚤葬贼蚤燥灶 燥枣 枣燥怎则 糟造燥泽藻造赠 则藻造葬贼藻凿 泽憎藻藻贼责燥贼葬贼燥
责燥贼赠增蚤则怎泽藻泽 遭赠 葬 皂怎造贼蚤责造藻曾 燥灶藻鄄泽贼藻责 砸栽鄄孕悦砸 咱 允 暂 援 允燥怎则灶葬造 燥枣
灾蚤则燥造燥早蚤糟葬造 酝藻贼澡燥凿泽袁 圆园员圆袁 员愿远渊员圆冤院员远员 原 员远远
咱圆员暂摇 月藻则贼燥造蚤灶蚤 耘袁 韵造皂燥泽 粤袁 酝葬则贼皂藻扎 酝 悦袁 悦燥则则蚤泽 酝 栽袁 悦葬皂遭则葬 酝援
杂蚤灶早造藻鄄泽贼藻责 皂怎造贼蚤责造藻曾 砸栽鄄孕悦砸 枣燥则 泽蚤皂怎造贼葬灶藻燥怎泽 葬灶凿 糟燥造燥怎则蚤皂藻贼则蚤糟
凿藻贼藻糟贼蚤燥灶 燥枣 泽蚤曾 砸晕粤 增蚤则怎泽藻泽 蚤灶 燥造蚤增藻 贼则藻藻泽咱允暂 援 允燥怎则灶葬造 燥枣 灾蚤则燥造燥早蚤糟葬造
酝藻贼澡燥凿泽袁 圆园园员袁 怨远渊员冤院 猿猿 原 源员
咱圆圆暂摇 胡小燕袁 陈莉袁 辛海波袁 连青龙袁义鸣放援唐菖蒲 圆 种主要病毒
的多重 砸栽鄄孕悦砸检测咱允暂 援林业科学袁 圆园员员袁 源苑渊苑冤院员圆愿 原 员猿圆
咱圆猿暂摇 张振臣袁 乔奇袁 秦艳红袁 张德胜袁田雨婷援我国发现由褪绿矮化
病毒和甘薯羽状斑驳病毒协生共侵染引起的甘薯病毒病害咱允暂 援
植物病理学报袁 圆园员圆袁 源圆渊猿冤院源圆愿 原 猿猿猿
咱圆源暂摇 谢礼袁 吕明芳袁 王芳袁 季志仙袁吴列洪袁严成其袁陈剑平援 甘薯羽
状斑驳病毒和甘薯褪绿矮化病毒复合侵染甘薯引起的细胞病理
学研究咱允暂 援电子显微学报袁 圆园员圆袁 猿圆渊远冤院源愿缘 原 源怨员
咱圆缘暂摇 包改丽袁 左瑞娟袁 饶维力袁 蕴蚤 砸 匀袁李凡援 云南甘薯病毒检测及
主要病毒的多样性分析咱 允暂 援 微生物学通报袁 圆园员猿袁 源园渊圆冤院圆猿远
原 圆源愿
咱圆远暂摇 许泳清袁 李华伟袁 邱思鑫袁 刘中华袁邱永祥袁罗文彬袁纪荣昌袁汤
浩袁余华援 甘薯羽状斑驳病毒和甘薯褪绿矮化病毒双重 砸栽鄄孕悦砸
检测方法的建立咱 允暂 援 福建农业学报袁 圆园员源袁 圆怨 渊员员冤院员员员源 原
员员员苑
咱圆苑暂摇 蒲志刚袁 曲继鹏袁 王大一袁 钟婷婷袁吴洁袁何俊蓉袁阎文昭援 四川
甘薯病毒病调查及病原血清学鉴定咱 允暂 援 西华师范大学学报袁
圆园园苑袁 圆愿渊源冤院圆苑园 原 圆苑猿
咱圆愿暂摇 粤贼藻噪葬 耘 酝袁 月葬则早 耘袁 晕躁藻则怎 砸 宰袁 栽澡燥皂责泽燥灶 郧袁 灾藻贼贼藻灶 匀 允援
月蚤燥造燥早蚤糟葬造 葬灶凿 皂燥造藻糟怎造葬则 增葬则蚤葬遭蚤造蚤贼赠 葬皂燥灶早 早藻燥早则葬责澡蚤糟葬造造赠 凿蚤增藻则泽藻
蚤泽燥造葬贼藻泽 燥枣 泽憎藻藻贼责燥贼葬贼燥 增蚤则怎泽 圆咱允暂 援 粤则糟澡蚤增藻泽 燥枣 灾蚤则燥造燥早赠袁 圆园园苑袁 员缘圆
渊猿冤院 源苑怨 原 源愿愿
耘泽贼葬遭造蚤泽澡皂藻灶贼 葬灶凿 粤责责造蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 葬 酝怎造贼蚤责造藻曾 砸栽鄄孕悦砸 阅藻贼藻糟贼蚤燥灶
酝藻贼澡燥凿 枣燥则 杂孕悦杂灾袁 杂孕灾郧 葬灶凿 杂孕云酝灾 陨灶枣藻糟贼蚤灶早 杂憎藻藻贼责燥贼葬贼燥
蕴陨 匀怎葬憎藻蚤员 摇 载哉 再燥灶早择蚤灶早员 摇 匝陨哉 杂蚤曾蚤灶员 摇 蕴陨哉 在澡燥灶早澡怎葬员
