全 文 ：热带亚热带植物学报
如urn~d Tropit{d 【圳tt
2002 1 0(I)：63—68
SMm ．pi*．(g f3otemy
四种观赏凤梨的离体繁殖
洪燕萍 林顺权 ‘ 林庆 良
(I福建龙岩师 々牛物系 ．福建 龙岩 364000；2华南农业大学同艺学 院，广东 广州 510642
3福建农林 火学亚热带果树研究所 ．福建 福州 350002)
摘 要 ：以 粉 菠 萝 【A 川^ Jk~ciota tLind1)Baker]、八 宝 剑 (Vrie~ea poeb*umi Hort) 虎 斑 姬 风 梨
【C07~t~ulht 月m (Vis)Beer]、E彩羞凤梨[?,~eoregeb：a earolinae(Beer)L B．Sm．】等的幼株茎段为外植体 ，
MS+NAA 0 5 mg0‘+BA 5mg 为诱 导培养基 ，MS—BA I mgL‘+NAA 01 mg 为增殖培养基 ．可获
得较好增殖效果。用 l，2MS+NAA 0 5 mgL‘生根效果较好 ，以椰糠：砂 =】：1，或椰糠：泥炭土：蛭石 =】：1：I为
基质移苗的成活率均达 95％以上 。
关键词 ：凤梨科 ；离体 培养 ；繁殖
中图分 类号 ： Q943．I 文献标识码 ：A 文章编号 ：1005—3395(2002)0I一0063—06
／n vitro Culture of Som e Bromeliaceae
HONG Yan—pfng LIN Shun-quan LIN Qing-1 i ang
i1． Bi．1og3；Longyrm Tefutwr~College．Longyan 364000，China；2 Colege Horticuhure，South China Agri．Univ
Guangzhou 510642 China；3 hLqt ‘ s T h l¨1， irm Agri ￡ma Fom~try Univ，Fu~ ou 350002，China
Abstract：Micropropagation was studied of four brometiad plants Aechmea f,zscicaa，Vriesea poelnmn．i~
Cryptan ^ zo~ us and Neoregef~ cnH)nn艘 ．cultured by stem explants．Induction medium of M S+
NA_A 0 5 mg L-‘+BA 5 mg led to budding after one or tWO weeks of culture． M S+BA l mg L- +NAA
0 l mg L-。was the optimum m edium in subculture． The optimum concentration ofNAA was 0．5 mg L。
in rooting Plan tlets transplan ted Oil media contained coconut．ban t：sand=1：l or coconut．ban t：tur f：
verm iculitef1：1：l1had better surviva1 rateupto 95％ ．
Key words：Bromeliaceae；／n vitro culture；M icropropagation
观赏凤梨的品种繁多，不少具有较高的观赏价值，但其增殖的速度较慢，进行离体培养研究的
还不多，而且没有较系统的基础研究和建立较有生产效益的快繁体系。此外，以离体培养为手段进
行变异品种选育 、种质资源保存等研究也有待开展 本实验以凤梨科四个属共 四种植物为材料 ，探
索观赏风梨离体繁殖 的途径 。
l 材料和方法
1．1 材 料
粉菠萝 echmea fci~ciota (Lind1) Baker]、八宝剑 [Vr~sea poefmcm．i Hort]、虎斑姬凤梨
【Copt~mth zolcao．~(Vis．)Beer]、七彩羞风梨[Neoregefia carofinae(Beer)L．B．Sm．】取 自缤纷 (厦
门)园艺公 司。均以蘖芽或腋芽萌发纳小苗的茎段及试管苗叶片基端为外植体材料。
收稿 日期：200t_o3-29 接受 日期：2001一l2-03
通 作者 Coresponding author
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热带亚热带植物学报 第 1O卷
