全 文 ：植物生理学报 Plant Physiology Journal 2012, 48 (1): 57~62 57
收稿 2011-07-27　　修定 2011-10-14
资助 农业部‘948’项目(2006-G26)和青岛市自然基金(10-3-4-5-
5-jch)。
* 通讯作者(E-mail: liuxin6080@yahoo.com.cn; Tel: 0532-
8030224)。
葡萄病程相关蛋白1基因的克隆和表达分析
侯丽霞, 高超, 车永梅, 赵方贵, 刘新*
青岛农业大学生命科学学院, 山东省高校植物生物技术重点实验室, 山东青岛 266109
摘要: 以葡萄品种‘左优红’组培苗叶片为材料, 利用同源克隆法获得其病程相关蛋白1基因VvPR1的cDNA全长序列。扩增
片段大小为486 bp, 编码161个氨基酸, 分子量17.5 kDa, 等电点PI=8.69, 含有6个保守半胱氨酸, 4个allergen V5/Tpx-1 related
保守结构域。VvPR1与多种植物PR1高度同源。实时定量PCR检测结果表明VvPR1在葡萄叶片中相对表达量最高; 霜霉病
菌、低温、盐和干旱胁迫均可显著诱导其表达; 水杨酸、脱落酸、茉莉酸、一氧化氮、过氧化氢和硫化氢等亦可诱导其
大量表达, 据此推测, VvPR1参与了多种生物胁迫和非生物胁迫过程。
关键词: 葡萄; 病程相关蛋白1; 基因克隆; 表达分析
Gene Cloning and Expression Analysis of Pathogenesis-Related Protein 1 in Vi-
tis vinifera L.
HOU Li-Xia, GAO Chao, CHE Yong-Mei, ZHAO Fang-Gui, LIU Xin*
College of Life Sciences, Qingdao Agricultural University, Key Lab of Plant Biotechnology in Universities of Shangdong Province,
Qingdao, Shandong 266109, China
Abstract: Using homology cloning method, the full-length cDNA of pathogenesis-related protein 1 (PR1)
named VvPR-1 was cloned from leaves of Vitis vinifera cultivar ‘Zuoyouhong’ tissue culture seedling. Bioin-
formatic analysis indicated that VvPR-1 consisted of 486 nucleotides encoding 161 amino acid with molecular
weight 17.5 kDa, isoelectric point 8.69, VvPR-1 possessed six conserved cysteine and four conserved allergen
V5/Tpx-1 related domain. The VvPR-1 was highiy homologous to PR1 in other plants. Real-time PCR analysis
showed that expression level of VvPR-1 was the highest in leaves, VvPR1 was significantly induced by Plasmo-
para viticola inoculation, salt stress and osmotic stress, signaling molecules such as salicylic acid (SA), jas-
monate (JA), abscisic acid (ABA) as well as nitric oxide (NO), hydrogen peroxide (H2O2), hydrogen sulfide
(H2S) also had inductive effects on VvPR-1 expression. It suggested that VvPR1 was concerned with various bi-
otic stresses and abiotic stresses.