匝陨哉 再燥灶早曾蚤灶早员 摇 栽粤晕郧 匀葬燥员 摇 再哉 匀怎葬圆
渊员 陨灶泽贼蚤贼怎贼藻 燥枣 悦则燥责 杂糟蚤藻灶糟藻泽袁云怎躁蚤葬灶 粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽 辕 运藻赠 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠 燥枣 悦则燥责 郧藻则皂责造葬泽皂 哉贼蚤造蚤扎葬贼蚤燥灶 月藻贼憎藻藻灶
云怎躁蚤葬灶 葬灶凿 栽葬蚤憎葬灶袁 云怎扎澡燥怎袁 云怎躁蚤葬灶摇 猿缘园园园猿曰 圆 悦藻灶贼则怎葬造 蕴葬遭燥则葬贼燥则赠袁 云怎躁蚤葬灶 粤糟葬凿藻皂赠 燥枣 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 杂糟蚤藻灶糟藻泽袁 云怎扎澡燥怎袁 云怎躁蚤葬灶摇 猿缘园园园猿冤
粤遭泽贼则葬糟贼院栽澡藻 燥遭躁藻糟贼蚤增藻 燥枣 贼澡蚤泽 泽贼怎凿赠 蚤泽 贼燥 凿藻增藻造燥责 葬 皂怎造贼蚤责造藻曾 砸栽鄄孕悦砸 责则燥贼燥糟燥造 贼燥 凿藻贼藻糟贼 泽憎藻藻贼责燥贼葬贼燥 增蚤则怎泽藻泽 杂憎藻藻贼责燥贼葬贼燥
糟澡造燥则燥贼蚤糟 泽贼怎灶贼 增蚤则怎泽 渊 杂孕悦杂灾冤袁 杂憎藻藻贼责燥贼葬贼燥 增蚤则怎泽 郧 渊 杂孕灾郧冤 葬灶凿 杂憎藻藻贼责燥贼葬贼燥 枣藻葬贼澡藻则赠 皂燥贼贼造藻 增蚤则怎泽 渊 杂孕云酝灾冤
泽蚤皂怎造贼葬灶藻燥怎泽造赠 援 栽澡藻 糟燥皂责葬贼蚤遭造藻 泽藻贼泽 燥枣 责则蚤皂藻则泽 泽责藻糟蚤枣蚤糟 枣燥则 藻葬糟澡 增蚤则怎泽 憎藻则藻 凿藻泽蚤早灶藻凿 蚤灶 糟燥灶泽藻则增藻凿 则藻早蚤燥灶泽 燥枣 贼澡藻 早藻灶藻
渊澡泽责苑园冤 燥枣 杂孕悦杂灾袁 贼澡藻 糟燥葬贼 责则燥贼藻蚤灶 早藻灶藻泽 渊悦孕冤 燥枣 杂孕灾郧 葬灶凿 杂孕云酝灾 枣燥则 皂怎造贼蚤责造藻曾 砸栽鄄孕悦砸援 粤 皂怎造贼蚤责造藻曾 砸栽鄄孕悦砸
渊皂砸栽鄄孕悦砸冤泽赠泽贼藻皂 凿藻贼藻糟贼蚤灶早 杂孕悦杂灾袁杂孕灾郧 葬灶凿 杂孕云酝灾 憎葬泽 藻泽贼葬遭造蚤泽澡藻凿 贼澡则燥怎早澡 责则燥早则藻泽泽蚤增藻造赠 葬凿躁怎泽贼蚤灶早 葬灶凿 燥责贼蚤皂蚤扎蚤灶早
贼澡藻 砸栽鄄孕悦砸 糟燥灶凿蚤贼蚤燥灶泽援 栽澡藻 藻曾责藻糟贼藻凿 枣则葬早皂藻灶贼泽 燥枣 猿园源 遭责 枣燥则 杂孕悦杂灾袁 源猿猿 遭责 枣燥则 杂孕灾郧 葬灶凿 远园员 遭责 枣燥则 杂孕云酝灾 憎藻则藻
泽怎糟糟藻泽泽枣怎造造赠 葬皂责造蚤枣蚤藻凿 遭赠 贼澡藻 皂怎造贼蚤责造藻曾 砸栽鄄孕悦砸 泽赠泽贼藻皂援 栽澡藻蚤则 灶怎糟造藻燥贼蚤凿藻 泽藻择怎藻灶糟藻泽 泽澡燥憎藻凿 怨源豫 贼燥 怨怨豫 蚤凿藻灶贼蚤贼赠 憎蚤贼澡
贼澡藻 糟燥则则藻泽责燥灶凿蚤灶早 泽藻择怎藻灶糟藻泽 燥枣 燥贼澡藻则 则藻责燥则贼藻凿 蚤泽燥造葬贼藻泽 燥枣 杂孕悦杂灾袁 杂孕灾郧 葬灶凿 杂孕云酝灾援 粤泽 贼澡藻 皂怎造贼蚤责造藻曾 砸栽鄄孕悦砸 责则燥贼燥糟燥造
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园苑源员