1．2 培养基
诱导培养基：①MS+NAA 0．5 mg L-。+BA 5 mgL。；②MS+NAA 1 mg 。+BA 5 mgL-l；．③MS+
2,4-D 4mgL _NAA 2mgL～；④ MS+2，4-D 2mgL +IBA 2mgL‘。+BA 0．1 mgL 。
增 殖培养基 ：MS+BA 1 mg L-。+NAA 0．05-5 mg L。；Ms+NAA 0．1 mg L。+BA 0 1—10 mg L～；
I／2M S．1／4M S—NAA 0．1 mgL 。十BA 1 mgL。。
壮苗培养基：MS+KT1，2，5mgL‘。；MS+BA 0 3．1，5mgL～。
生根培 养基 ：I／2MS+NAA 01，O．5，I，2mgL～；MS，1／2MS．I／4MS+NAA 2mgL。+话性炭 0，
0．1％ 。
所有培养基均加蔗糖 3％，固体培养基加琼脂 0 7％ 诱导壮苗均采用固体培养基，增殖培养采
用固体和液体两种培养基进行 比较。
培养方式的转换包括：①液体培养基转入液体培养基；②液体培养基转入固体培养基；③固体
培养基转入 固体培养基 ；④ 固体培养基转入液体培养基
1．3 育苗方 法
冠芽及蘖芽先去脒叶片，洗净。将茎段置于 0 1％升汞 中灭菌 】0 min，用无菌水冲洗 3-5次，再
切成长 1 cm 左右 的上 、中、下茎段，接人诱导培养基① 和② ，然后置于 28±l℃．光照 16 h d。，光强
2 000lx左右条件下培养。在诱导培养基上继代 1—2代，然后转入增殖培养基。试管苗叶片基部置
于诱导培养基⑧和④中培养 ，置于 28~1~C，暗培养。产生愈伤组织后转入弱光培养。
将诱导生成的芽或芽丛转入增殖培养基 ，并进行固体培养与液体培养方式转换。增殖数代的
较大的苗，转入壮苗培养基后再转人生根培养基；或直接转入生根培养基。培养得到的较大的有根
或无根苗，移人基质：①椰糠：砂 1：l、②椰檬：泥炭土：蛭石 1：1：1、③泥炭藓或④砂中，记录成活
率，筛选出成活率高，长势好的基质。
从瓶内或移栽后小苗的形态特征和叶色初步判断是否发生变异 ，估计变异率。
2 结果和分析
2．1 诱导培养
茎段诱导以NAA 0．5mgL。十RA 5mgL。培养基中芽的萌动早 ，生长快。本文后述的外檀体实
验均以 MS培养基加此调节剂组合为起点培养基。
四种风梨的中部茎段萌动最早 ，上部茎段萌动稍迟 ，下部茎段易污染。八宝剑和七彩羞风梨茎
中段接种一周后即已萌动，上段约 10 d后萌动，下段污染。虎斑姬凤梨中段接种约 5 d后萌动，1 5 d
后芽达 2mm，上段 25 d后萌动 ，下段污染。两个不同取材来源的粉菠萝分别记为粉菠萝 l和粉菠
萝 2，两者萌动迟早不一 ，前者的上段接种一周后萌动 ，1 5 d后芽约 4mm高 ，中段 30 d后萌动 ，下
段未萌动 ；后者中段约 1 5 d后才萌动 E段 30 d后萌动 ，下段未萌动 重复取材粉菠萝 2，以较小的
还未发根 的粉菠萝苗为材料 ，切取的茎段外植体褐化程度较轻者 ，萌动早 ，诱导敛果较好。
2．2 增殖培养
以下各种处理均以八宝剑的增殖体为试材 ，以芽丛块株数变化来计算增殖倍数。
生长调节剂的影响 用 MS—BA 1 mgL +NAA 0．05．0．1，0．5，1或 5 mgL 液体培养基 ，每
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第 1期 洪燕萍等：四种观赏凤梨 的离体繁殖
个处理组合接种 30个左右的增殖体 ，3Od后以芽苗株数计算增殖率 (增殖倍数)。除 NAA0．05mgL
与 0．1 mgL-。的增殖率相近(5．02，5．05)之外 ，随着 NAA浓度增加至 O．5，1．5，芽丛增殖倍数减小 ，分
别为 3．98、3 22、3 27。从其生长状况看．芽间的联系随NAA浓度的增加变得松散，芽苗变大，说明虽
然随NAA浓度的增加芽丛增大速率减小，但芽丛里芽苗的生长较好，对后续的壮苗有一定的益处。
以 MS+NAA 0．1mgL-。+BA 0．1，O 5，l，3，5或 l0mgL 液体培养基培养，每个处理组合接种
3O个左右的增殖体．30 d后记录的结果是：随BA浓度的增大，增殖率增大，浓度在 O．1，0．5和 1 mg
时，增殖率分别为 3．70，4．28 5．05。但此后浓度再增大至 3．5和 10mgL 时 ．增殖率反而下降 ，分
