全 文 ：植物生理学通讯 第 46卷 第 5期, 2010年 5月 471
收稿 2010-03-06 修定 　2010-04-01
资助 国家科技支撑计划课题(2008BAC39B05)和广东省农业
攻关(2009 B0202010 09)。
* 通讯作者(E-mail: duanj@scib.ac.cn; Tel: 020-37252978)。
亨利兜兰的离体快速繁殖
曾宋君 1,2, 陈之林 1,3, 吴坤林 1, 张建霞 1, 段俊 1,*
1中国科学院华南植物园, 广州 510650; 2中国科学院研究生院, 北京 100039; 3贵州省园艺研究所, 贵阳 550006
In vitro Propagation of Paphiopedilum henryanum Bream
ZENG Song-Jun1,2, CHEN Zhi-Lin1,3, WU Kun-Lin1, ZHANG Jian-Xia1, DUAN Jun1,*
1South China Botanical Garden, Chinese Academy of Sciences, Guangzhou 510650, China; 2Graduate University of Chinese
Academy of Sciences, Beijing 100039, China; 3Horticultural Research Institute of Guizhou Province, Guiyang 550006, China
1 植物名称 亨利兜兰(Paphiopedilum henryanum
Bream)。
2 材料类别 种子。
3 培养条件 种子萌发和原球茎分化培养基: (1)
1/2MS; (2) 1/2MS+1 g·L-1活性炭; (3) 1/2MS+1 g·L-1
活性炭+100 mL·L-1椰子乳; (4) 1/2MS+1 g·L-1活性
炭 +100 mL·L-1椰子乳 +NAA 1.0 mg·L-1 (单位下
同); (5) VW+100 mL·L-1椰子乳 +1 g·L-1活性炭 +
NAA 1.0; (6) 2 g·L-1花宝 1号 +2 g·L-1蛋白胨 +1 g·L-1
活性炭+NAA 1.0+50 mL·L-1椰子乳; (7) 2 g·L-1花宝
1号 +2 g·L-1蛋白胨 +1 g·L-1活性炭 +NAA 1.0+50
mL·L-1香蕉汁。壮苗培养基: (8) 1/2MS+2 g·L-1蛋
白胨 +1.5 g·L-1活性炭 +NAA 1.0+50 mL·L-1椰子
乳 +50 g·L-1土豆汁; (9) 2 g·L-1花宝 1号 +2 g·L-1蛋白
胨+1.5 g·L-1活性炭+NAA 1.0+50 mL·L-1椰子乳+50
g·L-1土豆汁; (10) 2 g·L-1花宝 1号 +2 g·L-1蛋白胨+
1.5 g·L-1活性炭+NAA 1.0+50 mL·L-1椰子乳+50 g·L-1香
蕉汁。以上培养基均附加 20 g·L-1蔗糖、6.5 g·L-1
琼脂固化, pH 5.2~5.4, 培养温度为(25±2) ℃, 光照
强度为 30~40 μmol·m-2·s-1, 光照时间为 12 h·d-1。
4 生长与分化情况
4.1 材料的无菌处理 收取亨利兜兰人工授粉300 d
的黄绿色荚果, 在超净工作台上用75%酒精的棉球
擦拭干净蒴果表面, 用 75%酒精中浸泡 30 s, 再用
0.1%升汞消毒 15 min, 无菌水冲洗 5次。用无菌
滤纸吸干蒴果表面水分, 剪除上下两端, 纵向切开
蒴果, 将灰色粉末状的种子散落到培养基(1)~(7)
上。
4.2 种子萌发和原球茎分化 在光照培养条件下, 种
子在培养基(1)~(6)中均能萌发; 在培养基(7)中萌发
率低, 萌发种子所形成的原球茎大部分也随后死亡,
其原因可能是香蕉汁中含有不利于种子萌发和早期
生长的营养物质。培养基(5)以VW培养基为基本
培养, 种子萌发的速度快, 20 d左右膨大, 40 d左右
形成白色原球茎, 50 d左右转绿, 萌发率约为 50%,
70 d左右原球茎上端出芽, 但随后生长停止, 并有
大量原球茎死亡, 转到同样的培养基上, 仍有大量
原球茎死亡。但培养基(5)上形成的原球茎继代到
培养基(6)中, 原球茎能继续发育形成小苗且生长良
好。种子在培养基(6)上效果较好, 20 d左右种子