Key words: Vitis vinifera; pathogenesis-related protein 1; gene clone; expression analysis
葡萄是世界范围内被广泛种植的果树, 具有
较高经济价值。但葡萄生长发育过程中易受到霜
霉病、低温、干旱等生物和非生物因素的危害,
逆境条件严重影响葡萄的产量和质量, 研究葡萄
对生物胁迫和非生物胁迫的防御和抗性对于葡萄
产业的发展具有重要现实意义。
病程相关蛋白(pathogenesis-related proteins,
PRs)是植物在受到病原菌侵染后积累的一类蛋白
质, 研究表明, 许多生物与非生物胁迫均可诱导
PRs积累(Hamamouch等2011)。植物PRs可分为17
个家族(Van Loon等2006), 其中PR-1家族含量最丰
富, 高度保守, 参与植物对多种生物和非生物逆境
的响应(牛吉山等2007; Xie等2011; Sarowar等2005),
是植物系统获得性抗性的标志基因。目前, 只有
少数植物的PR1被系统研究, 脱落酸(abscisic acid,
ABA)、水杨酸(salicylic acid, SA)和茉莉酸(jas-
monate, JA)等植物激素对PR1表达调控的研究多
集中于模式植物烟草和拟南芥(Nandi等2003; Flors
等2008)上, 且PR1的作用机制尚不明确。目前葡
萄基因组测序工作已经完成, 葡萄抗逆分子机制
的研究取得许多重要成果, 一些抗逆相关基因如
VvNPR1.1、VrCBF1、VrCBF4和转录因子MDR1、
MDR2、bHLH等被克隆, 并进行了功能分析研究
植物生理学报58
(Le Henanff等2009; Siddiqua和Nassuth 2011; Matus
等2010)。最近, Li等利用14个不同葡萄品种, 克隆
了VvPR1b1, 并比较了功能, 结果表明把品种‘BN5-
4’中VvPR1b1转入烟草后, 可以增强烟草对野火病
菌的抵御能力(Li等2011)。但未见对葡萄PR1表达
特性研究的报道, 亦不清楚葡萄PR1与低温等其他
因子之间的关系。因此, 本文拟以对低温和霜霉
病抗性较强的葡萄品种 ‘左优红 ’为材料 , 克隆
VvPR1, 分析VvPR1序列特征, 研究霜霉病菌和低
温等生物与非生物逆境及ABA、SA、JA、一氧
化氮(nitric oxide, NO)、过氧化氢(hydrogen perox-
ide, H2O2)和硫化氢(hydrogen sulfide, H2S)等逆境
相关信号分子对其表达的影响, 以期为进一步研
究PR1在葡萄抵御逆境胁迫中的作用及机制提供
理论依据。
材料与方法
以葡萄(Vitis vinifera L.)抗霜霉病品种‘左优
红’试管苗带芽新梢为外植体, 用75%乙醇浸泡15 s,
再用0.1% HgCl2浸泡8 min, 经无菌水冲洗3~5次。
接种于1/2MS+0.1 mg·L-1 IAA培养基上, 于光照培
养箱中[(25±1 ℃, 200 μmol·m-2·s-1]培养。无菌条件
下将生根试管苗的顶芽切下, 接种于培养基1/2MS+
0.1 mg·L-1 IAA+0.01 mg·L-1 IBA上诱导生根, 30~50
d后使用。
采用同源克隆法, 以拟南芥病程相关蛋白1基
因AtPR1 (GenBank登录号AY064023、AT2G14610.1)
CDS进行WU-BLAST序列比对, 检索到葡萄中PR1
基因同源序列, DNAstar软件分析其开放阅读框
(open reading frame, ORF), 并以之为模板设计特异性
引物, 由上海生工生物工程有限公司合成。VvPR1-
F: 5′ GCTCTAGAATGGGGTTGTTTAAGATTTC-
ACTAG 3′; VvPR1-R: 5′GGGGTACCTCAATAA-
GGACGCTGTCCG 3′。CTAB法提取葡萄基因组
总RNA, 大连宝生物公司RNA LA PCR™ Kit (AMV)
Ver.1.1 试剂盒反转录PCR。PCR条件为: 94 ℃ 5
min; 94 ℃ 30 s, 58 ℃ 30 s, 72 ℃ 1 min, 30个循环;
72 ℃延伸10 min, 4 ℃保存。北京博迈德试剂盒回
收目的片段, 与pMD18-T载体连接, 阳性克隆交由
上海英潍捷基生物技术有限公司测序。
借助DNAstar软件分析基因序列并推导其编
码的氨基酸序列, 蛋白分析专家(http://www.ex-
pasy.ch/tools/protparam.html)网站分析编码蛋白的
氨基酸数量、分子量、PI及稳定性, http://www.