别为 3．76．3．44，2 79 这说明增殖培养以 BA l mgL 为好。
基本培养基和细胞分裂素的影响 以 MS．1／2MS或 1／4MS+NAA 0．1 mg【『。+BA 1 mg L。
为培养基，每个组合接种 2O个左右的增殖体．50 d后记录，结果平均增殖倍数分别为 5．05，4．70，
3．9O。以 Barlett检验法进行多个方差齐性检验，方差具齐性。以单因素方差分析样本无显著差异 ，
即增殖培养阶段用上述三种基本培养基 ，其增殖倍数并无显著差异。
以 MS+NAAO．1 mgL +BA或 KT l mgL-。液体培养，每个处理组合接种 2O个左右 的增殖体 ，
50 d后，1 mgL。BA条件下其增殖系数达 8 30，是 l mgL-。KT条件下(3．41)的 2 43倍
固液转换的影响 MS+NAA 0．1 mg L +BA l mg L 的固体和液体培养基进行 固液转换
培养 ．每种处理接种约 2O个芽丛块 ，记录增殖倍数，观察培养方式的转换对增殖的影响 。不同转换
方式的培养结果分别为：固体转人液体增殖倍数最高 ，达 6 58(a)．液体转人固体增殖倍 数达 5．78
(b)．固体转入固体增殖倍数达 5．29(b)，液体转人液体增殖倍数达 4 45(c)(以Duncan法进行多重
比较 ．13．b c分别表示 p=0．05的显著 }生差异检验，下同)
黄化培养 参照 Kissm的黄化途径增殖 的方法 ，以粉菠萝和虎斑羞凤梨为试材 ，将生长健壮
的大苗(茎高约 1 cm)切除叶片转入 MS+NAA 2 mg L 进行暗培养。经约20 d的培养，黄化苗抽出
约 l cm。50 d后黄化苗抽出达 5-8节 ．长 5—7 cm。若原苗较小 ，切除叶片转人 MS+NAA 2 mg L 进
行暗培养后，茎不抽长，抽出黄化叶片。在实验中发现 ，每个茎段抽出黄化苗 1-2个。有些黄化苗在
节处生出气生根 ，有些黄化苗在节处又抽出黄化的腋芽
2．3 生根培养
NAA的影响 粉菠萝的芽苗为试材，以固体培养基
1／2MS+NAA 0．1，0．5，1．2mgL。‘进行生根培养 ，每种处理组合
约接种 2O株小苗。原苗无根，茎高约 0．1 cm，经 2个月的培养
后记 录茎高及根数 ，并进行显著性测验 ，结果如表 1所示 。可
见 ，O．5 mg L ‘为 NAA促进生根的最佳浓度 。
基本 培养 基及活性炭 的影 响 以 MS，1／2MS，1／4MS+
NAA 2mgL +活性炭 0或 0．1％为生根培养基 ，2个月后进行
结果统计分析 ，结果如下： 不加活性炭的培养基进行结果统
计 ，基本培养基为 MS，1／2MS．I／4MS的平均茎高(cm)分别为 1
(a)，0 33(b)，O．27(b)，平均根数分别 为 lO(a)，5．33(b)，2．70(c)；
不区分基本培养基进行统计 ，结果为加活性炭 的平均茎高为
表 1 NAA浓度对茎高和根散的影 响
Table【Efect of【，2MS medium supplemented
withNAA on shootheight and root
numberofbromeliads
以 Duncan法世行多重 比较 ．a．b，c分别表示
p=0~5的显著性差异检验 b and treatments
significantly diferent from each other Duncan-
testD 0．05．
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热带亚热带植物学报 第 10卷
O．2O cm，平均根数 为 1．62，不加活性炭的平 均苇高为 0 31cm，平均根数为 3．44，不加活性炭的茎高
及根数极显著高于加活性炭的 从外观长势看 ，加活性炭的培养基 ，小苗叶成束状向上生长 ；未加
活性炭者小苗叶较平展 加活性炭者根数量少 ，为正常根 ，不加活性炭者根数量多 ，为气生根。
以上结果表 明，经较长时间的培养 (约 2个月 )，与 1／2MS、I／4MS相 比，MS培养基XCd,苗的生
长较好。但是较短培养时间的观察结果却不相同，培养约 20 d后观察，仅 I／2MS中生根率达 40％，
MS与 1／4MS中未生根 ，可见 I12MS为较好的基本培养基 ．
如前述实验中 ．以 1，2MS+NAA 0．1，0 5，1，2mgL 为生根培养基 ，20 d后 观察 ．发现 NAA
