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滇桂石斛的离体培养和植株再生



全 文 :植物生理学通讯 第 44卷 第 2期,2008年 4月290
滇桂石斛的离体培养和植株再生
包英华,白音 *,彭晓云
韶关学院英东生物工程学院,广东韶关 512005
In vitro Culture and Plant Regeneration of Dendrobium guangxiense S. J. Cheng
et C. Z. Tang
BAO Ying-Hua, BAI Yin*, PENG Xiao-Yun
Yingdong School of Bioengineering, Shaoguan College, Shaoguan, Guangdong 512005, China
收稿 2007-12-17 修定 2008-02-18
资助 国家科技基础条件平台工作项目子课题(2005DKA21000)
和韶关学院科研项目(2 00 7 0 10 )。
* 通讯作者(E-mail:byinghua@126.com;Tel:075 1-
8 1 2 1 3 7 6 )。
1 植物名称 滇桂石斛(Dendrobium guangxiense S.
J. Cheng et C. Z. Tang)。
2 材料类别 成熟种胚。
3 培养条件 种胚萌发培养基:(1) MS+NAA 0.5
mg·L-1 (单位下同) ;(2) MS+NAA 0.5+0.5%~1.0%
酵母提取物。种胚苗增殖培养基:(3) MS+6-BA 0.2+
KT 0.2+NAA 0.1 ;(4) 1/2MS+6-BA 0.3+KT 0.1+
NAA 0.05。生根和壮苗培养基:(5) 1/2MS+IBA
0.2~0.4;(6) MS+NAA 1.0+6-BA 0.5+0.05%活性
炭;(7) MS+NAA 2.0+6-BA 1.0+0.05%活性炭。
以上培养基均加入 30 g·L-1蔗糖、10 g·L-1琼脂粉,
pH 5.8,高压灭菌锅中 121 ℃下灭菌 20 min。培
养温度为(26±2) ℃,光照度为 20~40 µmol·m-2·s-1,
光照时间 14 h·d-1。
4 生长与分化情况
4.1 无菌种胚苗的培育 先用肥皂水刷洗滇桂石斛
蒴果,流水冲洗干净,75%酒精浸泡 1 min,无
菌水冲洗 3次,再用 0.1% HgCl2表面消毒 12 min,
无菌水冲洗 6次后,吸干表面水分,用无菌解剖
刀将蒴果剖成两半,把种子散落到种胚萌发培养
基(1)和(2)上。培养 50 d后种子开始萌发,逐渐
形成绿色原球茎;再过 150 d,原球茎长成一株
或丛生苗。在实验过程中发现,培养基(2)上原球
茎生长情况比培养基(1)的好,表明酵母提取物对
滇桂石斛原球茎生长与分化有促进作用,这与美
花石斛原球茎的生长分化实验结果一致。
4.2 种胚苗的增殖 将无根种胚苗转接培养在培养
基(3)和(4)上,进行种胚苗的增殖培养。种胚苗
在培养基(3)和(4)上均可分株增殖,并长高,增
殖系数可达 7.5。
4.3 生根与壮苗 将长成大约 1 cm的增殖苗,分
株后转接在培养基(5)上,进行生根培养。滇桂石
斛在离体培养过程中比较容易生根,生根率可达
100%。种胚苗生根后,再继代在培养基(6)和(7)
上,进行壮苗培养。
4.4 炼苗与移栽 组培苗长出大约 8片小叶时,将
培养瓶移至室内散射光处炼苗 5~6 d。然后将小苗
从培养瓶取出,轻轻洗净苗根部粘连的培养基,
保持根系不受损伤,移栽到已铺好基质的炼苗盘
上,基质一般采用木屑和少量苔藓,上面喷浇
MS培养液和 0.2%多菌灵液。炼苗盘放在温度为
(26±2) ℃,湿度为 70%~85%的大棚内,30 d后
即可移栽到花盆中,花盆底部铺小石块,上面铺
木屑和树皮块,并有少量苔藓,成活率达到 90%
以上。
5 意义与进展 滇桂石斛是兰科石斛属多年生草本
植物,其花淡黄色或黄绿色,唇瓣上具有紫红色
斑块,是观赏价值很高的野生兰花。滇桂石斛的
茎紫色而柔软,是加工紫皮枫斗的主要原料之
一。由于长期过度采收,野生石斛资源(包括滇
桂石斛)急剧减少。近年来,人们试图用植物组
织快繁技术加以解决石斛资源的保护问题,本文
结果对此问题可能有一定的参考价值。与滇桂石
斛同属的玫瑰石斛、美花石斛、铁皮石斛、细
茎石斛、粉花石斛的组培快繁已有报道。但滇桂
石斛组织培养和快速繁殖的报道尚未见。