cbs.dtu.dk/services/SignalP分析其信号肽序列,
http://www.ebi.ac.uk/Tools/pfa/iprscan/网站分析保
守结构域。MEGA 4.0软件(Tamura等2007)的NJ算
法构建系统发育树, Bootstrap值取1 000。
从田间感病葡萄品种‘霞多丽’上采集感染霜
霉病的叶片, 清水冲去旧孢子囊, 将叶片置于20
℃、相对湿度90%条件下培养24 h, 待新孢子囊长
出后, 毛刷刷下孢子囊, 无菌水配成毎mL含8×104
孢子囊霜霉病菌孢子悬液。接种前用载玻片萌芽
法测定孢子囊活力, 萌芽率85%以上为有效。用于
葡萄霜霉病对VvPR1表达影响的研究。
CTAB法提取葡萄组培苗的根、茎、叶3种组
织的总RNA, 用于检测VvPR1的组织表达特异性分
析。分别用霜霉病菌孢子悬液、150 mmol·L-1
NaCl、200 mmol·L-1甘露醇、250 mg·L-1 SA、10
μmol·L -1 JA、150 mg·L-1 ABA、0.1% H2O2、1
mmol·L-1 H2S供体NaHS、0.1 mmol·L
-1 NO供体硝
普钠(sodium nitroprusside, SNP)处理葡萄组培苗叶
片0、12、24、48、72、96 h后, 提取总RNA, 用于
各种胁迫下的VvPR1的相对表达量分析。
上述提取的RNA为材料, 利用M-MLV反转录
试剂盒合成cDNA第一条链作为模板。以ACTIN为
内参对基因进行相对定量, Real-time PCR引物:
VvPR1- Realtime-F: 5 CTGGTTGGCATAGTTCTG
3, VvPR1- Realtime-R: 5 GCTTAGCCTTGGT-
TCACA 3。ACTIN-F: 5 AATGAGAGATGGCTG-
GAAGAG 3, ACTIN-R: 5 TACGAGCAAGAGCT-
GGAAA 3。Real-time PCR程序为: 95 ℃ 60 s; 95
℃ 10 s, 58 ℃ 20 s, 72 ℃ 15 s, 40个循环; Melt 曲线
从72 ℃至99 ℃, 第1步维持45 s, 以后每升高1 ℃维
持5 s。每个样品进行3次重复。VvPR1相对表达量
以实验组目的基因的表达相对于对照组的变化倍
数, 按2-DDCT方法计算(Livak和Schmittgen 2001)。
实验结果
1 VvPR1的克隆及序列分析
1.1 VvPR1的克隆
以拟南芥病程相关蛋白1基因AtPR1 (AT2G-
侯丽霞等: 葡萄病程相关蛋白1基因的克隆和表达分析 59
14610.1) CDS进行WU-BLAST序列比对, 检索到葡
萄品种‘黑诺比’中PR1基因同源序列(XM_0022-
73380)。利用葡萄品种‘左优红’为材料, 根据网站
公布序列设计引物, 并引入XbaI和KpnI酶切位点,
PCR扩增VvPR1 CDS。琼脂糖凝胶电泳检测结果
(图1-A)所示, 500 bp左右处均有1条清晰的条带, 片
段大小与预测一致。把得到的片段构建到pMD18-
T simple载体上, 提取质粒, XbaI/KpnI双酶切鉴定,
结果正确(图1-B), 阳性克隆提交测序。
1.2 VvPR1蛋白序列分析
DNAMAN软件测序结果表明, 扩增片段大小
为486 bp, 编码161个氨基酸。BLAST序列结果表
明, 与网站公布的葡萄‘黑诺比’推测的病程相关蛋
白1 (XP_002265050)氨基酸序列相比, 一致性96%,
相似性99% , 证明本实验克隆的VvPR1属于葡萄病
程相关蛋白1基因家族成员。蛋白质专家分析其
分子量17.5 kDa, 等电点PI=8.69, 不稳定系数
30.72。VvPR1的第1-25个氨基酸是信号肽序列,
切割位点在25到26个氨基酸之间, 具有6个保守的
半胱氨酸结构基序, 含有4个allergen V5/Tpx-1 re-
lated保守结构域(图2)。
将VvPR1与NCBI检索的PR1同源蛋白(共12
个植物物种)进行蛋白序列比对并构建系统发育
树, 结果(图3)显示葡萄的VvPR1与多种植物中病
程相关蛋白1具有同源性, 其中VvPR1与马铃薯
(Solanum tuberosum)、烟草(Nicotiana tabacum)、
