全 文 ：植物生理学报 Plant Physiology Journal 2015, 51 (3): 391~398　　doi: 10.13592/j.cnki.ppj.2015.0003 391
收稿 2015-01-07　　修定 2015-01-30
资助 国家自然科学基金(31401844)、山东省科技攻关项目(2013-
GNC11016)和山东省高等学校科技计划项目(J14LE12)。
* 通讯作者(E-mail: liuxin6080@126.com; Tel: 0532-88030311)。
葡萄WRKY18基因的克隆及表达特性分析
肖培连, 冯睿杰, 侯丽霞, 吕晓彤, 朱丹, 刘新*
青岛农业大学生命科学学院, 山东省高校植物生物技术重点实验室, 山东青岛266109
摘要: 以抗性品种‘左优红’组培苗为材料, 克隆得到WRKY18基因, 测序结果显示: VvWRKY18基因片段大小为954 bp, 编码317
个氨基酸序列。生物信息学分析结果显示VvWRKY18蛋白分子量约为35.2416 kDa, 等电点为8.22, 不稳定系数为48.61, 推测
为不稳定蛋白; 与已知的粳稻、高粱、毛果杨及拟南芥WRKY家族蛋白高度同源; 亚细胞定位预测结果显示主要存在于细
胞核中, 属于第二类WRKY转录因子家族成员。实时荧光定量PCR分析显示, VvWRKY18在葡萄不同组织中均有表达, 在花
中表达量最高; 多种逆境胁迫因子如盐、干旱和低温等诱导VvWRKY18上调表达, 且在低温胁迫6 h时诱导表达量最高。另
外, VvWRKY18受胁迫信号分子水杨酸、脱落酸、一氧化氮和过氧化氢诱导上调表达, 且VvWRKY18在一氧化氮处理下的表
达模式与低温诱导的类似, 推测VvWRKY18可能通过调控一氧化氮信号分子代谢途径来调节葡萄对低温胁迫应答。
关键词: 葡萄; WRKY18; 基因克隆; 表达特性分析
Gene Cloning and Expression Analysis of WRKY18 in Vitis vinifera
XIAO Pei-Lian, FENG Rui-Jie, HOU Li-Xia, LÜ Xiao-Tong, ZHU Dan, LIU Xin*
Key Lab of Plant Biotechnology in Universities of Shandong Province, College of Life Sciences, Qingdao Agricultural University,
Qingdao, Shangdong 266109, China
Abstract: Abiotic stress severely restrict the development of grape industry, so it will provide theoretical basis
for grape breeding through gene cloning and studying its molecular mechanisms. We cloned the full-length
cDNA of VvWRKY18 from leaves of Vitis vinifera cultivar ‘Zuoyouhong’ tissue culture seedling. The results
showed that VvWRKY18 amplified fragment size of 954 bp, encoding a protein of 317 amino acids. Bioinfor-
matic analysis indicated that VvWRKY18 with molecular weight 35.2416 kDa, isoelectric point 8.22 and insta-
bility coefficient 48.61, speculating it was unstable protein. Besides it shared high homology with WRKY18 in
Oryza sativa Japonica Group, in Sorghum bicolor, in Populus trichocarpa and in Arabidopsis thaliana. Subcel-
lular localization result indicated that it was located in nucleus. And it belonged to type II WRKY transcription
factor. Real-time PCR analysis indicated that VvWRKY18 expressed in different tissues, especially in flower. In
addition, VvWRKY18 was induced by low temperature (4 ℃), salt stress, osmotic stress, salicylic acid (SA), ab-
scisic acid (ABA), nitric oxide (NO) and hydrogen peroxide (H2O2). Moreover, the expression of VvWRKY18
was highly induced at 6 h by low temperature and the expression pattern of VvWRKY18 under NO were similar
to those of low temperature induction, which indicated that NO participated in the signal transduction process
of grape response to low temperature stress.
