全 文 ：植物生理学通讯 第 46卷 第 6期, 2010年 6月 615
收稿 2010-04-29 修定 　2010-05-19
资助 浙江农林大学科研发展基金(2008FK53)和浙江省科技厅
重大项目(2 006C120 59-2 )。
* 通讯作者(E-mail: zjfc_ghxia@126.com; Tel: 0571-
6 3 7 3 2 7 6 1 )。
堇叶紫金牛的组织培养与快速繁殖
王刘圣丹, 邱丝丝, 夏国华 *, 李根有
浙江农林大学林学基础实验教学中心, 浙江临安 311300
Tissue Culture and Rapid Propagation of Ardisia violacea (T. Suzuki) W. Z.
Fang & K. Yao
WANG Liu-Sheng-Dan, QIU Si-Si, XIA Guo-Hua*, LI Gen-You
Basic Experiment Teaching Center of Forestry, Zhejiang Agriculture and Forestry University, Lin’an, Zhejiang 311300, China
1 植物名称 堇叶紫金牛[Ardisia violacea (T.
Suzuki) W. Z. Fang & K. Yao] (方文哲和姚淦1979),
又名裹堇紫金牛(Huang 1998)、锦花紫金牛(Chen
和 Pipoly 1996)。
2 材料类别 带腋芽的茎段。
3 培养条件 MS为基本培养基。腋芽启动培养
基: (1) MS+BA 0.1 mg·L-1(单位下同)+IBA 0.5, (2)
MS+BA 0.5+IBA 0.5, (3) MS+BA 1.0+IBA 0.5; 腋芽
增殖诱导培养基: (4) MS+BA 5.0+IBA 0.5, (5)
MS+TDZ 0.5+IBA 0.5, (6) MS+TDZ 1.0+IBA 0.5;
壮苗培养基: (7) 1/2MS+BA 0.1+NAA 0.05+1 g·L-1
蛋白胨; (8) 1/2MS+BA 0.3+NAA 0.05+1 g·L-1蛋白
胨, (9) 1/2MS+BA 0.5+NAA 0.05+1 g·L-1蛋白胨; 生
根培养基: (10) MS+IBA 0.25+NAA 0.25, (11) MS+IBA
0.5+NAA 0.5。以上培养基均含 30 g·L-1蔗糖和
6.8 g·L-1琼脂, pH 5.8。培养温度为(25±2) ℃; 光照
强度约为 30 μmol·m-2·s-1, 光照时间为 16 h·d-1。
4 生长与分化情况
4.1 取材与消毒 取堇叶紫金牛幼嫩茎段, 用洗涤剂
漂洗 30 min, 流水冲洗 10 min, 然后在超净工作台
上用 70%酒精浸泡 10 s, 0.1% HgCl2灭菌 6~8 min,
无菌水漂洗3次, 用无菌滤纸吸干材料上的水分, 切
割成长约 0.5 cm的带节茎段, 接种在腋芽启动培
养基(1)~(3)上。培养 15 d左右开始生长(图 1), 堇
叶紫金牛生长缓慢, 经过 30~40 d的培养, 腋芽萌
发生长至 2~3 cm, 将其剪下进行增殖培养。
4.2 增殖诱导培养 腋芽接种到增殖培养基(4)~(6)
中, 培养 20 d后嫩茎节部明显膨大增粗至原来的 2
倍以上, 腋芽也明显膨大(图 2), 继续培养 15 d, 叶
片脱落, 腋芽形成极度缩短的茎, 肉眼可见形成大
量芽, 但芽不伸长(图 3)。将膨大茎段转接入培养
图 1 堇叶紫金牛的腋芽启动培养
图 2 堇叶紫金牛的茎和芽膨大
图 3 堇叶紫金牛的腋芽大量发生
植物生理学通讯 第 46卷 第 6期, 2010年 6月616
基(2)中诱导芽的伸长生长, 经过 20 d的培养, 腋芽
大量发生, 数量达到 6以上(图 4)。而直接将茎段
培养在(1)~(3)上的茎段未见茎节膨大和增殖, 因此