番茄(Solanum lycopersicum)等茄科的病程相关蛋
白1聚为一类, 油菜(Brassica napus), 拟南芥(Arabi-
dopsis thaliana)和山葵(Eutrema wasabi)聚为一类,
蓖麻(Ricinus communis)、毛果杨(Populus tricho-
carpa)、大豆(Glycine max)聚为一类, 以上物种均
属于双子叶植物, 而与水稻(Oryza sativa)、玉米(Zea
mays)这两种单子叶植物亲缘关系相对较远。
2 VvPR1表达特性分析
2.1 VvPR1组织表达特性分析
由图4看出, 葡萄品种‘左优红’根、茎和叶中
VvPR1相对表达量存在显著差异, 其中茎中VvPR1
相对表达量最小, 其次是根部, 叶片中VvPR1的相
对表达量最大。
2.2 霜霉病菌、盐、干旱和低温胁迫对葡萄叶片
VvPR1相对表达量的影响
图5表明, 正常条件下(H2O处理)葡萄叶片VvPR1
的表达水平较低, 甘露醇、NaCl、4 ℃和葡萄霜霉
病菌处理后, VvPR1表达量均呈先升高后下降趋
势, 但出现峰值的时间上存在差异。NaCl和4 ℃低
温可诱导VvPR1迅速表达, 处理12 h时VvPR1相对
表达量达最大值(P<0.05); 接种霜霉病菌后VvPR1
表达量于24 h达最高值(P<0.05); 甘露醇诱导
VvPR1表达反应较慢, 在处理48 h时相对表达量达
最大值(P<0.05), 96 h降至本底水平, 表明霜霉病
菌、低温、盐和干旱胁迫诱导VvPR1表达的机制
可能存在差异。
由图6得知, JA、ABA和SA均可诱导葡萄叶
片VvPR1相对表达量显著增加(P<0.05), ABA和SA
图1 VvPR1 CDS的PCR扩增和酶切鉴定
Fig.1 PCR amplification and enzyme digestion analysis of VvPR1
A: PCR扩增; B: 酶切鉴定。M: DL 2000 DNA Marker; 1和2: 样品。
植物生理学报60
处理后48 h 时 VvPR1相对表达量达到最高值, 之
后逐渐降低; JA处理后VvPR1的相对表达量于72 h
图2 VvPR1与其他物种PR1序列同源性分析
Fig.2 Alignment of the predicted amino acid sequences of VvPR1 and other PR1s
拟南芥(Arabidopsis thaliana): AtPR1 (GenBank登录号AEC06314); 蓖麻(Ricinus communis): RcPR1 (GenBank登录号EEF40266); 毛果杨
(Populus trichocarpa): PtrPR1 (GenBank登录号EEE75470); 水稻(Oryza sativa): OsPR1 (GenBank登录号BAB84473); 玉米(Zea mays): ZmPR1
(GenBank登录号ACG25182)。实线框表示保守的6个半胱氨酸, 虚线框I、II、III、IV表示4个allergen V5/Tpx-1 related保守结构域。
图3 植物PR1蛋白同源序列的系统发育树
Fig.3 Phylogenetic tree of PR1 homologous
sequences from plants
拟南芥: AtPR1 (AEC06314); 油菜: BnPR1 (AAB06458); 山葵:
EwPR1 (BAF03626); 大豆: GmPR1a precursor (AAD33696); 烟草:
NtPRB-1b (CAA47374); 水稻: OsPR1 (BAB84473); 毛果杨: PtrPR1
(EEE75470); 蓖麻: RcPR1 (EEF40266); 番茄: SlPR1 (ACB88202);
马铃薯: StPR1 (CAB58263); 玉米: ZmPR1 (ACG25182)。
图4 VvPR1组织表达特性
Fig.4 Characterization of VvPR1 expression in tissues
时达到最高值, 后逐渐降低, 于96 h基本达到最初
相对表达量。
2.3 外源H2O2、NO和H2S对葡萄叶片VvPR1相对
