全 文 :植物生理学通讯 第 43卷 第 2期,2007年 4月348
一种拟南芥无菌直播水培技术
陈建红,沈宏 *
华南农业大学资环学院根系生物学研究中心,广州 510642
收稿 2006-12-12 修定 2007-01-19
资助 国家自然科学基金(30100110和 30471040)和国际科学
基金(C/3042 -1 ,2 )。
* 通讯作者(E-ma il:hshen@sca u.edu .cn;T el:0 20 -
8 5 2 8 1 8 2 2 )。
一般拟南芥的水培方法多是开放的体系(郁晓
敏等 2004;赵淑清和郭剑波 2000),培养时间长
时容易滋生菌类和青苔,影响植株正常生长。
Ezaki等(2000)采用尼龙筛网和海绵缝在一起作为
拟南芥种子生长界面的方法,其装置的整个制作
过程复杂,且灭菌后海绵和尼龙筛网易变形,种
子生长界面不平稳,发芽不整齐。而我们用梯形
培养盒和不锈钢筛网制成的培养装置以及用毛笔播
种的方法污染率小,短期内能得到大量整齐一致
的幼苗,且可同时观察地上部和根部的生长过
程,获得的生物量较多。
本文所用的培养装置中的培养盒由 Sigma公
司生产,耐高温、透光性和密封性均极好,梯
形。筛网规格根据加入的营养液体积而定。以每
盒 120 mL为例,先将中等厚度孔径为 80目的不
锈钢筛网裁成 8.0 cm×8.0 cm的正方形,4个角
处各裁掉 1.0 cm×1.0 cm的小块(图 1),折叠后成
无盖的盒状(边长 6.0 cm,高度为 1.0 cm)。1/4MS
营养液倒入培养盒中,再将筛网放入其内,底部
紧贴液面,盖上盖子后放入高压灭菌锅中灭菌。
毛笔、离心管(5 mL)和无菌水一起灭菌备用。
中留半管无菌水,用灭菌的毛笔将种子轻轻均匀
地涂抹在筛网上。将播有种子的培养盒轻轻放入
光照培养箱内,光照 /黑暗时间为 14 h/8 h,白
天温度为 24 ℃,夜间为 18 ℃。长成的幼苗培养
一定时间后,根据不同的实验目的,用无菌的镊
子将筛网轻轻夹出,移入不同处理的营养液中。
一盒播种百粒种子左右,种子在播种 2 d后即可
萌发,5 d后根长约有 1 cm。
根据本文结果,我们认为拟南芥无菌直播水
培技术有如下优点:(1 )筛网耐高温、高压,灭
菌后不会变形,按照图 1做成的模型能牢固地固
定在一个水平面,还可用镊子夹住 4个边调整其
位置;筛网坚固耐用,可重复利用。80目的筛网
既能保证拟南芥种子不掉下去,又能保证根系正
常穿过并生长,而且不锈钢筛网化学性质比较稳
定,不影响拟南芥幼苗生长。(2)用无菌湿润毛笔
一次可沾取几十甚至上百粒种子,播种时,只需
来回在筛网上轻轻移动几下,就可使种子分布均
匀,播种一盒只需要几秒钟即可完成。与移液器
点播种子相比,既节约时间,污染率又小。
参考文献
郁晓敏, 方萍, 朱日清(2004). 拟南芥直播水培法. 植物生理学通
讯, 40 (1): 81~82
赵淑清, 郭剑波(2000). 一种简单快速的拟南芥水培方法的研究.
生物学杂志, 17 (6): 22~23
Ezaki B, Gardner RC, Ezaki Y, Matsumoto H (2000). Expression
of aluminum-induced genes in transgenic Arabidopsis plants
can ameliorate aluminum stress and/or oxidative stress. Plant
Physiol, 122: 657~666图 1 筛网的规格和制作
操作时,于超净工作台上,将拟南芥
(Arabidopsis thaliana)种子转入灭过菌的离心管
中,用 75%酒精消毒 2~3 min后用 10%次氯酸钠
浸泡 5~8 min,再用无菌水清洗 3~5次。离心管
·小经验·