堇叶紫金牛通过较高浓度的 BA (5 mg·L-1)或 TDZ
(0.5~1.0 mg·L-1)诱导潜伏腋芽的发生, 再用较低浓
度的BA (0.5 mg·L-1)促进伸长生长的二步法培养具
有较好的增殖效果。
图 4 堇叶紫金牛的增殖培养
4.3 壮苗培养 培养基(2)继续培养 15 d, 丛生芽长
至 2~3 cm时, 单个切下转入含有蛋白胨的壮苗培养
基(7)~(9)中培养 30~35 d, 苗高 4~5 cm, 具叶 8~12片。
4.4 生根培养 丛生芽长至 4~5 cm时, 转入生根培
养基(10)、(11)中进行培养, 培养约 25 d开始出现
新根, 继续培养 15 d, 生根率达 95%以上, 每株苗
长出 2~4条长约 5 cm的健壮新根(图 5), 苗高约 6
cm, 具叶 5~7片时即可移栽。
5 意义与进展 堇叶紫金牛属紫金牛科(Myrsinaceae)
紫金牛属, 特产于浙江和台湾, 仅分布在浙江舟山
白泉乡(谢文远等 2008)、杭州云栖、台湾北部乌
来、桃宜公路巴棱至四棱山区(方云亿 1989)以及
台湾巴福越、尖石、北横乡, 已被列为珍稀濒危
植物(张若蕙 1994)。该种株型紧凑、叶绿果艳、
姿态优美, 具有较高观赏价值, 是一种优良的盆栽
植物(图6), 组织培养技术可以提高繁殖速度, 有较
高的潜在应用前景。迄今已有一些紫金牛属植物
的组培技术报道, 如朱砂根(黄美娟等 2007)、虎舌
红(罗吉凤等 2 0 0 4 )、九节龙和紫金牛( G o o 等
2008), 但堇叶紫金牛的组织培养与快速繁殖尚未见
报道。堇叶紫金牛组织培养对维持小种群的生存,
促进种群更新和解濒危提供一条新途径, 同时为开
发利用这一珍稀资源提供技术储备。
4.5 炼苗与移栽 苗高约 6 cm时, 将培养瓶盖打开,
放到全天自然光照, 温度 25 ℃的通风条件下炼苗
7~10 d, 移栽时用镊子将试管苗从培养瓶中取出, 洗
净根部培养基, 移栽入已灭过菌的营养土(泥炭: 蛭
石 =1:1), 移栽后 7~10 d用塑料薄膜保湿, 保持空
气湿度 85%以上, 每天喷雾 1~2次, 20 d左右长出
新根, 移栽成活率达 90%以上。
图 5 堇叶紫金牛的生根培养
参考文献
方云忆(1989). 浙江植物志(第五卷) . 杭州: 浙江科学技术出版
社, 31
方文哲, 姚淦(1979). 紫金牛属研究资料. 植物分类学报, 17 (4):
99~100
黄美娟, 刘小辉, 邓娅玲, 樊国盛, 黄海泉(2007). 朱砂根的组织
培养和快速繁殖. 植物生理学通讯, 43 (6): 1149~1150
罗吉凤, 程治英, 龙春林(2004). 虎舌红的组织培养. 植物生理学
通讯, 40 (4): 465~466
谢文远, 王国民, 张宏伟, 马丹丹, 李根有(2008). 珍稀濒危植物
堇叶紫金牛的分布新发现及保护利用. 浙江林业科技, (增
刊): 45~47
张若蕙(1994). 浙江珍稀濒危植物. 杭州: 浙江科学技术出版社,
315~318
Chen Jie, Pipoly JJ III (1996). Myrsinaceae. In: Wu ZY, Raven PH
(eds). Flora of China. Beijing: Science Press & St. Louis:
Missouri Botany Garden Press, 15: 10~29
Goo DH, Kwon OK, Lee YR, Huh EJ (2008). Micropropagation
of Ardisia pusilla and Ardisia japonica in vitro . Acta Hort
(ISHS), 766: 237~242
Huang TC (1998). Flora of Taiwan (2nd ed). Taipei: National
Taiwan University Press, 4: 46
图 6 堇叶紫金牛的开花结实