表达量的影响
H2O2、NO和H2S是植物响应逆境胁迫的重要
信号分子, 图7显示, H2O2、NO供体SNP及H2S供体
NaHS都能诱导VvPR1的显著表达, VvPR1对NaHS
反应迅速, 表达量于处理12 h时达最大值(P<0.05),
侯丽霞等: 葡萄病程相关蛋白1基因的克隆和表达分析 61
SNP和H2O2处理后VvPR1表达量分别于24 h和48 h
达最高水平(P<0.05), 后逐渐降低。
讨　　论
PRs 基因家族中的PR1基因通常被认为是系
统获得性抗性的标记基因, 其中葡萄PR1是一个包
括大约21个成员的基因家族(Li等2011), 本实验以
葡萄品种‘左优红’为材料, 克隆得到VvPR1 cDNA
序列, BLAST比对表明, 与葡萄品种黑比诺公布序
列XP_002265050最为接近, 相似性达到99%。软
件分析表明, VvPR1具有信号肽, 6个半胱氨酸保守
区等PR1的典型序列特征。进一步分析其表达特
性, VvPR1在葡萄叶片表达量最高, 推测其在葡萄
叶片的生长发育或防御反应中发挥重要作用。
霜霉病、干旱和低温是限制葡萄生产的重要
因素, 本文研究表明VvPR1可响应多种胁迫, 霜霉
病菌、低温、干旱及盐均可上调其表达, 但VvPR1
表达对NaCl和4 ℃低温反应迅速, 而对甘露醇反应
较慢, 推测与不同胁迫因素诱导VvPR1表达的信号
转换过程存在差异有关。SA、JA和ABA是重要
的逆境适应激素, 均可诱导拟南芥等植物PR1表达
(Nandi等2003; Le Henanff等2009; Sabater-Jara等
2010)。并且三者之间存在信号网络交叉, 例如在
植物抵御病原菌浸染过程中, ABA作为一种信号
可以影响JA的生物合成并且激活拟南芥的抗性
(Adie等2007)。本文研究表明SA、JA和ABA对
VvPR1表达也有诱导作用, 且PR1对ABA的响应最
早, 其次是SA, 推测可能ABA作为上游的信号分子
诱导下游SA和JA的产生, 最终引起PR1表达量变
化。H2S、NO和H2O2是近期发现的应答逆境信号
分子, 它们参与植物对许多逆境的适应过程, 而且
之间存在相互作用(Neill等2008; Sang等2008; Zhang
等2009; Zhang等2010)。Leon等(1995)研究发现,
在烟草的系统获得性抗性(systemic acquired resis-
tance, SAR)过程中, H2O2在SA的上游起作用, 用高
浓度的H2O2 (>300 mmol·L-1)处理烟草后, 产生了计
量依赖的SA积累和PR1基因表达。但目前尚未见
NO和H2S对植物PR1表达影响的研究报道。本实
验证明外源H2S、NO和H2O2均可显著诱导VvPR1
表达, 并且VvPR1对NaHS反应最快, 其次是NO和
H2O2, 推测这三种信号间可能存在上下游关系。
VvPR1可被霜霉病菌等多种胁迫以及SA等多种激
素和NO等信号物质诱导, 那么这些过程是否存在
联系和相互作用？曲凌慧(2010)等研究表明, 低温
条件下贝达和赤霞珠葡萄叶片中均出现ABA和JA
的猝发; 林志强等(2010)研究表明H2O2、NO、JA
和ABA均参与了葡萄对霜霉病菌的防御反应。葡
萄是否通过ABA、JA或SA等信号分子诱导VvPR1
图5 甘露醇、NaCl、低温和霜霉病菌对葡萄叶片
VvPR1表达的影响
Fig.5 Effects of mannitol, NaCl, low temperature and Plas-
mopara viticola on expression of VvPR1 in
leaves of V. Vinifera
图6 JA、ABA和SA对葡萄叶片VvPR1表达的影响
Fig.6 Effects of JA, ABA and SA on expression of VvPR1
in leaves of V. Vinifera
图7 SNP、NaHS和H2O2对葡萄叶片VvPR1表达的影响
Fig.7 Effects of SNP, NaHS and H2O2 on expression of
VvPR1 in leaves of V. Vinifera
植物生理学报62
表达, 以增强对各种胁迫的适应性？各种信号分