O．1，0．5或 1mgL。的生根率达 80％，小苗的生长也较好 但 NAA浓度高 (2mgL )时，小苗初期生
长不佳 ，I1．r出现黄褐，特别是基部叶 ，有些苗后期死亡 ，生根率仪为 40％。可以推断 ，对于较小的苗，
不加活性炭时 ，NAA浓度 2mgL。，会对其产生一定的毒害 ，抑制其生长 ，加活性炭的生长较好 ，但
仍不及NAA 0 5mgL 培养基的 而对于较大的苗，NAA 2mgL 且不加活性炭，苗生长健壮，未出
现叶片黄褐．对苗的生长是有利的
综合较短时间培养和较长时间培养的观察结果 ，可 以认 为，以 I／2MS+NAA O．5 mgL 进行生
根培养 为好． 若培养时间较长 ，且原苗较大 ，可采用 MS+NAA 2mgL～。在 NAA浓度不过高的条件
下，生根培养以不加活性炭为好 。
增殖培养基的影响 培养于 MS~KT 1，2或 5mg L-。中的单芽，两个月后观察发现 ，芽几乎
不生长，I1 r色较绿，含有 2—3芽的小芽丛略有增殖：培养于 MS+BA 0．3，1或 5mgL 的单芽亦无明
显生长 ，叶呈暗绿色，含有 2-3芽的小芽丛有明显增殖 ，变为约含 1O芽的小芽从。可以认 为，仅含
KT或 BA 的培养基都不能使芽生长 但是 ，将 培养后的芽 苗转入 生根培养 基 1／2MS+NAA 1或
2mgL 后，芽苗开始生长 ，原培养基含 BA与 KT的平均茎高分别为 0．14 cm，O．43 cm，统计分析两
者差异极显著 而且．由含 BA的原培养基转移来的芽苗生根率约为 50％，由含 KT的原培养基来
的接近 100％
从其外观长势亦可明显看出，原培养于 KT中的芽 ，在生根培养基中为单芽或 2—3芽小芽丛 ，
芽均较高，芽丛中芽间分界明显。而原培养于 BA中的芽，在生根培养基中形成芽丛，如BA浓度由
低到高，则芽丛由稀到密 ，芽由小到大 BA达5 mgL。者，生根培养生成芽丛很密，有的形似绿色圆
球状愈伤组织一可初步断定 ，原培养基含 BA会使继代培养中芽增殖，从而影响芽的生长。
2．4 移 苗
将有根苗 、无根苗，大苗 、小苗．单芽 、丛芽等不同材料于 6月份分别移栽于不同基质中，2个月
后的成活率与长势如下。按不区分苗的类 型进行统 ’，不同基质中成活率有差异 ，其中①和②基质
中苗的成活率均达 95％以上，④基质中的达 85％以上，⑧基质中的仅 60％左右 大苗(茎高约 2—
4 mm，苗高约 2—3 cm)在① 、②和④基质中的成活率均达 100％，在③基质中的也达 90％以上 。小苗
(茎高约 1 mm，苗 高低于 2 cm)成 活率则较低 ，在①②基质 中的达 90％，在④基质中的达 80％以
上，在⑧基质中的仅 50％左右。芽丛成活率与小苗相似。
苗的K势也有所不同。以大苗(茎高约 2-4 mill，苗高约 2—3 cm)进行移栽，两个月后茎高达 4—
6 rtrfl，苗高达 3一l cm，叶片明显变宽 ，由 1—2mm变为 4—5 mm，苗健壮，移栽效果好；其次为小苗 ，苗
高达 2 cm左右 ，苗较弱，I1 r片也无明显变宽；芽丛长势最差，几乎无氏高，但苗间变松散，较易分割
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第 1期 洪燕 萍等 ：网种观赏风梨的离体繁殖
综合成活率 与长势两方面来看 ，以椰糠：砂 =1：1或椰糠 ：泥炭土：蛭石 =1：1：1为基质 ，以大苗进
行移栽，移栽效果好 以小苗或芽丛进行移栽，成活率也不低，但生长较慢。
粉菠萝．八宝剑，虎斑姬风梨在瓶内或移栽后均未发现形态变异 其他进行凤梨离体培养的实
验室发现叶片为全绿的观赏风梨离体培养发生变异的 比例很低 ，如缤纷 园艺公司的八宝剑变异率
为万分之一左右 而七彩羞凤梨在瓶内发现大馈的变异 原七彩羞风梨叶片为黄绿相间，即有黄色
纵条纹，培养后出现全绿、全黄及不同程度黄色纵条纹的小苗，说明七彩羞风梨为嵌合体 ，在培养
中出现分离．、
3讨 沦
不同茎段的诱导效率 诱导实验中以中部茎段诱导效果好。上段由于原叶基的生长，包被茎
段，造成茎段实际受光不足，且顶芽的存在抑制隐芽的萌动。不同种顶芽的抑制强度不同。下段则
由于茎段老化，隐芽不易萌动。实验中还发现，由于所取的小苗生长发育情况和生理状态．会导致
接种后不同程度褐化及萌动速度不一 一般以较小的苗为材料，切取的茎段褐化程度较轻，诱导效
果较好 其内在机制尚须进一步研究