Key words: Vitis vinifera; WRKY18; gene clone; expression analysis
葡萄(Vitis vinifera)属于葡萄科葡萄属, 多年生
藤本植物, 葡萄品种繁多, 具有优良的酿酒特性和
较高的食用价值, 在世界范围内被广泛种植, 也是
我国的主要经济果树之一。目前葡萄的基因组测
序工作已全部完成, 为挖掘葡萄耐逆相关基因、
阐明基因调控植物胁迫耐性的分子机理提供了大
量的信息资源。近年来人们利用分子生物学技术
手段已经从葡萄中克隆了多个与逆境胁迫应答相
关的基因, 并研究了其功能。如参与葡萄抵御低
温过程的VvIPK2 (李希东等2011)、VvBAP1 (张广
科等2014)、VvbZIP23 (Tak和Mhatre 2013)、
VrCBF1、VrCBF2和VvCBF4 (Xiao等2006); 与抗病
相关的VvNPR1.1、Vcchit1b和VvPR1等(Le Henanff
等2009; Fernandez-Caballero等2009; 侯丽霞等
2012)。Siddigua和Nassuth (2011)将葡萄的CBF1和
CBF4基因转入拟南芥中, 研究发现转基因植株的
植物生理学报392
抗寒和抗旱能力增强。因此, 克隆与抗性相关基
因, 研究其表达特性及其作用机制, 对提高葡萄的
抗逆能力具有重要意义。
WRKY转录因子为近年来发现的一种植物特
有的新型转录调控因子, 目前研究发现在模式植物
拟南芥中WRKY家族含有72个成员, 水稻中有100
多个成员。WRKY转录因子最主要的结构特点是
其家族成员在N-端含有WRKYGQK的高度保守序
列 , C端含有C2H2或C2HC的锌指纹(Eulgem等
2000)。近年来越来越多的研究表明WRKY家族参
与调控植物对干旱、冷害、高温和病原菌等逆境
胁迫的应答。如, 过表达甘蓝菜的BcWRKY46的烟
草植株其抗冷、耐盐和抵御渗透胁迫能力增强
(Wang等2012); AtWRKY3和AtWRKY4的双突变体植
株的抗病性较野生型明显下降(Lai等2008); At-
WRKY18能够调控ABA抑制拟南芥种子萌发、根
生长及对盐胁迫和渗透胁迫的敏感性(Chen等
2010)并改变其抵御丁香假单细菌(Pseudomonas sy-
ringae)侵染的能力(Chen和Chen 2002)。预测葡萄
中有59个葡萄WRKY基因(Guo等2014), 从酿酒葡萄
品种‘赤霞珠’分别克隆得到VvWRKY1 (Marchive等
2007)和VvWRKY2 (Mzid等2007), 并发现异源表达
VvWRKY1和VvWRKY2后增强烟草对真菌感染的抵
抗力; 从中国野生葡萄中克隆得到VpWRKY1和Vp-
WRKY2, 证明VpWRKY1和VpWRKY2的过表达拟南
芥植株具有较好抗冷性和抗盐性(Li等2010); 从‘北峰’
葡萄品种中克隆得到VvWRKY11, 发现转基因的拟南
芥植株抵御干旱胁迫能力提高(Liu等2011); 本实验室
从‘左优红’葡萄品种中克隆得到的VvWRKY13、
VvWRKY45和VvWRKY71, 证明其受NaCl、低温、
甘露醇和脱落酸(abscisic acid, ABA)等逆境相关因
子的诱导(侯丽霞等2013), 然而至今未见葡萄
WRKY18基因功能的研究。为此, 本实验以抗性葡
萄品种‘左优红’为实验材料, 从葡萄叶片cDNA克
隆获得抗逆相关基因VvWRKY18, 并利用荧光定量
PCR技术检测其在逆境相关因子作用下的表达特
性, 为进一步探究其在逆境胁迫中的调节机制提供
基础, 同时为葡萄的遗传改良提供候选基因。
材料与方法
1 实验材料
以葡萄(Vitis vinifera L.)抗性品种‘左优红’
(‘Zuoyouhong’)为实验材料, 以其带芽新梢为供试
外植体, 75%的乙醇处理30 s, 0.1%的升汞处理5
min, 无菌水充分冲洗5~6次。将材料两端切取2~3
mm, 去除被乙醇和升汞杀死的组织, 剩余部分接种
于含有0.1 mg·L-1生长素(auxin, IAA)的1/2MS培养
基上, 置于培养室中(温度25 ℃±1 ℃, 光强200
μmol·m-2·s-1, 12 h光照/12 h黑暗)培养, 30~50 d后使用。
2 材料处理
取生长4~5周龄的‘左优红’葡萄组培苗分别经