子诱导VvPR1表达早晚存在差异, 是否说明不同信
号分子存在于信号传递链中位置不同？另外, 在
拟南芥中SA能够通过NPR1依赖和NPR1不依赖两
条途径诱导PRs基因表达 (Nandi等2003) ; Le
Henanff等(2009)发现VvNPR1.1在葡萄中过表达可
诱导霜霉病菌侵染后PR1含量显著增加, 葡萄受霜
霉病菌侵染时 , 是否存在SA→？→NPR1→？
→PR1信号转导链？这些问题的进一步研究解决
将有助于葡萄抗病抗逆机理的阐明。
参考文献
林志强, 李希东, 侯丽霞, 张英昊, 刘新(2010). 葡萄感染霜霉病后几
种信号物质的变化. 植物保护, 36 (2): 50~55
牛吉山, 刘瑞, 郑磊(2007). 小麦 PR-1、PR-2、PR-5 基因的白粉菌
和水杨酸诱导表达分析及白粉病抗性研究. 麦类作物学报, 27
(6): 1132~1137
曲凌慧, 车永梅, 侯丽霞, 刘新, 卢江(2010). ABA和JA等激素参与
葡萄对低温胁迫的应答. 青岛农业大学学报, 27 (1): 117~121
Adie BAT, Pérez-Pérez J, Pérez-Pérez MM, Godoy M, Sánchez-
Serrano JJ, Schmelz EA, Solanoa R (2007). ABA is an essential
signal for plant resistance to pathogens affecting JA biosynthesis
and the activation of defenses in Arabidopsis. Plant Cell, 19:
1665~1681
Flors V, Ton J, van Doorn R, Jakab G, García-Agustín P, Mauch-Mani
B (2008). Interplay between JA, SA and ABA signalling during
basal and induced resistance against Pseudomonas syringae and
Alternaria brassicicola. Plant J, 54 (1): 81~92
Hamamouch N, Li C, Seo PJ, Park CM, Davis EL (2011). Expression
of Arabidopsis pathogenesis-related genes during nematode in-
fection. Mol Plant Pathol, 12 (4): 355~364
Le Henanff G, Heitz T, Mestre P, Mutterer J, Walter B (2009). Char-
acterization of Vitis vinifera NPR1 homologs involved in the
regulation of pathogenesis-related gene expression. BMC Plant
Biol, 9: 54 ~64
Leon J, Lawton MA, Raskin I (1995). Hydrogen peroxide stimu-
lates salicylic acid biosynthesis in tobacco. Plant Physiol, 108:
1673~1678
Li ZT, Dhekney SA, Gray DJ (2011). PR-1 gene family of grapevine:
a uniquely duplicated PR-1 gene from a Vitis interspecific hybrid
confers high level resistance to bacterial disease in transgenic
tobacco. Plant Cell Rep, 30 (1): 1~11
Livak KJ, Schmittgen TD (2001). Analysis of relative gene expression
data using real-time quantitative PCR and the 2-DDCT method.