利用黄化途径的增殖 Kiss等以健壮的苗通过黄化途径进行增殖，几乎不会发生变异。黄
化苗的高度与原苗的高度具有显著的相关性 i 但获得一定高度健壮的苗 ，需要经过较长时间的培
养 ，因此以黄化苗途径进行增殖费时较长 ，无法达到很高的增殖速度 黄化途径进行增殖要解决如
何快速获得健壮大苗的问题。我们以丛生芽的方式进行增殖，可以避免过高的变异率，又可以达到
较高的增殖率。变异率统计 与调查结果也证实了芽生芽的途径变异率很低 。值得一提的是 ，七彩羞
凤梨在诱导获得的萌动腋芽 中未发现变异 ，但在增殖获得的芽丛 中产生大量 的变异 ，因此以黄化
途径增殖控制变异仍有应用前景
活性炭的效用 话性炭已在防止培养物变褐I!l勺培养过程中广泛应用 l。林惠端等 在培养基
中加活性炭使风梨生根良好 但从我们的实验来看．当NAA浓度低于 1 mg L。时，以不加活性炭培
养基生根较好 ，而当 NAA 浓度高(2 mgL。)时，会对小苗产生一定的毒害 ，生长受到抑制 。加人活性
炭则可减弱 NAA的毒害作用．但小苗生长仍不及 NAA 0．5 mg L。’培养基的。这说明活性炭仅能减
弱 NAA的部分毒性。而对于较大的苗 ，NAA 2 mg L。且不加活性炭对苗无毒害，有利于生长。
展望 本文在风梨科 几种植物的离体培养上进行了一些探索 、初步建立了数种凤梨科植物
的快繁技术体系 其中，粉菠萝的离体培养尚未见到国内报道；国外报道须经愈伤组织途径 ，而本
实验则不须经愈伤组织途径，减少了变异的可能性 与八宝剑和七彩羞凤梨同属的植物已见不少
报道 ．同种尚未见搬道 ；与虎斑姬凤梨 同属 f}句植物国内已见报道191，但同种 尚未见报道。因此 ．本
研究取得的进展对于观赏风梨在我国进一步推广应用有一定意义 本文初步总结出凤梨试管育苗
需要估计的主要参数 ，包括增殖率 、培养基配方 、移苗基质 、移苗成活率等。在此基础上 ，今后若能
对技术体系和有关参数进一步完善．并找出各参数与成本之间的数量关系，使试管育苗可以实现
最优化生产．提高投入产m比“ ，则此快繁体系有望较好地应用于生产。
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中国羊蹄 甲属一分布新记录
张奠湘
c中国科学院华南植物研究所 广东 广州 5 10650
摘要 ：撤道 r原产于越南的蟹钳叶羊蹄甲在中国n勺分布新记 录
关键词 ：羊蹄 甲属；新记录
中图分类号 ：Q949．75I 9 文献标识码 A 文章编号 ：1 005—3395(2002)01—0068—0
A Bauhinia(Leguminosae)Species New to China
ZHANG Dian—xiang
(s China f¨ f f r 肌 the c^ Acrub,m) 矿 &／enees，Guangzhou 510650，China)
Abstract：A Vietnamese species ofBauhin．ia L．，13．CtT,Ft inophylla M en"．，is newly recorded from China．
Key words：Bnuhinia；New record
在准备《中国植物志》的英文版 “Flora ofChina”的羊蹄甲属稿件的过程中，作者发现在哈佛大
学标本馆的一份采 自广西钦州的标本(钟 观光 1861)，Larsen教授 曾研究并鉴定 为Bauh#~ia
arcim~pb,yllo Merr，本文作者亦认同。我们最近几年亦在广西凭祥等地多次采集到无花果的该种植
物标本 毫无疑问 ，该种植物普遍 见于广西与越南交界的地区．作为《中国植物志》未收录的一个
种，现予报道
蟹钳叶羊蹄 甲(新拟)
Bauhinia carcinophyIla Merr．J．Arnold Arb 23：171(1942)；Larsen＆ Larsen，FI．Carnb．Laos et
Vietn 18：】98(1980)．Type：Vietnam．QuangNinh，Tsang 29033(holotype：A!；isotype：IBSC!)
广两钦州 钟观光(K．K Tsoong)l 86 1(A) 、
收稿 日期：2ooi—i2-1o 接受 日期：200I一12-21
基金项 目：中国科学院知识创新工掸青年科学家小组项 H及经费择优蔓持回国工作基金项 目
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