过水杨酸(salicylic acid, SA) (1 mmol·L-1)、脱落酸
(abscisic acid, ABA) (0.5 mmol·L-1)、一氧化氮(ni-
tric oxide, NO)供体硝普钠(sodium nitroprusside,
SNP) (0.1 mmol·L-1)、过氧化氢(hydrogen peroxide,
H2O2) (0.1%)、硫化氢(hydrogen sulfide, H2S)供体
硫氢化钠 (sodium hydrosulf ide, NaHS) (0 .1
mmol·L-1)、甘露醇(200 mmol·L-1)、NaCl (150
mmol·L-1)、4 ℃低温处理0、3、6、9、12、24、
48 h后, 提取叶片总RNA, 反转为cDNA, 荧光定量
PCR用于基因相对表达量的研究。每处理至少重
复3次。
取‘左优红’盆栽苗一年生枝条的根、卷须、
茎、叶、叶柄、花芽、花以及小果, 提取总RNA,
反转为cDNA。实时荧光定量PCR检测VvWKRY18
相对表达量变化, 研究VvWKRY18基因组织表达特
异性, 每处理至少重复3次。
3 实验方法
3.1 总RNA的提取和cDNA合成
按照李希东等(2011)方法提取葡萄总RNA, M-
MLV反转录试剂盒合成cDNA第一条链作为模板。
3.2 VvWRKY18基因的克隆及序列分析
以拟南芥AtWRKY18进行WU-BLAST序列比对,
检索到葡萄品种‘黑比诺’基因组数据库中VvWRKY18
基因同源序列, 并利用生物学软件(Primer Premier
5.0)设计VvWRKY18基因特异引物, 引物如下: Sense,
5′-CGGGATCCATGGAATTCGAATTTATTGATAC-3′;
Anti-sense, 5′-GGGGTACCTCACCATTTTTCTATCT-
GAG-3′。PCR引物由上海桑尼生物工程有限公司合
成。PCR反应程序如下: 94 ℃预变性5 min; 94 ℃变
性30 s, 53 ℃退火30 s, 72 ℃延伸2 min, 35个循环; 最
后72 ℃延伸10 min, 4 ℃保存。PCR产物利用宝生物
工程(大连)有限公司试剂盒回收, 与pMD18-T载体连
接。阳性克隆由上海桑尼生物工程有限公司测序。
肖培连等: 葡萄WRKY18基因的克隆及表达特性分析 393
3.3 VvWRKY18的生物信息学分析
利用在线软件ProtParam (http://web.expasy.
org/protparam/)对氨基酸序列进行分析; 利用NCBI
网站在线软件Conserved Domains (http://www.ncbi.
nlm.nih.gov/Structure/cdd/wrpsb.cgi)预测保守结构
域; 利用在线软件NetPhos (http://www.cbs.dtu.dk/
services/NetPhos/)分析磷酸化位点; 利用ProtScale
(http://web.expasy.org/protscale/)分析氨基酸序列的
疏水性/亲水性; 利用http://wolfpsort.org/进行亚细
胞定位的预测; 利用软件MEGA4.0采用N-J法构建
进化树。
3.4 VvWRKY18基因表达分析
利用实时荧光定量PCR检测VvWRKY18相对
表达量变化, 引物如下: Sense, 5′-CTGCTTCT-
GAAGGACGGATA-3′, Anti-Sense, 5′-GCCTAATG-
ACACCTCAACTG-3′; 荧光实时定量PCR程序为:
95 ℃ 60 s; 95 ℃ 10 s, 58 ℃ 20 s, 72 ℃ 15 s, 40个
循环。Melt曲线从72 ℃至99 ℃, 第1步维持45 s,
以后每升高1 ℃维持5 s。每样品进行3次重复。以
ACTIN为内参对基因进行相对定量, VvWRKY18表
达量参考Livak和Schmittgen (2001)方法计算。
实验结果
1 VvWRKY18基因的克隆
从抗性葡萄品种‘左优红’的cDNA模板中扩增
得到目的基因VvWRKY18, 结果显示: 在约900 bp处
有一条清晰的条带, 片段大小与预期的VvWRKY18
基因全长序列954 bp一致(图1)。
将上述VvWRKY18 PCR扩增产物连接pMD18-T
载体, 提取重组质粒, 经BamHI和KpnI双酶切鉴定,