Methods, 25: 402~408
Matus JT, Poupin MJ, Cañón P, Bordeu E, Alcalde JA, Arce-Johnson
P (2010). Isolation of WDR and bHLH genes related to flavonoid
synthesis in grapevine (Vitis vinifera L.). Plant Mol Biol, 72 (6):
607~620
Nandi A, Kachroo P, Fukushige H, Hildebrand DF, Klessig DF, Shah
J (2003). Ethylene and jasmonic acid signaling affect the NPR1-
independent expression of defense genes without impacting
resistance to Pseudomonas syringae and Peronospora parasitica
in the Arabidopsis ssi1 mutant. Mol Plant Microbe Interact, 16
(7): 588~599
Neill S, Barros R, Bright J, Desikan R, Hancock J, Harrison J, Morris
P, Ribeiro D, Wilson I (2008). Nitric oxide, stomatal closure, and
abiotic stress. J Exp Bot, 59 (2): 165~176
Sabater-Jara AB, Almagro L, Belchí-Navarro S, Ferrer MA, Barceló
AR, Pedreño MA (2010). Induction of sesquiterpenes, phytoes-
terols and extracellular pathogenesis-related proteins in elicited
cell cultures of Capsicum annuum. J Plant Physiol, 167 (15):
1273~1281
Sang J, Jiang M, Lin F, Xu S, Zhang A, Tan M (2008). Nitric oxide re-
duces hydrogen peroxide accumulation involved in water stress-
induced subcellular anti-oxidant defense in maize plants. J Integr
Plant Biol, 50 (2): 231~243
Sarowar S, Kim YJ, Kim EN, Kim KD, Hwang BK, Islam R, Shin JS
(2005). Overexpression of a pepper basic pathogenesis-related
protein 1 gene in tobacco plants enhances resistance to heavy
metal and pathogen stresses. Plant Cell Rep, 24 (4): 216~224
Siddiqua M, Nassuth A (2011).Vitis CBF1 and Vitis CBF4 differ in
their effect on Arabidopsis abiotic stress tolerance, development
and gene expression. Plant Cell Environ, 34 (8): 1345~1359
Tamura K, Dudley J, Nei M, Kumar S (2007). MEGA4: molecular
evolutionary genetics analysis (MEGA) software version 4.0.
Mol Biol Evol, 24: 1596~1599
Van Loon LC, Rep M, Pieterse CMJ (2006). Significance of inducible
defense-related proteins in infected plants. Annu Rev Phyto-
pathol, 44 (1): 135~162
Xie XZ, Xue YJ, Zhou JJ, Zhang B, Chang H, Takano M (2011). Phy-
tochromes regulate SA and JA signaling pathways in rice and are
required for developmentally controlled resistance to Magna-
porthe grisea. Mol Plant, 4 (4): 688~696
Zhang H, Tan ZQ, Hu L Y, Wang SH, Luo JP, Jones RL (2010). Hy-
drogen sulfide alleviates aluminum toxicity in germinating wheat
seedlings. J Integr Plant Biol, 52 (6): 556~567
Zhang H, Tang J, Liu XP, Wang Y, Yu W, Peng WY, Fang F, Ma DF,
Wei ZJ, Hu LY (2009). Hydrogen sulfide promotes root organo-
genesis in Ipomoea batatas, Salix matsudana and Glycine max. J
Integr Plant Biol, 51: 1086~1094