膨大, 45 d左右形成白色原球茎, 55 d左右转绿, 萌
发率约为 45%, 80 d左右原球茎上端出芽, 100 d左
右当形成小苗, 此时可将其转移到相同的培养基中
继代培养。培养基(1)~(4)中, (1)中无活性炭, 种
子萌发快, 30 d左右形成白色原球茎, 45 d左右转
绿, 萌发率约为 45%, 但随后部分原球茎死亡, 在
同样的培养基上继代培养, 根粗而长, 小苗生长不
佳。培养基(3)、(4)中由于加入了椰子乳和 NAA,
萌发率与(2)相当, 均为45%左右, 但萌发后小苗生
长状况较好; 特别是(4)中由于加入了NAA, 小苗生
长较快(图 1)。
4.3 壮苗与生根 将分化出具有 2~3片叶、叶长
1.0~1.5 cm的小苗(图 2)转入培养基(8)~(10)上培
养, 小苗均能较好地生长, 生根率均可达 100%, 每
株有 3~4条根。其中培养基(9)最适合小苗的生长,
植株生长健壮, 根系正常; 培养基(8)上的植株根系
较差, 苗生长也较弱; 培养基(10)中根系较粗壮、
发达, 苗生长较差。
4.4 出瓶移栽 当小苗长至 4~5 cm高时, 将培养瓶
置于温棚中炼苗1周后, 从培养瓶中取出生根苗, 洗
植物组织培养简报 Brief Communications of Plant Tissue Culture
植物生理学通讯 第 46卷 第 5期, 2010年 5月472
净根部附着的培养基, 洗净晾干水分后, 种植于口
径 5 cm的塑料营养杯中, 置于通风的温室中栽培,
种植基质采用用水浸泡过的树皮、泥炭和兰石(1:
1:2)的混合基质中或用进口水苔包裹种植, 种植后
喷施 800倍多菌灵杀菌液。移栽后, 注意保持适宜
的湿度和温度, 7 d内不要浇水, 随后进行正常水、
肥和农药管理, 30 d左右植株恢复生长, 种植4个月
后统计, 小苗移栽成活率均可达 85%以上。8个月
后可换至直径 8.4 cm的塑料营养杯中栽培(图 3)。
图 2 亨利兜兰壮苗培养
图 3 移栽成活的亨利兜兰试管苗
图 4 亨利兜兰母株花朵
900~1 300 m石灰岩地区的岩壁缝隙中或林缘草坡
上。其叶片上面深绿色, 背面浅绿色。花期 9~10
月, 花葶直立或外弯、花单朵。中萼片浅黄绿色
至暗黄色, 上面有褐色的大斑点; 花瓣粉红紫色或
浅红紫色, 具暗紫色或黑紫色大斑点; 唇瓣唇瓣拖
鞋状, 粉红紫色或浅红紫色, 有浅黄色的边缘, 观赏
价值极高(图 4)。但由于长期无节制的乱采滥挖,
亨利兜兰已濒临灭绝, 属于 “野生动植物濒危物种
国际贸易公约”(CITES)附录I的保护对象而被禁止
贸易, 中国物种红色名录将其列入极濒物种。亨利
兜兰的常规繁殖常采用分株繁殖, 繁殖系数低, 而
其种子无胚乳, 在野外需与真菌共生才能萌发, 发
芽率极低。通过无菌播种能获得大量种苗用于野
外自然回归和商品花卉生产。同属植物中的杏黄
兜兰(陈之林等 2004; 丁长春等 2005)、硬叶兜兰
(陈之林等 2004)、带叶兜兰(曾宋君等 2006)、同
色兜兰(王莲辉等 2 0 0 8 )、彩云兜兰(曾宋君等
2009)、长瓣兜兰(王莲辉等2009)的离体培养已有过
报道, 但亨利兜兰种子的离体快速繁殖报道尚未见。
图 1 亨利兜兰无菌萌发
参考文献
陈之林, 叶秀粼, 梁承邺, 段俊(2004). 杏黄兜兰和硬叶兜兰的种
子试管培养. 园艺学报, 31 (4): 540~542
丁长春, 虞泓, 刘方媛, 魏兴强(2005). 杏黄兜兰胚培养与快速繁
殖. 植物生理学通讯, 41 (1): 55~56
王莲辉, 姜运力, 余金勇, 罗在柒, 陈景艳(2008). 同色兜兰的组织
培养与快速繁殖. 植物生理学通讯, 44 (6): 1171~1172
王莲辉, 姜运力, 余金勇, 罗在柒, 陈景艳(2009). 长瓣兜兰的组织
培养与快速繁殖. 植物生理学通讯, 45 (9): 997~888
曾宋君, 陈之林, 段俊(2006). 带叶兜兰的无菌播种和离体快速繁
殖. 植物生理学通讯, 42 (2): 247
曾宋君, 陈之林, 吴坤林, 段俊(2009). 彩云兜兰的离体快速繁殖.
植物生理学通讯, 45 (10): 1011~1012
5 意义与进展 亨利兜兰属于兰科兜兰属, 原产我
国广西南部、云南东南部和越南北部, 生长于海拔