结果如图2所示, 将鉴定正确的转化子送交测序,
测序结果表明: VvWRKY18扩增片段大小为954
bp。经DNAstar软件分析可知, GenBank中所公布
的‘黑比诺’品种VvWRKY18基因序列第208位为T,
第218位为T, 第450位为A, 第829位为A, 而从‘左优
红’品种中扩增得到的目的基因片段则分别为A、
G、C和G, 一致性为99.58%。该基因编码317个氨
基酸, 与数据库中公布的氨基酸序列相比, 70位为
甲硫氨酸、73位为丝氨酸、277位为缬氨酸, 而数
据库中对应位置的氨基酸分别为亮氨酸、苏氨酸
和异亮氨酸。
2 VvWRKY18的生物信息学分析
2.1 VvWRKY18蛋白的序列分析
利用在线软件ProtParam对VvWRKY18进行氨
基酸组成分析。结果表明, VvWRKY18的分子式
组成为C1524H2458N444O493S11, 氨基酸数为317, 分子量
约为35.2416 kDa, 等电点为8.22, 不稳定系数为
48.61 (40以下为稳定蛋白), 推测为不稳定蛋白。
利用ClustalX 2.0软件分析比较VvWRKY18所
编码的氨基酸序列, 结果发现VvWRKY18的氨基
酸序列存在位于第1 6 5 ~ 1 7 1位氨基酸的保守
WRKY结构域(图3-A结构域I), 并且存在C-X4-5-C-
X22-23-H-X1-H的锌指结构(图3-A结构域II), 因此可
图1 葡萄VvWRKY18基因CDS全长序列的扩增
Fig.1 PCR amplification production of VvWRKY18 CDS
M: DL 2000 DNA Marker; S1: VvWRKY18的扩增产物。
图2 VvWRKY18重组质粒的酶切鉴定
Fig.2 Restriction digestion analysis of recombinant plasmids
of VvWRKY18
M: DL 2000 DNA Marker; S1: VvWRKY18的酶切产物。
植物生理学报394
图3 葡萄与其他物种中WRKY18氨基酸序列同源进化分析(A)和进化树(B)
Fig.3 Alignment of the predicted amino acid sequences (A) and phylogenetic tree (B) of WRKY18 in grapevine and other species
黑色表示完全相同的氨基酸残基, 灰色程度越浅氨基酸残基保守性越低。粳稻OsWRKY18 (Oryza sativa Japonica Group, GenBank登
陆号BK005021); 高粱SbWRKY18 (Sorghum bicolor, GenBank登陆号NC_012871); 毛果杨PtWRKY18 (Populus trichocarpa, GenBank登录号
NW_001492687); 拟南芥AtWRKY18 (Arabidopsis thaliana, GenBank登录号NC_003075); 蓖麻RcWRKY18 (Ricinus communis, GenBank登
录号NW_002994295)。I代表WRKYGQK保守结构域, II代表C-X4-5-C-X22-23-H-X1-H保守结构域。
知VvWRKY18属于WRKY转录因子家族的第二类
WRKY转录因子。利用MEGA4.0软件分别与拟南
芥、水稻、高粱和毛果杨中的WRKY18氨基酸序
列比较, 发现与粳稻、高粱、毛果杨及拟南芥高
度同源(图3-B)。
2.2 VvWRKY18氨基酸序列翻译后的磷酸化修饰
预测
细胞内蛋白质磷酸化在信号转导中发挥着重
要的作用, 研究报道一共有3种主要的磷酸化部位
包括丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸结合位点。大多数
蛋白质是在丝氨酸和苏氨酸残基上磷酸化, 而许
多与信号转导有关的蛋白质还在酪氨酸位置上被
磷酸化。利用NetPhos分析可看出VvWRKY18存
在丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸3个磷酸化位点, 但是
各个磷酸化位点的数目不同, 其中丝氨酸磷酸化
位点20个, 苏氨酸磷酸化位点7个, 酪氨酸磷酸化位
点1个(图4); WRKY蛋白磷酸化后可改变蛋白质的
活性, 这种改变可能为激活作用, 也可能是抑制作
肖培连等: 葡萄WRKY18基因的克隆及表达特性分析 395
3 VvWRKY18的表达特异性分析
3.1 VvWRKY18的组织表达特性分析
以葡萄品种 ‘左优红 ’为实验材料 , 检测
VvWRKY18在不同组织器官中的表达特性。由图6
可知, VvWRKY18在根、茎、叶、卷须、叶柄、花
芽、花以及小果中均有表达, 但是在不同的组织
中相对表达量存在差异, 其中VvWRKY18在花、叶
柄和叶中相对表达量较高。推测VvWRKY18参与
葡萄的开花进程和叶的生长发育。
用, 这种蛋白质活性的改变在植物的生理生化应
答反应过程中起到重要作用。
2.3 VvWRKY18氨基酸序列疏水性/亲水性预测和
分析
蛋白质结构的特征是亲/疏水间的平衡, 了解
氨基酸序列中亲/疏水性有助于预测蛋白质的结构
和功能。用ProtScale分析WRKY氨基酸序列的亲/
疏水性, 预测结果表明VvWRKY18 N端含有亲水
头部, C端为疏水头部, 而中间氨基酸部分则表现
为亲水性, 整个多肽表现出VvWRKY18是一个亲
水性的蛋白(图5)。
3.2 几种逆境因子对VvWRKY18表达量的影响
经甘露醇、NaCl和低温处理‘左优红’叶片, 实
时荧光定量PCR检测VvWRKY18的相对表达量。
由图7可知, 甘露醇、NaCl和低温均可不同程度的
诱导VvWRKY18的表达, 其中低温诱导VvWRKY18
图5 VvWRKY18氨基酸序列的疏水性/亲水性预测
Fig.5 Analysis of VvWRKY18 hydrophobic/hydrophilic nature
图6 VvWRKY18的组织表达特性分析
Fig.6 Characterization of VvWRKY18 expression in
tissues of grape
2.4 VvWRKY18蛋白的亚细胞定位预测
为进一步研究蛋白发挥生物学功能的作用位
置, 利用在线软件WoLF PSORT对VvWRKY18进
行了亚细胞定位预测。结果显示, VvWRKY18定
位细胞核的预测值为12.0, 而定位在细胞质、叶绿
素、线粒体中的预测值为1.0, 推测VvWRKY18主
要存在于细胞核中。
图7 几种逆境因子对葡萄叶片VvWRKY18相对表达量的影响
Fig.7 Quantitative RT-PCR analysis of some stresses-induced
VvWRKY18 expression in leaves of grape
图4 VvWRKY18氨基酸序列翻译后的磷酸化修饰预测
Fig.4 Phosphorylation site prediction of VvWRKY18
植物生理学报396
子家族的第二类WRKY转录因子(图3-A)。
WRKY家族成员众多, 其表达受到真菌、高
盐、干旱和机械创伤等的诱导。有报道拟南芥的
AtWRKY18在调节植物生长及应答干旱、盐胁迫
和渗透胁迫等发挥着重要作用, 以拟南芥wrky18突
变体为材料发现其对盐胁迫和渗透胁迫的敏感性
减弱(Chen等2010), 但WRKY18的功能研究还刚起
步, 亦不清楚葡萄WRKY18的功能。本研究从葡
萄中克隆得到的VvWRKY18, 其荧光定量PCR结果
显示该基因在盐和干旱胁迫下均有一定程度的诱
导表达, 且首次发现低温能够显著诱导VvWRKY18
表达(图7), 暗示该基因可能参与葡萄对低温的胁
迫应答反应。此外, VvWRKY18在不同组织中的表
达特性结果显示: VvWRKY18在不同组织中均有表
达, 但表达量存在差异, 其中在花、叶柄和叶中表
达量较高, 推测VvWRKY18可能调控葡萄的开花进
程和叶的生长发育过程(图6)。
植物经一系列信号转导过程参与与逆境胁迫
的应答, ABA、SA、NO、H2O2和H2S均是与逆境
应答密切相关的重要信号分子。研究发现At-
WRKY18受ABA和SA的诱导(Chen等2010); At-
WRKY18和AtWRKY40、AtWRKY60相互作用,
与ABA信号途径中ABI4、ABI5的W-box结合并抑
制ABI4和ABI5的表达(Liu等2012)。本实验通过定
量PCR检测发现VvWRKY18受ABA诱导上调表达,
推测VvWRKY18可能通过参与ABA信号途径, 调控
葡萄的胁迫应答或生长发育。NO是一种重要的气
体信号分子, 有研究证实NO参与植物抗冷过程。
来自硝酸还原酶(nitrate reductase, NR)途经的NO
参与拟南芥低温驯化过程, 并通过诱导脯氨酸含
量增加提高植物抗冻性(Zhao等2009); 1 ℃低温处
理能诱导枇杷果实冷藏过程中内源NO含量, 施加
NO清除剂咪唑-1-氧-3-氧化物(tramethylimidazo-
line-1-oxyl-3-oxidepotassium salt, cPTIO)能逆转低
温诱导的NO含量增加, 且cPTIO还能够显著增强
低温下细胞膜膜脂过氧化程度和超氧阴离子含量,
同时降低内源NO含量, 还能降低超氧化物歧化酶
(superoxide dismutase, SOD)、过氧化物酶(peroxi-
dase, POD)、过氧化氢酶(catalase, CAT)活性(Xu等
2012); Zhao等(2011)在分子水平上证明, NO通过促
进CBF (C-repeat binding factor)基因表达提高收获
后番茄对低温的抵御能力。本研究中NO的供体
表达的效果最为显著, 在4 ℃处理后6 h相对表达量
达到最大, 约为对照的27倍。而NaCl和模拟干旱
诱导分别在3 h和9 h达到最大值。由此推测
VvWRKY18可能参与葡萄抵御多种非生物胁迫逆
境, 特别是低温胁迫的过程。
3.3 几种逆境信号分子对VvWRKY18表达量的影响
植物对逆境胁迫的响应是一个复杂的信号转导
过程, 本实验研究了多种逆境信号分子对VvWRKY18
表达量的影响。从图8可以看出, 逆境相关的信号
物质SA、ABA、NO供体SNP和H2O2均可诱导‘左
优红’叶片中VvWRKY18相对表达量的增加, 并分
别在12、9、6和12 h的相对表达量达到最大值, 表
达量变化存在差异; 但H2S供体NaHS对VvWRKY18
的相对表达量没有影响。推测SA、ABA、SNP和
H2O2均可能参与VvWRKY18介导的葡萄抵御非生
物胁迫的过程。
讨　　论
已有研究证明WRKY家族基因在植物应对多
种逆境胁迫过程中都起着正向调控的作用。本研
究从葡萄抗性品种‘左优红’中克隆得到VvWRKY18,
其基因全长CDS序列大小为954 bp, 编码317个氨
基酸序列, 与数据库中公布的品种‘黑比诺’氨基酸
序列相比, 存在3个氨基酸的差异, 分别为: 70位为
甲硫氨酸、73位为丝氨酸、277位为缬氨酸, 而数
据库中对应位置的氨基酸分别为亮氨酸、苏氨酸
和异亮氨酸。VvWRKY18蛋白含有保守的WRKY
结构域; 主要存在于细胞核中, 属于WRKY转录因
图8 几种逆境相关信号物质对葡萄叶片VvWRKY18相对表
达量的影响
Fig.8 Quantitative RT-PCR analysis of growth regulating
substances-induced VvWRKY18 expression in leaves of grape
肖培连等: 葡萄WRKY18基因的克隆及表达特性分析 397
SNP能诱导VvWRKY18在处理6 h时显著上调表达,
与低温诱导VvWRKY18表达显著上调时间相一致,
说明VvWRKY18可能通过调控NO信号分子代谢途
径来调节葡萄对低温胁迫应答。H2S是继NO与一
氧化碳(carbon monoxide, CO)之后的第3种气体信号
分子。有研究发现H2S能直接提高烟草悬浮细胞对
高温胁迫的抗性(Li等2012), Fu等(2013)发现内源
H2S能参与到葡萄应答低温胁迫的过程, 本实验定
量PCR结果表明VvWRKY18不受外源H2S的诱导表
达, 推测H2S可能作为VvWRKY18下游发挥作用。
H2O2亦作为信号分子参与调控一系列胁迫响应的
信号转导, 李希东等(2011)在葡萄中研究表明内源
H2O2参与植物应答低温胁迫过程, 发现H2O2不仅通
过平衡体内活性氧含量降低低温对其损害, 也可通
过提高低温相关基因表达提高葡萄抗低温能力。
本实验中发现H2O2能诱导VvWRKY18的表达, 推测
VvWRKY18可能通过H2O2诱导保护酶活性的升高,
提高葡萄抵御的低温的能力。葡萄转录因子
WRKY18是否是葡萄抵御逆境胁迫的正向调控因子,
及其调控的分子机制等还有待进一步研究。
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